Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Spontaani munasarjasyövän kanoilla muistuttaa ihmisen kasvaimissa sekä histologisesti ja biokemiallisesti. Tavoitteena oli selvittää, eroja lymfosyyttien pitoisuus normaalin munasarjat ja munasarjojen kasvaimia kanoilla pohjaksi lisätutkimusten ymmärtää rooli immuniteetin ihmisen munasarjasyövän etenemistä.

Methods

Kanat valittiin käyttämällä harmaasävy ja väri Doppler ultraääni onko heillä oli normaali tai kasvain morfologia. Solut eristettiin munasarjoista (n = 6 kanat) ja lymfosyyttien määrä määritettiin virtaussytometrialla käyttämällä vasta-aineita avian CD4- ja CD8-T ja B (Bu1a) soluja. Munasarjojen osastoja toinen joukko kanojen (n = 26) arvioitiin tarkistaa kasvaimen tyyppi ja vaihe ja laskea CD4, CD8 ja Bu1a immunovärjättiin soluissa morfometristä analyysiä.

Tulokset

T ja B solut olivat lukuisia ovarioiden kuin normaalissa munasarjat virtaussytometrialla ja immunohistokemia. Oli vähemmän CD4 + soluja kuin CD8 + ja Bu1a + solujen normaalin munasarjat tai munasarjan kasvaimet. CD8 + solut olivat hallitseva T-solu alatyyppi sekä munasarjojen strooman ja munarakkuloita verrattuna CD4 + soluja. Bu1a + solut johdonmukaisesti löydettiin peruskudoksesta normaalin munasarjat ja munasarjojen kasvaimia, mutta ei liittynyt munarakkuloiden. Lukumäärä immuunisolujen oli eniten myöhäisessä vaiheessa vakavien kasvainten verrattuna endomet- ja mucinous kasvaimia.

Johtopäätökset

Tulokset viittaavat siihen, että samankaltainen kuin ihmisen munasarjasyöpä on suhteellisesti enemmän immuunijärjestelmän soluja kanan munasarjojen tuumoreissa kuin normaalissa munasarjat, ja korkein immuunisolujen sisältö esiintyy vakavasta kasvaimia. Näin ollen tämä tutkimus luo perustan lisätutkimuksia kasvaimen immuunivasteiden spontaani malli munasarjasyövän mikä helpottaa tutkimuksia roolin immuniteetin alussa munasarjasyövän etenemistä ja käytöstä kana prekliinisissä rokotuskokeet.

Citation: Bradaric MJ, Penumatsa K, Barua A, Edassery SL, Yu Y, Abramowicz JS, et ai. (2013) immuunisolujen Normal munasarja ja spontaanit Munasarjojen Kasvaimet että kanoja (

Gallus domesticus

) Model of Human munasarjasyöpä. PLoS ONE 8 (9): e74147. doi: 10,1371 /journal.pone.0074147

Editor: Rajeev Samant, University of Alabama at Birmingham, Yhdysvallat

vastaanotettu: 22 maaliskuu 2013; Hyväksytty: 26 heinäkuu 2013; Julkaistu: 09 syyskuu 2013

Copyright: © 2013 Bradaric et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat NIH R01AI055060 (JL), DOD OC073325 (JL), The Segal Foundation (JL) ja estää Syöpäsäätiön (AB). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Taustaa

Useita asiat liittyvät kehittymistä ja etenemistä syövän myös geneettiset, epigeneettiset, ympäristö- ja immuuni tekijät [1], [2]. Vaikka on selvää, että koskemattomuus on merkittävä rooli syövän ja valvoa immuunivasteita kasvaimia on merkittäviä mahdollisuuksia syövän ehkäisyyn ja hoitoon, immuunivastetta kasvaimia ei ole hyvin ymmärretty. Korkeampi kasvain pitoisuus CD3 + T-solujen [3], tai sytotoksisten CD8 + T-solujen [4] myöhäisessä vaiheessa kasvaimia liittyy parempi ennuste munasarjasyöpä potilaille, kun taas korkeamman suhteellisen pitoisuus säätelijä-T-solujen liittyy huonompi ennuste [5 ], mikä viittaa määrä ja tyyppi immuunisolujen ovat tärkeitä kliinisiä tuloksia. Viimeaikaiset todisteet osoittavat, että CD20 + B-solujen löytyy sekä varhaisen ja myöhäisen vaiheen munasarjojen kasvaimia ja että korkeammat numerot voivat liittyä paremmin viisi vuotta eloonjäämisaste [6]. On kuitenkin olemassa ristiriitaisia ​​tietoja roolista immuniteetin kasvaimen estämiseksi tai etenemisen ja on ehdotettu, että toiminnallinen rooli immuniteetin muutosten aikana syövän etenemistä [7].

Munasarjasyövän diagnosoidaan yleensä edennyt pitkälle ja on korkea toistumisen ja kuolleisuuden koska ei ole olemassa standardia varhaisen havaitsemisen menetelmiä. Koska varhaisessa vaiheessa munasarjasyöpä on vaikea havaita, useimmat tutkimukset käyttävät myöhäisessä vaiheessa yksilöt ja siten on suhteellisen vähän tietoa koskemattomuudesta aloittamisesta ja varhainen etenemisessä munasarjasyöpä. Alkuvaiheessa munasarjasyövän ovat helpommin tutkittu eläinmalleissa ja nämä mallit ovat vaihtoehtona valaisemaan kasvain etiologiasta ja rooli immuniteetin munasarjasyöpä. Jatkokehitys prekliinisen malleja munasarjasyövän helpottamiseksi tarvitaan kehittämiseen ja testaamiseen rokotteiden hoitoon munasarjasyöpä.

On olemassa useita jyrsijämalleilla munasarjasyövän perustuu geneettisesti tai kemiallisesti aiheutettujen kasvaimien tai istuttaminen ihmisen kasvaimia SCID (Severe Combined Immunodeficiency) tai RAG (rekombinaatiolait- aktivoiva geeni) hiirissä [8]. Kuitenkin useimmat jyrsijöiden eivät kehittää munasarjasyöpä spontaanisti ja ne, jotka tekevät usein tuottavat vain yksi histotype [8], [9], [10], [11], [12]. Vaikka nämä mallit ovat hyödyllisiä oivalluksia geneettiset ja ympäristötekijät vaikuttavat syöpien ja kehittämiseen Chemo-hoitostrategioita, ne ovat vähemmän sopivia tutkinta aikaista spontaania liittyvien tapahtumien kasvain immunologian koska ei ole selvää, jos niille tehdään sama luonnollinen tai spontaani tapahtumia, jotka johtavat munasarjojen kasvaimia.

kanoja (

Gallus domesticus

) täyttää tämän aukon, koska se kehittää spontaanisti progressiivinen munasarjojen kasvaimista myöhemmin etäpesäkkeitä ja tuotanto askites [13]. Me ja muut kertoivat, että munivia kanoja on pätevä malli tutkia ihmisten munasarjasyöpä [14], [15], [16], [17], [18]. Spontaani munasarjojen kasvaimia kana on monia piirteitä ihmisen munasarjasyöpä. Histologia ja morfologia hen ja ihmisen munasarjan kasvaimet ovat samanlaisia; hen kasvaimet yleensä on vakavasta, endomet-, kirkas solu ja mucinous histologia verrattavissa usein epiteelin alatyyppejä ihmisen munasarjasyöpä [14]. Osoitimme aikaisemmin, että munasarjojen kasvaimia munivat kanat voivat myös havaita transvaginal ultraäänen avulla laitetyypin yleisesti käytetään klinikoilla [19], [20]. Yhdistettynä varjoaineiden [21], pystyimme edetä vaiheeseen, jossa munasarjojen tuumoriangiogeneesissa ja pienet mikroskooppiset kasvainpesäkkeet havaittu. Siten ei-invasiivisia menetelmiä valitsemiseksi kanojen analysointiin ja seurantaan kasvaimen etenemiseen ovat käytettävissä. Lisäksi luonnossa esiintyvät geneettisiä mutaatioita, kuten p53, RAS ja Her2 /neu löytyvät kana kasvaimissa [22], [23], [24]. Samoin on kasvava lista proteiinien ilmaistu kanan munasarjojen kasvaimia, kuten CA125 [25], Mesothelin [26], COX 1 [27], [28], Seleeni Binding Protein 1 [29], E-kadheriinin [30] ja VEGF jotka samalla muuttanut ihmisen munasarjan kasvaimissa [17], [20], [31]. On myös silmiinpistävää, että aspiriinin [32] ja eksogeenisen progesteronin [33] osittain vähentää munasarjojen kasvaimia samankaltainen ihmisille. Munasarjasyövän kana on monia puolia ihmisten sairauksien ja siksi on pätevä malli.

Munivien kanojen malli soveltuu erityisesti tutkimuksiin munasarjasyöpä ja koskemattomuus. Kana on tunnettu uraauurtava maksuosuudet ymmärrystämme immunologian lukien ensimmäiset todisteet eri suvusta T ja B-lymfosyytit [34]. Munasarjassa, on kasvu follicle liittyvät T-soluissa, makrofageissa ja B-solut aikana munasarjojen kypsymisen ja sitten lasku ikääntymiseen [35], [36], [37], [38]. Lisäksi, seerumin kanojen munasarjojen kasvaimia sisältää anti-munasarja- ja anti-kasvain-vasta-aineita [39] samanlainen naiset [40], [41], [42]. Siten munivia kanoja malli edustaa toteuttamiskelpoinen malli tutkia koskemattomuutta ja varhaisessa vaiheessa munasarjasyöpään.

Kuitenkin, tyypit ja sisällön immuunisolujen jos kanojen munasarjojen kasvaimia ja muutokset verrattuna normaaliin munasarjat ovat tuntemattomia. Siksi tavoitteena poikkileikkauksen tutkimuksen tarkoituksena oli kuvata ja määrällisesti T- ja B-solut, jotka liittyvät munasarjojen kasvaimia munivia kanoja, jotta voidaan luoda perusta tutkimuksiin mekanismeja immuniteetin ihmisen munasarjasyöpä.

Materiaalit ja menetelmät

Animal Care ja Selection

White Leghorn kanojen (3 vuotias, kanta W96) pidettiin University of Illinois at Urbana-siipikarjatilalla Kotieläintieteen laitos . Ruoka ja vesi toimitettiin

ad libitum

ja kanoja pidettiin sijoitukset 17:7 tuntia (valo: pimeä) aikataulun. Munasarjojen morfologia ja angiogeneesi arvioitiin käyttämällä transvaginal ultraäänellä kuten aiemmin on kuvattu [19], ja tietoja käytetään valitsemaan kanojen normaali munasarjat tai munasarjan kasvaimet. Varten virtaussytometria, solujen koko munasarja valmistettiin ilman histologista arviointia varten. Immunohistokemiallista tutkimuksia, kanat olivat samalla valittu. Normaali tai kasvainhistologiaa ja kasvaimen vaiheesta todennettiin ja kasvaimen tyyppi määritettiin käyttäen hematoksyliinillä ja eosiinilla (H Olympus America Inc., Center Valley, PA). Immunopositiivista solut laskettiin käyttäen MicroSuite Viisi ohjelmistoa (Olympus America Inc.). Lyhyesti, vähintään kolme osaa kustakin munasarjasta kaksikymmentä-kuusi kanoja laskettiin per immuuni solumerkille (CD4, CD8 ja Bu1a) yhteensä 243 dioja (3 liukuu × 27 munasarjat x 3 markkereita).

Yhteensä immuunijärjestelmän solut laskettiin kussakin osassa. Kussakin osiossa, 5- 20 satunnaista kentät laskettiin suurennoksella 20x (tai 84.000 um

2) koosta riippuen näytteen. Solujen määrä laskettiin keskiarvo kunkin osan normalisoida datan, koska eri kenttien määrä laskettiin eri kokoisia osia. Kolme osaa laskettiin keskiarvo jokaiselle hen kunkin markkerin. Arvot kullekin ryhmälle (normaali, varhainen ja myöhäinen kasvaimet) laskettiin keskiarvo ja ilmaistiin keskimäärin solujen 8.4 x 10

4 pm

2 munasarjojen kudosta. Ryhmä nimitykset (normaali, varhainen ja myöhäinen vaihe syöpä) perustuivat histologinen arviointi H 0,5 pidetään merkittävinä.

Tulokset

Hen valinta ja Munasarjojen Morfologia

Kanat valittiin ryhmiin ja ilman munasarjojen kasvaimia perustuu väri Doppler ultraääni ja brutto morfologia munasarjoissa. Kuten aiemmin on kuvattu, normaalin munasarjat sisältävät useita kehittää munarakkuloita (kuva 1A ja 1 D) ja diskreetti verisuonia (kuvio 1A) stroomaan ympäröivään munarakkuloita. Alkuvaiheen munasarjasyöpä, munasarja on vähemmän kehittää follikkelit, ja enemmän verisuonia kuin normaalissa munasarjat (kuvio 1 B ja 1 E). Loppuvaiheen munasarjasyöpä, kiinteä massa vesivatsasarkoomalla on ilmeinen ja ei ole kehittää munarakkuloita (kuvio 1C ja 1F).

normaali munasarja (A ja D), jotka erääntyvät munarakkuloita (F1, F2) ja strooman verisuonet (nuolet) normaali brutto morfologia osoittaa erääntyvät (F1, F2) munarakkuloita. Esimerkki epänormaali munasarjan (B ja E), joka sisältää enemmän verisuonia (nuolet) kuin normaalissa munasarjassa, mitään havaittavaa iso kypsä munarakkuloita ja pieni kiinteä kudos massa (ympyrä) munasarjoissa. Esimerkki myöhään munasarjasyöpä (C) ominaista suuri kiinteä massa lisääntynyt verenvirtaus (nuolet) ja runsas askites (*). Myyntikate morfologia (F) vahvisti läsnäolo useita kiinteitä massoja ja tuumorietäpesäke muihin elimiin. Lyhenteet: CT = umpisuolen nielurisojen; F1-F2 = suuri ovulaatiota edeltävässä munarakkuloita; GI = ruoansulatuskanavassa; OV = munasarja; S = munasarjojen strooman; SM = kiinteä kudos massa munasarjoissa; SP = perna; UOD = ylempi munanjohtimen; UT = kohtu.

lokalisaatio lymfosyyttien normaalissa Munasarja, Alkuvaiheen ja myöhäisessä vaiheessa Munasarjojen kasvaimet

CD4 + T-solut havaittiin sisällä thecal kerrokset rakkulat normaalin munasarjat (kuvio 2 ) mutta ei follikkeliepiteelisolujen tai varhaismunasolun osastoissa munarakkuloita. CD4 + T-solut tapahtunut koko normaalin munasarjan, esiintyy satunnaisesti strooman ja vieressä munarakkuloiden sisällä atretic munarakkuloita (ei esitetty) ja lähellä verisuonia. Kasvaimen sisältävän munasarjat, CD4 + T-solut tapahtui stroomaan sekä alkuvaiheen (kuvio 3) ja myöhäisessä vaiheessa munasarjojen kasvaimia (kuvio 4), ja harvemmin kuin joko CD8 + tai Bu1a + solut. Toisin kuin CD8 + T-solujen ja Bu1a + B-solujen, CD4 + T-solut olivat lähellä, mutta ei sisällä, kasvaimen varhaiseen leesioita (kuvio 3). CD8 + T-solut samoin paikallinen normaalissa follikkelia ja strooman lähellä munarakkuloita (kuvio 2). CD8 + T-solut havaittiin varhaisessa ja myöhäisessä vaiheessa kasvaimia (kuviot 3 ja 4). Kun taas B (Bu1a +) ja T-solut samoin jaetaan munasarjojen strooman Bu1a + värjäys harvoin löytyy munarakkuloita (kuvio 2).

Bu1a +, CD4 + ja CD8 + solut (nuolet) havaitaan immunohistokemiallisesti normaalin munasarjat munasarjojen strooman (S) vieressä munarakkuloita (f), on thecal kerros munarakkuloita (double nuoli) ja esiintyi runsaasti solukerrokselle alla munasarjojen pinnan epiteeli (SE). Alkuperäinen suurennos, 10x; asteikko bar = 100 pm. Valitut alueet (katkoviivalaatikoiden) esitetään upotettavat suuremmilla suurennus Bu1a ja CD8 värjäys; upotettavat mittakaavassa viivoilla = 10 pm.

Bu1a +, CD4 + ja CD8 + solut esitetään vastaaviin alueisiin leikesarjojen jotka sisältävät kasvainkeskusten. Lisää CD8 + T-solut ja B-solut ovat läsnä kasvainpesäkkeitä kuin CD4 + T-soluja. (A) alkuvaiheen kasvain osoittaa CD4 + solujen kasvain huonosti eriytetty (PD) rakenne, ja CD8 + ja B-solut viereisessä hyvin eriytetty (WD) alue. (B) pieni vaurio (pisteviiva ympyrä), joka sisältää CD8 + T-solujen ja Bu1a + solut, mutta ei CD4 + solut. (C) alue, jossa neoplastiset solut, jotka sisältävät CD8 + ja Bu1a + solut, mutta ei CD4 + solut. Alkuperäinen suurennos, 10x; asteikko bar = 100 pm. Stained CD8 + valitulla alueella (pilkullinen laatikko) näkyy upotettavat suuremmilla suurennus; asteikko bar = 10 pm.

Samankaltaisia ​​alueilla kolme kasvaintyypeille esitetään sarja leikkeet oli värjätty Bu1a, ​​CD4 ja CD8.

Ylärivi:

Esimerkki osien peräisin serous munasarjakasvain näytetään muutaman CD4 + solujen kasvain verrattuna Bu1a + ja CD8 + solujen.

Middle Row:

Esimerkki siitä mucinous munasarjakasvain osoittaa talletukset Bu1a +, CD4 + ja CD8 + solujen välillä rauhaset ja koko kasvain.

Alarivi:

Esimerkki endomet- munasarjakasvain osoittaa Bu1a +, CD4 + ja CD8 + solut. Alkuperäinen suurennos, 10x; asteikko bar = 100 pm. Stained CD8 + ja CD4 + lymfosyyttien valituilla alueilla (katkoviivalaatikoiden) esitetään sisäkkeet suurennettuna; asteikko bar = 10 pm.

kvantitatiivinen arviointi lukumäärä immuunisolujen normaalissa Munasarja, Alkuvaiheen ja myöhäisessä vaiheessa Munasarjojen kasvaimet

Alkukokeissa kokonaismäärä T ja B-solut eristettiin koko munasarja määritettiin virtaussytometrialla. Edustava virtaussytometrillä sirontakuvaajan esittää kokojakauma solujen normaalin munasarjan ilman kasvaimen (kuvio 5A), jossa on portin lymfosyyttien alue (R1). Vastaava edustaja pistekuvioita jokaisen fluoresoiva leima on myös esitetty (kuvio 5B). Vaikka näytti olevan vähemmän CD4 + T-solut munasarjojen kasvaimia verrattuna normaaliin munasarjat (kuvio 5C), oli myös merkittävä vaihtelua CD4 + solujen sisällön joukossa kanat, mikä todennäköisesti johtuu vaihteluista follicle sisällön ja kasvaimen vaiheessa nähdään solussa määrä on saatu käyttämällä morfometria. Rajoituksena virtaussytometrialla on, että koko munasarja käytetään laadittaessa lymfosyytteihin ja näin sijainti immuunisolujen suhteessa kasvaimia tai munarakkuloita ei voida arvioida. Samoin, se ei ollut mahdollista määrittää kasvaimen tyyppi, munasarjojen morfologia tai kasvaimen vaiheessa histologia. Kokonaismäärä T- ja B-solujen määritettiin edelleen morfometrisiin arviointi immuno- osien normaalista munasarjasta ja munasarjojen kasvaimia. Tämä lähestymistapa mahdollisti myös määrittää munasarjakasvain vaiheessa ja arvioida mahdolliset erot lymfosyyttien paikalla.

(A): edustaja eteenpäin vs. puolella Sirontakuvaajan varten solujen koko munasarja osoittaa portin (R1) käytetty lymfosyyttien. (B) Soluja ensimmäisen porteilla käyttäen portti (A), ja värjättiin sitten joko Bu1a-APC, CD4-FITC tai CD8-PE. Prosenttiosuus leimattujen solujen sisällä portti näkyy oikeanpuoleiseen alanurkkaan kunkin tahra. (C) kokonaismäärä Bu1a-APC, CD4-FITC ja CD8-PE-leimattujen solujen normaalin ja kasvaimen hen munasarjat (n = 3 /ryhmä) näytetään mediaani merkitty vaakasuora viiva.

Within munarakkuloita (kuvio 6), CD8 + T-solujen vähentynyt (p = 0,052), kun taas CD4 + T-solujen määrä nousi (p = 0,009) normaalista varhaiseen kasvaimia ja normaalia myöhäisessä vaiheessa kasvaimia. B-solut eivät tyypillisesti liittyvät munarakkuloita ja ei laskettu. Määrä munarakkuloita vähentynyt tai puuttuivat munasarjojen kasvaimia verrattuna normaaliin munasarjat (kuva 1).

(A) B (Bu1a +) solut harvoin löytyy munarakkuloita ja siksi ei lasketa. CD4 + T-solujen määrä nousi hieman (p = 0,052) ja CD8 + T-solujen vähentynyt (p = 0,009), myöhäisen vaiheen munasarjojen kasvaimia verrattuna normaaliin munasarjat. Kussakin vaiheessa oli enemmän CD8 + verrattuna CD4 + T-solut (normaali munasarja, p = 0,003; varhaisessa vaiheessa kasvaimen, p = 0,008; myöhäisessä vaiheessa kasvaimen, p = 0,007). Munarakkuloita määriteltiin kuvan (B) ja solujen sisällä rajatulla alueella laskettiin ja keskimääräinen määritettiin per 2 x 10

5 um

2 alueella follikkelia. Kolme osaa kustakin munasarja kunkin hen laskettiin suurennoksella 20x; mittakaavajana = 50 pm. Virhepalkit edustavat keskiarvoa ± SEM.

strooman (eli ei-follikulaarinen) immuunijärjestelmän solun sisällön kasvanut kanssa kasvain vaiheessa (kuvio 7) ja leimasi suurempi määrä CD8 + T-solujen kuin CD4 + T-solut kussakin vaiheessa (CD8 vs. CD4-solujen normaalin munasarja-, p = 0,003; varhaisessa vaiheessa kasvain, p = 0,008 ja myöhäisessä vaiheessa kasvain, p = 0,007). Samanlainen virtaussytometria, Bu1a + -solujen ja CD8 + T-solut olivat lukuisia kuin CD4 + T-solujen normaalissa munasarjassa ja varhaisen ja myöhäisen vaiheen munasarjojen kasvaimia (kuvio 7A, B ja C). CD4 + T-solujen oli merkitsevästi pienempi alkuvaiheen kasvaimissa verrattuna normaaliin munasarjojen (p = 0,03) ja ei ollut eroa Bu1a + ja CD8 + solujen. CD4 + -solut lisääntyivät merkitsevästi (p = 0,05), kun taas kasvu keskiarvot Bu1a + ja CD8 + solut eivät pääse merkitystä myöhäisessä vaiheessa kasvaimissa verrattuna normaaleihin. Kaiken yhteensä immuunisolujen nousi normaalista varhaisessa vaiheessa myöhäisessä vaiheessa kasvaimia (kuvio 7D).

Kuten on esitetty paneelien AC normaalin (N), varhainen (E) ja myöhäisessä vaiheessa (L) munasarjasyöpä, Bu1a + -solujen ja CD8 + T-solut olivat lukuisia yleistä kuin CD4 + T-solut, erityisesti myöhäisen vaiheen kasvaimia. Paneelissa D, B ja T-solujen määrä lisättiin. Oli lisääntymiseen yhteensä (ei-follikulaarinen) immuunisolujen normaalista munasarja myöhäisessä vaiheessa kasvaimia. Solut laskettiin useita kenttiä kolmeen osaan kustakin munasarjasta kunkin kanan 20x suurennuksella. Keskimäärin B (Bu1a +) solujen ja CD4 + ja CD8 + T-solujen arvioitiin 11 kanojen normaalin munasarjat (kenttien määrä laskettiin oli Bu1a = 524, CD4 = 425 ja CD8 = 360), 8 kanojen alkuvaiheen munasarjasyöpä ( kenttien määrä laskettiin oli Bu1a = 228, CD4 = 190 ja CD8 = 225) ja 7 kanojen myöhään munasarjasyöpä (kenttien määrä laskettiin oli Bu1a = 180, CD4 = 190 ja CD8 = 200). Koska alueet arvioidaan vaihteli koko, kaikki lasketaan normalisoitiin 8 x 10

4 um

2.

määrä immuunisolujen erosivat kasvaimen tyypin (kuvio 8). Vain myöhäisessä vaiheessa (III /IV) kasvaimet arvioitiin, koska määrittäminen kasvainhistologiaa oli selvempi näissä vaiheissa. Siellä oli enemmän B-solujen vakavien kasvaimia kuin mucinous (p = 2,6 x 10

–

14) tai endomet- (p = 7,6 x 10

–

9) kasvaimia. Vakavien kasvaimia oli huomattavasti vähemmän CD4 + T-soluja verrattuna mucinous (p = 3,8 x 10

–

5) tai endomet- (p = 2,9 x 10

–

9) kasvaimia. Määrä CD8 + T-solujen oli samankaltainen kasvaintyypeille (p 0,2).

Koska histologinen luokitus kasvaimia on selkein myöhäisessä vaiheessa munasarjakasvainten, The morfometrisiin analyysi rajoitettiin myöhäisessä vaiheessa kasvaimia. Tyhjennä solu kasvaimia oli suhteellisen vähän ja ei sisällytetty analyysiin. Määrä Bu1a +, CD4 + ja CD8 + solut laskettiin, kuten on kuvattu menetelmät vakavien (66 kentät 3 kana munasarjat); mucinous (53 kentät 2 kana munasarjat) ja endomet- (37 kentät lasketaan 2 kana munasarjat) histologia kasvaimia. Oli huomattavasti enemmän B (Bu1a +) solujen vakavien kasvaimia kuin mucinous (p = 2,6 x 10

–

14) tai endomet- (p = 7,6 x 10

–

9) kasvaimia. Sen sijaan, serous kasvaimia oli huomattavasti vähemmän CD4 + T-soluja verrattuna mucinous (p = 3,8 x 10

–

5) tai endomet- (p = 2,9 x 10

–

9). Määrä CD + 8 T-solut eivät eronneet merkittävästi kasvainhistologiaa (p 0,2).

Keskustelu

Tämä tutkimus on ensimmäinen tutkia immuunisolujen liittyy munasarjakasvainten että muninta kana malli spontaanin munasarjasyöpä. Yhteenlaskettu immuunisolujen sisällön munasarjojen kasvaimia oli korkeampi verrattuna normaalissa munasarjat. Tuloksena oli samanlainen kahdella standardimenetelmiä; virtaussytometria ja morfometristä analyysiä immunohistokemiallisesti leimatun kudosleikkeiden. Virtaussytometrillä oli suhteellisen suuria eroja solujen määrä kunkin solutyypin, erityisesti kanojen kasvaimia. Nämä vaihtelut saapuvat virtaussytometrialla voisi johtua osittain vaihtelevan sisällyttämisestä solujen verisuonten ja vaihtelevan sisällön aktiivisen munarakkuloita munasarja etenee normaalista munasarja munasarjojen edennyt pitkälle kasvain. Siksi enemmän painotettiin määrittämisestä immuunisolujen numeroiden immunohistokemiallisella morfometria koska sijainti lymfosyyttien suhteessa kasvaimen tai munarakkuloita voitaisiin arvioida ja koska kasvaimia voitaisiin luokitella histologian ja vaihe.

Havainto immuunisolujen normaalissa munasarjassa tässä tutkimuksessa on sopusoinnussa aikaisempien tutkimusten kanojen [38], muut eläinmalleissa [47] ja ihmisissä [45], [48]. Vuonna yksityiskohtainen tutkimus normaalin rotan munasarjassa, lymfosyyttejä oli runsaasti ja myös lisääntynyt lyhytaikaisesti yhtenevä ovulaation [47]. Kun rotat perna oli poistettu, munasarjojen lymfosyytit vähenivät, mutta ei eliminoida viittaa siihen, että normaalissa munasarjassa, on ”asukas” lymfosyyttejä, tai että kaikki lymfosyytit liikennettä perna. Tässä tutkimuksessa kanan, siellä näyttää olevan myös ”paikallisia” lymfosyyttien normaalissa munasarjassa, jotka ovat lähellä kaukosolussa kerros munarakkuloita sekä munasarjan strooman ja pintaepiteelissä. Tämä herättää kysymyksen siitä, onko immuunisolujen löytyy munasarjakasvaimia peräisin pernasta tai imusolmukkeista vai asuva immuunisolujen munasarjoissa myötävaikuttaa pahanlaatuiseen muuntaminen.

Normaalissa kana munasarja, B-soluja havaittiin suhteellisen korkea taajuus strooman ja medullaarinen alueita, samanlainen CD4 + ja CD8 + solujen. Kuitenkin B-solujen havaittiin harvoin sisällä rakkulat, toisin kuin CD4 + ja CD8 + solut. Suhteellisen korkea runsaasti T-solujen rakkulat viittaa niiden tehtävänä normaalin munasarjan toiminta. Vaikka merkki Bu1a on spesifinen hen B-solujen, se ilmentyy myös lintujen makrofagien ja vähemmässä määrin muiden B solutyyppejä [49]. Siten lisätutkimuksia tarvitaan johdetun markkereita erottamaan B-solujen ja ei-B-solujen kana. Kuitenkin, tämä tutkimus osoitti, että B-solut edustavat merkittävää osaa lymfosyyttien munasarjojen kasvaimia.

perusteella lukuisia raportteja muiden ryhmien eläinmalleissa ja ihmisillä, immuunijärjestelmän solut, joihin munasarjojen kasvaimia [50], [ ,,,0],51], [52]. On osoitettu, että potilaan eloonjääminen korreloi määrä kasvaimeen tunkeutuvia lymfosyyttejä [5] kirurginen aine, joka tavallisesti on saatu myöhäisessä vaiheessa tauti. On vaikea määrittää rooli näiden solujen alkuvaiheessa, koska munasarjasyöpä on harvoin havaitaan varhaisessa vaiheessa ihmisissä. Samoin kun munasarjasyövän indusoituu eläinmalleissa ei ole selvää, jos aloittamista tapahtumat ovat malleja spontaanisti syntyvien kasvainten kehitystä. Ei ole tutkimuksia immuunisolujen kanoilla munasarjojen kasvaimia ja joitakin tutkimuksia, jotka vertaavat näitä soluja normaalissa munasarjassa ja munasarjan kasvaimet arvioimaan mahdollisten muutosten aikana spontaanin munasarjojen kasvainten kehittymiseen. Tässä tutkimuksessa havaittiin, että kokonaismäärä immuunisolujen munasarjassa yleensä korkeampi läsnä ollessa spontaania kasvaimia, joka on yhdenmukainen hyväksyttyjen käsite, joka immuunijärjestelmän solujen liikennettä ja tunkeutua kasvaimia [5], [53], [ ,,,0],54]. Lisäksi immuunisolujen pitoisuus on korkein myöhäisessä vaiheessa kasvaimia, erityisesti myöhäisen vaiheen vakavasta kasvaimia. Koska tämä suuntaus on samanlainen kuin ihmisillä [50], [52], [55], [56], [57], tulokset tukevat käyttöä kanan mallin tutkimiseksi immuunivasteita munasarjakasvaimia ja prekliinisen rokotuskokeet.

ihmisillä lymfosyyttien pitoisuus määritettiin immunohistokemiallisesti ovarioiden ei ole yhdenmukainen eri tutkimuksissa, erityisesti suhteessa B-solut [58]. Myöhäisen vaiheen ihmisen munasarjojen tuumoribiopsioissa sisälsi pääasiassa CD8 + /CD45RO + T-solujen ja CD68 + makrofagit, kun taas NK-ja B-soluja esiintyi alhaisin määrä [50]. Sitä vastoin, CD20 + B-solujen havaittiin 42% munasarjojen kasvaimia toisessa tutkimuksessa [6]. Eloonjäämisessä tutkimuksissa, suurempi määrä CD19 + B-solujen liittyi huonompi ennuste [59], kun taas korkeampi määrä CD20 + B-solujen liittyvän kohonneeseen taudista vapaa eloonjääminen [6]. Erot näissä tutkimuksissa voi johtua käyttää eri markkereita, mutta ne voivat myös heijastaa eroja suhteellisen sisältöä eri kasvaimen histo-tyyppejä näissä tutkimuksissa [6]. B-solujen ja CD8 + T-solut havaittiin munasarjojen kasvaimia kanan suhteellisen korkealla taajuudella, kun taas CD4 + soluja havaittiin suhteellisesti pienemmällä taajuudella.

Immuunisolut esiintyi kaikilla kolmella kasvaimen histo-tyypit tutkitaan ( vakavien, mucinous, ja endomet-), mutta oli enemmän immuunijärjestelmän solut myöhäisessä vaiheessa vakavasta kasvaimia.