Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tokotrienolit on todettu monia biologisia toimintoja, kuten antioksidantti, -cancer, säilyttäen hedelmällisyyden ja säännellä immuunijärjestelmää ja niin edelleen. Tässä tutkimuksessa ruokinnan jälkeen tokotrienoliin fraktion palmuöljystä (TRF) 2 viikkoa, Balb /c nude-hiiriin istutettiin ihmisen paksusuolen SW620 syöpäsolujen ja jatkoi sitten ruokkia TRF 4 viikon ajan. Lopettamisen kokeita, ksenograftit poistettiin ja määritettiin ilmentymistä Wnt-reittejä liittyvät proteiinin immunohistokemiallisella tai western blotting. Maksa kudokset homogenoitiin määrittämiseksi tasot antioksidatiivista entsyymien aktiivisuutta tai malonidialdehydi (MDA). Tulokset osoittivat, että TRF estivät merkittävästi kasvua nude-hiirissä. TRF vaikutti myös aktiivisuus antioksidatiivisen entsyymien maksakudosta hiirillä. Nämä muutokset vaikuttivat osaltaan aktivointi wnt polkuja tai vaikuttavat niihin liittyviä proteiinia. Siten nämä havainto viittasi siihen, että tehokas syövän vaikutusta TRF liittyy Wnt signaalien kulkureiteillä.

Citation: Zhang JS, Zhang SJ, Li Q, Liu YH, hän N, Zhang J, et al . (2015) tokotrienoliin fraktion (TRF) estää kasvu Human Colon Cancer ksenoqraftit Balb /C Nude hiiret Wnt Pathway. PLoS ONE 10 (3): e0122175. doi: 10,1371 /journal.pone.0122175

Academic Editor: Terence Lee, University of Hong Kong, HONGKONG

vastaanotettu: 12 marraskuu 2014; Hyväksytty: 07 helmikuu 2015; Julkaistu 25 maaliskuuta 2015

Copyright: © 2015 Zhang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: Kaikki tiedot ovat paperiin.

Rahoitus: hanke tukivat National Natural Science Foundation of China (nro 30771801, 81472968). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Tällä tokotrienoliin fraktion palmuöljystä (TRF) saatiin eräänlainen lahja Dr. Yu BingYun Palm Nutraceuticals Sdn. Bhd, Malesian. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen PLoS One politiikkaa jakaa tietoja ja materiaaleja.

Johdanto

paksusuolen syöpä on yksi yleisimmistä pahanlaatuisten kasvainten ja uhkaa ihmisten terveyttä maailmassa. Mukaan käytettävissä viitteet, valtaosa paksusuolensyöpä liittyy aktivoimalla Wnt signaalireitin [1-3]. Wnt signaalireitin on monimutkainen proteiini vuorovaikutusverkosto, joka on todettu edistymistä alkion kehityksen ja syöpä. Samalla se on osallistuja normaaleissa fysiologisissa prosesseissa aikuisten [3]. Mahdolliset muutokset koostumuksessa Wnt signaalireitin johtaa epänormaalin signaalitransduktion puolestaan ​​solun pahanlaatuinen muutos, ja lopuksi, kipinöitä esiintyminen pahanlaatuisia kasvaimia. Wnt signaalireitin koostuu pääasiassa sarjan proteiineja, kuten solunulkoisen tekijä (Wnt), transmembraaninen reseptorit Frizzled (frz), β-kateniinin ja T-solujen tekijä (TCF) jne. [4] Aktivoidut Wnt signaali vuorovaikutus sytoplasmaproteiinin, β-kateniinin voi jäädä vakautta ja kertymistä sytoplasmassa. Kumulatiivinen β-kateniinin tulee sitten ytimen cooperationg kanssa TCF aktivoida kohdegeenien transkriptiota, kuten sykliini Dl ja c-myc, jne. [4]. Näin ollen on huomattava, että eri vaiheissa Wnt signaalien kulkureiteillä on erilaiset lainsäädäntöön liittyvät tekijät [1, 5].

Aktiiviset ainesosat luonnon kasveista ensimmäinen valinta hallussaan ominaisuus tappaa syöpäsoluja eikä haittaa normaalit solut. Tokotrienoleja, aktiivisena ainesosana erotetaan viljasta ja palmuja, on potentiaalinen teho estää kasvainsolujen kasvua [1, 2, 6-9]. Vuonna tokotrienoliin fraktion palmuöljystä (TRF), 23,5% heistä ovat yhteensä tocotrienols mikä on 10,7% ja γ-tokotrienoliin. Aikaisemmassa tutkimuksessa, TRF voi aiheuttaa p53-riippumaton syöttämällä reitin ihmisen paksusuolen syövän RKO-solujen [10]. Eitsuka et ai, ovat raportoineet, että E-vitamiini, joka sisältää suuria pitoisuuksia tokotrienoliin (δ-tokotrienoliin) voi estää kasvun ihmisen paksusuolen adenokarsinooma soluissa alassäätöä telomeraasiaktiivisuus [11]. Xu W et al. havaittu toiminta γ-tokotrienoliin ihmisen paksusuolen syövän HT-29-solujen löytää että γ-tokotrienoliin tukahdutetaan tärkeä tekijä Wnt signaalien kulkureiteillä-the β-kateniinin /Tcf HT-29-solujen [12]. Lisäksi, tokotrienolit tai TRF on raportoitu useita erilaisia ​​pahanlaatuisia karsinoomasoluja

in vitro

ja

in vivo

[1, 8, 9, 13-15]. y-tokotrienoliin voisi estää kasvun ihmisen mahasyövän solujen ja chemosensitize sen kapesitabiinilla vierassiirrännänmallissa hiirimallissa modulaation kautta NF-KB-reitin [15]. TRF tukahdutti kasvua kasvainsolun vähentämällä revaskularisaation [13] ja kasvaimen geeniekspression rintasyövän MCF-7-solujen istuttamisen nude-hiirissä [14]. Verrattuna kontrollihiiriin, ekspression interferonilla indusoitavissa transmembraani- proteiini-1-geenin ja CD59 glykoproteiinin prekursorigeeni oli ilmeisesti säädellään ylöspäin TRF-käsiteltyjen hiirten.

Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että δ -tocotrienol voisi aiheuttaa paraptosis kaltainen kuoleman paksusuolensyöpä SW620-soluissa, ja seurata vaikutuksia Wnt signaalien kulkureiteillä [2]. Niinpä arveltu, että samanlaisia ​​estävä toiminto tokotrienoliin voidaan olematon eläimessä tutkimuksessa. Tässä tutkimuksessa olimme onko TRF esti kasvua ihmisen paksusuolen syövän soluja Balb /c nude-hiirissä ja miten TRF vaikuttanut Wnt signaalien kulkureiteillä. Nämä tulokset auttavat meitä ymmärtämään mekanismia tokotrienoleja on syöpää ehkäisevistä omaisuutta.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

Eläin Koejärjestely hyväksynyt komitea Ethics eläinkokeiden Tianjin Center for Disease Control and Prevention (luvan numero: TJCDC0111). Tutkimus toteutettiin tiukasti mukaisesti kansantasavalta Kiinan Laboratory Animal asetuksissa.

Kemikaalit ja reagenssit

Reagenssit määrittämiseksi hemoglobiinin, punasolut, valkosolut reagenssit, imusuonten, monosyytit neutrofiilit, eosinofiilit ja basofiilisiä ostettiin Sysmex. Hapettaminen indeksi detektiovälinepakkaukset olivat NanJing Jiancheng Bioengineering Institute (NanJing, Kiina). PRO-PREP proteiini uuttoliuos oli Pekingistä SBS Genetech Co., Ltd (Peking, Kiina).

Soluviljely

Ihmisen paksusuolen syöpä SW620-solut ostettiin Cancer Institute of Chinese Academy Lääketieteen (Peking, Kiina). Soluja viljeltiin L-15 väliaineessa, joka sisälsi 2 mmol /l L-glutamiinia ja 2 g /l natriumbikarbonaattia (Gibco), jota oli täydennetty 10% naudan sikiön seerumia (FBS, Gibco), antibiooteilla (100 U /ml penisilliiniä ja 100 ug /ml streptomysiiniä), 37 ° C: ssa kosteutetussa ilmakehässä, jossa oli 95% ilmaa ja 5% CO

2. Ennen 90% konfluenssiin, solut siirrostettiin käyttäen 0,25% trypsiiniä, joka sisälsi 0,02% EDTAa.

Eläinten hoito

Viisikymmentä mies (17-22g) ja viisikymmentä naisten (14-19g) BALB /c-nude hiiriä (6-8 viikkoa vanhoja) ostettiin Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd (Peking, Kiina). Hiiret pidettiin sopeutua edellytykset 5 päivää ennen kokeen aloittamista. Eläinten huoneen lämpötila on noin 20-25 ° C, suhteellinen kosteus on noin 40-70%. Hiiret juomavesi, vuodevaatteet ja ruokinta häkit on autoklavoidaan ennen annettu hiirille.

Hiiret jaettiin satunnaisesti 5 ryhmään (20 per ryhmä) kehon painokiloa kohti, tasapuolisesti miesten ja naisten, kuten seuraaviin ryhmiin: negatiivinen kontrolli ryhmä, kasvain malli ryhmä, ja kolme annosta tokotrienoliin fraktion (TRF, Palm Nutraceuticals Sdn. Bhd., Malesian) palmuöljystä ryhmistä. Ainesosat TRF on esitetty taulukossa 1. TRF liuotettiin soijaöljyä. Kolme annosta 5, 10 ja 20 mg /kg kehon paino (ruumiinpainoa) ja TRF, jotka vastasivat y-tokotrienoli annettiin hiirille letkulla. Samalla, letkuruokinnalla negatiivisen kontrolliryhmän ja kasvainmuoto ryhmä kanssa yhtäläinen liuottimella soijaöljyä. Kaksi viikkoa myöhemmin hiiret mukaan lukien kasvain malli ryhmään injektoitiin 0,1 ml logaritmisen vaiheen SW620-soluja (1,0 x 10

7 /ml), osaksi axilla kunkin hiiren. Kaikki eläimiä tarkkailtiin päivittäin ja edelleen annettiin TRF /soijaöljy 4 viikkoa. Kokeilun aikana eläimet vapaa sai ruokaa ja vettä. Sen jälkeen kun kokoverta kerättiin silmän canthus kussakin eläimessä nukutuksessa, kaikki eläimet tapettiin katkaisemalla kaula. Paino elinten, kuten maksan, pernan ja munuaisten osalta, ja kasvainkudosta mitattiin. Osat kasvainkudosnäytteet kiinnitettiin 4% formaliinia, sitten kuivattu ja upotettu parafiiniin immunohistokemiallista värjäystä. Loput kasvaimen kudokset jäädytettiin -80 ° C: ssa western blottauksella.

määritys hapettumisen indeksin maksakudoksissa

maksakudoksissa homogenoitiin alla jäähauteessa. Hapetus indeksit kuten superoksididismutaasi (SOD), glutationi-Px (GSH-Px), malonidialdehydi (MDA) ja katalaasin (CAT) mitattiin maksahomogenaattia kuvatulla aiemman tutkimuksen [16] tai seuraa valmistajan ohjeen.

immunohistokemia

kalvot kasvaimen kudokset poistettiin parafiini ksyleenillä ja rehydratoitiin kautta luokiteltava alkoholin mennessä seuraavat immunohistochemistrical värjäys kuvatulla aiemman tutkimuksen [17]. Lyhyesti, leikkeet kuumennettiin 10 min 95-100 ° C: ssa 10 mmol /l natriumsitraattia (pH 6,0). Kolme prosenttia vetyperoksidia lisättiin osissa inaktivoimiseksi endogeenisten peroksidaasien ja sitten 10% normaalia vuohen seerumia lisättiin estämään epäspesifisen sitoutumisen. Leikkeet jälkeen inkuboitiin 4 ° C: ssa yön yli anti-Wnt-1, tai anti-c-myc, tai anti-b-kateniinin vasta-aineita (Santa Cruz Biotechnology, Inc. Santa Cruz, CA). Osat sitten inkuboitiin biotinyloidun anti-hiiri-IgG- tai anti-kani-IgG (ZSGB-BIO Co., Ltd. Peking, Kiina) 30 min, mitä seurasi peroksidaasiin konjugoitua streptavidiinia (ZSGB-BIO Co., Ltd.) ja 30 min. Leikkeet värjättiin 3, 3′-diaminobentsidiiniä (DAB) ja 3 min ja vastavärjättiin hematoksyliinillä. Negatiivinen kontrolli jättämällä pois ensisijaisen vasta-aineen myös noudatti samaa protokollaa. Positiivisten solujen laskettiin mikroskopialla (200 x). Suhde positiivisten solujen laskettiin kullekin ryhmälle.

Western blotting

Yhteensä proteiini uuttamalla kasvainkudoksista käyttäen RIPA-puskuria (Cell Signaling Technology, Inc. Danvers, MA) ja Western blotting suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu tutkimuksia [18, 19]. Seuraavat ensisijaiset vasta-aineita käytettiin: anti-Wnt-1, anti-β-kateniinin, anti-c-myc, anti-sykliini D1, anti-MMP-7, anti-ak- siini-2, anti-APC, anti-c- jun, tai anti-β-aktiini-vasta-aineita (Santa Cruz Biotechnology, Inc.). Toissijainen vasta-aineet, jotka vastaavat tyypin primaarisen vasta-aineen anti-hiiri- tai anti-kani-IgG (HRP) -conjugate (1: 1000 laimennus, Cell Signaling Technology, Inc.). Proteiinivyöhykkeet visualisoitiin parannetun kemiluminesenssi kit. Kvantifiointi Proteiinivyöhykkeet mitattiin FluorChem Imaging Systems (Alpha Innotech). Aineisto standardoitu β-aktiini.

Tilastollinen

Kaikki tiedot ilmoitetaan keskiarvoina ± keskihajonta (S.D.). Erot kontrolli- ja testiryhmään arvioitiin yksisuuntaisella ANOVA seurasi Student-Newman-Keuls (SNK) testi. Eroja pidettiin merkittävinä osoitteessa

P

0,05.

Tulokset

Effects of TFR painon hiirten

Kuten kuviossa. 1, TRF ei vaikuttanut painon mukaan (uros ja naaras) keskellä ja terminaalin paino verrattuna kontrolliryhmään (

p

0,05). Indeksi kehon paino ei myöskään todettu eroja kokeellinen päättymisen välillä TRF hoitojen ja kontrolliryhmiin (taulukko A S1 File).

* p 0,05, ** p 0,01 verrattuna positiiviseen kontrolliryhmään .

Effects of TRF indekseihin hematologian ja luokittelu valkosoluja hiirien

indeksit hematologian lukien veren valkosolujen, punasolujen, hemoglobiini, hematokriitti, verihiutaleiden ja cogulation aika määritettiin tässä tutkimuksessa (taulukko B S1 File). Tulokset osoittivat, että lukuun ottamatta 20 mg /kg ruumiinpainoa of TRF ryhmä, TRF ei vaikuttanut indeksit hematologian että uroshiirillä. TRF 20 mg /kg ruumiinpainoa ryhmä merkittävästi vähensi valkosolujen ja lisääntynyt cogulation aikaa verrattuna kontrolliryhmään (

p

0,05). Lisäksi määrä verihiutaleiden in TRF ja malli ryhmissä oli laskeva verrattuna negatiiviseen kontrolliryhmään. Naarashiirille TRF ei löytänyt mitään eroja indeksit hematologian välillä TRF hoitojen ja negatiivisen kontrolliryhmiin. Luokittelu leukosyyttien määritettiin myös tässä tutkimuksessa. Kuten taulukosta C S1 File Eroja ei havaittu luokittelu leukosyyttien koirashiirillä välillä TRF hoitojen ja kontrolliryhmissä (

p

0,05). Naarashiirissä, TRF annoksina 5, 10 tai 20 mg /kg ruumiinpainoa kasvoi merkittävästi neutrofiilien granulosyyttien tai lymfosyyttien tai eosnophils verrattuna kontrolliin hiirille (

p

0,05).

vaikutukset TRF indeksiin hapettumisen maksassa hiirten

jälkeen annetaan TRF 4 viikkoa, indeksi antioksidanttina tai hapetus, kuten SOD, GSH-P, CAT ja MDA että maksa määritettiin tässä tutkimuksessa. Kuten taulukossa 2 on esitetty, tasot SOD ja GSH-Px ei ollut eroa negatiivisen ja positiivisen ryhmiä. Kuitenkin taso CAT positiivisessa ryhmässä oli merkittävästi vähentynyt verrattuna negatiiviseen ryhmän (

p

0,01 tai

p

0,05). Maksa antioksidanttientsyymejä (SOD, GSH-Px ja CAT) aktiivisuus lisääntyi TRF ryhmissä verrattuna positiiviseen kontrolliryhmään. Taso SOD lisääntyi myös merkittävästi 20 mg /kg ruumiinpainoa of TRF ryhmän nude hiirillä ja 5 ja 10 mg /kg ruumiinpainoa of TRF ryhmien naisten nude-hiirissä. GSH-Px sisältöä merkittävästi lisäävän 5 mg /kg ruumiinpainoa of TRF ryhmän naisten nude-hiirissä. CAT taso oli merkittävästi lisääntynyt 5, 10 ja 20 mg /kg ruumiinpainoa of TRF ryhmän nude hiirillä ja 5 ja 20 mg /kg ruumiinpainoa of TRF ryhmien naisten nude-hiirissä. Taso lipidiperoksidia (MAD) on merkittävästi lisääntynyt 10 ja 20 mg /kg ruumiinpainoa of TRF ryhmän nude hiirillä ja 5 mg /kg ruumiinpainoa of TRF ryhmien naisten nude-hiirissä.

Effects of TRF kasvaimen painoon hiirillä

lopetettaessa kokeen, ihmisen paksusuolen syövän ksenograftien Balb /c nude-hiiret poistettiin ja mitattuna paino tässä tutkimuksessa. Tulokset on esitetty kuviossa. 1. TRF merkittävästi vähentynyt painon ksenograftien verrattuna positiivisen kontrolliryhmän (

p

0,01). Kuitenkin TRF 20 mg /kg naisten ryhmässä oli laskeva ksenograftit paino. Eroa ei havaittu välillä suuren annoksen TRF ja positiivisen ryhmiä.

Effects of TRF ekspressioon Wnt reittejä related protein kasvainkudoksissa

Jotta voitaisiin määritellä mahdollinen mekanismi TRF estoon ksenografteja kasvua, ilmaus Wnt-reitin liittyvä proteiini tutkittiin tässä tutkimuksessa. Ekspression β-kateniinin, Wnt ja c-myc in ksenografteissa tutkittiin immunohistokemiallisesti. Tulokset on esitetty kuvioissa. 2-4. TRF merkittävästi vähentynyt ilmentyminen β-kateniinin annoksesta riippuvalla tavalla (

p

0,05) (Fig. 2). TRF myös merkittävästi vähentynyt ilmentyminen Wnt proteiinin ksenografteissa verrattuna positiivisen kontrolliryhmän (

p

0,05) (Fig. 3). Lisäksi, TRF myös vähentynyt ilmentyminen c-myc-proteiinin vierassiirrännäiset comparion kanssa positice kontrolliryhmään (

p

0,01) (Fig. 4). Mielenkiintoista, paitsi Naarashiirille c-myc ilmentymistä hiirillä oli kasvava mukana kasvavia annoksia TRF.

, positiivinen kontrolliryhmä; B, 5 mg /kg b.w .; C, 10 mg /kg ruumiinpainoa D 20 mg /kg ruumiinpainoa * P 0,05 verrattuna positiiviseen kontrolliryhmään.

, positiivinen kontrolliryhmä; B, 5 mg /kg b.w .; C, 10 mg /kg ruumiinpainoa D 20 mg /kg ruumiinpainoa * P 0,05 verrattuna positiiviseen kontrolliryhmään.

, positiivinen kontrolliryhmä; B, 5 mg /kg b.w .; C, 10 mg /kg ruumiinpainoa D 20 mg /kg ruumiinpainoa * P 0,05, ** p 0,01 verrattuna positiiviseen kontrolliryhmään.

Jotta voitaisiin vahvistaa immunohistokemiallinen tulokset β-kateniinin, Wnt ja c-myc in ksenografteissa, β-kateniinin, Wnt ja c-myc-proteiinin ilmentyminen myös tutkittiin ksenografteissa western blottauksella. Tulokset on esitetty kuviossa. 5. TRF myös merkittävästi vähentynyt ilmaisun β kateniinin, Wnt ja c-myc-proteiinin ksenografteissa verrattuna positiivisen kontrolliryhmän (

p

0,05). Nämä tulokset ovat samaa suuntausta kuin havainnoista immunohistokemiallisesti. Täsmentämiseksi mahdollinen mekanismeja TRF estoon ksenografti kasvun, Wnt polkuja liittyvä proteiini, kuten sykliini D1, MMP-7, ak- siini-2, c-jun, APC, elossa, GSK-3β määritettiin tässä tutkimuksessa. Kuten kuvioissa. 5 ja 6, TRF merkittävästi vähentynyt ilmentyminen sykliini D1 ja surviviinille ksenografteissa. TRF huomattavasti ilmentymistä ak- siini-2 ja GSK-3β in ksenografteissa. Kuitenkin TRF saatiin erilainen suuntaus MMP-7 ja C-jun in ksenografteissa miesten ja naisten välillä hiirillä verrattuna positiiviseen kontrolliryhmään.

* p 0,05 verrattuna positiiviseen kontrolliryhmään.

* p 0,05 verrattuna positiiviseen kontrolliryhmään.

keskustelu

Palmuöljy sisältää lähinnä kahdenlaisia ​​yhteisiä rasvahappoja, palmitiinihappo (C16) ja öljyhappoa (C18), joita on käytetty luonnollista ruokaa yli viisi tuhatta vuotta. Palmuöljy ei vain voi olla helposti sulattamaan ja omaksua, mutta myös on hyötyä ihmisen kehon koska korkeat kiinteät glyseriiniä, jotka estävät elintarvikkeita hydrogenoimalla ja pitää sen vakaana olevan sopiva kuuma ilmasto hyvänä mausteita leivonnaiset ja leipä. Puhdistettu palmuoleiinia on runsaasti tokoferoleja ja tocotrienols, jotka ovat isomeerejä E-vitamiinin E-vitamiini, rasvaliukoinen vitamiini, uutetaan palmuöljyn, jotka koostuvat pääosin α-, β-, γ-, δ-tokotrienoliin tai α- tokoferolia. Näin ollen, palmuöljy pidetään seosta E-vitamiinia, joka tunnetaan fraktioiden Palm tokotrienoli runsaasti öljyä (TRF). TRF on monia biologisia toimintoja, erityisesti tokotrienolit vähentää ateroskleroosin kaneja, jotka voivat liittyä antioksidantti TRF [20], parantaa haiman tulehdusta ja fibroosia DBTC aiheuttama CP rotilla [21], ehkäisemiseksi tai sellaisten sairauksien hoidossa, koirien [22], hermoja suojaava vaikutus [23], ja anti-syöpä toiminnan [2]. Meidän tutkimusryhmä, käytimme suuri annos 20 mg /kg TRF jotka vastasivat 1,09 mg E-vitamiinia /hiiret päivässä. Se on pienempi kuin vuonna päivittäinen saanti tokotrienoleja (1,9-2,1 mg /päivä /henkilö) ja Japani [24] ja Finish ruokavalio (10.3mg α-tokotrienoliin /päivä /henkilö) [25]. Aiemmissa tutkimuksissa tocotrienols osoittivat kasvun estämiseen paksusuolensyöpä SW620 ja HT29 [1, 2]. Vaikka annoksesta riippuvainen suhteesta kasvaimen paino naarashiirillä ei näe tässä tutkimuksessa, tuumorin kasvun havaittiin kussakin ryhmässä. Se voi olla pieni imeytymistä suuren annoksen TRF ryhmän aikana muutaman viikon ruokinta. Näin ollen tässä tutkimuksessa, meidän havainnot osoittivat, että TRF oli potentiaalia esto ympätty ihmisen paksusuolen syövän SW620 soluja nude-hiiriin, mukaan lukien vaikutukset kasvaimen kasvuun, hapettumisenestoaine tasoilla maksassa, ja mahdollisia mekanismeja.

TRF tehostettu toimintaa of antioxidation maksassa

ympäristön kannalta haitalliset tekijät, kuten ultraviolettisäteily, ionisoiva säteily, altistuvat kemiallisille karsinogeenien jne altistuvat organismit tuottaa vapaita radikaaleja, kuten reaktiivisia happiradikaaleja (ROS), reaktiivisen typen laji (RNS). Patologisissa olosuhteissa, jos vapaiden radikaalien ylittää puolustusvalmiuksia antioksidantti puolustusjärjestelmää, vapaat radikaalit voidaan kerätä organismit aiheuttavat oksidatiivista stressiä. Biofilmin fosfolipidi monityydyttymätön rasvahappo tähteiden ovat erittäin herkkiä vapaita radikaaleja, jotka on tärkein tavoite radikaalien esiintyy lipidiperoksidaation [26, 27]. Lipidiperoksidaatiota aineenvaihduntatuotteiden voi hyökätä DNA emäkset, mikä aiheutti erilaisia ​​oksidatiivisen DNA vahingoista lisätä epävakautta genomin. Tämä on yleistä, että vapaita radikaaleja yhdistäminen ja antioksidantti toiminnan häiriöt aina tapahtua syövissä [28]. Tokotrienoleja scavenged vapaat radikaalit vastaan ​​lipidiperoksidaatiolta. Tokotrienoleja näytteillä vahva antioksidantti kapasiteettia kuin tokoferolit [29]. Kun tokotrienoliin ja tokoferolin on annettu rotille tai ihmisille, tokotrienoli osoitti hapetus suojaavan vaikutuksen, mutta ei vaikuttanut tokoferoli [30]. Tutkimuksessamme pieni määrä tokotrienoleja ja α-tokoferoli löytyy TRF. Kuitenkin TRF osoitti vähentynyt ihmisen paksusuolen syövän nude-hiirissä. Antioksidatiivisia aktiivisuus tokotrienoleja saavutetaan aiheuttamalla antioksidantti entsyymit, kuten superoksididismutaasi (SOD) ja katalaasi (CAT) [31], vähentää koentsyymi II (NADPH), glutationiperoksidaasi (GSH-Px) [32]. Nämä entsyymit vapaiden radikaalien vaimentamiseksi kuten Super hapen vapaiden radikaalien [33], suojella ja ylläpitää terveyttä organismin. Tässä tutkimuksessa, TRF voi lisätä toiminnan CAT hiirissä. Siinä ehdotettiin, että SW620-solut voivat vaikuttaa antioksidantti puolustusjärjestelmää, joten hiiret oksidatiivista stressiä. TRF voisi lisätä toiminnan SOD ja GSH-Px sammuttamiseksi vapaiden radikaalien suojelemiseksi terveyttä. Mutta me ei selittänyt, miksi TRF myös lisääntynyt taso MDA joka heijastuu tasot lipidien hapettumista.

TRF esti hiirissä antamalla asetuksella Wnt polkuja

Wnt reittejä olla tärkeä rooli useissa monimutkainen prosessi biokemiallisia reaktioita soluissa. Normaaleissa ei-jakautuviin soluihin, kuten epiteelisolujen paksusuolen, Wnt signaalit ovat heikkoja ja vain hyvin pieni määrä solunsisäisten β-kateniinin proteiini [34]. Aktivointi Wnt signaalien suoliston solut voivat aiheuttaa yli leviämisen suolen krypta hiukkasen ja lopulta johtaa esiintyminen paksusuolen syöpä [35, 36]. β-kateniinin ohjaa kanoninen reitin ja säätelee tuhoa monimutkainen, joka koostuu kahdesta ser /thr kinaasien, GSK-3β (glykogeenisyntaasikinaasi- 3β) ja CKI, kaksi rakennustelineet proteiineja, ak- siini ja APC (adenomatoottisen polypoosin coli) [37 ]. Kun Wnt /WG ligandi on poissa, ak- siini monimutkainen sytoplasmassa vakaassa tilassa, CK1α, GSK3p monimutkainen peräkkäin fosforyloidun β-kateniinin, fosforyloitu β-kateniinin suorittaminen tietyissä voitu havaita E3 ubikitiinipromoottori ligaasilla entsyymin β-Trcp ja sitten de-porrastettu by proteasomin, sen varmistamiseksi, että konsentraatti β-kateniinin pidetään suhteellisen matalalla tasolla [38]. Kun Wnt signaloinneista aktivoituvat, Wnt proteiiniin sidottu Frizzled (Fz) reseptorit, aktivoitua Fz palvelukseen DSH kalvolle, ja yhdistettynä ak- siini on monimutkainen depolymeroinnin monimutkainen, joka tekemistä APC, ak- siini ja GSK-3β [39]. Monimutkainen depolymerointia ja β-kateniinin sytoplasmassa kumuloituvat, sitten tranlocation ydin- ja yhdessä TCF (T-solu tekijä) aktivoida Wnt geeni, joka voi aiheuttaa loppupään geenejä, kuten c-myc, sykliini D1 surviviiniperäiset transkriptio liittyvä maligniteetti [40]. Proteiinifosfataasiin PP1 ja PP2A ovat mukana tässä prosessissa. Nämä tekijät voidaan yhdistää ak- siini, ja APC defosforyloimiseksi ak- siini ja β-kateniinin ja estävät kompleksin muodostusta ja hajoamista β-kateniinin [5]. Eritettyä frizzled-sukuiset proteiinit (SFRP: t), Wnt antagonistit, perheenä uusia peräsuolen tuumorisuppressorin kandidaattigeenit, voisi estää Wnt signalointia ja ilmentymistä β-kateniinin kohdegeenien sykliini D1 ja c-myc in β-kateniinin aktivoituvan paksusuolen syöpä SW480 ja HCT-116-solut, jotka johtavat estämällä kasvaimen kasvua [41, 42].

Valokuvauskemikaalit kuten esculetin [43], luteolin [44], dioskiinia [45] ja resveratrolin [46] on todettu anti-paksusuolen syövästä Wnt /β-kateniinin reitin. Wnt-signalointireitin koskee toimia mahdollisena kohteena uusille paksusuolensyöpä terapeuttisia. Lisäksi tocotrienols on voimakas anti-kasvain vaikutus ja Wnt-signalointireitin, joka voi olla tärkeä rooli anti-kasvain mekanismi. γ-tokotrienoliin voi estää angiogeneesin SGC-7901-CM aiheuttamaa HUVEC, joka on olennainen merkitys kasvaimen kasvua, ja estävä vaikutus liittyy vähentää β-kateniinin ja sykliini D1 toimintaa [47]. Tokotrienoliin myös alassäädetty ilmentymistä β-kateniinin syövän kantasoluja [48]. Edellisessä tutkimuksessa δ-, γ-tokotrienoli ovat osoittaneet estävän kasvua ihmisen paksusuolen syöpäsoluissa SW620 ja HCT-8 kautta tukahduttaa toimintaa Wnt signalointipolkujen [1, 2]. Jotta voitaisiin tutkia, onko tocotrienols osoittavat myös antituumorivaikutuksia

in vivo

, ihmisen paksusuolen syövän ksenograftien Balb /c nude-hiiriä käytettiin lisätutkimuksia samanlainen eston vaikutuksen kasvaimen kasvua välittämää TRF. TRF uutetaan palmuöljyn ja rikastunut tokotrienoleja. TRF on osoitti syövän biologinen toiminta ja myös todettu alentavan tasoja IL-6, IL-8: n ja VEGF liittyy angiogeeninen HUVEC ja 4T1 hiiren maitorauhasen syöpäsoluja [49]. Jälkeen täydentää TRF: n ilmentyminen IL-24-mRNA: n, sytokiini raportoitu olevan antituumorivaikutuksia, kasvoi 2-kertaisesti kasvainkudoksessa BALB /c-hiirten [50]. Meidän Tulosten mukaan TRF merkittävästi vähentynyt painon ksenografteista, lisääntynyt ilmentyminen Wnt polkuja liittyviä tekijöitä ak- siini-2-, GSK-3β, APC ja vähensi proteiinin ilmentymistä Wnt-1, β-kateniinin ja β-kateniinin kohdegeenien sykliini D1 , c-myc, elossa ksenografteissa nude-hiirten. Nämä tiedot osoittivat, että TRF inhiboivat ihmisen paksusuolen syövän nude-hiirissä, joita tukahduttaminen Wnt reittejä. Aiemmat tutkimukset osoittivat myös, että tukahduttaminen Wnt-signalointireitin liittyi eston koolonkarsinoomasoluissa lisääntyminen ja erilaistuminen, induktio apoptoosin, tukahduttaminen paksusuolen kasvainten kehittymiseen [51, 52].

Vaikka α-tokoferoli ja tocotrienols ovat tunnettu voimakas antioksidantti ja mahdollisia syöpälääkkeitä, välistä suhdetta kapasiteetin antioksidantti ja tuumorin vastaisen ei ole selvä. On mielenkiintoista, että Wnt-signalointireitin ei ole vain liittyy kasvaimen kehitys, mutta myös mukana Oksidatiivinen stressi [53, 54]. Kuitenkin annatto-tokotrienoli lisäravinteiden aiheuttaman apoptoosin ja senescent kaltainen pääte leviämisen pidätys tuumorisoluissa ja HER-2 /neu siirtogeenisiä hiiriä, ja lisääntynyt ROS tuotanto kasvainsoluissa [55]. Tämä osoitti, että kasvaimen vastainen aktiivisuus tokotrienoli voi liittyä induktion oksidatiivisen stressin. Tutkimuksessamme TRF lisäsi toiminnan GSH-Px ja CAT maksassa hiirillä. Kuitenkin tarkka mekanismit TRF kasvaimenkasvunestoaktiivisuuden ja säännellä antioksidantti indeksin täytyi vielä tutkia.

Yhteenvetona tokotrienoli fraktion palmuöljystä (TRF) esti kasvua ihmisen paksusuolen syövän ksenograftien Balb /c-nude-hiiriin. Tämä esto vaikuttivat osaltaan lisätä järjestelmän antioksidanttisia entsyymejä ja vaikuttavat ilmaus Wnt polkuja liittyvät proteiiniin. Siten TRF on voimakas inhiboivat kasvaimen

in vivo

.

tukeminen Information

S1 File. Sisältää taulukoissa A, B, C

taulukko A S1 File, vaikutuksen TRF uruilla kerroin BALB /c-nude-hiirissä. Taulukko B S1 File, vaikutukset TRF indekseihin hematologian, että nude-hiirissä. Taulukko C S1 File, vaikutukset TRF luokituksesta leukosyyttien nude-hiirissä.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0122175.s001

(DOCX) B

Kiitokset

kirjoittajat kiittää tohtori Yu BingYun kotoisin Palm Nutraceuticals Sdn.Bhd, Malesian ja ystävällisesti toimittanut tokotrienoliin fraktion palmuöljystä (TRF).