Krooninen sairaus

tiivistelmä

Bone luuytimestä johdettujen mesenkymaalisten kantasolujen (MSC: t) pystyvät siirtymään kasvaimia, jossa ne edistävät kasvaimen kehittymisen ja syövän etäpesäkkeiden. Kuitenkin molekyyli fenotyypin palvelukseen MSC: kasvaimen mikroympäristön ja geneettiset ohjelmat taustalla niiden rooli syövän etenemisessä on edelleen suurelta osin tuntemattomia. Käyttämällä kolmiulotteisen pyörivä seinään astian yhteisviljelmä järjestelmän, jossa ihmisen MSC: t kasvatettiin yksin tai läheisessä yhteydessä LNCaP, C4-2 tai PC3 eturauhassyövän solulinjoissa, loimme

vitro

pareina normaalien ja syöpään liittyvän MSC johdannaisia ​​tutkimaan strooman vaste MSC: eturauhassyöpää. Havaitsimme, että eturauhasen syöpään liittyvä MSC: hankki suuremmat mahdollisuudet adipogeenisen erilaistumisen ja osoittivat vahvempaa kykyä edistää eturauhassyövän solumigraatioon ja invaasio tavanomaiseen verrattuna MSC: eiden sekä

in vitro

ja kokeellisissa eläinmalleissa. Parannettu adipogeneesi ja pro-metastasoitunut ominaisuudet myönnetty jonka korkeat IL-6-erityksen syöpään liittyvän MSC: t ja olivat palautuvia toimintakykyisten estämällä IL-6. Olemme myös havainneet, että IL-6 on suora kohdegeenin varten let-7 microRNA, joka vaimentua syöpään liittyvän MSC:. Yli-ilmentyminen let-7 kautta transfektio let-7 lähtöaineiden väheni IL-6 ilmaisun ja tukahdutettu adipogeenisissä mahdollisia ja etäpesäkkeiden edistävää aktiivisuutta syöpään liittyvien MSC: t, jotka olivat yhdenmukaisia ​​inhibitio IL-6: n 3’UTR lusiferaasiaktiivisuus . Sitä vastoin hoito normaalin MSC: Let-7 estäjien johti vaikutukset samankaltaisia ​​kuin IL-6. Yhdessä tuloksemme osoittivat, että MSC: yhteistyössä kehittyvät kanssa eturauhassyöpä solujen kasvain mikroympäristössä ja downregulation let-7 syöpään liittyvän MSC: ylössäätelee IL-6 ilme. Tämä ylössäätely laukaisee adipogeneesi ja helpottaa eturauhassyövän etenemistä. Nämä havainnot eivät ainoastaan ​​tarjoa avain oivalluksia molekyylitasolla kasvaimeen stroomavuorovaikutuksiin mutta myös tasoittaa tietä uusien hoitojen metastaattisen eturauhassyövän.

Citation: Sung SY, Liao CH, Wu HP, Hsiao WC, Wu IH, Jinpu, et ai. (2013) menetys Let-7 MicroRNA ylössäätelee IL-6 luuydinperäisiä mesenkymaalisten kantasolujen laukaiseminen reaktiivinen stroomakasvaimet vastaus eturauhassyöpä. PLoS ONE 8 (8): e71637. doi: 10,1371 /journal.pone.0071637

Editor: Ching-Ping Tseng, Chang Gung University, Taiwan

vastaanotettu: 18 huhtikuu 2013; Hyväksytty: 30 Kesäkuu 2013; Julkaistu: 19 elokuu 2013

Copyright: © 2013 Sung et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat avustuksia NSC 101-2314-B-039-007, NSC 99-2320-B-039-029-MY3 ja NSC 99-2632-B-039-001-MY3 National Science neuvosto Taiwanissa, myöntää DOH102 TD-C-111-005 päässä Taiwan Department of Health, ja University Syöpäsäätiön kautta SINF MD Anderson Cancer Center, USA. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Bone on toiseksi yleisin sivusto ihmisen syövän etäpesäkkeiden [1], ja myös edistää suoraan eturauhassyövän kuolleisuuteen ja sairastuvuuteen, yli 85%: lla potilaista, jotka kuolevat eturauhassyöpään ovat luuetäpesäkkeistä [2] , [3]. Elämänlaatu eturauhassyövän potilaista voidaan merkittävästi vaarantua luumetastaaseja kehittämällä luukipu, syöpään liittyvä luunmurtumat ja selkäydinkompressio, luu-etäpesäke aikaansaaman kallon neuropatia Kallo oireyhtymiä, anemiaa ja infektioita [4] [5]. Huolimatta vakavia komplikaatioita eturauhassyövän luuston etäpesäkkeiden on ollut vähän edistystä terapeuttisessa areenalla ehkäisemään tai lieventämään nämä vauriot [6]. On tärkeää, että vankka käsitys patofysiologia eturauhassyövän luuston metastasoitunut prosessi on kehitetty tarjoamaan perustan luomisen keinoja estää tai vähentää niiden esiintymistä ja liittyvät komplikaatiot.

Tutkimus on osoittanut, että kasvaimeen microenvironment vuorovaikutukset ovat ratkaisevia syövän synnyssä ja syövän etenemistä, kuten kuvattiin ensimmäisen kerran vuonna 1889 Paget joka ehdotti, että kylvö metastasoituneen syöpäsolujen riippuu isännän elin microenvironment ( ”siemen ja maaperä” käsite) [7]. Vaikka useimmat isäntäsoluja strooman on tiettyjä kasvaimen tukahduttaa kykyjä, etenemisen karsinoomien high-grade pahanlaatuisten kasvainten perustavanlaatuisia histologisia muutoksia kasvaimeen liittyvää stroomaan. Näitä muutoksia ovat stroomasolulinja fenotyyppisten kytkentä, soluväliaineen remontin ja angiogeneesin induktio [8], [9]. Kehittäminen muuttuneessa strooman mikroympäristön vastauksena syöpä on yhteinen piirre monissa kasvaimia ja todennäköisesti edistää kasvaimien syntyyn. Aikana eturauhassyövän hyökkäyksen prosessin, esimerkiksi syövän epiteelisolujen on kyky edistää niin sanottu ”reaktiivinen” strooman vasteen kautta transdifferentiation normaalien fibroblastien reaktiivisen myofibroblastin fenotyyppi. Toisin kuin tavalliset fibroblastit, reaktiivinen myofibroblasteja ajaa geneettisiä ja geeniekspression muutokset eturauhassyövän soluissa, mikä mahdollistaa kasvua ja selviytymistä kasvain ja levittämistä kaukaisiin elimiin tappavia vaikutuksia [10] – [13]. Geeniekspressioprofilointi kliinisten näytteiden paljasti samanaikaista ja itsenäinen geneettisten muutosten strooman ja syövän epiteelisolujen [14], [15], jossa vahvistetaan yhdessä kehittymiseen syövän ja strooman soluvasteita. Kliinis tutkimukset ovat myös osoittaneet kriittinen rooli reaktiivisen strooman leikkauksen lopputulokseen potilaista [16] – [18]. Monimutkaisia ​​solujen välisen viestinnän välillä epiteelin ja peruskudoselementeistä ehdottaa tärkeyttä epigeneettiset reittejä helpottamisen eturauhassyövän etenemisen sijaan suora prosessi yksinkertaisesti johtua syöpäsoluja yksin.

hiiren malleissa sekä ihmisillä ovat raportoineet että kasvain stromasoluja voidaan johtaa luuytimestä johdettuja kantasoluja, jotka voidaan mobilisoida verenkiertoon, siirtyvät kohti kasvaimia, sisällyttää kasvain microenvironment, ja edistää kasvua eri kasvaimia [19] – [21]. Luuytimestä peräisin mesenkymaaliset kantasolut (MSC: t) ovat multipotentteja mesenkymaaliset prekursorisolut, jotka vaikuttavat ylläpitoa ja uudistumista erilaisten sidekudosten, mukaan lukien luu, rasva, rusto, ja lihasten [22]. Äskettäin, kiertävä MSC: t on osoitettu integroitua sinnikkäästi ja kasvaimen strooman [23], saada aikaan uusi alustan valikoivaa

in vivo

toimituksen syöpälääkkeiden invasiivisia ja etäpesäkkeiden kasvaimia [24] – [27] . Välisten vuorovaikutusten MSC: ja kasvainsolujen eivät rajoitu homing, mutta näyttää myös aiheuttaa lisää haitallisia vaikutuksia. Monet havainnot viittaavat, että kasvaimen mikroympäristössä, MSC: t on useita kasvaimen kasvua edistämällä toimintoja, kuten kasvutekijöiden ekspression [28], edistämällä kasvaimen aluksen muodostumisen [29] ja luomisen syövän kantasoluja kapeampiin [30]. Kuitenkin molekyyli fenotyypin palvelukseen MSC: kasvaimen mikroympäristön ja geneettiset ohjelmat taustalla omaisuutensa syövän etenemisessä on edelleen pääosin tuntemattomia. Ymmärtäminen rekrytoitaville MSC: t ovat muuttuneet aikana kasvaimen etenemisen ja miten ne vastavuoroisesti vaikuttavat neoplastiset eteneminen saattaa johtaa kehitystä Uusien hoitomuotojen pyritään vähentämään etäpesäkkeiden muodostumista.

Tässä tutkimuksessa olemme keskittyneet määrittelyyn jos luuytimen MSC: ”co-kehittyvät” eturauhassyövän epiteelisolujen vastavuoroinen kasvaimen strooman vuorovaikutus. Rooli ja erityiset molekyylitason mekanismeja reaktiivisen MSC: eturauhasen syövän etenemiseen oli myös selvitetty.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

eläinkokeissa suoritettiin tiukasti suositusten oppaasta Care ja käyttö Laboratory Animals of National Institutes of Health. Protokolla hyväksyi Institutional Animal Care ja käyttö komitean Kiinan Medical University (IACUC # 101-76-N). Kaikki Leikkaus suoritettiin Zoletil (tiletamlinilla-tsolatsepaami) anestesian annoksella 20 mg /kg injektiona vatsaonteloon. Kaikki pyrittiin minimoida kärsimyksen.

Solulinjat ja Cell Culture

Kaikki soluviljelyalustoja ja reagenssit ostettiin Invitrogen (Carlsbad, CA). Eturauhassyövän solulinjoissa LNCaP, C4-2 ja PC3 käytettiin aikaisemmissa tutkimuksissa [13], [31], ja niitä kasvatettiin T väliaineessa, jota oli täydennetty 5% naudan sikiön seerumia (FBS). Ihmisen luuytimestä peräisin MSC-(hMSC: t), ja normaaleihin ihmisen eturauhasen epiteelisolut (PrEC) ostettiin Lonza (Rockland, ME) pidettiin MSCGM ™ ja PrEGM ™, vastaavasti, mukaisesti valmistajan ohjeiden (Lonza). 3A6 Ihmisen luuytimestä peräisin MSC-solulinja [32] pidettiin DMEM-LG väliaineessa, jota oli täydennetty 10% FBS: ää. Kolmiulotteisen (3-D) yhteisviljelmä, 1 x 10

7 3A6-soluja kasvatettiin yksin tai sekoitettuna yhtä paljon LNCaP, C4-2 tai PC3-soluja pyörivässä seinään astian (RWV) järjestelmät (Synthecon, Houston , TX) seuraavan aiemmin perustettu protokollaa [33] pienin muutoksin. Lyhyesti, yksittäinen solususpensio lisättiin aluksiin, jotka täytettiin sitten 10 ml väliainetta, joka koostuu T keskipitkän ja DMEM-LG (01:01). Pyöriminen alusten vahvistettiin alun perin 15-20 rpm ja nousi sitten ylläpitää solun aggregaattien vapaa jousitus. Väliaine vaihdettiin joka 3 päivä. Eristää 3A6 soluja 3-D kimeerisen tumoroids, soluaggregaatteja kerättiin pois RWV ja erottaa toisistaan ​​0,25% trypsiiniä 2 viikon kuluttua yhteisviljelmä. 3A6 solut valittiin antibioottiselektiolla 800 ug /ml G418: aa ja 1 viikko.

erilaistuminen MSC:

3A6 MSC-solut ympättiin 6-kuoppaisille levyille tiheydellä 10

4 solua /cm

2 induktioon osteogeenisen ja adipogeenisen erilaistumisen tietyissä viljelyolosuhteissa. Osteogeenisen erilaistumista, soluja kasvatettiin osteogeeninen erilaistuminen väliaineessa, joka koostuu DMEM-LG, jossa oli 10% FBS: ää, 10 nM deksametasonia, 50 ug /ml askorbiinihappoa ja 10 mM β-glyserofosfaatti ja 14 päivää, ja sitten altistettiin alitsariinipunaisella S värjäys, kuten aiemmin on kuvattu [32]. Sillä adipogeenisistä erilaistumista, soluja viljeltiin adipogeenisen erilaistumisen väliaineessa, joka koostuu DMEM-LG täydennetty 10% FBS: ää, 100 nM deksametasonia, 0,45 mM 3-isobutyyli-1-metyyliksantiini, 10 ug /ml insuliinia, ja 50 ug /ml indometasiinia 21 päivää, ja sen jälkeen niille Oil Red O värjäystä. Muodostumista adiposyyttien seurattiin ulkonäkö lipidipisaroita mikroskoopilla. Määrällisesti värjäys, Oil Red-O uutettiin isopropanolilla, joka sisälsi 4% Nonidet P-40 ja mitataan absorbanssi aallonpituudella 510 nm. Kaikki kemikaalit hankittiin Sigma-Aldrich (St. Louis, MO).

Reaaliaikainen kvantitatiivinen PCR

Solun kokonais-RNA ja rikastettu pieniä RNA-lajeja sisältävien microRNA (miRNA) eristettiin viljellyistä soluihin käyttäen Mirvana miRNA Isolation Kit (Ambion, Austin, TX) valmistajan protokollaa. cDNA syntetisoitiin rikastetusta pieniä RNA: n ja kokonais-RNA hehkutettu kara-loop käänteinen transkription (RT) pohja- ja satunnaisia ​​alukkeita, vastaavasti, ja käänteistranskriptio MMLV käänteistranskriptaasia (Invitrogen). Kvantitatiivinen PCR suoritettiin käyttäen LightCycler 480 TaqMan master pakki miRNA- tai geenin alukkeet ja vastaava Universal Probe Kirjasto koetin (Roche Applied Science, Mannheim, Saksa). Varsi-silmukka-RT-alukkeita PCR-alukkeet, ja koettimet on suunniteltu ja sekvenssit on esitetty taulukossa S1. Reaaliaikaisen PCR-reaktio suoritettiin mukaan valmistajan ohjeiden ja kuvattiin aiemmassa tutkimuksessa [34]. U6 pieni ydin- RNA ja lämmön shock 90 kD proteiinia 1, beta (HSPCB) käytettiin taloudenhoito geenejä normalisoida ilmaisun kunkin miRNA ja geeniä, vastaavasti.

Sytokiiniagonistit Vasta Array ja ELISA

ilmentymistasojen eri sytokiinien väliaine mitattiin käyttämällä ihmisen sytokiini-vasta-aineen Array C Series 2000-kittiä (RayBiotech, Norcross, GA), kuten aiemmin on kuvattu [27]. Ihmisen interleukiini 6 (IL-6) proteiinin tasot kunnostetussa alustassa kvantitoitiin käyttämällä kaupallisia ELISA-kittejä (eBioscience, San Diego, CA) valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Oligonukleotidi transfektio

3A6 soluja ympättiin 2 x 10

5 solua /kuoppa 6-kuoppaisille levyille ja inkuboitiin yön yli. Solut transfektoitiin joko ennen miRNA (pre-miR negatiivinen kontrolli ja pre-miR-let-7c) (Ambion, Austin, TX) tai LNA ™ miRNA-inhibiittorit (anti-miR negatiivinen kontrolli ja anti-miR-let-7 ) (Exiqon, Vedbaek, Tanska), jonka lopullinen pitoisuus on 10 nM tai 30 nM, vastaavasti, käyttäen DharmaFECT transfektioreagenssia (Dharmacon, Lafayette, CO) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Reporter Vektorit ja Luciferase Assay

oligonukleotidit oletetun let-7c tunnustamista elementti, joko villityypin tai mutantti-sekvenssin, nukleotidien 316-322 3′-transloimaton alue (3′-UTR), ihmisen IL-6- geeni suunniteltiin reunustavat Hindlll ja SpeI sivustoja ja synteettistä. Hehkutuksen jälkeen sense- ja antisense-oligonukleotidien, tuloksena DNA-fragmentit kloonattiin pMir-REPORT-Luc vektorin (Ambion) jälkeen HindIII: lla ja Spel ruoansulatusta. Saatu pMir-REPORT-Luc plasmidit sekoitettiin pCMV-β-gal (galaktosidaasi), jonka 05:01 moolisuhteessa ja kotransfektoitiin kanssa pre-miRNA HEK 293-soluissa. 24 tunnin inkubaation jälkeen solu-uutteet valmistettiin lusiferaasi ja β-gal-aktiivisuuden määrityksissä käyttäen Luciferase Assay System, ja β-galaktosidaasi-entsyymianalyysi System (Promega, Madison, WI). Suhteellinen lusiferaasiaktiivisuus laskettiin jakamalla lusiferaasi suhteellinen valo yksiköitä vastaava arvo β-gal aktiivisuus kunkin näytteen.

In vitro

Muuttoliike ja invaasiomääritys

hMSC: t tai 3A6 johdannaiset (2 x 10

5-soluja) kasvatettiin alempaan kammioon siirtoaltaat seerumittomalla RPMI-1640 (Invitrogen). 24 tunnin inkubaation, 2 x 10

5 syöpäsolujen seerumivapaassa RPMI-1640 lisättiin ylempään kammioon, joka sisältää 8 um huokosia polykarbonaatti suodattimen, joka on päällystetty (hyökkäys) tai ilman sitä (siirtymä) Matrigel (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ). 16 tunnin kuluttua inkuboinnin solujen alapinnalle kalvon värjättiin kristallivioletilla ja laskettiin Zeiss Axiovert 200 fluoresenssimikroskoopilla (Carl Zeiss MicroImaging, Thornwood, NY), jossa on 10x tavoite.

Animal Studies

Kuusi viikkoa vanhoja koiraspuolisia karvattomia hiiriä (BALB /cAnN.Cg-Foxn1nu /CrlNarl) saatiin National Laboratory Animal Center (Taipei, Taiwan). 1 x 10

6 PC3-solut, joko yksinään tai sekoitettuna yhtä monta 3A6

RWV tai 3A6

PC3 solua 100 ui PBS: ää, injektoidaan subkutaani- kylkiin hiirten (

n =

10 kussakin ryhmässä). Kasvaimen tilavuus mittaukset tehtiin viikoittain. Hiiret lopetettiin 10 viikkoa soluinokulaation jälkeen, ja kasvaimet olivat innoissaan histopatologista tutkimusta.

immunohistokemia

Erityisiä proteiini havaittiin tuumorisektioiden käyttäen Novolink Polymer Detection System (Leica Microsystems, Newcastle Upon Tyne , UK) jälkeen sarja ohjeita kuten aiemmin on kuvattu [35]. Hiiren monoklonaalisia vasta-aineita ki-67 ja CD31 ostettiin Leica Microsystemsin ja laimennettu 1:100 ja 1:200, vastaavasti. Havaitsemiseksi lipidejä, kudoksen Objektilasit dehydratoitiin absoluuttiseen propyleeniglykolia 5 min ja värjättiin 0,5% Öljy punainen O liuosta 48 tuntia. Kudosleikkeet vasta-värjättiin hematoksyliinillä.

Tilastollinen analyysi

Kaikki tiedot esitetään keskiarvona ± SD, ellei toisin mainita. Erot ryhmien analysoitiin käyttämällä kaksisuuntaisia ​​Opiskelijan

t

-testi tai yksisuuntainen ANOVA monivertailuja.

p

-arvo vähemmän kuin 0,05 määriteltiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

perustaminen pareina normaalin ja syöpään liittyvän MSC välillä Kimeeriset Eturauhasen Tumoroids Under 3- D RWV olosuhteet

suostumuksella useissa aiemmissa raporteissa, että MSC: t hallussaan luontainen etuoikeutettu leviämiskyky jossain epiteelikasvaimet, osoitimme siirtymisen kapasiteetin ihmisen luuytimestä peräisin MSC: t kohti syöpäsolujen mutta ei normaalit eturauhasen epiteelisolujen

in vitro

yhteisviljelmä solumallin (Fig. 1A). Edelleen ymmärtää, onko palvelukseen ihmisen luuytimestä peräisin MSC: t ”co-kehittyy” eturauhasen syöpäsolujen kasvaimen mikroympäristössä, immortalisoitu ihmisen MSC solulinja 3A6 [32] viljeltiin yksin tai yhdessä androgeeniriippuvaisissa LNCaP, sen androgeeni-riippumattomia C4-2 alalinja, tai luun metastaattisen PC3 syöpäsolujen aiemmin perustettu 3-D RWV viljelyolosuhteissa, pääpiirteittäin

in vivo

kasvaimen mikroympäris- [13]. Olemme havainneet, että solut, joko monokulttuurin tai yhteisviljelmä olosuhteissa, muodostuu 3-D pallomainen aggregaattien spontaanisti (Fig. 1 B). Erityisesti kun taas 3A6 coculturing kanssa LNCaP (3A6 /LNCaP) tai C4-2-soluja (3A6 /C4-2) muodostetaan suurempia aggregaatteja kuin 3A6 yksipuolinen (3A6 /3A6), joka on huomattavasti pienempi määrä ja koko aggregaattien havaittiin kultivaattoriyksikkö ryhmä 3A6 ja PC3-solut (3A6 /PC3). Tunnistaa solutyypit, jotka ovat läsnä aggregaattien, jotkut soluaggregaateiksi tehtiin histomorphological analyysiin. Voimakas värjäys kromatiinin-rikas solun tumassa (Fig. 1 C, H 0,05; **

P

0,001 normaalin 3A6

RWV ja syöpään liittyvän 3A6 johdannaisiin.

syöpään liittyvän MSC: kohdistaa Korkeampi kiihtyvyyttä Eturauhassyöpä kasvu ja eteneminen kuin normaali MSC: t

seuraavan analysoitiin ja verrattiin biologisen vaikutuksen, joka vastaa pro-metastaattista potentiaalia normaalin 3A6 syöpään liittyvän 3A6 eturauhassyövässä. Vaeltavien ja invasiivisia kapasiteetti LNCaP, C4-2 ja PC3 syöpäsolujen vastauksena vihjeitä vastaavasta syöpään liittyvän 3A6

LNCaP, 3A6

C4-2 ja 3A6

PC3 vastaavasti tai normaali 3A6

RWV soluja, arvioitiin kautta Boyden kammion määrityksiä. Kuten kuviossa 4 on esitetty, kaikki kolme syöpään liittyvä 3A6 johdannaiset kohdistuu merkittävästi suurempi pro-metastaattinen vaikutus edistämällä eturauhassyövän solujen vaeltamiseen (kuvio. 4A) ja invaasion (Fig. 4B), jonka keskimääräinen 2- ja 3-kertaiseksi solujen lukumäärä liikkuu kohti pohjaa kammion, vastaavasti, verrattuna, että normaalin 3A6

RWV soluja.

Migration (A) ja invaasiota (B) osoitti syöpäsolujen kohti normaalia 3A6

RWV ja vastaava syöpään liittyvän 3A6 johdannaiset analysoitiin siirtokuoppaan määrityksessä 8 h ja 20 h inkuboinnin vastaavasti. Data esitetään keinona ± SD solujen määrä per korkean tehon kentässä (100x) kolmena kappaleena kokeissa. **

P

0,001. Edustaja kuvan kustakin ehto näkyy alareunassa.

edelleen vahvistaa kehittynyt kasvainta edistävää käyttäytymistä syöpään liittyvän MSC: t eturauhassyöpään

in vivo

, me ihon alle injektoidaan PC3 solut yksinään tai sekoitettuna joko normaali 3A6

RWV (3A6

RWV /PC3) tai syöpään liittyvään 3A6

PC3-solut (3A6

PC3 /PC3) nude-hiiriin ja vaikutuksia arvioi 3A6-solujen on PC3 kasvaimia. Rinnakkaisessa tutkimuksessa, 3A6

RWV ja 3A6

PC3-soluja injisoitiin yksinään, ja tuloksena vahvistettiin ei tuumorigeeninen omaisuutta 3A6 johdannaiset (tuloksia ei ole esitetty). Vaikka molemmat 3A6

RWV ja 3A6

PC3 ei ollut vaikutusta PC3 solujen kasvuun

in vitro

(Fig. S3), merkittävä kasvu kasvaimen havaittiin 3A6

PC3 /PC3 mutta ei 3A6

RWV /PC3-ksenograftit (Fig. 5A). Valtaosa PC3 kasvainten puuttuessa 3A6 pysyi sidotun, kun taas PC3 kasvaimia kasvatettiin yhdessä 3A6

RWV tai 3A6

PC3 näkyy infiltroiva kasvumalli, jossa invaasio ympäröivään strooman ja taustalla lihakset (Fig. 5B, H 0,05 versus PC3 kontrolliryhmään. (B) edustaja paneelin histologista H 0,05, **

P

0,001

vs.

Seerumia yksin. (D) inhibitio PC3 solumigraation kohti 3A6

PC3 kunnostettua alustaa, jonka anti-IL-6-vasta-ainetta. Väliaine 3A6

PC3-soluja esikäsitelty ilmoitetun pitoisuuden hiiren anti-IL-6-vasta-ainetta ja sen jälkeen lastattu alaosaan on siirtoaltaat. Käsittely 30 ug /ml hiiren IgG: tä (mIgG) oli negatiivinen kontrolli. *

P

0,05, **

P

0,001

vs.

Hiiri IgG. (E) induktio adipogeneesin ja 3A6

RWV solut ihmisen rekombinantti-IL-6, ja (F) eston adipogeneesin ja 3A6

PC3-soluissa anti-IL-6-vasta-aineen on osoitettu pitoisuus. Solut värjättiin Oil red O visualisoida lipidipisaroita jälkeen 21 päivää inkuboinnin jälkeen. Edustaja kuva (100 x) kunkin ehto näkyy ylhäällä. Värjätyt solut kvantitoitiin käyttäen väriainetta uuttomenetelmällä ja tiedot edustettuina keskiarvoina ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta. **

P

0,001

vs.

IgG kontrolliryhmään.

tutki IL-6 osallistuu induktioon eturauhassyövän solumigraation by syöpään liittyvien 3A6. Olemme havainneet, että eksogeeninen ihmisen IL-6 (rIL-6) indusoi annoksesta riippuvan lisääntyy transwell kulkeutumista PC3-solujen (Fig. 6C). Lisäksi määrä PC3-soluja, jotka vaelsivat kohti 3A6

PC3 väliaine alakammiossa inhiboitui 23% ja 36%, kun elatusaine esikäsitelty IL-6-neutraloiva vasta-aine, joiden pitoisuudet ovat 10 ug /ml ja 30 ug /ml, vastaavasti (Fig. 6D).

rooli IL-6 tehostetussa adipogeneesi syöpään liittyvien MSC: t arvioitiin myös.