Krooninen sairaus

tiivistelmä

RAD52

on tärkeä, mutta ei ole hyvin karakterisoitu homologisen rekombinaation korjaava geeni, joka voi sitoutua yksijuosteisen DNA: n päät ja välittävät DNA-DNA-vuorovaikutuksen tarpeen hehkutus täydentäviä DNA-säikeet. Arvioidaan roolin

RAD52

variantit vaste kasvainsolujen platinaa aineita, tutkimme niiden yhteenliittymien kanssa platinaa vastarintaa ja ennusteen kohdunkaulan syöpäpotilailla. Me otettiin 154 potilasta, joilla kohdunkaulan okasolusyöpä, joilla oli radikaaleja välillä 2008 ja 2009, sekä genotyyppi kolme potentiaalisesti toiminnallinen

RAD52

varianttien SNaPshot määrityksessä. Testasimme

in vitro

platinaa vastarintaa ja RAD52 ilmaisun käyttämällä MTT ja immunohistokemia menetelmiä vastaavasti. Vuonna 144 tapauksissa oli Genotyyppaustulokset, huomasimme, että sekä rs1051669 muunnos ja RAD52 proteiinin ilmentyminen liittyi merkittävästi karboplatiinin vastus (

P

= 0,024 ja 0,028, vastaavasti) ja rs10774474 kanssa nedaplatiini vastus (

P

= 0,018). Rs1051669 variantti merkitsevästi yhteydessä RAD52 proteiinin ilmentymisen (oikaistu OR = 4,7, 95% CI = 1,4-16,1,

P

= 0,013). Kun nämä kolme

RAD52

variantteja yhdistettiin, ilman taudin etenemistä oli pienempi potilailla, jotka kantoivat vähintään yksi (≥1) variantti alleeli verrattuna ilman variantin alleelien (

P

= 0,047). Näin ollen sekä

RAD52

varianttien ja proteiinin ilmentyminen voi ennustaa platinaa vastarintaa, ja

RAD52

variantteja näytti ennustaa ennusteen kohdunkaulan syöpäpotilailla. Suuret tutkimukset ovat perusteltuja vahvistaa näitä havaintoja.

Citation: Shi T-Y, Yang G, Tu X-Y, Yang J-M, Qian J, Wu X-H, et al. (2012)

RAD52

Vaihtoehdot Ennakoi Platinum Resistance ja prognoosi kohdunkaulan syövän. PLoS ONE 7 (11): e50461. doi: 10,1371 /journal.pone.0050461

Toimittaja: Shannon M. Hawkins, Baylor College of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 16 heinäkuu 2012; Hyväksytty 22 lokakuuta 2012 Julkaistu: 29 marraskuu 2012

Copyright: © 2012 Shi et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Science Foundation for Young Scholars Fudanin yliopistossa. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Kohdunkaulan syöpä on kolmanneksi yleisin diagnosoitu syöpä ja neljäs johtava syy syövän naisten yleisin kuolinsyy, osuus 9% (529800) kaikista uusista syöpätapauksista ja 8% (275100) kaikista syöpäkuolemista naisten keskuudessa vuonna 2008 maailmassa [1]. Yli 85% näistä tapauksista ja kuolemista tapahtuu kehitysmaissa, kuten Kiinassa [1]. Samanaikainen chemoradiation hoito on tavallinen hoito käytetään useimmiten potilailla, joilla kohdunkaulan levyepiteelisyöpä (CSCC), jotka ovat paikallisesti edennyt [2], [3] ja toistuva ja /tai metastaattinen [4] sairauksia. Kuitenkin ensisijainen tai hankittu chemoresistance on vakava kliininen ongelma, joka vaikuttaa taudin uusiutumisen, etenemistä ja taudin aiheuttamaa kuolleisuutta [5] – [7]. Mekanismi taustalla heterogeeninen reaktio potilaista on monitekijäinen ja voi sisältää useita geneettisiä tekijöitä. Osa näistä geneettiset tekijät voivat luotettavasti ja takautuvasti arvioitava niiden merkitys määriteltäessä vastauksena syöpälääkkeiden.

DNA korjaus on pääasiassa vastuussa korjaamisesta ja /tai poistamalla platina-DNA adduktit. Tämä DNA: n korjaukseen edellyttää koordinoitua toimintaa yli 20 entsyymejä, jotka poistaa ja palauttaa segmentin sisältävä DNA vieviä adduktia [8]. Homologinen rekombinaatio korjaus (HRR) on merkittävä DNA korjautumismekanismi korjata kaksinkertaisen säikeen katkoksia (DSB: t) aikana S ja G2-vaiheissa [9], joka on solun puolustusmekanismi vastaan ​​sytotoksisia vaikutuksia platinapohjaisen kemoterapia-aineiden [10] – [13].

RAD52

, koska suhteellisesti vähemmän hyvin tunnettu HRR geenin, kattaa 37,6 kb kromosomissa 12p12.2-13 ja koodaa proteiinia, jossa on 417 aminohappoa, jotka voivat sitoutua yksijuosteisen DNA: n päät ja välittäjänä DNA-DNA-vuorovaikutuksen tarpeen hehkutus komplementaarisen DNA: n juosteiden [14]. Äskettäin Tassone et ai. raportoitu, että yli-ilmentyminen

RAD52

mRNA BRCA1-viallinen HCC1937 solujen liittyy korkea herkkyys platina peräisin olevat yhdisteet [15]. Siksi oletamme, että

RAD52

saattaa olla mukana platinaa vastarintaa syöpäsoluissa.

Yhden nukleotidin polymorfismien (SNP) in geenien DNA: n korjaukseen voi vaikuttaa sitoutumiskohdista tai affiniteetin tai aiheuttaa muutoksia proteiinin rakenne ja voi siten muuttaa -geenifunktioiden ja tehdä syöpäsolujen herkempiä platinaa hoitoon [16], [17]. Tähän mennessä harvat raportoitu tutkimukset ovat tutkineet yhteenliittymien

RAD52

SNP kanssa tätä riskiä [18], [19], ja kukaan ei ole arvioinut tätä chemoresistance. Esillä olevassa tutkimuksessa arvioimme yhdistys kolme potentiaalisesti toiminnallisen

RAD52

SNP kanssa

in vitro

platinaa vastarintaa ja ennusteen potilailla, joilla CSCC.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

hanke hyväksyi Institutional Review Board Fudanin yliopiston Shanghai Cancer Center (FUSCC). Kirjallinen suostumus saatiin kaikilta palvelukseen henkilöitä, ja kukin kliininen tutkimus suoritettiin periaatteiden mukaisesti ilmaistu Helsingin julistuksen suostumuksen.

Potilaat

Tässä tutkimuksessa, rekrytoimme 154 CSCC potilailla, joilla oli radikaaleja kohdunpoisto ja lantion imusolmukkeiden maaliskuun 2008 päivänä maaliskuuta 2009 Fudanin yliopiston Shanghai Cancer Center (FUSCC). Kaikki tapaukset olivat histologisesti vahvistettiin okasolusyöpä kahdella gynekologiset patologit (XYT ja GY). Yksityiskohtaiset kliiniset tiedot eristettiin potilaiden sähköistä tietokantaa FUSCC ja mukana ikä, kasvaimen vaiheessa (FIGO, International Federation of Gynecology and Obstetrics, 2009), kasvaimen koko (eli suurin kasvain halkaisija raportoimat patologi jälkeen kirurginen resektio) , lantion imusolmuke (LN) etäpesäkkeitä, lymfoproliferatiivisten vaskulaaritilaa invaasiota (Lvsi) ja syvyys kohdunkaulan strooman hyökkäystä. Potilaita seurattiin kolmen kuukauden välein kahden ensimmäisen vuoden aikana, kuuden kuukauden välein kahden seuraavan vuoden aikana, ja vuosittain seuraavien vuosien jälkeen. Analyysi kaikkien veri- ja kudosnäytteet suoritettiin sokkona osalta potilaiden chemoresistance ja selviytymisen tila.

SNP Selection

SNP valittiin NCBI dbSNP tietokannasta (http : //www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP), Kansainvälinen HapMap Project tietokanta (https://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/) ja SNP toiminto ennustuksen (FuncPred) ohjelmisto (http : //snpinfo.niehs.nih.gov/snpfunc.htm), joka perustuu neljä kriteeriä: 1), joka sijaitsee molemmissa päissä

RAD52

geenin [eli 5′-sivuava, 5′-transloimaton alue (UTR), 3′-UTR, 3′-], 2) oli pieni alleelin frekvenssi on vähintään 5% Kiinan väestön, 3) alhaisen kytkentäepätasapainossa käyttämällä

r

2 kynnys 0,8 toisiaan, ja 4) ennustetun mahdollisesti funktionaalinen SNP at microRNA (miRNA) sitoutumiskohtiin tai transkriptiotekijän sitoutumiskohtia. Tämän seurauksena kolme

RAD52

SNP: tä on valittu, ja ne ovat rs1051669G A (3′-UTR), rs10774474A T (5′-sivuava) ja rs11571378T A (5′-sivuava).

DNA Extraction ja genotyypin

Perimän DNA saatiin kokonaisista verinäytteistä käyttäen QuickGene DNA kokoveri Kit (Fujifilm Co., Tokio, Japani) mukaan valmistajan ohjeiden. DNA puhtaus ja pitoisuus määritettiin spektrofotometrisesti absorbanssin mittaus 260 ja 280 nm Synergy ™ 4 Monitila Microplate Reader (BioTek, Winooski, VT).

Valitut SNP genotyypattiin käyttäen multiplex SNaPshot määrityksen. Alukkeet PCR-monistuksen ja SNaPshot laajennus suunniteltiin olevan hehkutus lämpötila noin 60 ° C: ssa käyttäen Primer5 ohjelmistoa. Testaamiseksi mahdollisia toistuvat sekvenssit, alukkeet kohdakkain GeneBank tietokantaan käyttäen BLAST online-työkalu. AutoDimer Ohjelmisto käyttää havaittaessa mahdollisten hiusneularakenteiden ja mahdolliset alukedimeerin yhdistelmiä. Kaikki alukkeet syntetisoitiin Sangon Biotech Co., Ltd (Shanghai, Kiina). Sen jälkeen, kun monistus ja puhdistus, PCR-tuotteet sekoitettiin ja käytettiin templaattina SNaPshot laajennus reaktion. Sitten, elektroforeesi suoritettiin ABI 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, CA) tarkistaa laadun PCR-tuotteiden. Genotyyppaustulokset data lopulta analysoitiin Peak Scanner Software versio 1.0 (Applied Biosystems). Kymmenen prosenttia näytteistä valittiin satunnaisesti voidaan sekvensoida. Tämän seurauksena keskimääräinen genotyypin oli 93,5% käyttäen multiplex SNaPshot määrityksessä. Ero korko kaikissa positiivisia kontrolleja (eli monistaa näytteet, päällekkäisiä näytteitä aikaisemmista tutkimuksista ja näytteitä satunnaisesti valittu Sekvensoitavat) oli alle 0,1%.

MTT-menetelmää [20]

suorittaessaan MTT-määritystä, me pidetään aiemmin raportoitu plasman huippupitoisuudet (PPC) neljän valitun platina aineet: sisplatiini 10 ug /ml (Qilu Pharmaceutical Co., Kiina, kliininen annos 100 mg /m

2) [21] , karboplatiini 20 ug /ml (Qilu Pharmaceutical Co., Kiina, kliininen annos 450 mg /m

2) [22], nedaplatiini 10 ug /ml (Nanjing Dongjie Pharmaceutical Co., Kiina, kliininen annos 100 mg /m

2) [23] ja oksaliplatiini 12 ug /ml (Nanjing Pharmaceutical Factory Co, Kiina, kliininen annos 130 mg /m

2) [24]. Varsinaisessa kokeessa käytimme 10 × PPC kuin lopullinen työskentelypitoisuuden kullekin näistä platinaa aineita suosittelema aiemmin [25], [26].

Histopatologisesti vahvisti tuore kasvain kudosten leikkauksen leikattiin palasiksi on pienempi kuin 5 x 5 mm ja suspendoitiin RPMI 1640-alustassa (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO), mukana 15% naudan sikiön seerumia (Gibco, Langley, OK) huoneenlämpötilassa. Keskeytetty syöpäsolut kaadettiin yli 150 pm steriili teräsverkolla sijoitetaan lautasen. Percoll epäjatkuva gradienttisentrifugoinnilla 400 g käytettiin erottamaan ja puhdistamaan syöpäsolujen suosittelema aiemmin [20]. Syövän solut tunnistettiin käyttämällä H 2+). Sydänten jotka olivat uninterpretable takia kudoskatoa tai puuttuminen soluissa, pisteet ei sovelleta (N /A) annettiin.

tilastolliset menetelmät

Koska platina-inhibiitionopeudet eivät seuranneet normaalijakaumat teimme paramerinen

Wilcoxonin

testi ja

Kruskal-Wallis

testi verrata platina-inhibiitionopeudet kullekin aineelle sekä välillä tekijöille ja eri ryhmiin. Pearsonin χ

2-testi ja regressioanalyysimme käytettiin myös arvioimaan yhdistyksen välillä

RAD52

genotyypit ja proteiinin ilmentymiseen. Selviytymisen analyysin ilman taudin etenemistä (PFS) ja kokonaiselossaoloaika (OS) kertaa laskettiin alkaen ensimmäisestä leikkauksen päivämäärä taudin uusiutumisen ja kuoleman, vastaavasti. Potilaat ilman etenemistä, hävisi seuranta tai kuolleet muista syistä sensuroitiin niiden viimeinen täsmäytyspäivänä.

Kaplan-Meier

selviytymisen arvio ja log-rank testi laskettiin arvioimaan PFS ja OS. Suoritimme Coxin suhteellisen vaarat regressioanalyysiä vaikutusten arvioimiseksi on

RAD52

genotyyppien kumulatiivisesta todennäköisyys selviytymisen CSCC potilailla. Jokainen raportoitu

P

arvo oli kaksipuolinen, ja

P

0,05 käytettiin päättelemään tilastollista merkitystä. Kaikki analyysit suoritettiin käyttäen SAS-ohjelmiston (versio 9.1; SAS Institute, Cary, NC).

Tulokset

Potilastiedot ja in vitro Platinum-esto hinnat MTT Pitoisuus

genotyypin oli hävinnyt 10 tapauksessa toistuvan määrityksiä. Näin ollen lopullinen analyysi mukana 144 CSCC potilasta, joiden kliiniset ja patologiset ominaisuudet on koottu taulukkoon 1. potilaiden mediaani ikä diagnoosi oli 46,5 vuotta (vaihteluväli 20-70 vuotta). Levinneisyysaste jakelu oli 68 (47,6%) vaiheessa IB, 67 (46,9%) vaiheessa IIA ja kahdeksan (5,6%) vaihe II B. Potilaat, joilla kasvain on suurempi kuin 4 cm osuus 43,8% (63/144) tapauksista. Neljäkymmentä yhdeksän (34,0%) ja 50 (34,7%) potilaista oli positiivinen lantion LN etäpesäkkeitä ja positiivinen Lvsi, vastaavasti. Oli 109 (75,7%) tapauksista, joiden syöpäsolut tunkeutuneet yli 1/2 strooman kerros kohdunkaula. Mediaani seuranta-aika oli 37,6 kuukautta (vaihteluväli 32,1-41,6 kuukausi), ja siellä oli 20 (13,9%) toistuminen ja 10 (6,9%) kuolemia aikana seuranta-ajan.

mediaani

in vitro

esto syöpäsolun kasvua sisplatiini, karboplatiini, nedaplatiini ja oksaliplatiini oli 80,8%, 34,3%, 76,4% ja 52,0%, tässä järjestyksessä (kuva 1). Käyttämällä

Kruskal-Wallis

testi, huomasimme, että neljä platina aineet osoittivat merkittävää eroa estämällä syöpäsolujen (

Kruskal-Wallis

testi,

P

0,001, kuvio 1). Sisplatiini ja nedaplatiini molemmilla oli suurempi vaikutus estämällä syöpäsolujen kuin karboplatiini teki (

Kruskal-Wallis

testi,

P

0,001; Kuva 1). Lisäksi merkittävää eroa inhibiitionopeudet välillä havaittiin sisplatiinin ja nedaplatiini ryhmät (

Wilcoxonin

testi,

P

= 0,269; Kuva 1). Kunkin platinavalmiste, vertasimme sen inhibiitionopeudet eri ryhmiin eri kliinisiä ja patologisia ominaisuuksia, mutta ei havaittu merkittävää eroa (tuloksia ei ole esitetty).

mediaani

in vitro

inhibition määrä syöpäsolujen kasvua sisplatiinia, karboplatiinia, nedaplatiini ja oksaliplatiini oli 80,8%, 34,3%, 76,4% ja 52,0%, tässä järjestyksessä, ja ne on merkitty ”-”. Neljä ryhmää osoitti merkittävää eroa estämällä syöpäsolujen (

Kruskal-Wallis

testi,

P

0,001). Ei ole merkittävää eroa inhibiitionopeudet välillä havaittiin sisplatiinin ja nedaplatiini ryhmät (

Wilcoxonin

testi,

P

= 0,269).

välisestä assosiaatiosta RAD52 SNP ja in vitro platina-esto hinnat

Kaikki havaitut genotyyppi jakaumat hoidettavien joukossa kanssa sovittu Hardy-Weinberg tasapaino (HWE,

P

= 0,533 ja 0,115 varten rs1051669 ja rs10774474, vastaavasti), paitsi rs11571378 (

P

= 0,0004). Kaiken rs1051669A ja rs10774474T variantti alleelit olivat merkitsevästi yhteydessä platinaa vastarintaa. Syöpäsolut kanssa rs1051669AA ja rs10774474TT variantti homozygoottien oli alhaisemmat vasteet karboplatiini ja nedaplatiini, vastaavasti (

Kruskal-Wallis

testi,

P

= 0,024 ja 0,018, vastaavasti, taulukko 2). Tarkemmin, olettaen resessiivinen geneettinen malli, huomasimme, että potilaat, jotka kantoivat rs10774474 TT-genotyyppi oli merkittävästi lisääntynyt vastustuskyky nedaplatiini, verrattuna niihin, jotka toteutetaan AA /AT genotyyppien (

Wilcoxonin

testi,

P

= 0,027). Rs1051669 AA genotyyppi harjoittajat näyttivät kasvaneen karboplatiinia vastus verrattuna GG /AG-genotyyppi joukkoon, mutta tämä ei ollut tilastollisesti merkitsevä (

Wilcoxonin

testi,

P

= 0,074). Ei ollut merkittävää yhteyttä välillä

in vitro

inhibiitionopeudet ja rs11571378 SNP.

Association between kliinis Ominaisuudet, RAD52 SNP ja Survival

Säätämisen jälkeen potilaille ikä, FIGO vaiheessa kasvaimen koko, lantion LN etäpesäkkeitä, Lvsi ja syvyys strooman hyökkäyksen, emme löytäneet riippumaton yhdistys yhden muunnoksen, yksin, potilas- eloonjäämisen (tuloksia ei ole esitetty). Kuitenkin, kun nämä kolme valittu RAD52 SNP yhdistettiin, potilaat joilla on vähintään yksi (≥1) variantti alleeli (eli rs10774474T, rs11571378A ja rs1051669A) oli huonompi PFS ja OS verrattuna ilman variantin alleelien (log-rank-testi

P

= 0,047 ja 0,162, vastaavasti, kuvio 2A ja 2B).

potilailla, joilla on vähintään yksi (≥1) variantti-alleeli (eli rs10774474T, rs11571378A ja rs1051669A) oli huonompi ilman taudin etenemistä ja kokonaiselinaika verrattuna ilman variantin alleelien (log-rank testi,

P

= 0,047 ja 0,162, tässä järjestyksessä). RAD52 (C) negatiivinen ja (D) positiivinen ilme alhainen soluliman taustalla havaittiin vasta-sc-8350 (400 x).

RAD52 SNP Associated kanssa RAD52 Protein Expression

edelleen arvioida biologinen uskottavuus taustalla havaitun yhdistys, suoritimme IHC analyysin kohdekudoksista ja totesi, että RAD52 paikallistettiin tumassa (kuvio 2C ja 2D). Keskiarvot RAD52 proteiinin ilmentymisen tasot olivat 1,6 ± 1,8 ja 4,2 ± 1,8 kohdunkaulansyövän ja normaaleissa kudoksissa, vastaavasti. Niistä 144 tapaukset analysoitiin, 109 (75,7%) oli RAD52 negatiivisia, 30 (20,8%) oli RAD52 positiivisia ja viisi (3,5%) oli RAD52 N /A. Positiivinen ilmentymisnopeudessa ( 2+) on RAD52 proteiinin kohdunkaulan syövän kudoksissa oli 22% (30/139) verrattuna 88% vuoden normaaleissa kudoksissa (15/17) (χ

2-testi,

P

0,001). Genotyyppi jakaumat rs1051669G A, rs10774474A T ja rs11571378T Taulukko 3]. Lisäksi RAD52-negatiivisten tulosten osuus oli merkitsevästi yhteydessä huonoon vasteen kohdunkaulan syöpäsolujen karboplatiinin (

Wilcoxonin

testi,

P

= 0,028; taulukko 2). Kuitenkin, emme löytäneet mitään merkittävää korrelaatiota RAD52 proteiinin ilmentymiseen ja potilaiden eloonjäämisen (tuloksia ei ole esitetty).

Keskustelu

Vastustuskyky platinapohjaiseen kemoterapiaan on Challege kliinisissä käytännössä [5] – [7]. Esillä olevassa tutkimuksessa arvioidaan platinaa vastarintaa, suoritimme MTT-määritystä, joka oli laajalti käytetty kemiallisia Herkkyystestiä, ja sen yleinen tarkkuus oli noin 81,3% ennustamaan kliinistä vaikutusta gynekologinen syöpä [28]. Olemme havainneet, että estoaste nedaplatiini ja sisplatiinin kohdunkaulan syöpäsolut ovat paljon korkeammat kuin karboplatiinin ja oksaliplatiinin, riippumatta kliiniset ja patologiset muuttujia. Tämä havainto on yhdenmukainen nykyisen NCCN ohjeena suosituksia sisplatiini on ensimmäinen valinta kemoterapiassa kohdunkaulan syöpää. Meidän toteamukset nedaplatiini ovat myös yhdenmukaisia ​​julkaistun kliinistä tietoa. Lisääntyvä tiedot ovat osoittaneet, että nedaplatiini on yhtä tehokas kuin sisplatiini vähemmän ruoansulatus ja munuaistoksisuus ja voi olla lupaava vaihtoehto valinta kohdunkaulan syövän potilaille [29]. Kuitenkin suurempia satunnaistettuja kliinisiä kokeita tarvitaan vahvistamaan tätä päätelmää.

On hyvin tunnettua, että DNA: n korjautumista tärkeä rooli platinaa vastarintaa ja kaikki häiriön DNA: n korjaukseen voi johtaa lisääntynyttä alttiutta hoitoon [30 ], [31]. DSB, kaikkein vaarallisin muoto DNA vaurioita ionisoivan säteilyn aiheuttama ja platinaa aineita, korjataan kaksi suurta korjausta väyliä-HRR ja ei-homologisen end-liittymällä [32]. On ehdotettu, että kohonnut tiheys DSB ja kromosomipoikkeavuuksien havaitaan 16-24 tuntia sisplatiinin jälkeen altistus [33] ja tukahduttaminen siihen liittyvien proteiinien mukana HRR reitti voi olla vastuussa vastustuskyky sisplatiinin [34]. Vuonna

Saccharomyces cerevisiae

, hiiva

RAD52

avainasemassa replikaatioon liittyviä HRR [35]. Hiivan RAD52 ja nisäkkään RAD52 osoittavat samanlaista aminohapposekvenssiä ja biokemiallisia toimintaa, mikä viittaa siihen, sen konservoitunutta toiminto [36]. Aiemmat tiedot ovat osoittaneet, että nisäkkäiden RAD52 voisi vastata DNA DSB: ihin ja replikointi sammumisen riippumatta BRCA2, joka toimii itsenäisenä ja vaihtoehtoisen HRR reitin [37]. Esimerkiksi puuttuminen RAD52 proteiinin johti laajaan kromosomiaberraatiot, erityisesti kromatidityyppisten poikkeavuuksien [37], ja platinaa aineita voisi sitoutua suoraan DNA, mikä johtaa erityyppisten DNA vaurioiden [38]. Lisäksi downregulation

RAD52

mRNA: iden liittyy huono vaste soluja platina-johdettujen yhdisteiden BRCA1-viallinen HCC1937 soluihin [15]. Johdonmukaisesti, tässä tutkimuksessa, huomasimme, että RAD52-negatiivinen proteiini ilmentymistilanne liittyi huono vaste kohdunkaulan syöpäsolujen karboplatiinia. Siksi

RAD52

voi osallistua muodostumiseen platinaa vastarintaa. Kuitenkin lisätutkimuksia tarvitaan tutkimaan mekanismit havaitun matalan RAD52 ekspressiotasot että on ensiarvoisen kohdunkaulan syövän kemoterapiaa.

Parhaan tietomme mukaan tämä on ensimmäinen tutkimus, joka keskittyi ennustearvo

RAD52

vaihtelut platinaa vastarintaa ja ennusteen CSCC. Kiinnostavaa kyllä, havaitsimme, että rs11571378 genotyyppi jakautumista potilaiden poikkesi HWE mutta ei ennustanut mitään kliinisiä tuloksia. Sen sijaan kaksi muuta SNP: (eli rs1051669 ja rs10774474), joiden genotyyppi jakaumat potilaiden keskuudessa seurasi HWE, jotka itsenäisesti liittyy

in vitro

inhibiitionopeudet karboplatiinin ja nedaplatiini in CSCC-soluissa, vastaavasti, mikä osoittaa, tärkeä rooli

RAD52

variantit platinaa vastarintaa. Itse asiassa, nämä kaksi SNP: itä sekä ennustettu mahdollisesti toimiva. Esimerkiksi rs1051669 SNP sijaitsee 3′- UTR

RAD52

ja voi olla suurentunut miRNA sitoutumiskohdassa häiritä miRNA-mRNA vuorovaikutuksen ja vaikuttavat ilmaus miRNA kohdennettujen geenien [39]. Samoin rs10774474 SNP sijaitsee ylävirtaan

RAD52

, jotka saattavat olla transkriptiotekijän sitoutumiskohdan osallistua geeniregulatiivista verkoissa, kuten DNA: n korjaus reittejä [40]. Lisäksi RAD52 proteiinin ekspressiotasoja liittyivät inhibiitionopeudet karboplatiinin, samanlainen tulos havaittiin

RAD52

-rs1051669 SNP. Mielenkiintoista, meidän genotyyppi-fenotyyppi korrelaatio analyysit osoittivat myös, että rs1051669 SNP oli merkitsevästi yhteydessä RAD52 proteiinin ekspressiotasoja. Siksi lienee biologisesti uskottavalta, että

RAD52

-rs1051669 SNP voi olla toimiva säätelemällä RAD52 ilmaisun ja siten edistää platinaa vastarintaa kohdunkaulan syöpäpotilailla.

Kaplan-Meier

eloonjäämisennusteet osoitti lisäksi, että potilaat, jotka toteutetaan vähintään yhden (≥1) variantti alleeli kolmesta

RAD52

SNP oli huomattavasti huonompi PFS kuin ne, jotka eivät kanna variantin alleelien, mikä osoittaa vaikutus

RAD52

SNP ennusteeseen CSCC potilaista. Koska nämä variantti genotyypit voivat ennustaa proteiinin ilmentyminen, me arveltu, että RAD52 proteiinin ekspressiotasot voidaan ennustaa selviytymisen kohdunkaulan syöpä. Kuitenkin tässä tutkimuksessa, emme noudata mitään assosiaatioita yksittäisen SNP tai RAD52 proteiinin ekspressiotasot ja selviytymistä, mikä saattaa johtua suhteellisen lyhyt seuranta-aika on rajoitettu tapahtumien uusiutumista ja kuolemia. Kuitenkin jotkut julkaistua tietoa muiden syöpien eivät tue hypoteesia, vaikka mitään tutkimuksia kohdunkaulan syöpä on julkaistu tähän mennessä. Äskettäin, Jewell et ai. raportoitu, että yli-ilmentyminen

RAD52

mRNA voitaisiin ennustaa huono PFS riskisuhde 4,49 melanooman ja että syöpäsolut ilmen- tymisen lisääntymisen geenien DNA korjaukseen väyliä olivat todennäköisesti aggressiivisempia [41].

Yhteenvetona

RAD52

SNP, yksin tai yhdessä, voivat muuttaa geenien toiminnan ja muuttaa RAD52 proteiinin ekspressiotasoja, mikä tekee syöpäsolujen resistentti platinaa aineita. Suurempi mahdollisille tutkimukset pidempi seuranta-aika tarvitaan vahvistamaan havaintomme.

Kiitokset

Haluamme kiittää Yunhua Ling, Guangqi Qin ja Hongyu Gu Fudanin yliopiston Shanghai Cancer Center suorittamiseksi

in vitro

MTT-määritystä, kudosten microarray ja immunohistokemia tekniikoita, vastaavasti, ja kiitos professori Shaokang Zhan Fudanin yliopiston School of Public Health tilastollista analyysia tukea. Kiitämme myös professori Mario Leitao Memorial Sloan-Kettering Cancer Center tarkasteltaessa tätä paperia.