Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

sairastavat haavainen paksusuolen tulehdus (UC) kantavat suurentunut peräsuolen syövän. Koska niukkuus koliitin liittyvän syövän (CAC) ja pitkän keston välillä UC aloittamisen ja selvä karsinooma, selvittämisessä mekanismeja tulehdukseen liittyvä syövän syntymistä suolistossa on erityisen haastavaa. Riittävä hiiren mallit ovat siis erittäin toivottavaa. Ihmisille sertiä tiheä kromosomi epävakaus (CIN) heijastama aneuploidia- voitiin osoittaa, joka ylittää satunnaista karsinoomia. Tutkimuksen tavoitteena oli analysoida hiiri malleja CAC osalta CIN. Lisäksi proteiini p53, beeta-kateniinin ja Ki67 mitattiin edelleen luonnehtia hiiren kasvainten kehittymistä verrattuna UC-liittyvän syövän synty miehillä.

Methods

AOM /DSS malli (n = 23) ja IL-10

– /- hiirillä (n = 8), levitettiin seurata maligniteetin kehityksen kautta tähystys ja analysoida syöpää edeltäviin ja pahanlaatuisten vaiheiden yhteistoimintalausekkeita. CIN arvioitiin käyttämällä DNA-kuvan cytometry. Proteiinin p53, beeta-kateniinin ja Ki67 arvioitiin immunohistokemiallisesti. Aste tulehduksen analysoitiin histologia ja rinnan paikallisten interferoni-γ release.

Tulokset

CIN havaittiin 81,25% kaikista hiiren viisumikeskusten aiheuttama AOM /DSS, vaikka kaikki karsinoomat että syntyi IL-10

– /- hiiret olivat kromosomiin vakaat. Beta-kateniinin ilmentyminen oli vahvasti membranous IL-10

– /- hiirissä, kun taas 87,50% AOM /DSS aiheuttaman kasvaimia osoitti sytoplasmaattinen ja /tai tumaansiirtymiseen beta-kateniinin. p53 ilmentyminen oli korkea molemmissa malleissa ja Ki67 värjäys paljasti korkeampi leviämisen IL-10

– /- aiheuttama yhteistoimintalausekkeita.

Johtopäätökset

AOM /DSS-koliitti, mutta ei IL 10

– /- hiirissä, voisi tarjota tehokas hiiren mallia mekanistisesti tutkia CIN koliitti liittyviä syövän synty.

Citation: Gerling M, Glauben R, Habermann JK, Kühl AA, Loddenkemper C, Lehr HA , et ai. (2011) karakterisointi Kromosomaalisen epävakaus Hiiren Colitis-Associated peräsuolen syövän. PLoS ONE 6 (7): e22114. doi: 10,1371 /journal.pone.0022114

Editor: Reiner Albert Veitia, Institut Jacques Monod, Ranska

vastaanotettu: 20 huhtikuu 2011; Hyväksytty: 16 Kesäkuu 2011; Julkaistu: 22 heinäkuu 2011

Copyright: © 2011 Gerling ym. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoittajat: Tutkimukset olivat osittain perustama saksalainen Research Foundation (Deutsche Forschungsgemeinschaftin) numerolla DFG Si-749 /5-3 ja SFB633, www.dfg.de. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen. Ei ylimääräistä ulkoista rahoitusta saatiin tähän tutkimukseen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

sairastavat haavainen paksusuolen tulehdus (UC) kasvot lisääntynyt elinikäinen riski sairastua peräsuolen syöpä (CRC) [1]. Tällaiset tulehdukseen liittyvä maligniteetit että colorectum osoittavat selviä eroja satunnaiseen karsinoomat: he kehittävät nuoremmilla potilailla, useammin miehillä, ja synkroninen karsinoomat ovat useammin havaittu [2]. Genomisessa tasolla, on oletettu, että krooninen tulehdus johtaa suurempaan kromosomaaliseen epävakautta (CIN) reaktiivisen hapen ja typen lajit (Rons), hypermetylaatiota pericentromeric DNA-alueen, telomeerien poistuman, ja muut vähemmän hyvin määritelty mekanismit [3], [ ,,,0],4], [5]. CIN havaitaan kroonisten tulehdustilojen kuten Barrettin ruokatorvi, krooninen hepatiitti, ja UC suuressa määrin [6], [7], [8]. UC, aneuploidiaa sillä mitattavissa jälkitilaan CIN voidaan soveltaa niin ennakoiva markkerina pahanlaatuisiin ja on havaittavissa jopa vuosikymmenen ennen diagnoosi syöpä [8], [9]. Äskettäin voitiin osoittaa, että CIN ominaista paksusuolen tulehdus liittyvä karsinoomien (CACs), jonka taajuus saavuttaa 100% vuonna joukko 31 sertiä analysoitu, kun taas päinvastoin vain 75% satunnaista CRC löydettiin aneuploidi [10], [11]. Yhdessä yhä enemmän todisteita viittaa syy- tulehdusta ja CIN, jossa läsnäolo CIN ollessa ennakoivan merkkiaine molemmille, maligniteetin kehitys ja huonompi ennuste kerran pahanlaatuisiksi on tapahtunut.

selvittämiseen syitä ja seurauksia CIN on mekanistinen taso voisi siten merkittävästi tukea strategioiden kehittäminen ehkäistä ja syövän hoitoon, joilla on uusia, kohdennettuja lähestymistapoja. Siten sopivia eläinmalleja erittäin toivottavaa nopeuttaa tutkimuksen edistymistä. Edullisesti tällaiset mallit tulisi osoittaa samanlaisia ​​ominaisuuksia kuin niiden ihmisten kollegansa, joka tapauksessa koliitti liittyvän syövän synnyn indispensably käsittää aneuploidia.

Lisäksi CIN, aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet edelleen eroja satunnaista ja koliitti liittyvän syövän synnyn kanssa huomioon kanoninen polkuja pahanlaatuisen muutoksen:

on jo kauan tiedetty, että p53-pistemutaatiot tapahtua varhain UC liittyviä neoplastisia etenemiseen ja korreloi suoraan aneuploidia- [12], [13], [14], [ ,,,0],15].

CRC ja muissa kasvaimissa, aktivointi Wnt-signalointi edistää solujen eloonjäämistä ja estää solukuolemaa. Sen jälkeen aktivointi Wnt-signalointireitin, keskittymisen ja translokaation beeta-kateniinin solukalvon sytoplasmaan ja tumaan voidaan havaita, jolloin aktivointi eri kohdegeenien [16]. Vain vähän tietoja olemassa beeta-kateniinin ilmentymistä CAC. Yksi tutkimus keskittyy geneettisiin muutoksiin vieressä beeta-kateniinin lokuksen kromosomissa 3p22-p21.3 eivät löytäneet eroa taajuus Heterotsygotian menetys keskuudessa UC-liittyvä ja satunnaista karsinoomien [17]. Päinvastoin, tuoreessa tutkimuksessa on Wnt-signalointi aktivaation CAC päätellä, että polku aktivoituu varhaisessa vaiheessa pahanlaatuisiksi koliitti, ja löysi ydin- beeta-kateniinin värjäystä hyödyllisiä havaitsemiseksi kasvainten CAC [18].

moninaisuus eläinmalleissa UC käytetään yleisesti. Yhdessä kanoninen malli koliitti indusoidaan dekstraanisulfaatti natriumia (DSS) [19]. Mielenkiintoista, pitkäaikainen DSS anto yksinään voi aiheuttaa pahanlaatuisiksi jyrsijöillä [20], [21], vaikka tämä vaikutus pahentaa lisäsovelluksessa azoxymethane (AOM), mutageenisen aine, joka itsessään aiheuttaa kehitystä Kolorektaalituumorien hiirillä [ ,,,0],22]. Kasvaimet induktiossa AOM yksinään eivät näytä CIN [23]. Annoksesta riippuva edistävää vaikutusta DSS varten AOM aiheuttaman kasvaimia on raportoitu, kun taas CIN ei ole tutkittu AOM /DSS-malli [24].

täydentävä hiirimallissa UC on interleukiini 10

– /- (IL-10

– /-) – hiiri [25]. Tässä mallissa tulehdusmuutoksia alkaa distaalisessa paksusuolessa noin kolmen viikon iässä ja edistyksen proximally ilman lisäanta- ulkoisia tautien [26]. Paksusuolen vauriot ovat ominaisia ​​tulehdukselliset infiltraatit limakalvon ja submukoosan sekä krypta paiseet [26]. On kuvattu, että kuuden kuukauden ikäisiä, 60% IL-10

– /- hiiret kehittävät adenokarsinoomat [26]. Olemme aiemmin osoittaneet, että ontelon täyttö kasvaimia syntyy IL-10

– /- hiirissä, jotka muistuttavat ihmisen adenokarsinoomia histologisesti [27]. Lisäksi on raportoitu, että neoplastisen muutoksen näissä hiirissä voi pahentaa anto selekoksibin [25], [27].

Tämän projektin tavoitteena oli kuvata hiiren tulehdukseen liittyvä CRC osalta CIN ja muita tunnettuja ominaisuuksia niiden ihmisen vastine. Laajuus CIN vuonna syöpää edeltäviin ja pahanlaatuisten vaiheiden kahdella hiiren mallia koliitti välittämän syövän syntymistä arvioitiin. Lisäksi proteiini p53: n ja beeta-kateniini arvioitiin hiiren kasvaimia, sekä esimerkinomainen joukko ihmisen yhteistoimintalausekkeita. Ki67 värjäys palveli määrittää kasvun osa kasvaimia. Lopuksi, tulehduksellinen aktiivisuus varmistettiin kautta tähystys, histologia, sekä paikallinen lisäys proinflammatoristen sytokiinien interferoni-γ (IFNy) B

Materiaalit ja menetelmät

Eettinen huomioitavaa

animal pöytäkirjat hyväksyttiin alueen eläinten opintovaliokunnan Berliinin (LAGeSo, hyväksyntä ID G0297 /03) molemmissa malleissa käytettiin tässä tutkimuksessa.

Hiiret

Kaikki eläimet ostettiin Harlan Winkelmann (Borchen, Saksa). Kaikkiaan 23 käsiteltyjen hiirten AOM ja DSS kuten alla on kuvattu, käytettiin tässä tutkimuksessa. Täydentävästi, kahdeksan IL-10

– /- hiirissä tutkittiin.

AOM /DSS-indusoidun kasvaimen kehittymisen

DSS ja AOM annettiin C57BL /6J-hiiriä kuuden viikon ikäisiä kuten aiemmin on kuvattu [27]. Lyhyesti, hiiret saivat yhden intraperitoneaalisen injektion mutageeninen aine AOM (12,5 mg /kg kehon painoa). Alkaen päivä viiden jälkeen AOM sovellus, 3,5% DSS liuotettiin juomaveteen kolmen syklin viisi päivää kunkin vaihtelevalla 14 päivän välein säännöllisesti juomaveden, aiheuttaen siten krooninen DSS koliitti. Endoskooppinen valvonta suoritettiin alla kuvatulla viikoittain ja hiiret lopetettiin päivänä 50, tuossa vaiheessa esillä joko adenokarsinooman tai koliitti ilman ilmeistä kasvaimien (katso tulokset, taulukko 1).

Yhteensä kymmenen tervettä, käsittelemättömät C57BL /6J-hiiriä käytettiin normaaleihin kontrolleihin (kuva 1).

(A) endoskooppinen kuvia tulehtuneiden limakalvojen ja kasvain AOM /DSS-koliitti sekä IL10

– /- malli. Tumorigeneesin arvioitiin korkean erotuskyvyn tähystys

in vivo

. Metyleenisininen käytettiin parantamaan dysplasia havaitsemiseen esitetyllä esimerkillisesti for AOM /DSS koliitti (B) Kasvaimen koon arvioija kasvaimen koon pisteet kuvattuja menetelmiä osassa, IFNy -levels, ja tulehdus pisteet arvioidut H.E. värjäys käsittelemättömiä kontrolleja, AOM /DSS-hiiriä, ja IL10

– /- hiirissä. Pylväät edustavat välineet, whishkers edustavat vakio keskivirhe (SEM). Paksusuolen limakalvon näytteitä 10 terveen käsittelemättömän C57BL /6J-hiiriä arviointiin soveltaa histologisen parametrien ja IFNy -ilmaisu.

IL-10

– /- hiirillä

Kahdentoista viikon iässä, syklo-oksigenaasi-2-estäjän selekoksibia (500 mg /hiiri /vrk) annettiin suun kautta IL-10

– /- hiirillä (C57BL /6J -Taustaa, n = 8), viiden päivän ajan kuten aiemmin on kuvattu [ ,,,0],25]. Hiiriä tarkkailtiin neljällä viikolla ja tehtiin viikoittain alempi tähystys, ennen uhrataan tai ilman merkkejä pahanlaatuinen kasvain (taulukko 1).

Endoskooppiset valvonta- ja post mortem -tutkimuksen

kasvain kehittäminen seurattiin makroskooppisesti käyttämällä korkean resoluution hiiri endoskooppia järjestelmä (Karl Storz GmbH, Tuttlingen, Saksa) kuten aiemmin on kuvattu [28]. Endoscopies tehtiin viikoittain alkaen viikon kuluttua AOM-hoidon ja selekoksibi-hoitoa, vastaavasti. Perustuen havaittuun kasvainten kehittymiseen, päivän 50 ja 28 jälkeen alussa jokaisen hoidon valittiin päätepisteen AOM /DSS ja IL-10

– /- ryhmä, vastaavasti. Endoskooppinen menettelyt tutkituista on värinäytöllä rekisteröitiin digitaalisesti (DSR-20MD, Sony, Köln, Saksa).

Lisäksi valmistuksessa koolonkudoksessa kuten alla on kuvattu, post mortem ruumiinavaus suoritettiin makroskooppisesti. Erityisesti seuloa etäispesäkkeitä, raikas keuhko- ja maksakudosta leikattiin 5 mm osiin, jotka tutkittiin makroskooppisia merkkejä kasvainten.

DNA-image cytometry

Nuclear DNA ploidia arviot olivat suoritetaan millä DNA-kuvan cytometry käyttäen Feulgen-värjätty histologinen kohdissa 8 um paksuus. Värjäysmenetelmistä, solunvalintakriteerit, ja sisäinen standardointi perustuivat aikaisemmin kuvattuja menetelmiä [29]. Keskimäärin 110 suoliston ytimet (vaihteluväli 100-120, SD = 3,4) mitattiin kussakin yksilössä jälkeen vuorovaikutteinen valinta käyttämällä digitaalista kuvantamisjärjestelmä (Ahrens ACAS, Hampuri, Saksa). Kaikki DNA: n arvot ilmaistaan ​​suhteessa sisäiseen värjäys kontrolleihin (lymfosyytit), joita annetaan arvo 2c. DNA luokiteltiin Auer [29]. Histogrammit luonteenomaista yksi ainoa huippu diploidi tai lähes diploidi alue (1,5 c-2.5 c) luokiteltiin tyypin I tyypin II histogrammit esiintyi yksi piikki tetraploidinen alueella (3,5 c-4.5 c) tai piikkien sekä diploidi ja tetraploidi alueilla ( 90% koko solupopulaation). Solujen lukumäärä DNA-arvojen diploidinen ja tetraploidiset alueella ja ne ylittävät tetraploidinen alue ( 4,5 c) oli 10%. Tyyppi III histogrammit edusti erittäin lisääntyvissä lähes diploidisolupopu- populaatiot ja koostuivat DNA arvojen vaihdellessa välillä diploidinen ja tetraploidi alue. Vain pieni määrä soluja (alle 5%), osoitti enemmän kuin 4,5 c. DNA histogrammit tyyppien I, II ja III siten luonnehtia euploid solupopulaatioiden. Tyyppi IV histogrammit osoittivat lisääntynyttä ( 5%) ja /tai selvästi hajallaan DNA-arvot ylittävät tetraploidinen alue ( 4,5 c). Nämä histogrammit ehdotettiin pohtimaan aneuploidi populaatioiden suoliston ytimeksi.

Colon elinviljelyssä ja sytokiinimittaukset

Hiiren colons leikattiin auki pitkittäin ja pestiin PBS: ssä. Nauhat 1 cm

2 laitettiin 48 tasapohjaisille viljelylevyille, jotka sisältävät 0,5 ml seerumitonta RPMI 1640 penisilliiniä (100 U /ml) ja streptomysiiniä (100 ug /ml), ja inkuboitiin 37 ° C: ssa 24 tuntia. Viljelmän supernatantit kerättiin, analysoitiin IFNy, ja Kokonaisproteiinimäärä mittaamaan Bio-Rad proteiinin määritys (Bio-Rad Laboratories, Munich, Saksa). Hiiren IFNy määritettiin spesifisellä ELISA mukaan valmistajan protokollia (BD Biosciences, Heidelberg, Saksa), jossa on määrällisesti alueella 20 pg /ml 10 ng /ml.

histopatologia ja immunohistokemia

kaikki kasvaimet ja limakalvon näytteet altistettiin

Hematoksiliini

Eosiini

(H 1, polttoväli; 2, laajennettu ja /tai konfluentteja; 3, laajennettu ja nosti; ja 4, valovirran täyte. Vasta-aineet p53, beta-kateniinin, ja Ki67 hankittiin DAKO (Hampuri, Saksa, anti-Ki67-vasta-aine, klooni TEC3, rotan IgG2a), New England Biolabs (Frankfurt, Saksa, anti-beeta-kateniini vasta-aine, klooni 6B3, kani IgG), ja Cell Signaling (Danvers, MA, USA, anti-p53-vasta-Ser15; polyklonaalinen kaniini). Värjäys menettelyt suoritettiin valmistajan protokollia. Ainakin kymmenen HPF käytettiin semikvantitatiivisesti arvioida proteiinin ilmentymisen. Immunohistokemiaa pisteytys katso taulukko 1.

Tilastolliset analyysit

Tilastotiedot analyysit suoritettiin käyttäen Microsoft Excel 2003 DigDB v7.1.3.3 (Sunnyvale, CA, USA), ja XLStat Pro v7.5 (Addinsoft, New York, NY, USA). Tiedot ilmaistaan ​​välineet (tavallisilla virhe keinoja, SEM). Induktiivinen päättely, nonparameteric rank-sum testejä käytettiin verrata sijainti parametrien tietojen jakaumat. Kaksi itsenäistä näytettä, esim. Eri ploidian tila, verrattiin käyttämällä Wilcoxonin testiä. Vastaavat taajuudet analysoitiin käyttämällä Fisherin tarkkaa testiä. Tyypin 1 virheprosentti asetettiin 5%.

Tulokset

hallinto AOM /DSS ja IL-10 puutos johtaa koliitti välittämän karsinoomien

Yhteensä 16 pois 23 hiiriä hoidettiin AOM ja DSS kehittyi peräsuolen kasvaimien jälkeen keski-ikä seitsemän viikkoa AOM annon. Kasvainten kehittymiseen jälkeen voitaisiin endoskooppisesti ja kasvainten läheisesti muistuttavalla ihmisen adenokarsinoomia histologisesti. Hiirillä, joka kehittyi kasvaimet (n = 16), kasvain määrä vaihteli kahdesta 19 eläintä kohti mediaani yhdeksän kasvaimista hiirtä kohti (kuva 1a). Kunkin yksittäisen, yksi edustaja kasvaimen valittiin jatkotutkimuksiin perusteella kasvaimen koon. Kuitenkin vain yksi 16 tapauksessa, hyökkäyksen läpi paksusuolen seinämän havaittiin, kun taas kaikki muut syövät leimasi estää intraluminar kasvua ilman tunkeutumisen pidemmälle lamina propria limakalvoja. Kasvaimet nähtiin ainoastaan ​​paksusuolessa.

IL-10

– /- hiirillä, keski-ikä on 15 viikkoa tulevista dysplasioita edennyt soluttautua adenokarsinooman yhteensä neljä eläintä (kahdeksasta eläinten havaittu kuvatulla ”methods”). Kasvain määrä vaihteli seitsemästä 24 kasvaimiin eläintä kohden, mediaani 16 kasvainten hiirtä kohti. Yksi kasvain kunkin eläimen valittiin loppupään analyysejä, kuten on kuvattu edellä. Neoplastisen muuttumisen rajoitti sen colorectum.

MAKROSKOOPPINEN etäispesäkkeitä nähtiin kumpikaan jälkeen AOM /DSS-hoidon eikä IL-10

– /- hiirissä.

Krooninen suolistotulehdus molemmissa malleja edellytyksenä kasvaimien synnyn

Krooninen tulehdusta tumorigeneesin leimasi merkittävää lisäystä histologisen tulehduksen pisteet rinnakkain kohonnut IFNy tasolle paksusuolessa viljelysupernatanteista molempien mallien verrattuna terveisiin kontrolleihin (kuva 1b).

IL-10

– /- koliitti tulokset kromosomiin vakaa kasvaimissa

yhteensä neljä IL-10

– /- hiirille kehittyi invasiivisia peräsuolen karsinoomat vailla CIN. Kuviossa 2a on esitetty DNA-histogrammin tulehtuneiden limakalvojen ja esimerkki invasiivisen karsinooman IL-10

– /- hiirissä, jotka molemmat kuvaavat diploidi-proliferatiivisen kuvio. Histogrammit osoittavat lisääntyvissä kasvain ilman merkittävää epävakautta genomin. Yhteensä, kaikki neljä karsinoomat IL-10

– /- hiirissä esitetään diploidinen kuvioita. Samoin kaikki ei-neoplastisia limakalvolla näytteet osoittivat diploidinen histogrammit. Kaikki ei-neoplastisia limakalvon näytteitä, joita on haettu DNA-cytometry ja IHC esitetään merkkejä kroonisen tulehduksen (keskiarvo tulehdus pistemäärä 2,1), kun taas ilman neoplasia varmistettiin histologisesti (kasvain pistemäärä = 0).

( A) edustaja DNA histogrammit logaritmisella asteikolla syöpää edeltäviin ja pahanlaatuinen kudos IL-10

– /- hiirissä. Molemmat histogrammit esittävät diploid proliferatiivisen kuvioita. (B) Hiiriä hoidettiin AOM /DSS osoitti diploidi-proliferatiivinen kuvioita syöpää edeltävä vaiheissa. Vuonna tässä esitetään esimerkkinä CAC, 23% kaikista soluista mitattuna ylittänyt 4,5 c, joka edustaa aneuploidi solupopulaatio.

AOM aiheuttama kasvaimia, jotka syntyvät hoidetuilla hiirillä DSS merkkejä brutto CIN

Ei-pahanlaatuisen limakalvon antamisen jälkeen AOM ja DSS paljasti diploidi malli DNA-sytometrialla (n = 7/7). Krooninen tulehdus oli läsnä kaikissa epäneoplastisis- koepaloja, joiden keskimääräinen tulehdus pisteet 0,5, kasvaimen pisteet = 0.

Avoin ja peräsuolen kasvaimet perusteella AOM /DSS-koliitti esitteli aneuploidia- kanssa merkittävän määrän solujen suurempi 4 c (kuvio 2b). Kaikkiaan 13 ulos 16 karsinoomien syntyneiden AOM /DSS-koliitti osoitti aneuploidia heijastavan CIN. Aneuploidian vaihteli merkitsevästi AOM /DSS-tuumoreita ja IL-10

– /- tuumoreita (p = 0,007).

Proteiinin ilmentymistä CRC-liittyvien geenituotteiden vaihtelee sekä kasvaimen tyypit

kaikissa IL-10

– /- karsinoomat (n = 4), kalvo beeta-kateniinin lokalisointi todettiin, vaikka näin oli kaksi pois 16 AOM /DSS aiheuttama kasvain. Yhdeksässä 16 AOM /DSS aiheuttama karsinoomien, ydin- tai ydin- ja sytoplasmaattinen beeta-kateniinin ilmentymistä havaittiin (taulukko 1). Jakauma beta-kateniinin ilmaisu vaihteli merkitsevästi molemmissa ryhmissä (p = 0,020). Neljässä seitsemästä ei-pahanlaatuinen valvontaa AOM /DSS-koliitti, kalvomaisista lokalisointi havaittiin, kun taas loput kolme limakalvon näytettä leimasi kalvomainen ja sytoplasmaattinen ilme, mikään osoitti ydinvoiman ilme. Kaikki neljä ei-pahanlaatuinen valvonta IL-10

– /- paksusuolentulehdus esitteli membranous ilmentymistä beeta-kateniinin.

IL-10

– /- koliitti sekä IL-10

– /- aiheutettujen kasvaimien, erittäin korkeita p53-proteiinin ilmentymisen havaittiin. Sen sijaan, kun taas p53 ilmentymistä edelleen koholla AOM /DSS-koliitti, se oli merkittävästi pienempi kuin havaittiin IL-10

– /- kasvaimet (p = 0,010, taulukko 1). Lisäksi, esipahanlaatuinen limakalvo AOM /DSS-koliitti paljasti huomattavasti pienempi p53-ilmentymisen kuin AOM /DSS-indusoidun CRC (p = 0,015).

sisällä ryhmä AOM /DSS-indusoidun kasvaimia, oli ei merkittävä korrelaatio läsnä aneuploidian ja beeta-kateniini ilmentymisen (p = 0,580) välillä eikä aneuploidian ja p53 ilmentymistä (p = 0,730). Kasvu osa kasvain oli yleensä suurempi IL-10

– /- aiheuttama kuin AOM /DSS-koliitti aiheuttaman karsinoomien (taulukko 1). Siten korkea ilmentyminen Ki67 havaittiin premaligni limakalvon IL-10

– /- eläimet, kun se oli alhainen premaligni vaiheissa AOM /DSS-indusoidun paksusuolentulehduksen (taulukko 1, kuva 3).

keskustelu

Aiemmin huomattavasti suurempi aneuploidian heijastaa kromosomi epävakauden ihmisen paksusuolen tulehdus liittyviä karsinoomia verrattuna satunnaisesti vastine on kuvattu [10]. Sen arvioimiseksi, onko kanonisen hiiri malleja koliitti liittyvän syövän synnyn olemassa, jotka yhtä esiintyy merkkejä CIN, tutkimme ploidisia kuvioita hiiren koliitti liittyvän kasvaimet Kahden hiiren mallia CAC.

IL-10

– /- hiirissä, kasvaimet kehittävät, jotka muistuttavat ihmisen adenokarsinoomia, joka on kuvattu aiemmin [26], [31], [32]. Tulehduksen vakavuus voi pahentaa ja pahanlaatuisiksi kiihdyttää lisäanta- selekoksibin [25]. Karsinoomat IL-10

– /- /selekoksibi malli ei ilmennyt merkkejä perimän epävakaisuuden tutkimuksessamme. Päinvastoin, kasvaimia, jotka syntyvät, AOM /DSS-malli esitetään brutto aneuploidiaan useimmissa tapauksissa. Vaikka määrä näytteitä tutkittiin erosivat molemmissa ryhmissä huomattavasti vähemmän IL-10

– /- ryhmä, erot aneuploidian saavuttaneet merkitystä. Läsnäolo biologisia eroja sertiä molemmissa malleissa on lisäksi ehdotettu ero ilmentyminen beeta-kateniinin.

IL-10

– /- hiirillä ei ulkoista karsinogeeni tarvitaan aiheuttamaan kasvaimien syntyyn. Kuitenkin täydellinen puuttuminen kriittisen sytokiinin suoliston homeostaasiin edustaa Epäfysiologiset tilassa, vaikka muuttunut IL-10 ilmentyminen on aiemmin liittynyt ihmisen UC [33], [34]. Tuloksemme osoittamaan, että krooninen tulehdus johtuen IL-10 puutos ei indusoi CIN, läsnäolosta huolimatta vakava paksusuolen tulehdus. Lisäksi, edelleen karakterisointi kasvainten osoittaa, että beta-kateniinin ilmentymistä premaligni vaiheissa ja karsinoomat rajoittuu solukalvon. Tämä näyttää ovat vastakohtana ihmisen sertiä, jossa APC mutaatiot arvellaan estävän beeta-kateniinin hajoamiseen ja siten edistää tumaansiirtymiseen, vaikka yksityiskohtaisia ​​tietoja ihmisellä puuttuvat [18], kun taas korkea ilmentyminen fosforyloidun p53 havaittu näissä kasvaimissa on yhtenevä johtaa ihmisen UC-liittyvä karsinoomien [13].

AOM /DSS koliitti, voitaisiin ulkoista karsinogeeni tarvitaan aiheuttavan pahanlaatuisia muutosta. Hallinto DSS – ja näin aloittaminen krooninen koliitti – kiihdyttää maligniteetti kehitys, mikä tekee mallin erityisen kiinnostavaa tutkimusta koliitin liittyvän syövän synnyn [22], [35]. Täällä, voisimme osoittaa, että suuri osa viisumikeskusten joita syntyy kun AOM /DSS hoito näyttelytila ​​CIN (81,25%). Tämä havainto on erityisen merkittävä, koska se on aiemmin osoitettu, että CRC: t indusoitiin antamalla AOM yksin, minkä vuoksi syntyy puuttuu krooninen tulehdus, ovat geneettisesti stabiileja [23]. Näin ollen voidaan arveltu, että samankaltainen kuin ihmisen paksusuolen tulehdus, hiiren paksusuolen tulehdus aiheuttaa tai merkittävästi edistää CIN. AOM /DSS paksusuolentulehdus voisi siten tarjota tehokas malli tutkia kehittämiseen tulehdusperäistä CIN

in vivo

. Lisäksi AOM /DSS tuumoreita, sytoplasmaattinen ja /tai tumaansiirtymiseen beta-kateniinin havaittu, mikä osoittaa aktivoinnin Wnt-signalointireitin [18], [36].

Expression fosforyloidun p53 korotettiin AOM /DSS aiheutettujen kasvaimien ohella kasvua kasvun murto verrattuna syöpää edeltäviin vaiheisiin. Ei yhdistyksen välillä läsnäolo aneuploidian ja p53 tai beeta-kateniinin voitiin osoittaa, mikä saattaa johtua riittämätön määrä (n = 3 diploideille ryhmä). Suuremmat tutkimukset olisi otettava esiin ero ilmentyminen kasvaimeen liittyvien proteiinien suhteen CIN tässä hiirimallissa.

Kummassakaan Molemmissa malleissa tutkittu tässä tutkimuksessa, makroskooppiset etäispesäkkeitä voitu havaita. Tämä on linjassa aiempien havaintojen [26], [37], mutta on ristiriidassa CRC ihmisillä, jossa maksametastaaseista esiintyy jopa 50%: lla potilaista aikana sairauden [38]. Tässä yhteydessä väistämättä rajoituksia kääntää biologista havaintoja hiiristä osaksi ihmisen toiminta on syytä arvostaa. CIN in tulehdukseen liittyvä syövän synnyn erityisesti telomere lyhenemistä voisi olla suurempi perimän epävakaisuuden [39]. Koska eroja hiiren ja ihmisen telomeerivasta biologian hiirillä enää telomeres ja konstitutiivisen telomeraasiaktiivisuuteen [40], se saattaa olla kyseenalaista käsitellä telomeerivasta poistuman AOM /DSS malli. Kuitenkin e. g. hiiren epiteelisyöpien, telomeerien ja telomeraasi toimintahäiriöitä on osoitettu olevan ratkaisevaa kasvainten kehittymiseen, esimerkkinä mahdollista roolia telomere biologian hiiren karsinogeneesissä [41]. Lisäksi muita mekanismeja kuten kromatidin koheesio viat on liittynyt CIN CRC, joihin liittyy proteiinien hyvin samankaltainen ihmisellä ja hiirillä ja tutkittu molemmat organismit [42], [43].

Yhteenvetona IL 10-hiirillä eivät edusta sopiva eläinmalli tutkimuksen CIN reitin syövän. Lisäksi kasvaimen kehitystä tässä mallissa ei ole riippuvainen beeta-kateniinin translokaatio.

Päinvastoin, jossa läsnäolo aneuploidian ja beeta-kateniinin aktivointi, malli AOM /DSS-koliitti saattaa kuitenkin arvokas väline saada yksityiskohtaisemman käsityksen molekyyli arkkitehtuuri tulehdukseen liittyvä syövän synnyn ja mekanistisesti tutkia koliitti liittyvän syövän synnyn ja kiinnitetään erityistä huomiota CIN.

Kiitokset

kirjoittajat haluavat ilmaista kiitollisuutensa Katja Grollich varten suorittamista immunohistokemia ja Gisela Grosser-Pape erinomaista apua valmistelussa dioja DNA-cytometry. Avustuksia Werner ja Clara Kreitz Foundation ja Saksan Cancer Aid (DKH # 108446:

Pohjois-Saksan Tumorbank kolorektaalisyövän

) ovat kiitettävällä.