Krooninen sairaus

tiivistelmä

Kiertävä verihiutaleet ovat runsaat lähteitä angiogeneesin molekyylejä kasvaimen verisuoniston vaikuttaa kasvaimen kasvua ja etäpesäkkeiden. Suhde ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) ja sisäisen verihiutaleiden määriä VEGF, TSP-1 ja net verihiutaleiden angiogeeninen aktiivisuus (NPAA) on epäselvä. Tutkimuksen tavoitteena oli tutkia paremmin ymmärtää rooli näiden tekijöiden etenemistä NSCLC syövän ja arvioida sen kliinistä merkitystä. Verihiutaleiden VEGF ja TSP-1 ja NPAA mitattiin ennen leikkausta 68 potilasta NSCLC ELISA tai Kapillaariputkitermostaatti muodostumista määrityksessä. VEGF, TSP-1 ja NPAA jakaumat syöpäpotilailla ja terveillä vapaaehtoisilla verrattiin käyttämällä Mann-Whitney

U

testi. Kaplan-Meier menetelmällä, yhden ja usean regressioanalyysiä käytettiin analysoimaan korrelaatio näiden tekijöiden ja kliinis-, kokonaiselossaoloaika ja taudista vapaan eloonjäämisen. Mean sisäisen verihiutaleiden TSP-1 taso oli hieman korkeampi potilailla kuin terveillä henkilöillä (p = 0,092). Sisäinen verihiutaleiden TSP-1-tasot olivat merkitsevästi suurempi potilailla, joilla osallistuminen yli T2 tai vaiheen III, verrattuna muihin potilaisiin. Mean sisäisen verihiutaleiden VEGF taso oli 40,8 pg /10

6 potilailla verrattuna 21,9 ng /10

6 terveillä henkilöillä (p = 0,041). Mediaaniarvo Ohjelmassa potilailla oli merkitsevästi korkeampi kuin terveillä verrokeilla (p 0,001). Potilaat, joilla on korkea Ohjelmassa ovat todennäköisesti näytteille aggressiivista kliinistä patologisia piirteitä. Ohjelmassa on suurempi kuin mediaani liittyvät huonoon ennusteeseen. Kohonnut Ohjelmassa on parempi korrelaatio kasvaimen mikroverisuonitiheys (MVD) kuin verihiutaleista johdettu VEGF. Kuuluvilla alueilla vastaanottimen toiminta-käyrän (AUROC) on Ohjelmassa oli suurempi kuin verihiutaleista peräisin VEGF eri ryhmissä. Monimuuttuja-analyysissä ilmeni, että Ohjelmassa ovat riippumattomia ennustavat tekijät. Nämä tulokset osoittivat, että Ohjelmassa voi olla kliinisesti käyttökelpoinen indikaattori ja ennustavia arvioinnin pienisoluista keuhkosyöpää.

Citation: Yao L, Dong H, Luo Y, Du J, Hu W (2014) Net Verihiutaleiden angiogeenisen Activity ( NPAA) korreloi Progression ja prognoosi ei-pienisoluinen keuhkosyöpä. PLoS ONE 9 (4): e96206. doi: 10,1371 /journal.pone.0096206

Editor: Rossella Rota, Ospedale Pediatrico Bambino Gesu ”, Italia

vastaanotettu: 20 tammikuu 2014; Hyväksytty: 03 huhtikuu 2014; Julkaistu: 30 huhtikuu 2014

Copyright: © 2014 Yao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Educational komission Anhui Kiina (Grant KJ2011A163), Natural Science Foundation of Anhui Kiina (Grant 11040606M208), ja Natural Science Foundation of China (Grant 30672437). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Keuhkosyöpä on yksi yleisimmistä pahanlaatuisia kasvaimia maailmanlaajuisesti, jossa on jatkuvasti yhä useammin, erityisesti Kiinassa. Se sijoittuu ensimmäinen johtava syy syövän kuoleman miehillä Kiinassa [1], [2]. Edistysaskelista huolimatta kemoterapiaa, ennuste keuhkosyöpäpotilaita edelleen heikko, 5-vuoden suhteellinen eloonjääminen alle 14% miehillä ja alle 18% naisten keskuudessa useimmissa maissa [3]. Täten kyky ennustaa yksilön prognoosi olisi kriittinen ohjaa kirurgista ja kemoterapian. Angiogeneesi, tai newblood aluksen muodostumista, joka on välttämätön vaihe kasvaimen kasvun ja etäpesäkkeiden, säätelee tasapaino pro-angiogeenisten tekijöiden, kuten VEGF ja bFGF, ja anti-angiogeenisten tekijöiden, kuten endostatiini ja TSP-1. Verihiutaleet ovat jo pitkään tiedetty olevan ensisijainen välittäjiä tromboosin ja hemostasis. Viime aikoina, niiden on todettu olevan monia angiogeneesin promoottorit ja angiogeneesi-inhibiittorit, on yksi suurimmista yksittäisistä lähteistä angiogeenisten tekijöiden in vivo [4]. VEGF: n ilmentyminen on havaittu olevan suuri eri pahanlaatuisia kasvaimia, ja seerumin VEGF tasot korreloivat taudin vaiheen ja ennusteeseen rinta- syöpä, peräsuolen syöpä ja eturauhassyöpä [5], [6]. On raportoitu, että korkeat VEGF immunoreaktiivisuus kasvainkudoksissa liittyy ennusteen pienisoluista keuhkosyöpää [7], [8]. Trombospondiini-1 (TSP-1) oli ensimmäinen endogeeninen angiogeneesin estäjä voidaan tunnistaa [9], [10]. Tämä 450-kDa glykoproteiini on tuottaa ja erittää useita kasvainsolujen ja asuvat kasvain strooman. Ekspressio TSP-1 ihmisen kasvaimissa moduloidaan onkogeenien ja microenvironmental tekijöitä ja useita erilaisia ​​ihmisen kasvaimissa TSP-1 on läsnä sekä strooman ja kasvainsoluissa [11]. Lisäksi kohonneet verenkierrossa TSP-1 on yhdistetty sairauden etenemisen ja kehittynyt kliinisiä vaiheissa taudin [12], [13]. Vaikkakin seerumin VEGF ja TSP-1 ovat eniten tutkittu pro- ja antiangiogeenisten tekijät, vastaavasti, ja erittäin koholla angiogeneesiin liittyvien sairauksien, koskevat tutkimukset verihiutaleperäisten VEGF ja TSP-1 vähäisyyden keuhkosyöpäpotilaita. Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että sen lisäksi vapauttaa jo olemassa olevia yhdisteitä, verihiutaleet voidaan syntetisoida uusia stimuloitaessa koska suuri määrä lähetti-RNA: n [14]. Tämä seikka osoittaa, että verihiutaleet voivat olla aiemmin tuntemattomia sääntelyvaltaa verisuonten vastauksia. Tässä olemme tutkineet VEGF ja TSP-1, mutta myös net verihiutaleiden angiogeeninen aktiivisuus (NPAA) on verihiutaleiden keuhkosyöpään potilailla verrattuna terveisiin kontrolleihin. Arvioida NPAA, testasimme in vitro vaikutus verihiutaleiden lysaatit potilailla, joilla on keuhkosyöpä muodostumista ihmisen napanuoran endoteelisoluja (HUVEC: t) kapillaari-rakenteita.

Materiaalit ja menetelmät

Solun eristämistä ja viljelyä

Ihmisen napanuoran endoteelisolut (HUVEC) saatiin napanuorasta myöntää paikallinen Naistentautien. Kirjallinen suostumus saatiin luovuttajien, ja hyväksyi tutkimuksen eettisen komitean Anhui Medical University. Eristäminen ja viljely suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [15]. Soluja kasvatettiin RPMI FBS: ää (10%), L-glutamiinia (2 mM), streptomysiiniä (100 ug /ml) ja penisilliiniä (100 U /ml) 37 ° C: ssa kosteutetussa 5% CO

2 yrityshautomo.

Kapillaariputkitermostaatti muodostumisen määritys

putken muodostumiseen määritys suoritettiin valmistajan ohjeiden (Chemicon International, Hampshire, UK) pienin muutoksin. Endoteelisoluja (1 x 10

4) ympättiin kasvutekijän vähennetty Matrigel päällystetyillä levyillä (Becton Dickinson Biosciences, Bedford, MA, USA) ja altistettiin verihiutaleiden lysaatit 18 tuntia. Tubule muodostus tutkittiin alle käänteisvalomikroskoopilla ja haarautumiskohtien lukumäärä neljässä ei-päällekkäisiä kenttiä mitattiin. Valokuvia kaikkien kuoppien otettiin käyttäen käänteisvalomikroskoopilla. Kokeet suoritettiin kolmena rinnakkaisena, ja vaihtelu oli alle 10%. Arvioida testin toistettavuus, kapillaariputki muodostuminen (CTF) HUVEC toistettiin 3 kertaa läsnä ollessa 9 valittujen potilaiden verihiutaleiden (3 stimuloiva vaikutus, 3 stimuloiva vaikutus alueella terveen luovuttajan verihiutaleiden ja 3 estävä aktiivisuus) . Kaikissa toistojen valittu verihiutaleet säilyttivät alkuperäisen aktiivisuuden. Inhiboimaan valittujen verihiutaleita, ne preimcubated kanssa 5 ng /ml VEGF: ää monoklonaalinen vasta-aine (Sigma) tai 200 ug /ml TSP-vasta-ainetta (Sigma).

Potilaat ja näytteet

Kuusikymmentä kahdeksan histologisesti tai sytologisesti vahvistettu NSCLC sairaalassamme välillä syyskuu 2006 ja heinäkuussa 2007 otettiin mukaan tutkimukseen. 68 potilasta kuului 46 miestä ja 22 naista (ikä 61 ± 12,8 vuotta [keskiarvo ± SD]). Vertailuryhmä koostui 68 terveiden luovuttajien ilmoittautunut päässä Veripalvelun yksikkö samassa sairaalassa samana aikana. Sekä terveiden luovuttajien ja potilaiden ei ollut aiempi pahanlaatuinen sairaus. Kliininen-patologinen ominaisuudet potilaiden on raportoitu. Histologinen luokitus kasvainten perustui Maailman terveysjärjestön kriteerien [16]. Histologisesti, 37 kasvaimet olivat adenokarsinooma, 28 oli okasolusyöpä, ja kolme oli suuri solu syöpä. Etäpesäke imusolmukkeisiin oli N0 + N1 49 potilaalla, N2 + N3 19. Leikkauksen jälkeinen taudin vaiheessa oli vaiheen I + II vaihe 38 potilaalla, vaiheen III + vaihe IV 30. parafinoidut formaliinikiinnitetyt kirurgisista näytteistä kerättiin immunohistokemiallista värjäystä varten kasvaimensisäistä mikroverisuoniendoteelisoluja. Histopatologisen läsnä arkistoidut jäädytettyjen kudoksissa varmistettiin patologi olevan samankaltainen, että parafinoidut kudoksiin. Elinaika potilaiden laskettiin alkaen toiminnan kuolinpäivä. Seuranta-aikana kesti 60 kuukautta. Ääreisveren näytteitä potilaista NSCLC vedettiin 1 viikon kuluessa ennen leikkausta tai kemoterapiaa. Kaikki verinäytteistä potilaiden ja verrokkien otettiin varhain aamulla, kautta paaston jälkeen ja lepoaika vähintään 30 minuutin ajan. Näytteet käsiteltiin standardimenetelmien mukaisesti. Kirjallinen suostumus saatiin kaikille osallistujille, ja tutkimus protokollat ​​ovat hyväksyneet eettisen komitean Anhui Medical University.

valmistaminen ihmisen verihiutaleiden

Standard ”blue top” antikoagulaatiohoito näytteet kerättiin kunkin yksittäisen, ja käsitellään yhtenäisiä menetelmiä verihiutaleiden keräämisen 1-2 h keräämisen. Lyhyesti, verinäyte (noin 4 ml), vedettiin laskimopistolla alipaine putkeen, joka sisälsi 105 mM sitraattia (pH 5), veren hyytymistä estävä suhteessa 1:09 (tilavuus /tilavuus), puskuri verta. Putkia sekoitettiin varovasti ja pidetty hidas rokkari ympäristön lämpötilassa (20-28 ° C) odottaessaan käsittely. Verihiutaleiden rikas plasma saadaan sitraattiplasmassa sentrifugoimalla (1000 rpm, 10 minuuttia) 1 tunnin kuluessa keräys, tilavuuden kirjataan ja solumäärän suoritettu. Verihiutalerikas plasma sentrifugoidaan sitten, kun läsnä on PGI2 (75 nM) nopeudella 2000 rpm 20 minuuttia, jolloin saatiin verihiutaleiden pelletti, joka sitten pestiin kaksi kertaa fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS) ja suspendoitiin uudelleen varovasti PBS: ssä, jolloin saatiin pitoisuus on 2 × 10

8 verihiutaletta /ml. yksi ml tätä verihiutaleiden suspensiota sekoitetaan 1 ml 0,1% Triton X-100 (Sigma), 37 ° C: ssa 20 minuutin ajan. Tämä tehokkaasti liuottaa kaikki verihiutaleita. Tämä verihiutaleiden lysaatti sitten säilytettiin -80 ° C: ssa ennen analyysiä ELISA: lla.

Mittaukset VEGF ja TSP-1

Kaikki näytteet testattiin samassa laboratoriossa, samassa aikataulussa (2 viikkoa). Syöpä ja kontrolliryhmän näytteiden satunnaistettiin ennen testausta kokeiden välttämiseksi bias. Verihiutaleiden pitoisuudet määritettiin käyttämällä kvantitatiivista ELISA sarjat (Quantikine Immunoanalyysit; R 5% ja määritysten välinen CV 10%. Alarajat havaitsemisen kunkin määrityksessä ovat 10 pg (VEGF) ja 5 ng (TSP-1). Kaikki testit suoritettiin valmistajan ohjeiden mukaisesti. Kaikki kokeet tehtiin vähintään kahtena kappaleena on sopivasti laimennettua näytettä.

mikroverisuonitiheys (MVD) B

mikrosuonten värjättiin käyttämällä hiiren polyklonaalista anti-CD34-vasta-ainetta (1:20 laimennus) (Novocastra, Newcastle, UK) ensisijaisena vasta-, jossa sitoutuminen visualisoitu kautta avidiini- biotiini-peroksidaasi-kompleksin menetelmällä. Jokainen red-värjäys endoteelisolujen klusteri, joka on selvästi erillään viereisen pienten verisuonten, kasvaimen soluihin, ja muun sidekudoksen elementtejä pidettiin yhtenä, laskettavissa pienten suonten. Aluksen lumenia eivät olleet välttämättömiä rakennetta voidaan määritellä pienten suonten. Valitsimme kolme verisuonten kuormittajat sekä kasvaimen ja peritumorally laskemiseksi CD34 pienten verisuonten.

Tilastollinen analyysi

Tilastolliset analyysit tehtiin SPSS 11.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL) ohjelmistoja. Tiedot testattiin normaaliuden ja niiden havaittiin olevan ei-normaalisti jakautunut. VEGF, TSP-1 ja NPAA jakaumat syöpäpotilailla ja terveillä vapaaehtoisilla verrattiin käyttämällä Mann-Whitney

U

testi. Korrelaatiot arvioitiin kanssa Spearmanin-sum test. Herkkyys ja spesifisyys Ohjelmassa määritettiin vastaanotin toimii (ROC) käyriä, ja alueet käyrän alla laskettiin [17]. Survival käyrät saatiin Kaplan-Meier menetelmällä ja Coxin suhteellisten riskien mallia käytettiin tunnistamaan tekijöitä, jotka itsenäisesti liittyvät selviytymistä. Tulokset on esitetty mediaaniarvoina, jossa kvartiiliväliä. Merkitys otaksuttiin at p-arvot alle 0,05.

Tulokset

Ohjelmassa, verihiutaleista peräisin VEGF ja TSP-1 tasot keuhkosyöpäpotilaita ja terveillä verrokeilla

NPAA , verihiutaleperäisen VEGF ja TSP-1 tasot olivat havaittavissa kaikissa terveillä verrokeilla. Heidän mediaaniarvot Ohjelmassa, verihiutaleperäisten VEGF ja TSP-1-tasot olivat 65,4 no. haaroittumiskohtien /10

6, 21,9 pg /10

6 ja 8,5 ng /10

6, vastaavasti. Mediaaniarvo Ohjelmassa ja VEGF keuhkosyöpää potilaat olivat 156,2 no. haaroittumiskohtien /10

6 (vaihteluväli 66,4-250,2) ja 40,8 pg /10

6 (vaihteluväli, +15,85-+85,9), ja huomattavasti suurempi kuin terveillä verrokeilla (P 0,001 ja P = 0,041, vastaavasti ; Pöytä 1). Ei ollut mitään merkittävää eroa verihiutalekasvutekijäryhmän TSP-1: n välillä keuhkosyöpäpotilaita ja terveiden kontrollien (P = 0,092; taulukko 1).

väliset Ohjelmassa, verihiutaleista peräisin VEGF tai TSP- 1 tasot ja kliinisiä patologisia profiilit

arvioimiseksi yhdistys NPAA, verihiutaleperäisten VEGF tai TSP-1 tuumoribiologiassa, vertailuja kliinisiä patologisia ominaisuuksia Ohjelmassa, verihiutaleista peräisin VEGF tai TSP-1 tehtiin . Kuten odotettua, potilailla, joilla on korkea Ohjelmassa olivat todennäköisesti näytteille aggressiivista kliinistä patologisia piirteitä: korkea Ohjelmassa korreloi merkitsevästi huono kasvain eriyttäminen (P = 0,004), patologinen vaiheessa (P 0,001), patologisen T-kerroin (P 0,001) ja patologista N-kerroin (P 0,001), kun taas korkea verihiutaleperäisen VEGF korreloi merkitsevästi huono kasvaimen erilaistumiseen (P 0,001) ja patologisen vaiheessa (P 0,001) (taulukko 2). Tasot verihiutaleperäisten TSP oli suurempi potilailla patologisissa vaiheen III + IV ja patologinen T-tekijä T2-4 kuin potilailla patologisissa vaiheen I + II (P = 0,002) ja patologisen T-tekijä T1 (P = 0,008) , vastaavasti (taulukko 2). Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että mediaaniarvot Ohjelmassa ja VEGF keuhkosyöpäpotilaita ovat huomattavasti korkeampi kuin terveillä verrokeilla. Sen sijaan, TSP-1 ei ollut kohonnut, että syöpäpotilailla verrattuna kontrollinäytteestä. Potilaat, joilla on korkea Ohjelmassa olivat todennäköisesti näytteille aggressiivista kliinistä patologisia piirteitä.

Vastaanotin-toiminta käyrää (ROC) analyysi VEGF ja NPAA havaitsemisessa keuhkosyövän

Kuva 1 osoitti että ala-vastaanotin-toiminta käyrää (AUROC) on NPAA erottamiselle keuhkosyöpään terveystarkastuksia oli 0,892 (95% CI, 0,874-,961), joka oli suurempi kuin 0,823 (95% CI, +0,786-+0,941) VEGF. (P 0,0001).

(A, B) ROC-analyysi keuhkosyöpäpotilaita ja terveiden kontrollien, ja terveillä verrokeilla negatiivisena ryhmä ja potilailla, joilla on keuhkosyöpä positiivisena ryhmä. Ohjelmassa oli paras ennakoiva diagnostinen tarkkuus (AUC = 0,893, P 0,0001). AUROC: ala-vastaanotin-toiminta käyrää.

väliset korrelaatiot Ohjelmassa, verihiutaleista peräisin VEGF tai TSP-1 tasot ja potilaiden eloonjäämiseen tai tautivapaan elinajan

Univariate Coxin regressioanalyysiä oli alueellisesti imusolmuke, patologisen vaiheessa Ohjelmassa, ja verihiutaleista peräisin VEGF-tasojen merkittäviä tekijöitä, jotka vaikuttavat eloonjäämiseen (taulukko 3). Log-rank analyysi osoitti, että kohonnut Ohjelmassa suurempi kuin mediaani oli liittyy huono taudista vapaan ajan ja huono kokonaiselinaikaa (P = 0,012, P = 0,002; Kuva. 2), kun taas verihiutaleperäisen VEGF ja TSP-1 ei näytä tätä -alueella. Kun kyseessä on monimuuttuja-analyysin histologista erilaistumiseen, T tekijä, alueellisen imusolmuke, patologisen vaiheessa Ohjelmassa, verihiutaleista peräisin oleva VEGF: n ja TSP-1, ainoa alueellisen imusolmuke, patologisen vaiheessa ja Ohjelmassa olivat edelleen eloonjäämiseen jossain määrin ( taulukko 3). Sen sijaan alueellinen imusolmuke, patologisen vaiheessa Ohjelmassa olivat merkittäviä tekijöitä tautivapaan elinajan (taulukko 4).

Tautivapaa elinaika (A) ja Kokonaiselossaoloaika (B) matala Ohjelmassa ja korkea NPAA potilaiden . P-arvot määritettiin log-rank-testi.

väliset Ohjelmassa tai Verihiutalekasvutekijät VEGF ja kasvaimen MVD potilailla

oli merkitsevä korrelaatio välillä NPAA tai verihiutaleista peräisin VEGF ja kasvaimen MVD syöpäpotilailla (r = 0,78, P 0,001, r = 0,521, P 0,01; Kuvio. 3A, B). Ohjelmassa on parempi korrelaatio kasvain MVD kuin verihiutaleperäiset VEGF. Nämä tulokset viittaavat siihen, että Ohjelmassa tai verihiutaleista peräisin VEGF voi edistää tuumorin angiogeneesiä. MVD NSCLC kudoksessa ja normaalissa kudoksessa määritettiin CD34 immunohistokemiallisella värjäyksellä (kuvio. 3C, D).

(A) Hyvä korrelaatio MVD ja NPAA 68 pienisoluista keuhkosyöpää (r = 0,78; P 0,001). (B) merkittävä korrelaatio kasvaimen MVD ja verihiutaleista peräisin VEGF-tasot (r = 0,521, P 0,01). (C) MVD NSCLC kudoksen ja (D) normaalia kudosta määritettiin CD34 immunohistokemiallisella värjäyksellä. Arrow, positiivinen tahra MVD.

stimulointi kapillaariputken muodostumisen (CTF) verihiutaleiden sytokiinit

arvioimiseksi net verihiutaleiden angiogeeninen aktiivisuus (NPAA), testasimme in vitro vaikutusta verihiutaleiden lysaatit sairastavilla potilailla keuhkosyöpä ja terve valvontaa CTF HUVEC: ien. Ohjelmassa oli merkitsevästi suurempi potilailla kuin terveillä verrokeilla (P 0,001, taulukko 1, kuvio. 4A, B).

edustaja valokuvia putken muodostumisen määrityksen jälkeen 18-inkubaation verihiutaleita julkaissut sytokiinien näkyvät paneeleissa A (potilaiden verihiutaleiden julkaissut sytokiinien lisätty) ja B (terveillä verrokeilla verihiutaleita julkaissut sytokiinien lisätty). Esi-inkubointi verihiutaleiden lysaatit IgG-ohjattu (C) ja antiTSP-1-vasta-ainetta (D). Tilastollinen analyysi (E). Baarit ovat keskiarvoja ± SD 4 kokeiluja. *

P

0,05 ohjaus versus hoito.

rooli VEGF tai TSP-1 Verihiutaleiden Lysaatit potilasfoorumia NSCLC vuonna Ohjelmassa

esi-inkubointi high-VEGF verihiutaleiden lysaatit vasta-aineilla VEGF johti huomattavaan vähenemiseen ( 48%) kun CTF HUVEC, kun taas vain vähäistä estämistä ( 16%) tai ei lainkaan inhibitiota CTF HUVEC havaittiin, kun stimuloivan verihiutaleita lysaatit alhainen VEGF tasot esi-inkuboitiin anti-VEGF-vasta-aineita. Esi-inkubointi Näiden estävän verihiutaleiden lysaatit syöpäpotilaista paljasti kohonneita TSP-1 molemmissa tapauksissa vasta-aineita TSP-l (200 ug /ml) johti kasvuun CTF HUVEC verrattuna nämä estävän verihiutaleiden lysaatit esi-inkuboitu IgG-ohjaus (5 ug /ml) (

P

0,05, n = 3) (kuvio 4 C, D, E). Nämä havainnot osoittavat, että intraplatelet TSP-l vaikuttaa yleiseen antiangiogeenistä vaikutus laukaisee verihiutaleiden lysaatit.

Keskustelu

tuumoriangiogeneesissa tutkimukset ovat myös osoittaneet, että verenkierrossa verihiutaleet ovat runsaat lähteitä angiogeneesiä molekyylejä kasvaimen verisuoniston, ja että kasvainsolut aikaan verihiutaleiden aktivoitumista ja aggregaatiota vapautumista verihiutaleita aktivoivaa tekijää, jolloin vapauttamaan α-rakeita ja niiden sisältöä, mikä puolestaan ​​vaikuttaa suoraan kasvaimen kasvua ja etäpesäkkeiden [18] – [ ,,,0],21]. Kohonnut verihiutalemäärä on yhteydessä huonoon ennusteeseen keuhkosyöpää ja mahasyövän, mikä viittaa siihen, että prokoagulanttitila ja verihiutaleiden aktivaatio voi edistää varhaista syövän kehitykseen [22], [23]. On raportoitu, että VEGF verihiutaleiden ovat koholla ja ovat riippumattomia ennustajia kolorektaalisyöpää [24]. Koska angiogeneesi säätelee tasapaino inhibiittorit ja aktivaattorit, yksi Tutkimuksen tarkoituksena oli arvioida TSP-1 (estäjä) /VEGF (aktivaattori) tasapainon verihiutaleita. On kuitenkin muistettava, että kasvaimen angiogeneesiä säännellään paitsi VEGF ja TSP-1 tasot, mutta myös useat tunnistettu ja tunnistamattomia aktivaattoreita ja inhibiittorit, jotka voivat vaikuttaa netto angiogeenisten tasapaino [25], joten toinen Tutkimuksen tarkoituksena oli arvioida NPAA.

tässä tutkimuksessa tutkimme taso verihiutaleiden VEGF ja NPAA verihiutaleiden lysaateissa 68 potilasta NSCLC. Huomasimme, että mediaaniarvot Ohjelmassa ja VEGF keuhkosyöpäpotilaita ovat huomattavasti korkeampi kuin terveillä verrokeilla. Tutkimuksemme osoittivat lisäksi, että potilailla, joilla on korkea Ohjelmassa ovat todennäköisesti näytteille aggressiivista kliinistä patologisia ominaisuuksia ja että Ohjelmassa on suurempi kuin mediaani liittyvät huonoon ennusteeseen. Kohonnut Ohjelmassa on parempi korrelaatio kasvain MVD kuin verihiutaleperäiset VEGF. Vaikka kohonnut verihiutalemäärä on havaittu joidenkin syöpien, emme noudata mitään merkittäviä eroja verihiutalemäärä välillä terveiden verrokkien ja potilaiden väestömme (tuloksia ei ole esitetty).

mitattu TSP-1 tasot verihiutaleiden lysaatit NSCLC ja löysi ei-merkitsevää nousua TSP-1 tasot. Kuitenkin tasot verihiutalekasvutekijäryhmän TSP-1 oli suurempi potilailla patologisissa vaiheen III + IV ja patologinen T-tekijä T2-4 kuin potilailla patologisissa vaiheen I + II ja patologinen T-tekijä T1. On kaksi mahdollista selitystä tähän havaintoon. Ensinnäkin, aggressiivinen kasvaimet voivat tuottaa enemmän TSP-1 kuin ei-aggressiivinen kasvain. Toiseksi TSP-1 tasoja voidaan suoraan korreloida kokonaistilavuudesta taudin ja tutkimuspotilaat aggressiivisten kasvaimia oli yleensä korkeampi kasvaintaakkaa. Arvioimme verihiutaleiden lysaatit syöpäpotilaista ja terveen luovuttajan niiden kykyä lisätä tai vähentää CTF HUVEC yksinkertaisena ja toistettavissa

in vitro

lähestymistapa, saada tietoa NPAA. Todellakin, kaikki Verihiutalenäytteisiin kanssa suuria määriä VEGF indusoi CTF, luultavasti siksi läsnäolosta antiangiogeeniset molekyylejä. Toisaalta kaikki stimuloivan verihiutaleita osoittivat suuria määriä VEGF, mikä osoittaa, että muut tekijät kuin VEGF mukana. Kun taas testejä tunnistamaan positiivinen ja negatiivinen sääntelyviranomaisten angiogemesis ovat hankalia, meidän in vitro mitata NPAA syöpäpotilaan HUVEC CTF tarjoaa yksinkertaisen väylä toiminnallisia tietoja nettotasapaino angiogeenisten ja anti-angiogeenisten tekijöiden. Tällaiset tiedot voivat olla arvokkaita ennustetta syövän ja seurannassa kasvaimen vaste syöpähoidon.

Jotta voitaisiin edelleen arvioida kliinistä arvoa Ohjelmassa määrittelimme, ja verrattiin diagnostinen hyödyllisyyttä Ohjelmassa ja verihiutaleiden johdettuja VEGF syövän ja terve kontrolliryhmiin. Ohjelmassa tasoa erottaa keuhkosyöpäpotilaita normaaleista yksilöiden erittäin luotettavasti. Ohjelmassa oli huomattavasti parempi ennustaja keuhkosyöpään kuin verihiutaleperäisen VEGF tässä tutkittua populaatiota. Survival analyysi keuhkosyöpäpotilaita arvioitiin tässä tutkimuksessa perustuu tasoilla NPAA. Tutkimuksessamme eloonjäämisaste potilaiden, joilla on korkea Ohjelmassa oli huomattavasti pienempi kuin potilailla, joilla on alhainen NPAA. Huomattavaa on, että ennen leikkausta tasot verihiutaleperäisen VEGF näillä potilailla ei korreloinut Huonon lopputuloksen (tuloksia ei ole esitetty) .Voit Tietääksemme tämä on ensimmäinen raportti koskee NPAA NSCLC.

On olemassa useita mekanismeja, jossa eri angiogeneesi säätelyproteiineihin voisi tulla lisääntynyt verihiutaleiden syöpäpotilaita. Ensinnäkin, verihiutaleet voisi suoraan hankkia tekijä kasvain kautta endosytoosin. Toiseksi, kasvaimen voisi edistää megakaryosyyttien upregulate synteesi angiogeneesin säätelyproteiini. Kolmanneksi, koska verihiutaleet sisältävät mRNA: t ja translaatiokoneistolla, verihiutaleet voitaisiin stimuloida syntetisoimaan angiogeneesi säätelijäproteiinia [24].

Yhteenvetona tämän tutkimuksen tulokset osoittivat, että vaikka Ohjelmassa, verihiutaleista peräisin VEGF ja TSP- 1 tasot olivat korkeampia pienisoluista keuhkosyöpää ennen leikkausta kuin terveillä verrokeilla, vain molemmat Ohjelmassa ja verihiutaleista peräisin VEGF tasot havaittiin tilastollisesti merkittävä ero näiden kahden ryhmän välillä. Se osoitti myös, että Ohjelmassa suurempi kuin mediaani olivat yhteydessä huonoon ennusteeseen. Vaikka verihiutaleperäisen TSP-1 tason ei näytä olevan markkeri NSCLC, Ohjelmassa voi olla enemmän arvoa kuin verihiutaleperäisen VEGF diagnostisen ja ennusteen ei-pienisoluinen keuhkosyöpä.