Krooninen sairaus

tiivistelmä

Cisplatin-pohjainen yhdistelmä solunsalpaajahoito on järkevä vaihtoehto cystectomy kehittyneissä /metastaattinen virtsarakon syöpä, mutta hankinta sisplatiinin vastus on yleinen potilailla, joilla on virtsarakon syöpä. Aiemmat tutkimukset osoittivat, että menetys homeodomain-vuorovaikutuksessa proteiinikinaasi-2 (HIPK2) edistää solujen lisääntymistä ja kasvaimen kehittymisen. Kuitenkin rooli HIPK2 säätelyssä chemoresistance syöpäsolun ei ole täysin ymmärretty. Tässä tutkimuksessa, huomasimme, että HIPK2 mRNA ja proteiini-arvot ovat selvästi vähentyneet sisplatiini kestävä virtsarakon syöpäsolun

in vivo

ja

in vitro

. Downregulation HIPK2 lisää solujen elävyys annoksesta ja ajasta riippuvaisella tavalla aikana sisplatiinihoitoon, kun taas yli-ilmentyminen HIPK2 alentaa solujen elinkykyä. HIPK2 yliekspressio osittain voitetaan sisplatiinin vastustusta RT4-CisR solu. Lisäksi olemme osoittaneet, että Wip1 (villityyppisen p53: n aiheuttama fosfataasin 1) ilmentyminen on ylössäädelty RT4-CisR solu verrattuna RT4 solun, ja HIPK2 säätelee negatiivisesti Wip1 ilmentymistä virtsarakon syövän solujen. HIPK2 ja Wip1 ilme on myös korreloi negatiivisesti sisplatiinin jälkeen perustuva yhdistelmä kemoterapiaa

in vivo

. Lopuksi osoitettiin, että yli-ilmentyminen HIPK2 herkistää solunsalpaajaresistentti virtsarakon syövän solujen sisplatiinin säätelemällä Wip1 ekspressiota.

Päätelmät

Nämä tiedot viittaavat siihen, että HIPK2 /Wip1 signaloinnin edustaa uutta reitin säätelevä chemoresistance, mikä tarjoaa uuden tavoitteen kemoterapiaa virtsarakon syöpään.

Citation: Lin J, Zhang Q, Lu Y, Xue W, Xu Y, Zhu Y, et al. (2014) alassäätely HIPK2 lisää resistenssiä virtsarakon syövän Cell Sisplatiini säätelemällä Wip1. PLoS ONE 9 (5): e98418. doi: 10,1371 /journal.pone.0098418

Editor: Thomas G. Hofmann, Saksan Cancer Research Center, Saksa

vastaanotettu: 24 tammikuu 2014; Hyväksytty: 02 toukokuu 2014; Julkaistu: toukokuu 20, 2014

Copyright: © 2014 Hu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Kirjoittajat ei ole tukea tai rahoitusta raportoida.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Ihmisen virtsarakon syöpä on kymmenes yleisin pahanlaatuinen kasvain naiset, ja neljänneksi yleisin miesten [1], [2]. Patologinen tutkimukset osoittavat, että virtsarakon syöpä käsittää kaksi suurta ryhmää. Yleisin virtsarakon syöpä on urothelial carcinoma (UC), joka yleensä vääjäämättä mutta harvoin edetä [3], [4]. Lisäksi, invasiivinen virtsarakon syöpä on aggressiivinen, ja puolet potilaista, joilla on invasiivinen virtsarakon syövän kehittää etäpesäkkeiden [5], [6]. Chemoradiation on järkevä vaihtoehto cystectomy kehittyneissä /metastaattinen virtsarakon syöpä, mutta kestävyys syövän kemoterapia on yleinen ilmiö etenkin metastaattisen virtsarakon syövän [7]. Kuitenkin kehitys kemoterapiaa varten virtsarakon syövän hoitoon on ollut rajoitettua, koska taustalla olevien mekanismien aiheuttavat chemoresistance eivät ole tiedossa. Paljastaen molekyylimekanismi chemoresistance on välttämätöntä kehittää tehokkaita kemoterapeuttisia aineita.

homeodomain-vuorovaikutuksessa proteiinikinaasin-2 (HIPK2) on seriini /treoniini-kinaasi, kuten on osoitettu olevan mukana tuumorisuppressorin [8], [9], [10]. HIPK2 aktivoituu vasteena eri DNA: ta vaurioittavien aineiden, kuten sisplatiinin, ultravioletti- ja roskovitiini kemoterapeuttisten [9]. HIPK2 fosforyloi p53 tiettyjen aktivoitumisen proapoptoottiset kohdegeenien, kuten p53AIP1, PIG3, Bax ja Noxa ja edistää sääntelyn p53 aiheuttaman apoptoosin [11], [12], [13]. Puca

et ai

osoitti, että HIPK2 on tärkeä säätelijä p53 aktiivisuutta vasteena kemoterapeuttinen lääkeaine [14]. HIPK2 ilmaistaan ​​eri tavalla herkkä versus solunsalpaajaresistentti solujen vastauksena eri kemoterapeuttisten lääkkeiden (ts sisplatiini ja adriamysiini). HIPK2 esto estää adriamysiini aiheuttaman apoptoosin solunsalpaajaresistentti syöpäsoluissa, kun taas yli-ilmentyminen HIPK2 laukaisee apoptoosin solunsalpaajaresistentti soluissa, liittyy induktioon p53Ser46-kohdegeenin AIP1 [14], [15], [16]. Lazzari

et ai

osoitti, että HIPK2 pudotus aiheuttaa resistenssin eri syöpälääkkeiden jopa targetingΔNp63α p53-null-soluissa [17].

Wild-type p53-indusoidun fosfataasin 1 (Wip1) on p53-indusoituvaa seriini /fosfataasi, joka sammuttaa DNA-vaurioita tarkistuspiste vasteet defosforyloitumista tiettyjen proteiinien, kuten p38 mitogeeniaktivoidut proteiinikinaasi, p53, tarkistuspiste kinaasi 1 ja Checkpoint kinaasi 2 [18], [19]. Wip1 on kohdistettu HIPK2 hajoamiselle [20]. Kehittyvät tiedot osoittavat myös, että Wip1 on yli-ilmentynyt useissa erilaisissa ihmisen kasvaimissa, ja se on yhdistetty chemoresistance [19]. Wang

et al

osoitti Wip1 Knockdown lisää DNA-vaurioita signalointia ja uudelleen herkistää suun levyepiteelisyöpä (SCC) soluja sisplatiini [21]. Käyttämällä ksenografti kasvainmuodosta, he osoittivat, että yli-ilmentyminen Wip1 edistää kasvaimen kehittymisen ja sen estäminen parantaa kasvaimen vaste Sisplatiinin [21]. Vastakkaisesti, Goloudina

et ai

osoitti, että Wip1 yliekspressio herkistää koolonsyöpäsoluja HCT116 (p53

– /-) sisplatiiniin RUNX2 riippuvainen transkription induktio proapoptoottiset Bax-proteiinia [22]. Kuitenkin rooli Wip1 säätelyssä sisplatiinin herkkyys virtsarakon syöpä solu ei ole täysin ymmärretty.

Näiden havaintojen perusteella, me tutkimme, HIPK2 säätelee kemosensitiivisyys kohdistamalla Wip1 virtsarakon syöpäsolun. Täällä huomasimme, että säätelyä HIPK2 estää Wip1 ilmaisua, joka herkistää solunsalpaajaresistentti virtsarakon syöpäsolun sisplatiinia.

Materiaalit ja menetelmät

Solulinjat ja kudosnäytteiden

käytettävien protokollien tutkimuksessa oli hyväksynyt sairaalan koehenkilöiden suojelemiseen komitean. Veren yksilöt hankittiin kirjallinen suostumus Pekingin Friendship sairaala Sidoksissa Capital University of Medical Sciences. Yhteensä 31 leikkaushoitoon /metastaattinen virtsarakon syöpä potilasta osallistui tutkimukseen, ja kaikki potilaat saivat sisplatiinia perustuva yhdistelmä kemoterapiaa välillä 12/2011 ja 08/2013 (mediaani-ikä 62,3, vaihteluväli 51-80).

Ihmisen virtsarakon syövän solulinjat villityypin p53: n (RT4 ja 253J) hankittiin ja ylläpidetään suosittelemat American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA). Sisplatiini kestävä alilinja RT4-vastus (RT4-CisR) perustettiin jatkuva altistuminen lisääntyy sisplatiinin jakson aikana 12 kuukauden raportoitu aiemmin [23].

Reaaliaikainen PCR

Kokonais-RNA uutettiin soluista tai kudoksista käyttäen Trizol-reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, CA), ja käänteistranskriptio (RT) reaktiot suoritettiin valmistajan protokollan. Reaaliaikainen PCR suoritettiin käyttäen standardia protokolla SYBR Green PCR Kit (Toyobo, Osaka, Japani). p-aktiini käytettiin viitteinä mRNA: iden. ACt arvot normalisoitiin p-aktiini tasot. 2

-ΔΔCt menetelmää käytettiin määrittämään suhteellinen kvantitointi geenin ekspressiotasoja. Kukin näyte analysoitiin kolmena rinnakkaisena.

Western blot-analyysi

Western blot-analyysi arvioida HIPK2, Wip1 ja β-aktiinin ekspressio suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [24]. HIPK2 (ab28507) ja Wip1 (ab72000) primaaristen vasta-aineiden hankittiin Abcam (Cambridge, MA, USA). Β-aktiini ensisijainen vasta-aineet hankittiin Sigmalta (MO, USA).

solunelinkykyisyysmääritys

Solut maljattiin ja niitä kasvatettiin 96-kuoppaisen levyn 0,1 ml Dulbeccon modifioitua Eaglen elatusainetta, joka sisälsi 10 % (v /v) vasikan sikiön seerumia 37 ° C: ssa 24 tuntia. Sen jälkeen elatusaine vaihdettiin ja 0,1 ml: lla tuoretta elatusainetta, joka sisälsi osoitti lääkkeen lisättiin ja soluja inkuboitiin vielä 48 tuntia. Useita elävien solujen määritettiin käyttämällä 3- (4,5-di- metyylitiatsol-2-yyli) -2,5-difenyylitetratsoliumbromidia (MTT), kuten on kuvattu [25].

RNAi ja yli-ilmentyminen

RNAi suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [26], [27]. SiRNA käytetty tässä tutkimuksessa olivat seoksia kolme siRNA: t ja ostettiin Genepharm (Shanghai, Kiina). pcDNA-HIPK2 ja pcDNA-Wip1 rakennettiin yli-ilmentää HIPK2 tai Wip1 lisäämällä fragmentti, joka sisälsi HIPK2 tai Wip1 esiaste osaksi pcDNA plasmidiin.

Tilastollinen analyysi

Kaikki tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona ± standardipoikkeama poikkeama (SD) vähintään kolmesta erillisestä kokeesta. Erot ryhmien välillä analysoitiin käyttäen Studentin

t

testi. Erot katsottiin tilastollisesti merkitsevä

p

0,05.

Tulokset

HIPK2 ilmentyminen väheni kemiallis-resistenttejä virtsarakon syöpäsolun

Sisplatiini on nykyisin tehokkain antituumoriaine edenneisiin virtsarakon syöpään. Kuitenkin kestävyys sisplatiini perustuva yhdistelmä kemoterapia on yleinen ilmiö etenkin metastaattisen virtsarakon syöpä. Selventää molekyylitason mekanismeista sisplatiinin vastarintaa virtsarakon syövän, yhteensä 31 metastaattinen virtsarakon syöpä potilasta osallistui, ja HIPK2 ekspressiotaso analysoitiin sisplatiinin jälkeen perustuva yhdistelmä kemoterapiaa. Kuva 1A osoitti, että HIPK2 ilmentymistä potilailla, jotka ovat kemiallis-resistenttejä on merkittävästi vähentynyt verrattuna kemiallis-herkillä potilailla. Sitten perustettiin sisplatiinin kestävästä alalinja ihmisen virtsarakon syövän solulinja RT4 (RT4-CisR), ja määritettiin ilmentymistason HIPK2. Kuten kuviossa 1B on esitetty, HIPK2 mRNA-tasot olivat matalammat RT4-CisR soluissa verrattuna RT4-soluihin. Vastaavasti, HIPK2 proteiinin tasot olivat vaimentua in RT4-CisR soluissa (kuvio 1C). Nämä tiedot osoittavat, että downregulation HIPK2 voi liittyä sisplatiinin vastus virtsarakon syövän soluissa.

(A) analyysi HIPK2 ekspressiotason suoritettiin verinäytteistä sisplatiinin kanssa herkkien potilaiden (n = 19) ja sisplatiini resistenttien potilaiden (n = 12). Kokonais-RNA uutettiin ja suoritettiin reaaliaikainen RT-PCR analysoida suhteellisen tason HIPK2 kussakin näytteessä. Suhteellinen ekspressio laskettiin ja normalisoitu p-aktiini-mRNA: n. Kaikki tiedot ilmennettiin kertainen muutos suhteessa kudoksen (kontrolli, ilmaisu = 1). Tulokset ilmaistiin Log 10 (2

-ΔΔCt). *

p

0,05. (B) toinen sisplatiini kestävä alilinja RT4-CisR perustettiin jatkuva altistuminen lisääntyy sisplatiinin jakson aikana 12 kuukautta, ja HIPK2 tasot analysoitiin reaaliaikaisella PCR: llä. Suhteellinen HIPK2 tasot laskettiin suhteessa kontrolliin. *

p

0,05. (C) Western blot-analyysi HIPK2 proteiinin tason RT4-CisR ja RT4 soluja (ylös). Osoitimme myös suhteelliseksi kvantitoimiseksi HIPK2 proteiinin taso (pohja, n = 3). *

p

0,05.

HIPK2 pudotus kasvaa solujen elinkelpoisuuden aikana sisplatiinihoitoon virtsarakon syövän solujen

roolin tutkimiseksi HIPK2 vuonna sisplatiinin vastus, erillinen yli-ilmentymisen ja ablaatio kokeet tehtiin käyttäen joko pcDNA-HIPK2 tai HIPK2 siRNA aikana sisplatiinihoitoon ja solujen elinkelpoisuus määritettiin. Kuva 2A osoitti, että HIPK2 ekspressiotasoja määrä väheni RT4 soluissa käsitelty HIPK2-siRNA. Sitten RT4 solujen inkuboitiin eri sisplatiinin (0, 1, 2, 3, 4, 5 ja 6 uM) 48 tuntia. Kuten on esitetty kuviossa 2B, HIPK2 inhibitio lisää merkittävästi RT4 solujen elinkelpoisuus verrattuna negatiiviseen kontrolliin (N.C). Odotetusti, knockdovvn HIPK2 lisää RT4 solujen elinkelpoisuuden seuraavat sisplatiinihoitoon ajoissa riippuvaisella tavalla (kuvio 2C). In RT4-CisR soluja, sisplatiinihoitoon johti vaatimaton esto solujen elinkelpoisuuden, kun taas yli-ilmentyminen HIPK2 uudelleen herkistyneet RT4-CisR soluja sisplatiinin (kuvio 2D ja E). Samoin HIPK2 ilmentyminen inhiboitui 253J soluissa jälkeen HIPK2-siRNA hoito (kuva S1), ja HIPK2 esto lisää 253J solujen elinkykyä ajoissa riippuvaisella tavalla (kuvio 2F). Nämä tiedot viittaavat siihen, että HIPK2 lisää sisplatiinin herkkyyttä virtsarakon syövän soluissa.

(A) RT4 solut transfektoitiin HIPK2-siRNA: t ja HIPK2 ekspressiotaso määritettiin reaaliaikaisella PCR: llä. N.C = negatiivinen kontrolli (salattu) siRNA. (B) RT4 soluja käsiteltiin HIPK2-siRNA: t, ja solujen elinkelpoisuus määritettiin käyttäen MTT: n jälkeen, sisplatiinihoitoon (1-6 uM). Tulokset osoittavat tiedot kuudesta itsenäisestä kokeesta, ilmoitetaan keskiarvona ± SD. *

p

0,05. (C) RT4 soluja käsiteltiin HIPK2-siRNA: t, ja osoitetuissa aikapisteissä, solujen elinkelpoisuus määritettiin käyttäen MTT: n jälkeen, sisplatiinihoitoon (6 pM). Tulokset osoittavat tiedot kuudesta itsenäisestä kokeesta, ilmoitetaan keskiarvona ± SD. *

p

0,05. (D) RT4-CisR solut transfektoitiin pcDNA-HIPK2 ja HIPK2 ekspressiotaso määritettiin reaaliaikaisella PCR: llä. (E) HIPK2 yliekspressoitiin RT4-CisR soluja, ja solujen elinkelpoisuus määritettiin käyttäen MTT: n jälkeen, sisplatiinihoitoon (1-6 uM). Tulokset osoittavat tiedot kuudesta itsenäisestä kokeesta, ilmoitetaan keskiarvona ± SD. *

p

0,05. (F) 253J-soluja käsiteltiin HIPK2-siRNA: t, ja solujen elinkelpoisuus määritettiin käyttäen MTT: n jälkeen, sisplatiinihoitoon (6 pM). *

p

0,05.

HIPK2 säätelee negatiivisesti Wip1 ilmaisu

Aiemmat tutkimukset osoittivat, että HIPK2 säätelee kasvaimen etenemistä ja lääkeresistensseihin kautta useita mahdollisia kohdegeenien, kuten kuten Bax, p53AIP1, Noxa, jne [14]. HIPK2 on myös ratkaiseva rooli aloittamisesta kaksinkertaisen lohkon murtuma korjaus signalointi ohjaamalla Wip1 tasot vastauksena ionisoivan säteilyn [20]. Viimeaikaiset tutkimukset osoittavat, että Wip1 on yli-ilmentynyt useissa erilaisissa ihmisen kasvaimissa, ja se on yhdistetty chemoresistance [19]. Kuitenkin vähän tiedetään onko HIPK2 säätelee sisplatiini vastus kohdistamalla Wip1. Ensin määritetään ilmentymistason Wip1 vuonna RT4 ja RT4-CisR soluissa. Kuvio 3A ja B osoittivat Wip1 mRNA ja proteiini tasot olivat merkitsevästi yläreguloituja RT4-CisR verrattuna RT4 soluun. Sitten määritettiin, onko HIPK2 säätelee negatiivisesti Wip1 ilmentymistä. HIPK2 pudotus lisääntynyt Wip1 ekspressiotasot virtsarakon syövän solulinjoissa (kuvio 4A), kun taas HIPK2 yli-ilmentyminen estää huomattavasti Wip1 mRNA-tasolla virtsarakon syövän solulinjoissa (kuvio 4B). Western blot-analyysi osoitti, että HIPK2 pudotus kasvaa Wip1 proteiinin taso (kuvio 4C).

In vivo

merkittävä negatiivinen korrelaatio havaitaan myös väliin HIPK2 tasojen ja Wip1 tasot virtsarakon syöpään jälkeen sisplatiini-pohjainen yhdistelmä kemoterapiaa (

r

2 = 0,1507,

p

= 0,0063, kuvio 4D). Nämä tiedot osoittivat, että downregulation HIPK2 johtaa kasvua Wip1 ilmentymisen.

(A ja B) Wip1 mRNA ja proteiinin ilmentyminen tasot määritettiin RT4 ja RT4-CisR soluissa, vastaavasti. *

p

0,05.

(A) Wip1 mRNA-tasot arvioitiin reaaliaikaisen PCR jälkeen HIPK2 eston RT4 soluissa ja 253J soluja. *

p

0,05. (B) Suhteellinen Wip1 mRNA-tasolla, kun HIPK2 yli-ilmentymisen RT4 soluissa ja 253J soluja. *

p

0,05. (C) Western blot-analyysi Wip1 tason jälkeen HIPK2 eston RT4 ja 253J soluja. (D) Negatiivinen korrelaatio HIPK2 tasojen ja Wip1 tasot 18 virtsarakon syöpään jälkeen sisplatiini-pohjainen yhdistelmä kemoterapiaa (

r

2 = 0,1507,

p

= 0,0063) . Suhteellinen Wip1 tai HIPK2 ilmentyminen lasketaan ja normalisoidaan suhteessa p-aktiini-mRNA: n. Kaikki tiedot ilmennettiin kertainen muutos suhteessa kudoksen (kontrolli, ilmaisu = 1).

HIPK2 yliekspressio herkistää solunsalpaajaresistentti virtsarakon syövän solujen sisplatiinin säätelemällä Wip1 ilmaisu

tutkimme seuraavaksi roolia Wip1 säätelyssä solujen elinkelpoisuuden aikana sisplatiinihoitoon. Kuva 5A osoitti Wip1 yliekspressio lisääntynyt solujen elinkelpoisuutta RT4 soluissa aikana sisplatiinihoitoon. HIPK2 estää Wip1 ilmaisua ja vähentää sisplatiinin vastus, ja merkittävä negatiivinen korrelaatio havaitaan väliin HIPK2 ja Wip1. Siksi arveltu, että rooli HIPK2 säätelyssä sisplatiinin vastus välittää Wip1. Kuvio 5B osoitti, että HIPK2 esto lisää merkittävästi RT4 solujen elinkelpoisuus verrattuna N.C, kun taas Wip1 esto in HIPK2-vähen- tämisessä soluissa osittain vähentää solujen elinkykyä. Samoin Wip1 esto in HIPK2-vähen- tämisessä soluissa osittain vähentää 253J solujen elinkelpoisuuden (kuvio 5C). Tärkeämpää, solujen elävyys laski HIPK2 yli-ilmentyminen, kun taas Wip1 yli-ilmentyminen kasvoi HIPK2-yliekspressoivassa solujen elinkelpoisuuden (kuvio 5D). Nämä tiedot vahvistavat, että HIPK2 yliekspressio herkistää solunsalpaajaresistentti virtsarakon syövän solujen sisplatiinin säätelemällä Wip1 ekspressiota.

(A) Wip1 yliekspressoitiin RT4-solujen ja solujen elinkelpoisuus määritettiin käyttäen MTT: n jälkeen, sisplatiinihoitoon (6 pM). Tulokset osoittavat tiedot kuudesta itsenäisestä kokeesta, ilmoitetaan keskiarvona ± SD. *

p

0,05. (B ja C) RT4 ja 253J soluja käsiteltiin HIPK2-siRNA tai HIPK2-siRNA plus Wip1-siRNA, ja osoitetuissa aikapisteissä, solujen elinkelpoisuus määritettiin käyttäen MTT: n jälkeen, sisplatiinihoitoon (6 pM). (D) HIPK2 tai HIPK2 plus Wip1 yliekspressoitiin RT4-CisR soluja, ja solujen elinkelpoisuus määritettiin käyttäen MTT: n jälkeen, sisplatiinihoitoon (6 pM). *

p

0,05.

Keskustelu

Ihmisen virtsarakon syöpä on yksi kohtalokas syövät kaikkialla maailmassa, ja sen esiintyvyys on lisääntymässä monissa maat. Paitsi kirurgisia hoitoja, järjestelmällinen kemoterapiaa, on tärkeä rooli virtsarakon syövän hoitoon erityisesti potilaille, joilla on edennyt ja metastaattinen virtsarakon syöpä [28], [29]. Kuitenkin, vaikka nopea kutistuminen kasvainmassan seuraavissa kemoterapeuttisten syklien chemoresistance syöpäsolujen johtaa usein myöhemmin toistumisen ja etäpesäkkeiden syöpä [30], [31]. Kun otetaan huomioon huono ennuste potilaille, joilla on virtsarakon syöpä, lähinnä myöhäinen diagnosointi ja alhainen vastaus kemoterapiaa, yritimme tunnistaa ennustavan merkkiaineiden hoitovasteen ja molekyylikohteista lisätä herkkyyttä hoitoon.

Tutkimuksemme antaa perusteet että mahdollinen käyttö HIPK2 transduktion herkistää solunsalpaajaresistentti virtsarakon syöpäsolujen sisplatiinia. Osoitimme, että HIPK2 ekspressiotasot ovat merkittävästi vaimentua sisplatiini- resistenttejä RT4 cell (RT4-CisR) verrattuna RT4 soluun. Downregulation HIPK2 lisää sisplatiinin vastus annoksesta ja ajasta riippuvaa tavalla RT4 solussa, kun taas pakko ilmaus HIPK2 vähentää solujen elinkykyä aikana sisplatiinihoitoon. Lisäksi yli-ilmentyminen HIPK2 osittain voitetaan sisplatiinin vastustusta RT4-CisR solu. Aiemmat tutkimukset osoittivat, että HIPK2 on aktivoitu vasteena eri DNA: ta vaurioittavien aineiden, kuten sisplatiinin, ultravioletti- ja roskovitiini kemoterapeuttisten [14], [32], ja se on tärkeä säätelijä p53 aktiivisuutta vasteena kemoterapeuttinen lääkeaine [ ,,,0],11], [14]. N yli-ilmentyminen HIPK2 p53 villityypin uudelleen herkistää solunsalpaajaresistentti munasarjasyöpäsoluja kemoterapiaa välittämällä p53 fosforylaatio. Kuitenkin, molekyylimekanismi HIPK2 säätelyssä chemoresistance syöpäsolun ei ole täysin ymmärretty.

Wip1 on p53-indusoituva seriini /treoniini-fosfataasi, joka kytkee pois päältä DNA-vaurioita tarkistuspiste vasteet defosforyloitumista tiettyjen proteiinien mukana DNA korjaus ja solusyklin Checkpoint [19]. Wip1 geeni monistetaan monissa kasvaintyypeissä [33]. Song

et al

osoitti, että Wip1 vuorovaikutuksessa ja defosforyloi BAX tukahduttaa BAX välittämää apoptoosia vastauksena y-säteilytys eturauhassyöpäsoluissa [19]. Säteilyä kestävien LNCaP-solut osoittivat dramaattisia lisäyksiä Wip1 tasoilla ja heikentynyt BAX liikkeen mitokondriot jälkeen c-säteilytys, ja nämä vaikutukset olivat palautuneet jonka Wip1 estäjän [19]. Wang

et al

osoittivat, että Wip1 on tehokas lääke tavoite parantaa syövän hoidossa [21]. Wip1 esto lisää DNA-vaurioita signalointia ja herkistää suun SCC solujen sisplatiinia. Wip1 ylössäätely edistää kasvaimen kehittymisen ja sen inhbition parantaa tuumorivaste sisplatiinia. Yhdenmukainen edellä tuloksia, huomasimme, että ilmentymisen taso Wip1 on yliaktiivista RT4-CisR solu verrattuna RT4 solu, ja Wip1 yli-ilmentyminen lisää solujen elävyyden aikana sisplatiinihoitoon sisään RT4 soluissa. Tärkeää on, osoitimme, että HIPK2 säätelee negatiivisesti Wip1 ilmentymistä virtsarakon syövän solujen. HIPK2 ja Wip1 ilme on myös korreloi negatiivisesti sisplatiinin jälkeen perustuva yhdistelmä kemoterapiaa

in vivo

. Pakko ilmentymisen HIPK2 herkistää solunsalpaajaresistentti virtsarakon syöpäsolun sisplatiiniin säätelemällä Wip1 ilme. Johtopäätös: Nämä tiedot osoittivat, että HIPK2 /Wip1 signalointi edustaa uutta koulutusjakson säätelevä chemoresistance. Näin ollen tämä tutkimus osoittaa, että HIPK2 /Wip1 on tehokas lääke tavoite parantaa syövän hoidossa.

tukeminen Information

Kuva S1.

HIPK2 ilmentymistaso määritettiin reaaliaikaisella PCR: 253J-soluissa. N.C = negatiivinen kontrolli (salattu) siRNA. *

p

0,05.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0098418.s001

(TIF) B