Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

3′-deoksi-3 ’- [

18F] fluoritymidiini (

18F-FLT) on merkkiaineen käyttää arvioitaessa solujen lisääntymistä

in vivo

. Tavoitteena oli tutkia käyttää

18F-FLT positroniemissiotomografia (PET) tutkimushoitoon vastauksia uuteen syöpälääkkeen yhdiste. Tätä varten tutkittiin varhaisen antiproliferatiivisia vaikutuksia kokeellisen kemoterapiaa Top216 ei-invasiivisesti PET.

Menetelmät /Principal Havainnot

In vivo

ottoa

18F-FLT ihmisen munasarjasyöpä vastaan ​​hiirissä (A2780) tutkittiin eri ajankohtina jälkeen Top216 hoidon (50 mg /kg iv 0 ja 48 tuntia) aloitettiin. Lähtötilanteessa

18F-FLT skannaukset tehtiin ennen joko Top216 (n = 7-10) tai ajoneuvo (n = 5-7) injektoitiin ja toistetaan 2 ja 6 tuntia ja 1 ja 5 päivän hoidon jälkeen. Rinnakkainen tutkimus tehtiin 2′-deoksi-2 ’- [

18F] fluori-D-glukoosi (

18F-FDG) (n = 8). Merkkiaineen sisäänotto kvantifioitiin käyttämällä pieneläinten PET /TT. Kuvantamistuloksia todensi kasvaimen tilavuuden muutosten ja geeni-ilmentymisen Ki67 ja TK1. Top216 (50 mg /kg 0 ja 48 tuntia) inhiboi kasvua A2780 kasvain verrattuna kontrolliryhmään (P 0,001).

18F-FLT otto väheni merkittävästi 2 tuntia (-52%; P 0,001), 6 tuntia (-49%; P = 0,002) ja Day 1 (-47%; P 0,001) jälkeen Top216 hoidon. Päivänä 5

18F-FLT otto oli verrattavissa ottoa kontrolliryhmässä. Otto

18F-FLT pysyi muuttumattomana kontrolliryhmässä kokeen aikana. Hoitoryhmässä, otto

18F-FDG väheni huomattavasti 6 tunnin (-21%; P = 0,003), Day 1 (-29%; P 0,001) ja Päivä 5 (-19%; P = 0,05) verrattuna lähtötilanteeseen.

Johtopäätökset /merkitys

Yksi injektio Top216 aloitetaan nopea ja merkittävä lasku soluproliferaatiosairauden arvioitavissa

18F-FLT 2 tunnin jälkeen. Varhainen vähennykset kasvainsoluproliferaation edeltää muutoksia kasvaimen koon. Tuloksemme osoittavat, että

18F-FLT PET on lupaava varhaiseen ei-invasiivisia arviointi kemoterapian vaikutuksia sekä lääkekehityksen ja räätälöintiin potilailla.

Citation: Munk Jensen M, Erichsen KD, Björkling F, Madsen J, Jensen PB, Højgaard L, et al. (2010) Early Detection of Response to Experimental Kemoterapia Top216 kanssa [

18F] FLT ja [

18F] FDG PET Human munasarjasyöpä hiirissä. PLoS ONE 5 (9): e12965. doi: 10,1371 /journal.pone.0012965

Toimittaja: Andrew Boswell, Genentech, Yhdysvallat

vastaanotettu: 08 heinäkuu 2010; Hyväksytty: 28 elokuu 2010; Julkaistu: 24 syyskuu 2010

Copyright: © 2010 Munk Jensen et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: AP Moller Foundation, Tanskan kansallinen Advanced Technology Foundation, Svend Andersens Foundation, Novo Nordisk Foundation, Lundbeck Foundation, Birthe ja John Meyer Foundation, Tanska Cancer Society, Rigshospitalets Research Foundation, Pääkaupunkialue ja Topotarget A /S. Laatijana palveluksessa Topotarget ollut rooli tutkimuksen suunnittelussa ja tietojen keruun ja analysoinnin. Toinen rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Seuraavat co-kirjoittajat ovat eturistiriitaa: Peter Buhl Jensen: omistusosuuksien ja työllisyys Topotarget A /S. Maxwell Sehested: omistusosuuksia ja työllisyyttä Topotarget A /S. Fredrik Björkling: Työllisyys Topotarget A /S. Kamille Dumong Erichsen: Työllisyys Topotarget A /S. Kaikki muut kirjoittajat eivät ole eturistiriitaa. Että jotkut yhteistyössä kirjoittajat työskentelevät Topotarget A /S ei muuta tekijöiden noudattamista PLoS ONE politiikan tietojen jakamista ja materiaaleja.

Johdanto

arvioimiseksi vaikutus eläinkokeissa aikana prekliinistä uusien syöpälääkkeiden, vähennys kasvaimen tilavuus on yleisimmin käytetty kriteerinä tehoa. Kuitenkin aika, kunnes kasvaimen kutistuminen voi olla pitkä, ja se vaatii toistuvan kasvaimen tilavuuden mittaukset useita kertoja viikossa näyttää vaikutus. Noninvasiiviset molekyylikuvantaminen kuten positroniemissiotomografia (PET) mahdollistaa biologisten toimintaa voidaan visualisoida ja kvantifioida kuin invasiivisesti ajan. Ei-invasiivinen menetelmä havaita varhain biologisen vasteen syöpähoidon olisivat arvokkaita syöpälääkkeen kehittämiseen erottaa tehokkaasti ulkopuolisten tehokkaita lääkkeitä ennen muutoksia kasvaimen tilavuuden käynyt ilmeiseksi.

Lisääntynyt soluproliferaatiota on yksi tärkeimmistä ominaisuuksia syövän [1]. Paljon tutkimusta keskittyy ei-invasiivisia visualisointi solujen lisääntymistä, jota voitaisiin käyttää määrittämään biologisen vasteen hoitoon aikaisin aikana hoidon. 3′-deoksi-3 ’- [

18F] fluoritymidiini (

18F-FLT) käytetään PET-merkkiaineen visualisointiin soluproliferaation [2].

18F-FLT on tymidiinianalogi ja näin ollen substraatti-DNA: Synteesireitissä [3]. Kun otetaan ylös soluissa

18F-FLT fosforyloituu tymidiinikinaasi-1 (TK1), joka johtaa solunsisäisen ansastusta. TK1 toiminta on tiukasti solukiertosäädeltyjä ja ilmentyy pääasiassa aikana S-vaiheen solusyklin; Näin ollen oletetaan, heijastaa määrä lisääntyvien solujen [4], [5].

18F-FLT otto korreloi positiivisesti solujen kasvua ja TK1 toimintaa [5] – [7]. Useat tutkimukset ovat osoittaneet korrelaation

18F-FLT otto ja kasvainsoluproliferaation sekä syöpää vastaan ​​hiirissä [8] – [11] ja ihmisen kasvaimen näytteitä [12] – [14].

Useita prekliinisissä tutkimuksissa on arvioitu lisääntymistä mitattuna

18F-FLT PET vastauksena eri kemo- ja sädehoitoa eri syövän eläinmalleissa [8] – [11], [15] – [19]. Tulokset näistä tutkimuksista vaihdella; ensimmäinen muutos

18F-FLT otto löytyy välillä 24 tuntia viikon kuluttua hoidon aloittamisesta. Kuitenkin kaikki tutkimukset ovat löytäneet korrelaatiota kasvaimen vasteen ja muutos

18F-FLT otto kuluttua hoidon aloittamisesta [20], [21]. Näennäisesti, aikataulua muutosten arvioimiseksi proliferaatio on hyvin vaihteleva mukaan eri hoito-.

Early ei-invasiivisia havaitseminen antiproliferatiivinen aktiivisuus

18F-FLT PET voisi olla hyötyä myös kliinisessä asettamalla onko potilaat reagoivat tavanomaisen hoidon aikana vaiheen I, II ja III tutkimuksissa arvioinnissa ratkaisuja uusiin syöpälääkkeet. Nykyään yleisimmin käytetty menetelmiä, joilla arvioidaan tuumorivasteita kliinisesti on anatomisesti kuvantamisen tekniikoita, kuten tietokonetomografia (CT) ja magneettikuvaus (MRI) käyttäen Response arviointiperusteet kiinteitä kasvaimia (RECIST). Tämä kuitenkin vaatii usein useita viikkoja tai kuukausia, ennen kuin mahdollinen vastaus tulee ilmi [22], [23]. Äskettäin suuntaviivat analysointiin tuumorivasteita käytetään PET ja 2′-deoksi-2 ’- [

18F] fluori-D-glukoosi (

18F-FDG) on ehdotettu jossa tarvitaan lisää mittaus- tuumorivasteita [24]. Uusi syöpälääkkeet ovat usein tumorstatic sijaan kasvaimia tuhoavaa ja muutokset kasvaimen koko voi olla erittäin vähäinen, vaikka tehokas hoito synnyttäen tarvitaan uusia menetelmiä, joilla arvioidaan kliinisen vasteen lisäksi tuumorin tilavuuden kutistuminen.

18F-FDG on tällä hetkellä eniten käytetty radiomerkkiaineena kuvantamisen syöpätautien ja on erittäin hyödyllinen havaitsemiseksi ja karakterisoimiseksi syöpiä. Useissa tutkimuksissa on analysoitu muutoksia

18F-FDG oton seuraavat anti-syövän hoitoon, mutta vaihtelevin tuloksin [25].

18F-FDG kärsii sillä rajoituksella, että se ei voi havaita vaikutuksia klo hyvin varhaisessa vaiheessa ja tulehdusreaktion jälkeen syövän hoidossa saattaa jossain määrin epäselvä havaitseminen syövän vaikutusta [26], [27].

Top216 on tehokkaampi ja metabolisesti stabiili johdannainen Top001, joka löysi BioImage olevan voimakkaita ja selektiivisiä tappava vaikutus rintasyövän solulinjoissa [28]. Top001 estää mTOR reitin soluun-valikoivalla tavalla pitkitetyn inkubaation jälkeen (~24 tuntia). Korrelaatio mTOR esto ja solulinja herkkyys on hyvä, mutta ei täydellinen.

Top216 estää proteiinisynteesiä, RNA ja DNA-synteesiä herkissä solulinjoissa jälkeen 1-2 tunnin inkubaation ja indusoi apoptoosia. Apoptoosin induktio mitattuna kaspaasi 3/7 toiminta on havaittavissa 6 tunnin kuluttua herkimmillä solulinjoissa. Top001 ja Top216 eivät estä merkittävästi kinaasien (Upstate kinaasi paneeli) tai reseptorit (Cerep paneeli) merkityksellisinä pitoisuuksina ja tällä hetkellä täsmälleen kohde tai vaikutustapa on tunnistettava. Top216 näkyy voimakas

in vivo

teho hiiren ksenograftimalleja ihmisen rinta-, eturauhas-, munasarja-, ja haimasyöpä, sekä silloin, kun annettiin i.v. ja po. Top216 on parhaillaan sääntelyn turvallisuutta ja toksikologia käsittelyä tarkoituksena siirtää yhdiste klinikalla.

Tutkimuksen tarkoituksena oli käyttää

18F-FLT PET tutkimushoitoon vastausten uusi syöpälääkkeen yhdiste ei-invasiivisesti. Voit tehdä niin me kuvattiin soluproliferaatiota

in vivo

kanssa

18F-FLT PET ihmisen syövän hiiren kasvainmuoto seuraavan hoidon aloittamista Top216. Otto

18F-FLT verrattiin oton

18F-FDG ja Ki67 ja TK1 geeniekspressiota.

Materiaalit ja menetelmät

kasvainmuoto

Animal care ja kaikki kokeelliset menettelyt suoritettiin hyväksynnän nojalla Tanskan Animal Welfare neuvoston (2006 /561-1124). Nainen NMRI (Naval Medical Research Institute) nude-hiiriin (8-11 viikkoa vanhoja) hankittiin Taconic Euroopasta (Lille Skensved, Tanska) ja annettiin mukautua viikoksi eläimen laitos ennen sen väliintuloa aloitettiin. Ihmisen munasarjasyöpäsolulin- A2780 (lahja R. Ozols, Fox Chase Cancer Center Philadelphia, PA, tammikuu 2004) käytettiin. 10

7 solua 100 ui väliaineessa sekoitetaan 100 ui Matrixgel ™ tyvikalvon Matrix (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) injektoitiin subkutaanisesti vasempaan ja oikeaan kylkeen vastaavasti nukutusaineen 01:01 tilavuus /tilavuus-seosta of Hypnorm® (Janssen Pharmaceutica, Beerse, Belgia) ja Dormicumia® (Roche, Basel, Sveitsi). Solu linja on testattu mykoplasmaa; kuitenkaan sitä ei ole todennettu. Soluja viljeltiin RPMI (Roswell Park Memorial Institute) keskipitkän 1640+ GlutaMAX (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), johon oli lisätty 10% vasikan sikiön seerumia (Biological Industries, Israel) ja 1% penisilliini-streptomysiiniä (Invitrogen), 5% CO

2 37 ° C: ssa.

Koejärjestely

Kuusi ryhmää hiiriä seurattiin (n = 5-10 kasvaimia per ryhmä). Hoito aloitettiin päivänä 12-24 istuttamisen jälkeen kasvainsolujen, kun kasvainten olivat keskimäärin 225 mm

3. Hiiret saivat Top216 hoitoa 50 mg /kg i.v. tai vehikkeliä (2% DMSO, 20% HP-b-CD suolaliuoksessa) 0 ja 48 tunnin (kuvio 1). Tämä annos Top216 oli edellisen analyysien osoitettu estävän kasvua A2780 ksenograftin kasvaimen (tuloksia ei ole esitetty). Ennen käsittely aloitettiin, hiiret skannattiin

18F-FLT tai

18F-FDG, jotta voidaan määrittää perustason taso merkkiaineen ottoa.

18F-FLT tai

18F-FDG skannaa toistettiin 6, 30 (päivä 1) ja 126 (Päivä 5) tuntia injektion jälkeen Top216 tai ajoneuvon (kuva 2) Lisäksi, ryhmä hiiriä skannattiin jossa

18F-FLT lähtötilanteessa ja 2 tunnin kuluttua hoidon aloittamisesta (Top216 tai ajoneuvo). Kasvaimen tilavuus seurasi CT kokeiden aikana [29]. Kasvaintilavuudet laskettiin suhteessa tilavuuteen lähtötilanteessa.

Expression of Ki67 ja TK1 analysoitiin

in vitro

rinnakkain joukko hiiriä, jotka käsiteltiin joko Top216 tai ajoneuvon ja biopsia ennen ja 6, 30 (päivä 1) ja 126 (päivä 5) tuntia hoidon aloittamisesta. Biopsiat poistettiin 18G neulalla ja sijoitettava välittömästi RNA later® (Ambion (Europe) Limited, Cambridgeshire, UK). Kaikki näytteet säilytettiin 4 ° C: ssa ja seuraavana päivänä RNAlater® poistettiin ja näytteet siirrettiin -80 ° C: ssa, kunnes sitä qPCR käsittelyä.

synteesi

18F-FLT ja

18F-FDG

[18F] FLT syntetisoitiin käyttäen 3-N-Boc-1- [5-O- (4,4′-dimetoksitrityyli) -3-O-nosyyli-2-deoksi-BD lyxofuranosyl] tymiini esiasteena ja syntetisoitiin GE TracerLab MX syntetisaattori. Kaikki reagenssit ja FLT kasetit ostettiin ABX (Radeberg, Saksa). Radiokemiallinen puhtaus määriteltiin jälkeen mittaamalla pitoisuus fluoria 18 ja muita radioaktiivisia epäpuhtauksia FLT ratkaisu mitattiin TLC ja HPLC vastaavasti. Sisältämän etanolin ja asetonitriiliä määritettiin GC-analyysillä. PH mitattiin käyttäen pH-mittaria. Erillisissä valmisteita vakautta valmisteiden tutkittiin 8 tunnin kuluttua. HPLC suoritettiin Gilson HPLC-järjestelmä (Biolab A /S, Tanska) varustettu Dionex UV-detektori (Dionex Denmark A /S, Tanska) ja in-line radioaktiivisuusdetektori. HPLC-kolonniin oli Luna 5 μ C18 (2) 100A, 150 x 4,6 mm (Phenomenex, Tanska). Eluentti oli vesi /asetonitriili 90/10 ja virtausnopeudella 1 ml /min. UV-detektio 267 nm: ssä. TLC-levyt hankittiin Merck ja vesi /asetonitriili 5/95 käytettiin eluenttina. Jäännösliuottimet määritettiin Shimatzu GC 2014 (Holm Halby, A /S, Tanska) varustettu Chromosorb 101, 100-120 Mesh, 1/8 ”x 10 ’sarake, FID detektori ja heliumia kantokaasun. Lämpötila kolonnin oli 210 ° C. Radiokemiallinen puhtaus

18F-FLT oli 98%, jossa on spesifinen radioaktiivisuus vaihtelee 150-270 GBq /umol klo EOS. Etanolipitoisuus oli välillä 7-8% ja määrä asetonitriiliä oli alle määritysrajan. PH oli 7,5-7,8. Radiokemiallinen puhtaus, etanolipitoisuus ja pH eivät muuttuneet 8 tunnin varastoinnin huoneenlämmössä.

18F-FDG hankittiin päivittäin tuotannot kliiniseen käyttöön (Rigshospitalet, Kööpenhamina, Tanska).

microPET ja microCT kuvantamisen

Hiiret injektoitiin iv 10,0 ± 1,5 (keskiarvo ± SD) MBq

18F-FDG tai 6,9 ± 2,4 (keskiarvo ± SD) MBq

18F-FLT. Hiiret pidettiin paastolla yön yli ennen kutakin

18F-FDG skannata [30]. Tunnin kuluttua merkkiaineen injektion hiiret nukutettiin 3% sevofluran (Abbott Scandinavia AB, Solna, Ruotsi) sekoitettuna 35% O

2 N

2 ja kiinnitetty sängyssä toimii kolme perusmerkitsimiä mahdollistaa fuusio PET ja TT kuvia. 20 min PET scan saatiin käyttäen MicroPET Focus 120 (Siemens Medical Solutions, Malvern, PA, USA). Sen jälkeen tiedonkeruu, PET tietoja järjestetty sinograms ja myöhemmin rekonstruoitu maksimi a posteriori (MAP) rekonstruointialgoritmi. Pikselikoko on 0,866 x 0,866 x 0,796 mm ja keskellä näkökenttä resoluutio 1,4 mm koko leveyteen puoli maksimi.

jälkeen microPET scan, joka on microCT scan hankittiin kanssa Microcat® II -järjestelmä (Siemens Medical Solutions). A 7 minuuttia ja 10 sekuntia CT suoritettiin parametriasetukset: 360 kierto vaiheet, putken jännite 60 kV, putken nykyinen 500 uA, binning 4 ja valotusaikaa 310 ms. Pikselikoko on 0,091 x 0,091 x 0,091 mm.

PET ja microCT kuvia fuusioitiin vuonna Inveon ohjelmisto (Siemens Medical Solutions). Ennen fuusiota alueen etujen (ROI) piirrettiin CT kuvat manuaalisesti laadullinen arviointi kattaa koko kasvaimia ja myöhemmin kasvaimen tilavuus ja merkkiaineen ottoa, arvioidaan standardin otto arvot (SUV) keskiarvo ja maksimi, tuotettiin summattu voxels sisällä tomographic lentokoneita.

Quantitative reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio (qPCR) B

Yhteensä-RNA eristettiin koepaloja TRI reagent® noudattamalla valmistajan ohjeita (Molecular Research Center Inc., OH, Yhdysvallat ) ja tämän jälkeen RNA eheys mitattiin 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). RNA laatu on todettu RNA eheyden numero (RIN) [31]. Pitoisuus RNA määritettiin NanoDrop 1000 (Thermo Fisher Scientific, Wilmington, DE, USA). Kokonais-RNA (0,3 ug) on ​​kääntynyt päinvastaiseksi transkriptoitiin käyttäen Affinityscript ™ QPCR cDNA Synthesis Kit (Stratagene, La Jolla, CA, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Näytteet jäähdytettiin ja säilytettiin -20 ° C: ssa myöhempään käyttöön saakka.

geeniekspressio kvantifioitiin on Mx3000P® reaaliaikainen PCR-järjestelmän Stratagene. Ki67 ja TK1 olivat kukin määrällisesti duplex TATA sitovan proteiinin (TBP). Brilliant® QPCR Core Reagent Kit (Stratagene) käytettiin. Optimointi määritykset johti 50%: n lisäys dNTP ja Taq. MgCl pitoisuus 5,5 mM käytettiin kaikissa kokeissa. Seuraavat terminen profiili käytettiin kaikissa kokeissa: 10 minuutin denaturaatio 95 ° C: ssa, jota seuraa 45 sykliä, joissa denaturaatio 30 sekuntia 95 ° C: ssa ja jäähdytys /venymä 60 ° C: ssa 1 minuutin ajan.

Suhteellinen kvantitointiin vertailumenetelmällä (2

-ΔΔCt) [32] käytettiin. Mittaukset korjattiin tehokkuuden PCR-reaktion laskettu 5-kertainen laimennus käyrät joka korvasi 2 kaavassa kanssa (E + 1) [33]. Tehokkuus tehtiin korjauksia kullekin geenille jokaisessa määrityksessä. Tissue lähtötasosta näytteistä toimi kalibraattori. TBP käytettiin viitteenä geeni. Tämä geeni on aiemmin testattu olevan stabiili kasvain verrattuna normaaliin kudokseen ja myöhemmin todettu olevan stabiili tässä kokeellisessa setup.

pohja- ja TaqMan-koettimet suunniteltiin käyttäen Beacon Designer (PREMIER Biosoft, Palo Alto, CA USA). Alukkeet ja koettimet on esitetty (taulukko 1). Kunkin geenin optimaalisen pohjamaali ja koetinkonsentraatiossa todettiin. Kaikki näytteet ajettiin kolmena kappaleena käyttämällä yhtä ui cDNA: ta. Kuhunkin näytteeseen no-käänteistranskriptio ohjaus (nort) oli mukana, ja kullakin levyllä no-mallia ohjaus (NTC) oli mukana.

Tilastollinen

Comparison of kasvain välinen tilavuus Top216 käsiteltyjen ja kontrolliryhmien laskettiin käyttäen parittomia Studentin t-testiä. Parillista t-testiä käytettiin Konserninsisäisten vertailuja. Bonferroni korjaus p-arvojen monimuuttujille haettiin. Kaikki tiedot testattiin olevan normaali jaettu avulla Kolmogorov-Smirnov testi. Laskelmat tehtiin SPSS 16.0. Tiedot ilmoitetaan keskiarvona ± SEM ja P 0,05 pidettiin tilastollisesti merkittävänä.

Tulokset

vaikutus Top216 kasvaimen kokoon

Top216 (50 mg /kg 0 ja 48 tuntia) esti kasvua A2780 ihmisen munasarjan syöpään vastaan ​​hiirissä

in vivo

verrattuna kontrolliryhmään (P 0,001) (kuvio 3). Koot käsittelemättömän kasvaimia kasvoi noin kertoimella 3 tutkimuksen aikana ja tilavuudet käsitellyt tuumorit olivat ennallaan.

A) Vaikutukset Top216 kasvuun A2780 tuumoriksenograftien. Kasvaimen tilavuus määritettiin microCT. Hiiriä käsiteltiin Top216 (50 mg /kg) tai vehikkelillä 0 ja 48 tuntia. *) P 0,05, **) P 0,01 vs. perustaso ja

# # #) P 0,001 vs. kontrolli. n = 15 kasvaimia per ryhmä. B) Muutokset kasvaimen tilavuuden arvioi suhde Päivä 5 /lähtötason kontrolliryhmän funktiona perustason FLT oton. n = 7 kasvaimia. R

2 = 0,61, P = 0,04.

18F-FLT ja

18F-FDG oton

lähtötilanteessa kasvaimeen oton

18F- FLT että A2780 kasvain malli oli suhteellisen korkea (SUVmean 1,05 ± 0,03), joten se on helppo erottaa kasvaimen kuin kasvain kudosten taas

18F-FDG vain vaatimaton kasvaimeen havaittiin (SUVmean 0,48 ± 0,02). Kontrolliryhmässä, lähtötilanteessa

18F-FLT oton ennustettu kasvaimen kasvua 5 päivää (lineaarisen regression SUVmean lähtötilanteen vs. kasvaimen tilavuuden suhde Päivä 5 /lähtötason: r

2 = 0,61, P = 0,04) (kuva 3). Ei korrelaatiota lähtötilanteessa

18F-FDG otto ja kasvaimen kasvua havaittiin.

otto

18F-FLT arvioitiin SUVmean laski huomattavasti 1,09 ± 0,03 lähtötilanteessa 0,53 ± 0,02 (-52 %; P 0,001) 2 tuntia, 0,56 ± 0,06 (-49%; P 0,001) 6 tuntia ja 0,58 ± 0,03 (-47%; P 0,001) 1. päivänä kuluttua Top216 hoidon aloittamisesta (kuvio 4 +5).

) kahdeksan kuvat vasemmalla ovat edustavia koronan sulatettu PET /CT-kuvia kaksi hiirtä skannata

18F-FLT lähtötilanteessa ja 6 tuntia ja 1 ja 5 päivän kuluttua hoidon aloituksesta . Kuvat huipulla näyttää yhdellä hiiren käsitelty Top216 ja kuvat alaosassa jokin ohjaus hiiri, joka on saanut ajoneuvo. Neljä kuvaa oikealla näyttää sulatettu PET /TT kuvaa kahden edustavan hiiren käsitelty joko Top216 tai ajoneuvon ja skannataan perustasolla ja 2 tunnin kuluttua hoidon aloittamisesta. Nuolet osoittavat kasvaimia. B) edustaja koronan sulatettu PET /CT-kuvia kaksi hiirtä skannata

18F-FDG lähtötilanteessa ja 6 tuntia ja 1 ja 5 päivän kuluttua hoidon aloituksesta. Kuvat huipulla näyttää yhdellä hiiren käsitelty Top216 ja kuvat alaosassa jokin ohjaus hiiri, joka on saanut ajoneuvo. Nuolet osoittavat kohti kasvaimia.

Top216 /ajoneuvo hoito aloitettiin 0 tuntia ja toistetaan 48 tunnin kuluttua ensimmäisestä annoksesta. N = 5-10 kasvainten ryhmää kohti. *) P 0,05, **) P 0,01, ***) P 0,001 verrattuna lähtötasoon. Kaksi kaaviot at vasemmalle osoittavat tietoja

18F-FLT kokeita ja kahden kuvaajan oikealla näyttää tietoja

18F-FDG kokeita.

5 päivän jälkeen

18F -FLT otto (1,33 ± 0,08) oli verrattavissa perustason oton. SUVmean pysyi muuttumattomana kontrolliryhmässä kokeen aikana. SUVmax arvot laskivat merkittävästi 2,01 ± 0,09 lähtötilanteessa 0,89 ± 0,05 2 tuntia (-55%; P 0,001), 0,94 ± 0,08 6 tuntia (-53%; P = 0,002) ja 0,84 ± 0,03 Day 1 (-58%; P 0,001). SUVmax arvot nousivat 2,26 ± 0,12 päivänä 5 jälkeen hoidon aloittamisesta (13%; p = 0,04). SUVmax pysyi muuttumattomana kontrolliryhmässä, mutta nousi hieman Päivä 5 jälkeen hoidon aloittamisesta verrattuna lähtötasoon (13%; p = 0,03).

otto

18F-FDG arvioitiin SUVmean väheni merkittävästi 0,49 ± 0,03 lähtötilanteessa 0,39 ± 0,02 (-21%; P = 0,003) 6 tuntia, 0,35 ± 0,01 (-29%; P 0,001) päivänä 1 ja 0,40 ± 0,02 (-19%; P = 0,05 ) päivänä 5 (kuva 4 + 5). Otto

18F-FDG kontrolliryhmässä oli merkittävästi lisääntynyt päivänä 5 verrattuna lähtötilanteeseen ottoa (27%; p = 0,05). SUVmax arvot laskivat merkittävästi 0,92 ± 0,06 lähtötilanteessa 0,64 ± 0,04 6 tunnin kuluttua injektion (-31%; P 0,001), 0,53 ± 0,02 päivänä 1 (-42%; P 0,001) ja 0,66 ± 0,03 päivänä 5 (-29%; P = 0,01). SUVmax pysyi muuttumattomana kontrolliryhmässä kokeen aikana.

ilmentäminen Ki67 ja TK1

Expression viitteen geenin TBP oli vakio koko kokeen ajan. Erot Ct-arvojen normaalin näytteen ja nort näytteet olivat 13 (mediaani). RNA eheyden numerot (RIN-arvot) olivat 9,1 ± 0,1 (keskiarvo ± SD) kaikille näytteille.

Gene ekspressiotasot Ki67 ja TK1 on esitetty kuvassa 6. hoitoryhmässä ilmaus Ki67 oli merkittävästi pienempi 6 tunnin kuluttua injektion (-31%, p = 0,01) ja Day 1 (-71%; P 0,001) hoidon aloituksesta lähtötilanteeseen verrattuna. Expression of Ki67 oli 21% kasvanut Päivä 5 (P = 0,04) verrattuna lähtötasoon. Expression of Ki67 kontrolliryhmässä oli huomattavasti pienempi 6 tuntia (-17%; P = 0,01) verrattuna lähtötasoon.

Data esitetään kertamuutoksia hoidon jälkeen Top216 /ajoneuvo suhteessa lähtötasolle (n = 7 kasvaimet ryhmää kohti). Top216 hoito aloitettiin 0 tuntia ja toistetaan 48 tunnin kuluttua ensimmäisestä annoksesta. *) P 0,05, **) P 0,01, ***) P 0,001 verrattuna lähtötasoon.

hoitoryhmässä ilmaus TK1 pieneni merkitsevästi 1. päivänä (-56% P 0,001) verrattuna lähtötasoon. 5. päivänä ilmentymistä TK1 lisääntyi (30%, P = 0,013) verrattuna lähtötilanteeseen. Kontrolliryhmässä ilmaus TK1 pysyi muuttumattomana kokeen aikana.

Keskustelu

Yksi injektio Top216 aloitetaan nopea ja merkittävä lasku solujen lisääntymistä 52% arvioitavissa

18F-FLT PET jo 2 tunnin kuluttua injektiosta. Tämä lasku kesti vähintään 1 päivä, mutta Päivä 5 (3 päivää sen jälkeen, kun 2

nd hoito) otto

18F-FLT oli verrattavissa ottoa kontrolliryhmässä viittaa siihen, että kasvainsolut olivat takaisin niiden leviäminen kapasiteetti. Otto

18F-FLT kontrolliryhmässä ei muuttunut kokeen aikana siten validointi antiproliferatiivista vaikutusta Top216. Toisin kuin jyrkkä lasku

18F-FLT oton hoidon alkua, pieni, mutta merkittävä, lasku

18F-FDG sisäänotto havaittiin 6 tuntia ja 1. päivänä aloittamisen jälkeen Top216 hoidon, ja tämä lasku jatkui 5. päivä muutokset

18F-FLT oton (max lasku: 52%, 2 h) oli nopeampaa kuin muutokset

18F-FDG oton (max lasku: 29%; päivä 1). Kuitenkin lopussa kokeen,

18F-FDG kertymä jäi pienemmäksi kuin lähtötilanteessa vuonna Top216 ryhmässä, kun se nostettiin kontrolliryhmässä.

lasku

18F-FLT otto aikaisin injektion ei liittynyt vähenemiseen kasvaimen tilavuus kuin kasvainten tilavuus ei muutu hoitokuurin. Tämä osoittaa, että muiden kuin invasiiviset arvioida tuumorivaste on tärkeää, koska arvioitaessa pieneneminen kasvaimen tilavuuden päätepisteenä olisi aiheuttanut vääriä negatiivisia johtopäätös. Anti-tilavuus vaikutusta Top216 oli kuitenkin vielä nähtävissä verrattuna kontrolliryhmään. Muutokset merkkiaine saatavuus esim. seurauksena kasvaimen perfuusio muutoksia hoidon jälkeen, voisi selittää joitakin vaikutuksia laski

18F-FLT oton. Kuitenkin se, että

18F-FDG kertymä ei laskenut samalla tavalla kuin

18F-FLT johtaa oletukseen, että pienenee

18F-FLT pääsy ei vain muutoksen vuoksi kasvaimen perfuusio mutta myös fysiologinen muutos kasvainsolujen proliferaatiota. Tämä edelleen vahvistanut samanlainen lasku Ki67 geeniekspression.

Mittaukset merkkiaineen sisäänoton päivänä 5 voidaan tulkita sekä mittana soluproliferaation 5 päivän kuluessa hoidon aloittamisesta ja leviämisen tila 3 päivää sen jälkeen, kun toinen injektio Top216. Näin ollen, yksi injektio Top216 inhiboi proliferaatiota jonnekin välillä 1 ja 3 päivää, minkä jälkeen tuumorisolut talteen niiden leviäminen kapasiteettia. Tämä tieto voi olla hyödyllinen suunniteltaessa Altistustapoja edeltävissä kliiniset tutkimukset ja tulevaisuudessa kliinisiä protokollia, jotta löydettäisiin optimaalinen hoitoaikataulun.

Päivänä 5 jälkeen hoidon aloittamisesta

18F-FDG otto oli 19% alhaisempi verrattuna perustason, kun taas otto

18F-FLT oli verrattavissa lähtötilanteeseen. Otto

18F-FDG oli näin ollen vaikutti pitempään kuin

18F-FLT oton. Tämä osoittaa, että vaikka solujen lisääntymistä 5 päivän jälkeen (3 päivän kuluttua 2

toinen käsittely) oli verrattavissa perustason, biologisten vaikutusten hoidossa oli edelleen olemassa ja visualisoitiin

18F-FDG. Otto

18F-FDG oli huomattavasti pienempi 6 tunnin kuluttua hoidon aloittamisesta lähtötilanteeseen verrattuna ottoa. Kuitenkin väheneminen 21% jo alhainen kertymä ei helposti visualisoida PET /CT-kuvia (kuva 4).

Tulosten että

18F-FLT oli ylivoimainen

18F-FDG arvioimiseksi alussa vasteet anti-syövän hoidossa ovat samaa mieltä muissa tutkimuksissa [8], [11], [21]. Lähtötasot on

18F-FDG sisäänottoa kasvainmallissa olivat alhaisia ​​ja vain noin puolet lähtötasolle on

18F-FLT otto, joka on yhtä mieltä havaintojen toisten [11], [17]. Kuitenkin muut tutkimukset ovat osoittaneet suurempaa

18F-FDG kertymä useissa ksenograftimalleissa verrattuna

18F-FLT otto [16], [19], [21]. Aikaisemmin on osoitettu, että se on vaikeampi mitata hoitovasteen kasvaimissa lähtötilanteessa matala merkkiaineen kertymä, joka on yhdenmukaiset kanssa osumaa tässä tutkimuksessa [11], [21], [34].

tulokset muista tutkimuksista käyttää

18F-FLT PET arvioida varhain vastauksia anti-syövän hoitoon on ollut hyvin vaihteleva, jossa vastauksena histonideasetylaasi- estäjän havaittiin 4 päivän jälkeen [10], vastauksena sisplatiinin nähdään jälkeen 1 päivä [9], vastauksena syklofosfamidi ja mTOR esto on ilmeinen 2 päivän jälkeen [16] ja ErB inhibiittori aloitetaan lasku

18F-FLT otto 2 päivää sen jälkeen hoidon aloittamisesta taas ilman vastausta havaittiin 6 ja 24 tuntia [11]. Kuitenkin vertailu tutkimuksissa on vaikeaa, koska erilaisen kohtelun ja skannaus aikatauluja ja vaihteleva kasvainmuodoista. Verrattuna muihin tutkimuksiin löysimme jyrkkä lasku

18F-FLT otto arvioitiin PET ja tämä lasku havaittiin paljon aikaisemmin (2 ja 6 tuntia). On vielä selvitettävä, onko tämä varhainen vaste on yhdiste erityinen tai yksinkertaisesti johtuu meidän protokolla on ensimmäinen arvioida vastaus niin pian hoidon.

Vai ei aikaisin muutos

18F-FLT ja

18F-FDG voi olla ennustaja kliininen tulos on vielä tuntematon ja lisätutkimuksia tutkivat varhain muutoksia ja eloonjäämiseen tarvitaan, jotta voidaan vastata tähän kysymykseen.

Comparison of

18F-FLT otto ja Ki67 geenien ilmentyminen oli samanlainen muutos hoidon jälkeen Top216. Kuitenkin Ki67 mRNA-tasot eivät laskeneet yhtä paljon kuin

18F-FLT otto 6 tunnin kuluttua hoidon aloittamisesta. Mahdollinen selitys voisi olla, että muutokset entsyymiaktiivisuus tapahtua ennen muutoksia mRNA. Korrelaatio Ki67 geenien ilmentyminen ja

18F-FLT otto tutkimuksessamme on mukaisesti muissa tutkimuksissa löytää vahva korrelaatio Ki67 proteiinitasolla ja

18F-FLT otto [8] – [11]. Löysimme merkittävä lasku

18F-FLT otto jo 2 ja 6 tunnin kuluttua hoidon aloittamisesta; Huolimatta siitä huomattavasti pienempi

18F-FLT otto 6 tuntia, lasku TK1 geeniekspression oli ensimmäinen ilmeistä 1. päivänä kuluttua hoidon aloittamisesta. TK1 entsyymiaktiivisuus korreloi positiivisesti

18F-FLT otto [6], [7] ja on osoitettu, että transkription mekanismit voivat osallistua sääntelyn TK1 toimintaa, jossa sekä TK1 proteiini ja mRNA-tasot liittyivät vähenemiseen

18F-FLT oton hoidon jälkeen histonideasetylaasi- estäjän [10]. Varhainen muutokset

18F-FLT oton ilman muutoksia TK1 mRNA-tasojen todennäköisesti johtuu muutoksista proteiinin tasot, posttranslational proteiini muutoksia ajoneuvoihin tai ATP-tasot [7], [10], [35]. ATP tarvitaan TK1 toimintaa [36] ja muut tutkimukset ovat samoin löytäneet vähentynyt

18F-FLT oton, vaikka korkea TK1 tasolla, mikä voidaan selittää alhainen ATP [8].

Lopuksi löysimme 52% lasku

18F-FLT otto jo 2 tunnin kuluttua ensimmäisestä injektion Top216.

18F-FLT oli ylivoimainen

18F-FDG kuin noninvasive keino arvioida varhain biologisia vasteita Top216.