Krooninen sairaus

tiivistelmä

tavoite

Useimmat kohdun limakalvon syövät havaitaan varhaisessa vaiheessa ja on hyvä ennuste, kun taas jotkut kohdun limakalvon syöpä on erittäin invasiivisia, metastasize aikaisin, ja vastata suboptimally terapiaan. Nykyisin sopiva malli järjestelmien tutkia aggressiivinen luonne kasvainten puuttuvat. Tavoitteena Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli luoda hiiri ksenograftimallia kohdun limakalvon kasvaimia peräisin potilaita, jotta voidaan tutkia biologisten aggressiivinen ominaisuuksia että taustalla invaasio ja metastaasi.

Methods

Kohdun limakalvon kasvain kudosfragmenttien ( 1,5 mm x 1,5 mm) potilailla, joille tehdään leikkaus, istutettiin alle munuaiskapselin NOD

scid

gamma-hiirissä. Sen jälkeen 6-8 viikkoa, kasvaimet irrotettiin ja sarjoittain istutetaan ylimääräistä hiirille leviämistä. Immunohistokemiallinen analyysi kasvainten tehtiin eri kasvaimen merkkiaineita.

Tulokset

Neljä tapausta eri alatyyppien kohdun limakalvon syöpä kasvatettiin ja kasvatettiin hiirissä. Kolme neljästä kasvain tapauksissa tunkeutunut osaksi munuaisten ja viereisiin elimiin. Vaikka kaikki kasvaimet osoittivat vähäistä tai ei värjäytymistä estrogeenireseptori α, progesteroni reseptorin värjäytyminen havaittiin kasvain köynnöksen. Lisäksi tasot ja lokalisaation E-kadheriinin, sytokeratiini ja vimentiinistä vaihdella riippuen alatyyppi. Lopuksi kaikki tuumoriksenografteja värjättiin positiivisesti urokinaasi plasminogeeniaktivaattorin taas 3 tuumoriksenografteja, joka osoitti invasiivisia ominaisuuksia, värjättiin positiivisesti urokinaasi plasminogeeniaktivaattorin reseptorin.

Johtopäätös

Kohdun limakalvon kasvaimia istuttaa alle munuaisten kapseli näytteille kasvu, invaasio ja paikallinen leviäminen. Nämä kasvaimet voidaan lisätä ja käyttää tutkimaan aggressiivinen kohdun limakalvon syöpä.

Citation: Unno K, Ono M, Winder AD, Maniar KP, Paintal AS, Yu Y, et al. (2014) perustaminen Ihmisen potilaasta peräisin endometriumsyöpään ksenoqraftit NOD

scid

Gamma Hiiret for Study of eteneminen ja metastaasit. PLoS ONE 9 (12): e116064. doi: 10,1371 /journal.pone.0116064

Editor: Eric Asselin, University of Quebec Trois-Rivieres, Kanada

vastaanotettu: 10. heinäkuuta 2014; Hyväksytty: 01 joulukuu 2014; Julkaistu: 26 joulukuu 2014

Copyright: © 2014 Unno et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoittajat: National Cancer Institute RO1CA155513. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

kohdun limakalvon syöpä on neljänneksi yleisin pahanlaatuinen kasvain naisten keskuudessa Yhdysvalloissa, jossa on noin 49500 uutta tapausta ja 8200 kuolemantapausta vuonna 2013 [1]. On olemassa kahden tyyppisiä kohdun limakalvon syöpien luokitella tyypin I ja tyypin II, riippuen siitä, histologisia ja kliinisiä tuloksia. Tyyppi I, joka esiintyy noin 75% -85% tapauksista kohdun limakalvon syöpään liittyy pelkän estrogeenin toimintaa on riskitekijöitä kuten lihavuus, anovulation, ja munasarjojen monirakkulatauti. Type 1 kasvaimet ovat adenokarsinoomat, joita kutsutaan myös endomet- kohdun limakalvon syöpä (ETY) [2]. ETY on ominaista erilaisia ​​geneettisiä muutoksia, mukaan lukien PTEN, β-kateniinin, PIK3CA, ARID1A, KRAS ja ARID5B mutaatioita [3]. Tyypin II syövistä ovat vakavien karsinooma, kirkas cell carcinoma, huonosti eriytetty, 3. asteen endomet- syöpä, ja karsinosarkooma tai pahanlaatuinen sekoitettu MUllerin kasvain (MMMT). Nämä syövät huonompi ennusteet ja osuus 40% kuolemista johtuu kohdun limakalvon syöpä [4], [5]. Kohdun vakavien karsinooma (USC) on erittäin aggressiivinen vaurio, jossa epiteelin morfologia on samanlainen kuin munasarjasyövän serous carcinoma [6]. USC taipumus levitä laajasti verisuonten tiloja ja läpi myometrium [4]. Nämä kasvaimet yleensä levinnyt vatsan ja imusolmukkeiden [7]. Merkittävin geneettinen muutos USC on p53-mutaatio, jota esiintyy noin 90%: ssa tapauksista [3]. P53-mutaatio johtaa proteiinin yli-ilmentymisen katsotaan varhainen tapahtuma USC syövän synnyn, ja MSI tai mutaatio PTEN eivät ole niin yleisiä [3].

Toistaiseksi ksenograftin tutkimuksia kohdun limakalvon syöpä ovat rajoittuneet ihonalainen ja ortotooppisten (kohdun) injektioilla kuolemattomia solulinjoja [8] – [12]. Kun taas kasvu ihonalainen ksenograftien voidaan helposti seurata ei-invasiivisia tavalla, vierassiirrännäiset potilaalle tehdä tai muissa kohdunulkoinen kohteen kehossa ontelon tarjoavat eri mikroympäristön kasvain kasvaa, usein mahdollistaa parempi kasvu, eloonjääminen ja verisuonten muodostumista. Munuainen NOD

scid

gamma on sivusto, joka on laajalti käytetty kudossiirtoa koska tämä elin tarjoaa korkean veren ja imunesteen virtausnopeudet ja positiivinen soluvälinesteessä paine [13]. Soluja ja kudoksia sekä hyvän- että pahanlaatuisia kudokset on onnistuneesti oksastettu alle munuaisten kapseli näissä hiirissä. Näitä ovat ihmisen kohdun limakalvon ja leiomyooma kudoksissa [14] – [16], eturauhassyöpä, rintasyöpä kudoksissa [17], [18], munasarjojen kasvainten kudokset [19], [20].

Näin ollen tavoitteet tämän tutkimuksen tavoitteena oli luoda ja levittää kasvaimia peruskoulusta kehittynyt kohdun limakalvon syöpä munuaiskotelon alle NOD

scid

gamma hiiriä ja luonnehtia kasvaimiin käyttäen erilaisia ​​merkkiaineita kasvain alatyypin, EMT, steroidireseptorit, ja hyökkäystä.

Materiaalit ja menetelmät

Tissue kokoelma

kohdun limakalvon kasvaimet saatiin naisilla, joille hysterectomies Northwestern Memorial Hospital. Potilaat kunhan kirjallinen suostumus ennen leikkausta. Tutkimus hyväksyttiin Human Subject komitean Northwestern University mukaisesti Yhdysvaltain terveys- mukaisesti.

sisälsivät kapselin alle varttaminen ihmisen ensisijainen kohdun limakalvon syöpä kudoksiin

Kaikki toimenpiteet, joissa eläimet hyväksynyt Northwestern Universityn animal Care ja Käytä komitea (Protocol # 2012-2867). Kaikki kirurgiset toimenpiteet suoritettiin nukutuksessa injektoimalla vatsaonteloon ketamiini /ksylatsiinin (90/8 mg /kg) ja yritettiin minimoida kärsimyksen. Aikuinen nainen NOD

SCID

gamma (NSG) hiiriä (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME), poistettiin munasarjat (OVX) ja täydennetty tai ilman 0,36 mg E2 muodossa 90 päivän vapauttavat pelletit (Innovative Research of America Inc., Sarasota, FL), jotka istutettiin ihon alle. Endometriumin tuumorikudosfragmentit saatiin potilailta leikkauksen. Kasvaimet leikattiin pieniksi paloiksi (1,5 mm x 1,5 mm) ja oksastettu alle munuaisten kapseli aikuinen nainen NSG-hiiriä (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME), kuten aiemmin on kuvattu [14]. Kaksi fragmenttia per munuainen oli oksastettu anterior sekä kaulan sivuille ja molemmat munuaiset käytettiin. Sen jälkeen kun 6-8 viikkoa oksastuksen, tuumorit poistettiin, leikattiin pienemmiksi kappaleiksi (1,5 mm x 1,5 mm) ja sitten siirtää alle munuaisten kapseli NSG hiirissä sarja- leviämistä. Ksenosiirrettyjä kudokset leimattiin passage 0 (P0), P1, P2, jne määrästä riippuen kohtia alkuperäisestä kasvaimesta. Kasvaimen kudokset kiinnitettiin 10% neutraaliin puskuroituun formaliiniin, joka sisälsi 3,8% formaldehydiä (VWR International, West Chester, PA) ja sen jälkeen parafiiniin histologista analyysiä varten. Osia kasvain myös jäädytettiin nestemäisessä typessä tai kylmäsäilytetyt ja varastoitiin -80 ° C lisäanalyysi.

Hiiriä pidettiin este laitos, joka on vapaa taudinaiheuttajista, häkeissä ympäristö- rikastamiseen, ja ruokitaan säteilytetty jyrsijä Teklad ruokavalio. Hiiriä pidettiin 14 tuntia valoa ja 10 tuntia pimeää sykli. Hiirille annettiin kipulääkkeitä (meloksikaami) kivun hallinta kaksi päivää leikkauksen jälkeen ja havaitaan päivittäin merkkejä hätä kuten hidastunut hengitys, epäonnistuminen hoitotuotteita ja turkin poimutuskokoonpanosta ja epäonnistuminen vastata häkkiin salakuuntelu. Lopussa 6-8 viikkoa, hiiret tapettiin CO

2, jota seuraa kaula sijoiltaan.

immunohistokemia

Parafiini upotettujen leikkeiden poistettiin parafiini ja värjättiin käyttäen Envision DAB HRP kit (Dako) tai hematoksyliinillä ja eosiinilla (H kanin polyklonaalista anti-progesteroni reseptorin 1:1000 (Dako, Cat # A0098), kanin monoklonaalinen anti-estrogeenireseptori α 1:5000 (Abgent, Cat # AJ1268a), rotan monoklonaalinen anti-Ki67 1:31250 (Dako, Cat # M7249) , vuohen polyklonaalinen anti-CD31 1:1000 (Santa Cruz, Cat # Sc-1506), hiiren monoklonaalinen anti-E-kadheriinin 01:50 (BD Transduction Laboratories, Cat # 610181), hiiren monoklonaalinen anti-Pan-sytokeratiini (tunnustaa sytokeratiineja 4, 5, 6, 8, 10, 13 ja 18) 1:500 (Cell Signaling, Cat # 4545), kanin monoklonaalista anti-vimentiinista 1:2500 (Abcam, ab92547), kanin monoklonaalinen anti-p53 1:160 (Cell Signaling, Cat # 2527), kaniinin monoklonaalinen anti-PTEN 1:125 (Cell Signaling, Cat # 9188), hiiren monoklonaalinen anti-uPA 50 yli 01 (American Diagnostic GmbH, Cat # ADG3689). Sillä PTEN-vasta, SignalStain Vasta Laimentimena ensisijaisen vasta-aineen laimennus ja SignalStain Boost (HRP, Rabbit) havaitsemiseksi Cell Signaling käytettiin. UPAR (ATN-617 hiiri) vasta-1:300 luovutti ystävällisesti Dr. Andrew Mazar (Northwestern University). Inkuboinnin jälkeen ensisijainen vasta-aineiden, leikkeet huuhdeltiin TBS-T ja lajispesifisiä (anti-kani-anti-hiiri-anti-vuohi) sekundäärinen vasta-aine on konjugoitu dekstraani leimatun polymeerin ja piparjuuriperoksidaasi levitettiin ja värjättiin käyttäen DAB liuosta. Kuvat otettiin Leica DM5000B mikroskooppi.

kylmäsäilytys Ksenosiirretyn kudosten

Tissue fragmentteja 1,5 mm x 1,5 mm: n koon (noin 10 kpl putkea kohti) asetettiin liuokseen, jossa oli 10% DMSO: ja 90% FBS: ää ja säilytettiin -80 ° C: ssa. Kasvaimen palasia ETY4 sulatettiin huoneenlämpötilassa, pestiin kahdesti PBS: llä ja välittömästi oksastettu alle munuaiskapselin kahden OVX-hiirissä. Seitsemän viikkoa siirron jälkeen, hiiret leikeltiin ja kasvaimen kasvua analysoitiin.

Tulokset

perustaminen ksenograftien alla munuaisten kapseli

Kohdun limakalvon kasvaimet saatiin yhteensä 11 potilasta . Neljä tapausta tyypin II kohdun vakavien karsinooma (USC), 1 tapauksessa tyypin II kohdun kirkas cell carcinoma (UCCC), 1 tapaus pahanlaatuisten sekoitettu Mullerian kasvain (MMMT), ja 5 tapausta endomet- kohtukarsinooma (ETY) transplantoitiin alle munuaisten kapseli NSG hiirillä. Näistä kasvaimet, USC1, MMMT1, ETY2 ja ETY4, perustettu ja kasvoi alle munuaisten kapseli (taulukko 1). Siirrostumi- ottaa laskettiin prosenttiosuutena määrän kaavioita, jotka kasvoivat kokonaismäärästä siirretyn kudoksen fragmentteja. USC1 ja ETY4 ota määrä ei eronnut siitä estradioli oli läsnä tai ei munasarjattomilla hiirillä. Siirrostumi- ottaa korko MMMT1 oli korkeampi puuttuessa estradioli, kun taas ETY2 oli korkeammat take hinnat estradiolia, mikä osoittaa ero riippuvuus estrogeeni kasvua. Graafisesti ksenograftien alkaen 4 tapausta ja vastaavat H K, Munuainen. Asteikko bar; 200 um.

A) Ensisijainen kudosten pahanlaatuisia sekoitettu MUllerin kasvain (MMMT1), istutettiin alle munuaisten kapseli NSG hiirten OVX kanssa tai ilman E2. Klo 6-8 viikkoa siirron jälkeen, kasvaimen kerättiin ja uudelleen oksastettu muille hiiriä (1-2 kpl /munuainen). P2, hyökkäystä MMMT1 kudosten haima näkyy. B) Ensisijainen kudoksia endomet- adenokarsinooma (ETY 2), istutettiin alle munuaisten kapseli OVX hiiriä E2. Klo 6-8 viikkoa siirron jälkeen, kasvaimen kerättiin ja uudelleen oksastettu muille hiiriä (1-2 kpl /munuainen). P4, kudokset istuttaa OVX hiirillä ilman E2 pelletti. P1, hyökkäystä ETY2 kudoksiin kohtuun näytetään. C) Ensisijainen kudoksia endomet- adenokarsinooma (ETY4), istutettiin alle munuaisten kapseli OVX hiirten kanssa tai ilman E2. Klo 6-8 viikkoa siirron jälkeen, kasvaimen kerättiin ja uudelleen oksastettu muille hiiriä (1-2 kpl /munuainen). P3, hyökkäystä ETY4 kudosten kohtu on esitetty. Vasen paneeli näyttää H K, munuainen; S, Perna; P, haima; Peri, vatsakalvon U, Kohtu; V, Vagina. Asteikko bar; 200 um.

USC1 saatiin potilaalta, jolla lopullinen patologian diagnoosi vaiheessa IA asteen 3 USC, jossa lymphovascular tilaa invaasiota (Lvsi). Siirrostumi- ottaa oli suuri tällä kudoksen kasvun useimmissa köynnöksen (taulukko 2). Histologinen tutkimus kasvain munuaisten paljastanut mitään merkittäviä invaasion munuaiseen selvä raja munuaisten ja kasvaimen (Fig. 1). Riippumatta siitä, onko estradioli oli läsnä tai ei, USC1 kasvaimet kasvoivat samalla tavalla (Fig. 1, taulukko 2).

MMMT1 potilaalta on diagnosoitu pahanlaatuinen sekoitettu mullerian kasvaimen Lvsi johti juurtumista ottaa oli 42%, kun läsnä on estradiolia ja 79% ilman estradiolin hiirillä (taulukko 2). Lisäksi, kasvaimet olivat pienempiä hiirissä, joita käsiteltiin estradiolilla verrattuna ei estradiolia (Fig. 2A). Näkyvä kasvu tapahtui ulkopuolella munuaisissa ja myös tunkeutui munuaisissa. Merkillistä, kasvaimet toisessa kulku osoitti tunkeutumista koko munuainen, paikallisten leviäminen ja invaasion haima, joka hiiren sijaitsee lähellä munuainen (Fig. 2A, taulukko 3). Eteneminen P2 hiirissä, joissa estradioli aiheutti optimaalisella kasvua, mikä osoittaa negatiivinen vaikutus E2 kasvuun MMMT1.

ETY2 oli peräisin potilaalta, jolla vaihe IA luokka 2 endomet- adenokarsinooma, joilla ei ole Lvsi. ETY2 kasvaimia kasvatettiin OVX hiiriä E2 implantit. Määrittämään E2 riippuvuutta, kudoksissa passage 4 istutettiin OVX hiirillä ilman E2. Tämän seurauksena vain 1 kudoksen pois 16 kasvoi (taulukko 2). H K, Munuainen. Asteikko bar; 200 um.

Expression sytokeratiinin, vimentiinistä ja E-kadheriinin

invaasio ja metastaasi syöpäsolujen liittyy epiteelin-mesenkymaalitransitioon (EMT), jossa epiteelisolut voivat muuntua liikkuvia mesenkyymisolujen [21]. Tuumoriksenografteja värjättiin merkkiaineiden EMT lukien sytokeratiini-, vimentiinistä, ja E-kadheriinin ja verrattuna normaaliin kohdun limakalvon, hyperplastic kohdun limakalvo, ja luokka 1 kohdun limakalvon syöpä (Fig. 4). Rauhasepiteeliin värjätään vahvasti positiivinen sytokeratiinia normaalissa kohdun limakalvon, liikakasvu ja arvosana 1 syöpään (Fig. 4). Mielenkiintoista, USC1 ksenografteissa värjättiin positiivinen sytokeratiinia tumassa, kun taas MMMT1 ja ETY2 näytteillä sytoplasminen värjäys ja ETY4 oli hyvin heikko eikä värjäytymistä. Sekä ensisijainen ja ksenosiirrettyjä kudosten osoittivat samanlaisia ​​malleja värjäystä lukuun ottamatta USC1 jossa ksenograftien värjätään lähinnä tumaan sytokeratiini (Fig. 4, S1 Kuva.).

immunohistokemiallinen värjäys tehtiin sytokeratiinia, vimentiinistä ja E -cadherin in ksenosiirrettyjä USC1, MMMT1, ETY2 ja ETY4 kasvaimia passage 5, 1, 1 ja 0, vastaavasti. Ruskea väri merkitsee positiivista värjäytymistä. Asteikko bar; 200 um.

vimentiinista oli vahvasti positiivinen molemmissa ksenosiirrettyjä ja ensisijainen kudosten USC1, ETY2 ja ETY4 kudoksissa sekä stromasoluja normaalissa kohdun limakalvon (Fig. 4, S2 kuvassa.). Grade 1 kohdun limakalvon syöpä ja liikakasvun kudokset olivat heikosti positiivisia vimentiinista sekä epiteelin ja strooman soluja (S2 Kuva.). Rauhas komponentti MMMT1, ei osoittanut mitään värjäytymistä vimentiinista sekä ksenosiirrettyjä ja ensisijainen kudoksissa kun stroman oli positiivinen (Fig. 4, S2 kuvassa.).

E-kadheriinin värjäytyminen normaalissa ja hyperplastic kohdun limakalvoa ja luokka 1 kasvaimia lokalisoitu pääasiassa rauhas osastossa ja ilmestyi sytoplasman (Fig. 4, S3 kuvassa.). Sen sijaan, tumavärjäystä E-kadheriinin havaittiin ksenografteissa ja ensisijainen kasvainten USC1, ETY2 ja ETY4 kun MMMT1 esillä tumma sytoplasmista värjäytymistä. Puute E-kadheriinin pinnalla solujen muuttaisi tartuntaominaisuudet solujen edistää enemmän liikkuvaksi fenotyypin.

p53- ja PTEN

yleisin geneettinen muutos USC esiintyy p53-geenin noin 90% tapauksista [3]. Mutaatio p53 usein ilmentyy lisääntyminen p53-proteiinin tasot [22]. Tasot p53-proteiinin olivat havaittavissa rauhaset ja strooman normaalien ja hyperplastic kohdun limakalvoa ja luokka 1 kohdun limakalvon syöpä (S4 Fig.). Samoin p53 värjäytyminen oli vähäistä tai puuttui MMMT1, ETY2 ja ETY4 sekä ksenosiirrettyjä ja primäärikasvaimissa (Fig. 5, S4 kuvassa.). Sitä vastoin p53 värjäytyminen oli vahvasti positiivinen USC1 ksenosiirrettyjä ja ensisijainen kasvaimia. Tyyppi I ETY on tunnusomaista erilaisten geneettisten muutosten kanssa yleisin mutaatiot PTEN-geenin [3]. Kaikki ksenosiirrettyjä ja primaaristen kasvainten värjättiin PTEN, lukuun ottamatta ETY 2, joka osoitti vähän tai ei lainkaan värjäytymistä kasvainsoluissa (Fig. 5, S5 kuviossa.). Verrattain, rauhas osastoon liikakasvun ja luokan 1 kohdun limakalvon syöpä ei näkynyt värjäytymistä PTENin taas normaali endometrium värjättiin PTEN rauhaset ja strooman (S5 Fig.).

immunohistokemiallinen värjäys tehtiin p53, PTEN, uPA ja uPAR in ksenosiirrettyjä USC1, MMMT1, ETY2 ja ETY4 kasvaimia passage 5, 1, 1 ja 0, vastaavasti. Ruskea väri merkitsee positiivista värjäytymistä. Asteikko bar; 200 um.

Expression of Urokinase plasminogeeniaktivaattori (UPA) järjestelmä

UPA ja sen reseptori uPAR edistää proteolyysiä joka parantaa kasvaimen kasvua ja invaasiota. Sekä UPA ja uPAR on osoitettu ilmaistaan ​​edenneisiin syöpiin [23]. Kaikki tuumoriksenografteja ja primaarikasvainten värjättiin positiivisesti UPA (Fig. 5, S6 Fig.). Samoin normaali ja hyperplastic kohdun limakalvoa ja luokka 1 kohdun limakalvon syöpä, värjättiin UPA sekä rauhas ja strooman osastojen (S6 Fig.). Sen sijaan, värjäys uPAR näkyi invasiivisia kasvaimet, MMMT1, ETY2 ja ETY4 vähän värjäytymistä havaittiin USC1 (Fig. 5). UPAR tasot olivat poissa palkkaluokan 1 kohdun limakalvon syöpä ja normaalin kohdun limakalvoa (S7 Fig.). Nämä tulokset viittaavat siihen, että ilmentyminen uPAR voi myötävaikuttaa invasiivisia luonteen kohdun kasvainten järjestelmässämme.

Keskustelu

Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli selvittää potilaalle peräisin tuumoriksenografteja ensiarvoisen kohdun limakalvon syöpä kudosten lisääntyä tarjota mallin tutkia ja metastaasit. Raportoimme tässä perustaminen kasvainten neljästä potilaiden eri kohdun limakalvon syövän tyypit ja laadut, jotka osoittavat ero invasiivisen ja metastaattisen kapasiteetti. Ksenografteissa säilyttävät piirteet alkuperäisen kasvaimen ja näyttö ominaisuuksia, jotka ovat ainutlaatuisia tyypin 1 tai tyypin II endometriumsyöpään.

Koska kohdun limakalvon kasvaimet tullut aggressiivisempia ja huonosti eriytetty, ilmaus hormonireseptorit, ER ja PR vähenee, ja niiden hormoni reagointikykyä muuttuu. Riippuvuus kasvaimen siirteiden E2 tässä osoitettiin. USC1, MMMT1, ja ETY4 ei vaatinut E2 siirteitä kasvaa. Tämä voi johtua siitä, että alhainen ER kasvaimissa. Sen sijaan ETY2 ylläpidetään E2 riippuvuutta huolimatta alhainen ER havaittu. E2 voi olla ligandi G-proteiiniin kytkeytynyt reseptori 30 (GPR30), joka on yli-ilmentynyt korkealaatuista kohdun limakalvon syöpä [24]. Lisäksi on mahdollista, että GPR30 välittää ei-transkription vaikutukset estrogeenin aktivoinnista PI3K /Akt-reitin tämän kasvain, ja edistää kasvua [25]. Mielenkiintoista, kun taas kaikki neljä ksenosiirrettyjä kudokset ERa alhainen negatiiviseksi, kaikki siirrettyihin tuumoreihin ilmaisivat eritasoisia PR. PR ilmentävät solut ETY2 olivat paikallisia ympäri hyökkääviä edessä munuaisissa. Syy ilmentymistä PR tällä alueella ja sen rooli hyökkäys jää epäselväksi. Itse asiassa, vaikutusmekanismi progesteronin kautta reseptorin pitkälle, invasiivinen kohdun limakalvon karsinooma on tuntematon. Geenit, jotka sääntelevät PR normaaliin kohdun limakalvon ovat erilaisia ​​kuin ne, kohdun limakalvon syöpä [26]. Ottaen huomioon pleiotrooppinen toiminta PR, joka on riippuvainen solujen ympäristöön [15], on mahdollista, että PR voi olla sekä kasvua, invasion- ja metastasis- edistämiseksi tai inhiboimiseksi toimia kasvainsolun. Meidän potilas ksenograftimallia olisi hyödyllinen väline tulkita roolin progesteronin näihin kasvaimiin.

Jotta syöpäsoluja hyökätä, solu-adheesio on menetetty saamiseksi soluliikkuvuus ja irrottautua kasvain kudosta. EMT on mukana levittämistä yksittäisten syöpä solujen primäärikarsinoomaan kudoksista, joko ohimenevästi tai [27], [28]. Menetys E-kadheriinin on ensimmäinen askel EMT, joka mahdollistaa hyökkäyksen ja etäpesäkkeiden monissa karsinoomia. Vuonna USC1, ETY2 ja ETY4, E-kadheriinin paikallistettiin ytimeen kun taas MMMT1, luokka 1 kohdun limakalvon syöpä, hyperplasia, ja normaali endometrium esillä tumma sytoplasmista värjäytymistä. Tutkimukset ovat osoittaneet ydinvoiman lokalisointi E-kadheriinin sekä hyvän- että pahanlaatuisia kasvaimia [29], [30]. Lohkaista fragmentit E-kadheriinin on raportoitu tumaan [31]. Menetys ehjä transmembraanisen E-kadheriinin väistämättä pienenee solun soluadheesion.

urokinaasi plasminogeeniaktivaattori (UPA) järjestelmä voi aiheuttaa hajoamista soluväliaineen, parantaa angiogeneesiä ja johtaa ja metastaasit [32]. On vähän tunnettu siitä UPA järjestelmän kohdun limakalvon syöpään. Aiemmin olemme määritelleet lisääntynyt UPA mRNA ilmentymistä kohdun serous masolulinjassa (SPEC2) verrattuna huono laatu endomet- masolulinjassa (Ishikawa) [33]. Reseptori uPAR on osoitettu olevan läsnä korkeampi potilailla, joilla aggressiivinen ja myöhäisessä vaiheessa kohdun limakalvon syöpiä [32], [34]. Tutkimuksessamme UPA värjäytyminen havaittiin kaikissa kasvaimissa testataan taas uPAR ilmaistiin kasvaimia, jotka hyökkäsivät munuaisten kautta ja paikallisten elinten viittaa siihen, että uPAR voitaisiin kohdistaa estävän invaasiota pitkälle endometriumsyöpään.

Yhteenvetona olemme onnistunut ja levittävät potilaan peräisin kohdun kasvainten 4 tapauksessa käyttäen munuaisten kapseli ksenograftin järjestelmään. Tämä malli voisi käyttää testaamaan uusia yhdisteitä sekä yhdistelmähoidot ja on parempi kuin tavanomaisen solulinjan ksenograftimalleissa. Lisäksi biologia kasvain voidaan helposti arvioida tunnistaa ennustavan merkkiaineita hoitovaste hoito joita ei nykyisin ole pitkälle ja toistuvia kohdun limakalvon syöpä. Huolimatta hyvään ennusteeseen, joka liittyy huono laatu kohdun limakalvon syöpä, erityisesti silloin, kun havaitaan varhaisessa vaiheessa, kehittynyt tapaukset ovat tappavia hyvin vähän tai ei lainkaan tehokkaita hoitoja tähän tautiin. Opiskelu potilaan kasvaimissa ksenografteissa antaa paljon kaivattua tietoa parantaa hoitomuotoja aggressiivinen endometriumsyöpään.

tukeminen Information

S1 Kuva.

sytokeratiinivasta perus- ja ksenosiirrettyjä kudoksiin. Immunohistokemiallinen värjäys tehtiin vimentiinista ala- ja ksenosiirrettyjä USC1, MMMT1, ETY2 ja ETY4 kasvaimia passage 5, 1, 1 ja 0, vastaavasti. Värjäys tehtiin normaalin ja hyperplastic kohdun limakalvoa ja luokka 1 kohdun limakalvon syöpä kudoksiin. Ruskea väri merkitsee positiivista värjäytymistä. Asteikko bar; 200 um.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0116064.s001

(TIFF)

S2 Kuva.

vimentiinista perus- ja ksenosiirrettyjä kudoksiin. Immunohistokemiallinen värjäys tehtiin vimentiinista ala- ja ksenosiirrettyjä USC1, MMMT1, ETY2 ja ETY4 kasvaimia passage 5, 1, 1 ja 0, vastaavasti. Värjäys tehtiin normaalin ja hyperplastic kohdun limakalvoa ja luokka 1 kohdun limakalvon syöpä kudoksiin. Ruskea väri merkitsee positiivista värjäytymistä. Asteikko bar; 200 um.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0116064.s002

(TIFF)

S3 Fig.

E-kadheriinin perusterveydenhuollossa ja ksenosiirrettyjä kudoksiin. Immunohistokemiallinen värjäys tehtiin E-kadheriinin ala- ja ksenosiirrettyjä USC1, MMMT1, ETY2 ja ETY4 kasvaimia passage 5, 1, 1 ja 0, vastaavasti. Värjäys tehtiin normaalin ja hyperplastic kohdun limakalvoa ja luokka 1 kohdun limakalvon syöpä kudoksiin. Ruskea väri merkitsee positiivista värjäytymistä. Asteikko bar; 200 um.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0116064.s003

(TIFF)

S4 Fig.

p53 perus- ja ksenosiirrettyjä kudoksiin. Immunohistokemiallinen värjäys tehtiin p53 ala- ja ksenosiirrettyjä USC1, MMMT1, ETY2 ja ETY4 kasvaimia passage 5, 1, 1 ja 0, vastaavasti. Värjäys tehtiin normaalin ja hyperplastic kohdun limakalvoa ja luokka 1 kohdun limakalvon syöpä kudoksiin. Ruskea väri merkitsee positiivista värjäytymistä. Asteikko bar; 200 um.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0116064.s004

(TIFF)

S5 Fig.

PTEN perus- ja ksenosiirrettyjä kudoksiin. Immunohistokemiallinen värjäys tehtiin PTEN ala- ja ksenosiirrettyjä USC1, MMMT1, ETY2 ja ETY4 kasvaimia passage 5, 1, 1 ja 0, vastaavasti. Värjäys tehtiin normaalin ja hyperplastic kohdun limakalvoa ja luokka 1 kohdun limakalvon syöpä kudoksiin. Nuolet osoittavat PTEN positiivisten solujen ETY2. K, munuainen; Ruskea väri merkitsee positiivista värjäytymistä. Asteikko bar; 200 um.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0116064.s005

(TIFF) B S6 Fig.

UPA perus- ja ksenosiirrettyjä kudoksiin. Immunohistokemiallinen värjäys tehtiin UPA ala- ja ksenosiirrettyjä USC1, MMMT1, ETY2 ja ETY4 kasvaimia passage 3, 1, 1 ja 0, vastaavasti. Värjäys tehtiin normaalin ja hyperplastic kohdun limakalvoa ja luokka 1 kohdun limakalvon syöpä kudoksiin. Ruskea väri merkitsee positiivista värjäytymistä. Asteikko bar; 200 um.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0116064.s006

(TIFF)

S7 Fig.

uPAR tasoilla ensisijainen ja ksenosiirrettyjä kudoksiin. Immunohistokemiallinen värjäys tehtiin uPAR ala- ja ksenosiirrettyjä USC1, MMMT1, ETY2 ja ETY4 kasvaimia passage 5, 1, 1 ja 0, vastaavasti. Värjäys tehtiin normaalin kohdun limakalvo ja luokka 1 kohdun limakalvon syöpä kudoksiin. Ruskea väri merkitsee positiivista värjäytymistä. Asteikko bar; 200 um.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0116064.s007

(TIFF) B S8 Fig.

ARRIVE tarkistuslista.

doi: 10,1371 /journal.pone.0116064.s008

(PDF) B

Kiitokset

Olemme kiitollisia Gynecologic Oncology Team, Doreine Carson , Cary Passaglia, Racher Bers, Dr. Mario J. Pineda ja tohtori Kristina M. Mori suostuu potilaiden ja saamisen kudosten, tohtori Andrew P. Mazar tarjota uPAR (ATN-617) vasta, Vanida A. Serna ja Lindsey M. Butler teknistä apua, ja hiiri histologia ja Fenotyypitys Core tilat Robert Lurie Cancer Center Northwestern University.