Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tavoite

3′ deoksi-3 ’- [

18F] fluoritymidiini ([18F] FLT) on merkkiaineen käyttää arvioitaessa soluproliferaatioon

in vivo

. Tavoitteena oli tutkia käyttää [18F] FLT positroniemissiotomografia (PET) tutkimaan ei-invasiivisesti varhaisen antiproliferatiivisia vaikutuksia kokeellisen kemoterapeuttisen aineen TP202377 niin herkkiä ja resistenttejä kasvaimia.

Methods

hiirissä 3 ihmisen syövän solulinjat käytetään: TP202377 herkkä A2780 munasarjasyövän solulinja (n = 8-16 kasvaimia /ryhmä), indusoitu kestävät A2780 /Top216 solulinja (n = 8-12 kasvaimia /ryhmä) ja luonnon kestävä SW620 koolonisyöpäsolulinja (n = 10 kasvaimet /ryhmä).

In vivo

ottoa [18F] FLT tutkittiin lähtötilanteessa ja toistettiin 6 tuntia, päivä 1, ja Päivä 6 jälkeen TP202377 hoidon (40 mg /kg i.v.) aloitettiin. Merkkiaineen sisäänotto kvantifioitiin käyttämällä pieneläinten PET /TT.

Tulokset

TP202377 (40 mg /kg 0 tuntia) aiheutti kasvun estäminen päivänä 6 herkällä A2780 kasvain malli verrattuna kontrolliin ryhmä (P 0,001). Vuonna A2780 kasvain malli TP202377 hoito aiheutti merkittävää laskua oton [18F] FLT 6 tuntia (-46%; P 0,001) ja Day 1 (-44%; P 0,001) hoidon aloituksesta lähtötilanteeseen verrattuna ottoa. Päivänä 6 otto oli verrattavissa perustason. Hoito TP202377 ei vaikuttanut kasvaimen kasvua tai [18F] FLT sisäänottoa resistenttien A2780 /Top216 ja SW620 kasvainmuodoista. Kaikkien kontrolliryhmien ottoa [18F] FLT ei muutu. Ki67 geenien ilmentyminen paralleled [18F] FLT ottoa.

Johtopäätös

hoito A2780 hiirissä kanssa TP202377 (kerta-annos iv) aiheutti merkittävän laskun solujen lisääntymisen arvioitiin [18F] FLT PET 6 tunnin kuluttua. Esto säilyi 1. päivänä; kuitenkin, solujen lisääntymistä oli palannut perustasolle päivänä 6. kestävä A2780 /Top216 ja SW620 kasvainmuodoista ottoa [18F] FLT ei muuttunut hoidon jälkeen. Jossa [18F] FLT PET oli mahdollista erottaa ei-invasiivisesti herkkien ja resistenttien kasvainten jo 6 tunnin kuluttua hoidon aloittamisesta.

Citation: Munk Jensen M, Erichsen KD, Björkling F, Madsen J, Jensen PB, Sehested M, et al. (2012) [18F] FLT PET Non-invasiivinen arviointi Kasvaimen Herkkyys Kemoterapia: Tutkimukset Experimental Kemoterapia TP202377 Human Cancer hiirissä. PLoS ONE 7 (11): e50618. doi: 10,1371 /journal.pone.0050618

Editor: Vladimir V. Kalinichenko, Cincinnati Lasten Hospital Medical Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 24 elokuu 2012; Hyväksytty: 23 lokakuu 2012; Julkaistu: 30 marraskuu 2012

Copyright: © 2012 Munk Jensen et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus rahoittivat National Advanced Technology Foundation, Tanskan Medical Research Council, Rigshospitalets Research Foundation, Svend Andersen Foundation, AP Møller Foundation, Novo Nordisk Foundation, Lundbeck Foundation ja Tanskan Cancer Society. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Peter Buhl Jensen on omistusosuuksia ja työllisyyden Topotarget A /S. Maxwell Sehested on omistusosuuksia ja työllisyyden Topotarget A /S. Fredrik Björkling on työllisyyden Topotarget A /S. Kamille Dumong Erichsen on työllisyyden Topotarget A /S. Kaikki muut kirjoittajat eivät ole eturistiriitaa. Että jotkut yhteistyössä kirjoittajat työskentelevät Topotarget A /S ei muuta tekijöiden noudattamista PLoS One politiikan tietojen jakamista ja materiaaleja. Ei ole olemassa patentteja, tuotteiden kehittämiseen tai kaupan tuotteiden julistaa.

Johdanto

haasteena aikana uusien syöpälääkkeiden on erottelemaan vastanneiden ja vastetta alussa kurssin hoidon. Aikana prekliinisen kehittämisen syöpälääkkeet testaus in vivo vaikutus uusien huumeiden ehdokkaita kuvantamisen biomarkkereita voi auttaa ohjauksessa joista lääkeaihiota kehittää, parantaa tietämystä lääkekandidaatteja ja auttaa valita ne ennustavan biomarkkerit voivat olla sisällytetään tulevaisuudessa kliinisissä tutkimuksissa. Monet uudet ja jo hyväksytyn kemoterapeuttisia ei vain anti-kasvain vaikutus potilaiden alaryhmässä. Tunnistaminen näistä potilaista varhaisen hoidon aloitus voi aiheuttaa siirtyminen kohti muita hoitoja ei-vastaaville potilaille ja vähentää tarpeettomia hoitoja. Käyttö ei-invasiivisia positroniemissiotomografia (PET) kuvantamismenetelmä kuvan soluproliferaatiosairauden kanssa merkkiaine 3′-deoksi-3 ’- [18F] fluoritymidiini ([18F] FLT) on testattu erilaisissa pre-hoitopaikassa [1] – [10]. [18F] FLT arvioinnissa käytettävä solujen lisääntymistä

in vivo

PET, mittaamalla aktiivisuus tymidiinikinaasin 1 (TK1), joka on säädelty S-vaiheeseen solukierron [11] – [ ,,,0],16]. TK1 on entsyymi DNA pelastaa kautta. TK1 muuntaa tymidiini osaksi tymidiinimonofosfaattia (jolloin on edelleen fosforyloituu osaksi tymidiinitrifosfaatin sisällytetty DNA) ja siten on keskeinen tehtävä DNA synteesien ja solujen lisääntymistä. TK1 on keskeinen entsyymi osallistuu ottoa [18F] FLT ja siksi mittaukset TK1 geenin ilmentyminen oli sisällyttää esillä tutkimuksissa arviointiin [18F] FLT ottoa. Standardi menetelmä arvioimiseksi soluproliferaation kasvaimissa on Ki67 immunohistokemiallisesti. Mittaus määrä Ki67 positiivisten solujen kiinteä kasvain vaatii koepala ja siksi peräkkäistä mittausta soluproliferaation kasvainten hoidon aikana on usein rajallinen, koska haasteet poistaen sarja koepaloja. Ki67 antigeeni on proteiini ilmaistu jakautuviin soluihin, missä se sijaitsee nucleolus [17]. Ki67 ilmaistaan ​​G1, S, G2 ja M vaihe solusyklin muttei aikana lepää G0 vaiheessa ilmaisun ollessa korkein mitoosi vaiheessa [18]. Soluproliferaatiota on usein joko primäärinen tai sekundäärinen tavoite monien syöpälääkkeet, ja näin ollen tutkimuksen muutoksia solujen lisääntymisen käyttämällä [18F] FLT PET voidaan käyttää käsittelyn jälkeen eri syöpälääkkeitä. Kuitenkin [18F] FLT muutokset hoidon jälkeen ovat hyvin vaihtelevia ja riippuvaisia ​​kasvaimia ja hoidot [19].

Vaikka monet pre-kliiniset tutkimukset ovat tutkineet muutoksia [18F] FLT ottoa hoidon jälkeen eri kemoterapeuttisten harvat tutkimukset ovat analysoineet eroja kertymä- [18F] FLT välillä vastaamisen ja ei-vastaamisen kasvaimia [20], [21].

Aikaisemmin on havaittu, että [18F] FLT laski 2, 6 ja 24 tuntia hoidon jälkeen Top216 herkällä A2780 kasvain malli [22]. TP202377 on analoginen edellä kuvatun Top216 samalla voimakas antituumorivaikutus, mutta pienempi myrkyllisyys [23]. Sekä Top216 ja TP202377 kuuluvat yhdisteryhmän rakentaa 1,3-dihydroindoli-2-onirakenteessa. Nämä yhdisteet estävät proteiinien ja DNA-synteesiä ja indusoida apoptoosia ja näyttää voimakas syövän vastaista aktiivisuutta useissa solulinjoissa ja hiirimalleissa ihmisen syövän. TP202377 indusoi täydellinen kasvaimen regressio rotan PC3 (ihmisen eturauhassyövän solulinjaa) ksenograftimallia [23]. Tarkka vaikutusmekanismi näiden yhdisteiden on vielä tuntematon; Kuitenkin syövän vaikutusta on jotenkin liittyy mTOR polku ja se saattaa johtua ehtyminen solunsisäisen aminohappojen [24].

Sen tutkimiseksi, jos lasku [18F] FLT ottoa hoidon jälkeen ennustaa myöhempää heikentämiseen kasvaimen koon, on tarve tietoa jos aikaisin muutokset [18F] FLT otto ovat spesifisiä herkkiä kasvaimia. Tässä tutkimuksessa selvitettiin [18F] FLT otto kolmella kasvainmuodoista joista kaksi ovat resistenttejä TP202377 (A2780 /Top216 ja SW620) [23], [24] hoidon jälkeen selvittääkseen, jos muutokset [18F] FLT otto paljastaa ovatko kasvaimet ovat huumeiden herkkiä. Käytimme herkkä A2780 munasarja kasvainmuoto koska TP202377 on anti-kasvain vaikutus tässä tuumorimallissa ja uusien kemoterapia munasarjasyövän hoitoon on erittäin tarpeen. Monet munasarjasyöpä potilaat osoittavat ensimmäinen vastaus kemoterapiaa; kuitenkin lukuisat potilaat relapsi lääkeresistentissä kasvaimia ja näin ollen uusien kemoterapia munasarjasyövän hoitoon on suuri etuja.

Tutkimuksen tarkoituksena oli siis analysoida, [18F] FLT PET voitaisiin käyttää erottaa vastaaminen ei-vastaamasta kasvaimia 24 tunnin kuluessa hoidon aloituksesta uuden syöpälääkkeen yhdiste TP202377. Voit tehdä niin, me kuvaamisen solujen lisääntymistä

in vivo

kanssa [18F] FLT PET ennen ja hoidon aikana sekä TP202377 herkkä ja kahta kestävää ihmisen syövän hiiren kasvainmuodoista. Kuvantamisen data verrattiin Ki67 ja TK1 geenien ilmentyminen ja kasvaimen kasvua mitattiin tietokonetomografia (CT).

Materiaalit ja menetelmät

Kasvainmalli

Eläinten hoito ja kaikki kokeelliset menettelyt suoritettiin hyväksynnän nojalla Tanskan Animal Welfare neuvoston (2006 /561-1124). Nainen NMRI (Naval Medical Research Institute) nude-hiiriin (8 viikkoa vanhoja) hankittiin Taconic Euroopasta (Lille Skensved, Tanska) ja annettiin mukautua viikoksi eläimen laitos ennen sen väliintuloa aloitettiin. Tree eri solulinjoja käytettäessä TP202377 herkkä ihmisen munasarjasyöpäpotilailla A2780 [25] (lahja R. Ozols, Fox Chase Cancer Center Philadelphia, PA, tammikuu 2004), joka on TP202377 kestävä muoto A2780 A2780 /Top216 ja ihmisen paksusuolen syövän SW620. SW620-solulinja hankittiin ATCC (LGC Standards AB, Borås, Ruotsi). Top216 kestävät A2780 klooni (A2870 /Top216) tehtiin sen jälkeen, kun järjestysnumero

in vitro

käytäviä ja kloonin valinta A2780, kun läsnä on kasvavia konsentraatioita Top216. A2780 /Top216 klooni on ristiresistenttejä TP202377 [23].

kasvainten kasvua seuraavien TP202377-hoidossa A2780 (yläpaneeli), A2780 /Top216 (mid paneeli) ja SW620 (alempi paneeli). Kasvaimen tilavuus määritettiin microCT. Hiiriä käsiteltiin TP202377 (40 mg /kg i.v.) tai vehikkeliä päivänä 0. N = 8-16 kasvainten /ryhmä. *) P 0,05, **) p 0,01, ***) p 0,001 kohtelu verrattuna kontrolliryhmään samanaikaisesti vaiheessa.

[18F] FLT otto mitattiin SUVmean (vasemmanpuoleiset paneelit) ja SUVmax (oikea paneeli) A2780, A2780 /Top216 ja SW620 käsittelyn jälkeen TP202377 tai ajoneuvoon. N = 8-16 kasvainten /ryhmä. *) P 0,05, **) p 0,01, ***) p 0,001 verrattuna lähtötilanteeseen samassa hoitoryhmässä. #) P 0,05, ##) p 0,01, ###) p 0,001 kohtelu verrattuna kontrolliryhmään samanaikaisesti vaiheessa.

edustaja [18F] FLT PET /CT-kuvia A2780 ( ylempi paneeli), A2780 /Top216 (mid paneeli) ja SW620 (alempi paneeli) ksenografteja (pisteviiva ympyrät). [18F] FLT otto mitataan samoilla eläimillä lähtötilanteessa ja 6 tuntia, päivä 1 ja päivä 6 seuraa hoidon aloittamisesta kanssa TP202377.

Muutokset kasvaimen tilavuuden mitattuna suhde Päivä 6 /lähtötilanteen verrattuna ottoa [18F] FLT mitataan suhteessa 6 tuntia /lähtötilanteessa (oikea paneeli) ja Päivä 1 /lähtötilanteessa (vasen paneeli).

Expression of Ki67 ja TK1 normalisoitu geometrinen keskiarvo kolmen viite geenejä. Tiedot esitetään kertaisesti muutoksia hoidon jälkeen suhteessa lähtötasolle. N = 6-8 kasvaimia /ryhmä. *) P 0,05, **) p 0,01, ***) p 0,001 verrattuna lähtötilanteeseen samassa hoitoryhmässä. #) P 0,05, ##) p 0,01, ###) p 0,001 kohtelu verrattuna kontrolliryhmään samanaikaisesti vaiheessa.

perustaminen ksenograftien, 10

7 solua 100 ui keskipitkän sekoitetaan 100 ui Matrixgel ™ tyvikalvon Matrix (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) injektoitiin subkutaanisesti vasempaan ja oikeaan kylkeen vastaavasti nukutusaineen 01:01 tilavuus /tilavuus-seosta Hypnorm® (Janssen Pharmaceutica, Beerse, Belgia) ja Dormicumia® (Roche, Basel, Sveitsi). Solulinjat on testattu mykoplasmaa. Kaikkia solulinjoja viljeltiin RPMI (Roswell Park Memorial Institute) keskipitkän 1640+ GlutaMAX (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), johon oli lisätty 10% vasikan sikiön seerumia (Biological Industries, Israel) ja 1% penisilliini-streptomysiiniä (Invitrogen) 5 % CO

2 37 ° C: ssa.

Kokeellinen malli

hiirissä 3 ihmisen syövän solulinjat käytetään: TP202377 herkkä A2780 munasarjasyövän solulinja (n = 4 -8 hiirtä /ryhmä = 8-16 kasvaimia /ryhmä), indusoitu TP202377 kestävä A2780 /Top216 solulinja (n = 4-6 hiirtä /ryhmä = 8-12 kasvaimia /ryhmä) ja luonnollinen TP202377 vastustuskykyisten SW620 paksusuolen syöpä solulinja (n = 5 hiirtä /ryhmä = 10 kasvaimet /ryhmä).

In vivo

ottoa [18F] FLT tutkittiin eri ajankohtina hoidon jälkeen TP202377 (40 mg /kg iv 0 tuntia) tai vehikkeliä (2% DMSO, 20% HP-b-CD suolaliuokseen ). Kemiallinen rakenne TP202377 on esitetty kuviossa 1. TP202377 oli edellisen analyysit osoitettu estävän kasvua A2780 ksenograftikasvaimissa mutta ei A2780 /Top216 ja SW620. [18F] FLT skannaukset suoritettiin ennen joko TP202377 tai ajoneuvo ruiskutettiin määrittämiseksi lähtötasoon merkkiaineiden oton. Suunnittelu Tutkimus oli pitkittäinen ja [18F] FLT skannaukset toistettiin samalla eläinten 6 tuntia, päivä 1 ja päivä 6 (5-7) injektion.

Kasvaimen tilavuus seurasi CT aikana kokeissa [26]. Kasvaintilavuudet laskettiin suhteessa tilavuuteen lähtötilanteessa.

Expression of Ki67 ja TK1 analysoitiin

in vitro

rinnakkain ryhmissä hiiriä A2780, A2780 /Top216 ja SW620 kasvaimet vastaavasti, joita käsiteltiin joko TP202377 tai ajoneuvon ja biopsied ennen ja 6 tuntia, päivä 1 ja päivä 5 hoidon aloittamisen jälkeen. Koepaloja otettiin käyttäen 18G neulaa ja sijoitettava välittömästi RNA later® (Ambion (Europe) Limited, Cambridgeshire, UK). Kaikki näytteet säilytettiin 4 ° C: ssa ja seuraavana päivänä RNAlater® poistettiin ja näytteet siirrettiin -80 ° C: ssa, kunnes sitä qPCR käsittelyä.

synteesi [18F] FLT

[18F] FLT syntetisoitiin käyttäen 3-N-Boc-1- [5-O- (4,4′-dimetoksitrityyli) -3-O-nosyyli-2-deoksi-β-D-lyxofuranosyl] tymiinin esiaste ja syntetisoitiin GE TracerLab MX Synthesizer kuten aikaisemmin on kuvattu [22]. Kaikki reagenssit ja [18F] FLT kasetit hankittiin ABX (Radeberg, Saksa).

microPET ja microCT Imaging

hiiriin injektoitiin i.v. 9,6 ± 1,7 (keskiarvo ± SD) MBq [18F] FLT. Tunnin kuluttua merkkiaineen injektion hiiret nukutettiin 3% sevofluran (Abbott Scandinavia AB, Solna, Ruotsi) sekoitettuna 35% O

2 N

2 ja kiinnitetty sängyssä toimii kolme perusmerkitsimiä mahdollistaa fuusio PET ja TT kuvia. PET scan hankittiin käyttäen MicroPET Focus 120 (Siemens Medical Solutions, Malvern, PA, USA) ja sen jälkeen microCT scan hankittu Microcat® II -järjestelmän (Siemens Medical Solutions) aikaisemmin kuvatulla [22]. Sen jälkeen tiedonkeruu, PET tietoja järjestetty sinograms ja myöhemmin rekonstruoitu maksimi a posteriori (MAP) rekonstruointialgoritmi. Pikselikoko on 0,866 x 0,866 x 0,796 mm ja keskellä näkökenttä resoluutio 1,4 mm koko leveyteen puoli maksimi.

PET ja microCT kuvia fuusioitiin vuonna Inveon ohjelmisto (Siemens Medical Solutions). Ennen fuusiota alueen etujen (ROI) piirrettiin CT kuvat manuaalisesti laadullinen arviointi kattaa koko kasvaimia ja myöhemmin kasvaimen tilavuus ja merkkiaineen ottoa, arvioidaan standardin otto arvot (SUV) keskiarvo ja maksimi, tuotettiin summattu voxels sisällä tomographic lentokoneita.

kvantitatiivinen reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio (qPCR) B

Yhteensä-RNA eristettiin koepaloja TRI reagent® noudattamalla valmistajan ohjeita (Molecular Research Center Inc., OH, Yhdysvallat ) ja tämän jälkeen RNA eheys mitattiin 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). RNA laatu on todettu RNA eheyden numero (RIN). Pitoisuus RNA määritettiin NanoDrop 1000 (Thermo Fisher Scientific, Wilmington, DE, USA). Kokonais-RNA (0,3 ug) on ​​kääntynyt päinvastaiseksi transkriptoitiin käyttäen Affinityscript ™ QPCR cDNA Synthesis Kit (Stratagene, La Jolla, CA, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Näytteet jäähdytettiin ja säilytettiin -20 ° C: ssa myöhempään käyttöön saakka.

geeniekspressio kvantifioitiin on Mx3000P® reaaliaikainen PCR-järjestelmän Stratagene. Kaikki geenin etujen (GOI-sekvenssiä) ja viite-geenit määrällisesti Brilliant® SYBR® Green QPCR Master Mix (Stratagene). Seuraavat terminen profiili käytettiin kaikissa kokeissa: 10 minuutin denaturaatio 95 ° C, minkä jälkeen 45 sykliä 30 sekunnin denaturaatio 95 ° C: ssa, 1 minuutti annealing 60 ° C: ssa ja 1 minuutin pidennystä 72 ° C: ssa. Dissosiaa- käyrä myöhemmin osti denaturointi tuotteiden 1 minuutin ajan 95 ° C: ssa, jota seuraa vaiheittainen lämpötilan nousu 55 ° C: sta 95 ° C: ssa vaiheessa 0,5 ° C /sykli, jossa kesto kunkin syklin oli 18 sekuntia .

QPCR tiedot analysoitiin Qbase ohjelmassa. Suhteellinen kvantifiointi GOI-sekvenssiä laskettiin käyttämällä useita viite geenejä [27]. Tissue lähtötasosta näytteistä toimi kalibraattori. Taso GOI-sekvenssiä oli normalisoitu geometrinen keskiarvo kolmen viite geenejä. Kolme vakain viittaus geenit löydettiin paneeli 12 ehdokasta, ihmisen viittaus geenin paneeli (TATAA Biocenter AB, Göteborg, Ruotsi) käyttämällä geNorm algoritmin.

Alukkeet suunniteltiin käyttäen Beacon Designer (PREMIER Biosoft, Palo Alto, CA, USA) ja sekvenssit esitetään taulukossa 1. jokaisen geenin optimaalinen alukekonsentraatio todettiin. Kaikki määritykset optimoitu hyötysuhde välillä 95% ja 105%. Kaikki näytteet ajettiin kolmena kappaleena käyttämällä yhtä ui cDNA: ta. Kuhunkin näytteeseen no-käänteistranskriptio ohjaus (nort) oli mukana, ja kullakin levyllä no-mallia ohjaus (NTC) oli mukana.

Tilastollinen analyysi

vertailut kasvaimen tilavuuden välillä hoidon ja kontrolliryhmien laskettiin käyttäen paritonta Studentin t-testiä. Parillista t-testiä käytettiin Konserninsisäisten vertailuja. Bonferroni korjaus P-arvojen monimuuttujille haettiin. Korrelaatioita SUVmean ja SUVmax suhteet ja kasvaimen kasvu laskettiin käyttäen lineaarista regressiota. Laskelmat tehtiin PASW 18,0 (IBM Corporation, Armonk, New York, USA). Tiedot ilmoitetaan keskiarvona ± SEM ja P 0,05 pidettiin tilastollisesti merkittävänä.

Tulokset

Tumor Nide

A2780 kasvaimia, jotka oli käsitelty TP202377 oli määriä päivänä 6, että olivat 161 ± 13% verrattuna lähtötasoon. Vuonna A2780 kontrolliryhmässä volyymien 6. päivä oli 322 ± 38% verrattuna lähtötasoon, jotka olivat huomattavasti korkeammat verrattuna hoitoryhmässä (P 0,001). A2780 /Top216 kasvaimia, jotka oli käsitelty TP202377 oli määriä päivänä 6, jotka olivat 442 ± 65% verrattuna lähtötilanteeseen. A2780 /Top216 kontrolliryhmän määriä päivänä 6 oli 376 ± 59% verrattuna lähtötilanteeseen, joka ei ollut erilainen kuin hoitoryhmässä. SW620 kasvaimia hoidettiin TP202377 oli volyymit Päivä 6, jotka olivat 198 ± 15% lähtötasosta. Vuonna SW620 kontrolliryhmässä määriä päivänä 6 oli 193 ± 9%, joka ei ole erilainen kuin hoidon ryhmässä (kuva 2).

[18F] FLT otto

perustason oton [18F] FLT mitattuna SUVmean oli 1,44 ± 0,06 A2780 kasvaimissa, 0,83 ± 0,02 A2780 /Top216 kasvaimia ja 0,86 ± 0,03 on SW620 kasvaimia. Vuonna A2780 kasvain malli TP202377 hoito aiheutti merkittävää laskua oton [18F] FLT välillä 1,51 ± 0,07 lähtötilanteessa 0,78 ± 0,03 6 tuntia (-46 ± 3%; P 0,001) ja 0,79 ± 0,04 päivänä 1 (- 46 ± 3%; P 0,001) (kuvio 3). Päivänä 6 otto oli 1,67 ± 0,12, joka oli verrattavissa lähtötilanteeseen. Välillä hoito ja kontrolliryhmässä otto oli erilainen 6 tuntia (P 0,001) ja Päivä 1 (P 0,001) (kuvio 4). Hoito TP202377 ei vaikuttanut [18F] FLT SUVmean sisäänottoa resistenttien A2780 /Top216 tai SW620 kasvainmuodoista ja eroa käsitellyissä ja kontrolliryhmissä havaittiin. Kaikissa verrokkiryhmien [18F] FLT SUVmean ei muuttunut kokeen aikana.

perustason oton [18F] FLT mitattuna SUVmax oli 2,58 ± 0,13 A2780 kasvaimissa, 1,24 ± 0,03 A2780 /Top216 kasvaimia ja 1,50 ± 0,04 on SW620 kasvaimia. TP202377 hoito aiheutti merkittävää laskua oton [18F] FLT että A2780 kasvainmallissa mitattuna SUVmax. Hoitoryhmässä otto väheni 2,67 ± 0,17 lähtötilanteessa 1,20 ± 0,05 (-53 ± 3%; P 0,001) 6 tuntia ja 1,19 ± 0,05 (-54 ± 3%; P 0,001) päivänä 1. päivä 6 otto oli palannut perustason tasolle 2,94 ± 0,23. Välillä hoito ja kontrolliryhmässä kertymä oli erilainen 6 tuntia (P 0,001) ja Päivä 1 (P 0,001) (kuva 3).

hoito TP202377 ei vaikuttanut [18F] FLT SUVmax kertymä resistenttien A2780 /Top216 kasvainmuoto kuitenkin otto SUVmax laski 1,50 ± 0,07 lähtötilanteessa 1,36 ± 0,08 6 tuntia (-10 ± 3%, P = 0,02) että SW620 kasvain malli. Vuonna SW620 kontrolliryhmässä oton Päivä 6 1,49 ± 0,04 oli alhaisempi verrattuna perustason ottoa 1,29 ± 0,07 (-14 ± 4%; P = 0,04). Mitään eroa käsitellyissä ja kontrolliryhmissä havaittiin joko A2780 /Top216 tai SW620 kasvaimia (kuvio 3).

väliset korrelaatiot SUVmean tai SUVmax suhteet lähtötilanteesta 6 tuntia ja Päivä 1, vastaavasti, ja tuumorin tilavuus muutoksessa lähtöarvosta 6. päivä laskettiin. Sillä TP202377 käsitelty A2780 ja A2780 /Top216 kasvaimia yhdessä, löysimme merkittävä positiivinen korrelaatio kasvaimen kasvua ja SUVmean 6 tuntia /lähtötilanteessa (r

2 = 0,53; P 0,001), SUVmean Day1 /lähtötilanteessa (r

2 = 0,65; P 0,001), SUVmax 6 tuntia /lähtötilanteessa (r

2 = 0,51; P 0,001) ja SUVmax Day1 /lähtötilanteessa (r

2 = 0,63; P 0,001) (kuvio 5).

Ki67 ja TK1 Gene Expression

puu vakain viittaus geenejä havaittiin olevan peptidylprolyl isomeraasi A (PPIA), ribosomaalinen proteiini P0 (RPLP0) ja TATA sitovan proteiinin (TBP). Taso GOI-sekvenssiä normalisoitiin geometrisen keskiarvon näiden kolmen geenin. Geeni-ilmentymisen tasot on esitetty suhteessa perustasoon. RNA eheyden numerot (RIN-arvot) olivat 8,8 ± 0,9 (keskiarvo ± SD) kaikille näytteille.

Ki67 geenin ilmentyminen oli alempi hoitoryhmässä verrattuna kontrolliryhmään 6 tuntia (0,60 ± 0,02 vs. 1,00 ± 0,04; P 0,001) ja Day 1 (0,35 ± 0,03 vs. 0,97 ± 0,05; P 0,001) hoidon aloittamisen jälkeen on A2780 kasvain ryhmään. 5. päivänä, ilmaus Ki67 hoitoryhmässä oli verrattavissa kontrolliryhmään. Lähtötilanteeseen verrattuna ilmentymisen, Ki67 aleni 6 tuntia (-40 ± 2%; P 0,001) ja Day 1 (-65 ± 3%; P 0,001) A2780 hoitoryhmässä. Expression of Ki67 ei muuttunut joko A2780 /Top216 ja SW620 ryhmissä tai mikä tahansa kontrolliryhmistä.

Expression of TK1 oli muuttumattomana A2780 kasvaimia sekä hoidossa ja kontrolliryhmässä. Kuitenkin A2780 /Top216 kasvaimia havaitsimme pieni lisäys TK1 ilmaisun hoidossa verrattuna kontrolliryhmään 6 tuntia (1,13 ± 0,06 vs. 0,93 ± 0,03; p = 0,04) hoidon aloituksen jälkeen (kuvio 6). 5. päivänä ilmentymistä TK1 oli vähentynyt SW620 kasvain kontrolliryhmään verrattuna lähtötilanteeseen (-27 ± 6%; p = 0,02).

Keskustelu

Tämä tutkimus osoitti ei-invasiivisia eriyttäminen välillä vastaamisen ja ei-vastaamisen kasvaimia 6 tunnin kuluttua hoidon aloittamisesta kanssa syöpälääke TP202377 käyttämällä [18F] FLT PET. Kuusi tuntia injektion jälkeen TP202377 havaitsimme -46% lasku SUVmean arvojen ja -53% lasku SUVmax arvot TP202377 herkkien A2780 kasvain tyyppi. Väheneminen merkkiaineen ottoa edeltää regressioanalyyseissa kasvaimen tilavuuden päivänä 6. Emme havainneet muutoksia SUVmean hoidon jälkeen kahden TP202377 kestävä kasvainmuodoista. Kuitenkin TP202377 kestävä SW620 tuumorin mallissa havaittiin pientä laskua -10% 6 tunnin kuluttua injektion TP202377 kun mitataan SUVmax. 1. päivänä SUVmax oli verrattavissa lähtötilanteesta SW620 kasvaimia. Syy siihen, että totesimme tämän pienen muutoksen SUVmax oton 6 tuntia voisi olla, että tämä kasvain malli ei ole ehdoton vastustuskykyinen TP202377 mutta vain on hyvin alhainen huumeiden herkkyys verrattuna A2780. Kuitenkaan mitään muutoksia kasvaimen tilavuuden lopussa kokeen havaittiin huolimatta pieni väheneminen SUVmax 6 tuntia. Ei ollut mitään merkittävää eroa joko SUVmean tai SUVmax välillä hoitoa ja kontrolliryhmässä 6 tunnin kuluttua hoidon aloituksesta, joten havaittiin edelleen ero vastaa, ja ei-vastaa kasvaimia tänä ajankohtana.

Päivä 6 [18F] FLT otto hoitoryhmässä oli verrattavissa kontrolliryhmään herkällä A2780 kasvaimia, jotka osoittavat, että kasvaimia oli alkanut uudelleen lisääntyä. Olemme arvioineet [18F] FLT vastetta kerta-annoksen TP202377 ja saadakseen pitkän aikavälin hoidon vaikutus lääkkeen on pistää useita kertoja. Mahdollisesti, arviointia kasvainten proliferatiivisen asema [18F] FLT voitaisiin käyttää määritettäessä optimaalisen aikaikkunan kahden lääkeinjektioita.

Muutokset [18F] FLT 6 tuntia ja päivä 1 korreloivat kasvaimen tilavuuden suhde lähtötilanteen /Päivä 6 sen tutkimiseksi, jos se, yksilön kasvain tasolla, oli mahdollista ennustaa kasvaimen vaste. Siellä oli hyvä korrelaatio muuttuu 6 tunnin kuluttua ja Day 1 [18F] FLT merkkiaineen ottoa ja muutoksia kasvaimen tilavuuden päivänä 6. kasvaimia, jotka vähenivät eniten merkkiaineen ottoa välittömästi (6 tuntia ja päivä 1) hoidon alusta oli kasvaimia että myöhemmin oli alhaisimmat kasvaimen tilavuuden. Vastaavasti 6 tunnin kuluttua hoidon aloituksesta pystyimme huomauttaa kasvaimia, jotka vastasivat parhaiten hoitoon. Aikana uusien kemoterapeuttisten lääkkeiden, etenkin aikaisin kliinisessä vaiheessa, tunnistaminen vastata kasvainten on suuri arvo, jotta voidaan ennustaa hoitotulokseen. Useimmat uudet syöpälääkkeen hoidot vaikuttavat erityiset tavoitteet kasvaimissa ja tehdä useimmiten ole vaikutusta ainoastaan ​​potilasalaryhmissä. On myös täsmennettävä vastaamisen potilaalla on [18F] FLT PET varhain hoidon aloitus saattaa alentaa lääkekehityksen ja välttämään tarpeetonta hoito potilailla, joilla hoitoa ei toimi, koska hoito voi pysäyttää ei-vastaamisen potilaille. Myös [18F] FLT PET sallisi voimakkaiden lääkkeiden, jotka ovat tehokkaita vain muutamilla potilailla, jos yhdistetään kuvantaminen vastevalvonta.

taso Ki67 ja TK1 geenin ilmentyminen mitattiin samalla selvittää. Expression of Ki67 samansuuntainen oton [18F] FLT, mikä vahvisti PET tulokset osoittavat, että lasku merkkiaineen sisäänoton johtui todellinen fysiologinen muutos ja ei ole seurausta esim. vähentynyt toimituksen [18F] FLT. Ei muutoksia TK1 geenien ilmentyminen havaittiin. Aiemmassa tutkimuksessa, jossa [18F] FLT ottoa hoidon jälkeen kanssa TP202377 analogisten Top216 analysoitiin, poikkeama [18F] FLT otto ja TK1 ilmentyminen havaittiin sekä [22]. Tuntuu siltä, ​​hoito näitä lääkkeitä, vaikka asiakkuutta merkittävä lasku [18F] FLT ottoa, ei säännellä TK1 geenien ilmentyminen ja lisää tutkimuksia tarvitaan, jotta tietää enemmän vaikutuksesta TK1 on [18F] FLT ottoa hoidon jälkeen kanssa TP202377. Muut tutkimukset ovat vastaavasti ole löytänyt mitään muutoksia mRNA tasoilla TK1 huolimatta muutoksen [18] FLT merkkiaineen ottoa [2] tai vain havaittu viikon korrelaatio [18F] FLT ja TK1 mRNA [28]. Huolimatta TK1 on keskeinen tekijä käyttöönoton [18F] FLT nämä kaksi eivät aina kiinteästi yhteydessä [29], ja muutokset [18F] FLT otto voi johtua muutoksista proteiinien tasot ja toimintaa tai muutoksia ATP-tasot [5 ], [12], [30], [31].

Yksi TP202377-resistenttejä solulinjoja käytettiin tässä tutkimuksessa oli peräisin TP202377 herkkä A2780. SW620 solulinja aiemmin havaittu olevan luonnostaan ​​vastustuskykyisiä TP202377. Käytimme sekä indusoi kestävä ja luonnostaan ​​resistenttejä solulinja, jotta voidaan analysoida, jos ei olisi mitään eroa [18F] FLT hoitovasteesi kahden solulinjoista. Mielenkiintoista on, että [18F] FLT sisäänottoa kunkin TP202377-resistenttejä solulinjoja on pienempi verrattuna TP202377 herkkä A2780. Kuitenkin omaksumista [18F] FLT oli molemmissa solulinjoissa yli taustan tason. Alhainen ottoa [18F] FLT vuonna SW620 on myös raportoitu muut [32].

Monissa tutkimuksissa vaikutus monia erilaisia ​​kemoterapian oton [18F] FLT on tutkittu [1] – [10]. Kuitenkin vain harvat tutkimukset ovat testanneet sekä herkkiä ja resistenttejä kasvaimia. Eräässä tutkimuksessa analysoitiin [18F] FLT sisäänottoa sekä setuksimabia herkkä ja setuksimabin kestävä solulinja seuraavat setuksimabihoidon; kuitenkaan mitään muutoksia FLT oton havaittiin joko solulinjoista [20]. Toisessa tutkimuksessa havaittiin ilman havaittavaa vaikutusta trastutsumabin hoidon kasvaimen ottoa [18F] FLT kohortin sekä vastaamisen ja ei-vastaamisen kasvaimia [21].

Yhteenvetona löysimme -53% lasku [ ,,,0],18F] FLT SUVmax otto 6 tunnin kuluttua hoidon aloituksesta on TP202377 herkkien A2780 kasvain malli. Vuonna TP202377 vastustuskykyisten kasvainmuodoista emme nähneet mitään kliinisesti merkittäviä muutoksia [18F] FLT ottoa hoidon jälkeen. Tuumorin kasvun inhibitio, kun TP202377 hoidon havaittiin vastaa A2780 tuumorin malli, mutta ei kahden ei-vastaa kasvaimen malleja. Tämä tutkimus osoitti, että erot [18F] FLT otto 6 tuntia hoidon jälkeen aloittaa uuden kasvaimen vastaisen yhdisteen voisi erottaa vastaaminen ei-vastaamasta kasvaimet ennen heikentämään kasvaimen koon havaittiin. Uskomme, että tämä käsite pitää suuria lupauksia sekä lääkekehityksen ja räätälöintiä syövän hoidossa.