Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tulehduksellinen suolistosairaus (IBD) voi johtaa lisääntyneeseen riskiin sairastua peräsuolen syöpä ( CRC). Tutkimuksen tavoitteena oli tutkia vahvistaa malli yhdistetyn luuydinsiirtoa (BMT) ja koliitti liittyvä peräsuolen syöpä (CAC) ja määritellä osuus BM peräisin olevien solujen aikana liittyvää tulehdusta syövän synnyn. Olemme perustaneet malli BMT käyttää vihreän fluoresoivan proteiinin (GFP) siirtogeenisiä hiiriä, jonka jälkeen AOM /DSS aiheuttama CAC, ja suoritetaan konfokaalimikroskopialla analyysi

in vivo

elävää kudosta ja jäädytetty tuumorisektioiden. Meidän kuvantamisen analyysit osoittivat, että GFP-positiivisten solujen laajasti soluttautuneet kasvain strooman ja että jotkut WGA ja GFP tai CD31 ja GFP kaksinkertainen positiivisia soluja havaittiin limakalvon kasvain aluksia. Virtaussytometria-analyysi kasvaimeen infiltroituvat solut osoittivat, että GFP-positiiviset CD11 c + DC-soluja kolmasosa GFP + /CD11C- soluja, ja että puolet näistä DC: iden (0,96% vs. 1,02%) olivat GFP-positiivisia BM-johdetut solut. Suurin osa CD4

+ T-solut olivat GFP-negatiivinen (12,02% vs. 1,9%), ja olemme löytäneet uuden CD4

+ CD11 c

+ DC osajoukko (0,34% vs. 1,64%). Lopuksi määrittelimme jakelu BM johdettujen endoteelisolujen CD11 c

+ DC ja CD4

+ T-solujen kasvaimia. Tämä malli voisi olla käyttökelpoinen selvittämiseksi erilaisia ​​BM-johdettu solutyyppejä ja toiminnot etenemisen aikana koliitti liittyvien peräsuolen syövän.

Citation: Xiao CX, Wang HH, Shi Y, Li P, Liu YP, Ren JL, et ai. (2013) Distribution of Bone-Marrow-Derived endoteelisolujen ja immuunijärjestelmän solut on Hiiren Colitis-Associated peräsuolen syövän Model. PLoS ONE 8 (9): e73666. doi: 10,1371 /journal.pone.0073666

Editor: Shi Yu Yang, University College London, Iso-Britannia

vastaanotettu: toukokuu 12, 2013; Hyväksytty: 19 heinäkuu 2013; Julkaistu 10 syyskuuta 2013

Copyright: © 2013 Xiao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat National Natural Science Foundation of China (nro 81072013 ja 91229201), perustutkimus rahastoja Keski yliopistojen Kiinassa (nro 2010111082) ja Foundations of Health Bureau of Xiamen Kiinassa (nro 3502Z200940010). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on yksi johtavista syistä syövän liittyvät kuolemat läntisellä pallonpuoliskolla. Sen kehittäminen tapahtuu satunnaisesti tai voi olla pitkäaikainen komplikaatio kroonisen tulehduksen, kuten nähdään tulehduksellinen suolistosairaus (IBD) [1]. Kumulatiivinen riski hankkia CRC voi nousta noin 20% potilailla, joilla on IBD, jotka elävät 30 vuotta taudin [2,3]. Koliitti-liittyvän paksusuolen syöpiä kehittyy kroonisesti tulehtuneen limakalvon ja uskotaan kehittää vaiheittain, jossa tulehtunut limakalvo synnyttää dysplasia ja lopulta syöpään. Krooninen tulehdus uskotaan edistävän syövän synnyn. Kliiniset tutkimukset ovat osoittaneet, että potilailla, joilla koliittia on 2- 8-kertainen suhteellinen riski peräsuolen syöpä verrattuna väestöön [4].

Hiiret annettu DSS aiheuttamaan tulehdukseen (AOM /DSS) osoittavat Lisääntynyttä ja laajuus paksusuolen kasvaimen muodostumisen verrattuna villityypin hiirissä [5]. Yksittäisiä komponentteja synnynnäisen ja adaptiivisen immuunivasteen on myös osallisena karsinogeneesissä [4]. Proinflammatoristen tekijöiden synnynnäisen ja adaptiivisen immuunijärjestelmän edistää kehitystä ja kasvua paksusuolen neoplasia. Luuytimestä johdettuja kantasoluja, jotka edistävät tulehdusvastetta ja kasvaimen uudissuonittumisen, on ehdotettu on erilaisia ​​rooleja syövän etenemiseen. Kuitenkin tiedetään vähän rooli luuytimestä peräisin olevia soluja in koliitti liittyvän paksusuolen syövät (CAC) [6].

Luuytimen peräisin olevat solut ovat yllättävän muovia [7], joskus olettaen toiminnot ulkopuolella hematopoieesijärjestelmän. Luuydinsiirrossa (BMT) vastaanottajat, tutkijat ovat havainneet luovuttajalta peräisin olevien solujen erilaisia ​​ei-hematopoieettisten kudosten, kuten luurankolihasten, sydänlihaksen, verisuoniendoteelissä, hermosolujen ja epiteelisolut [8]. Luuytimestä peräisin olevat solut ovat myös osoitettu toistaa useita rooleja kasvainten kehittymiseen. Luuytimestä peräisin endoteelisolujen kantasolujen (EPC) edistää kasvaimen uudissuonittumisen, kun taas solut kehittymätön myeloidista, että on erilaisia ​​rooleja taudin etenemiseen, kuten syövän aloittamista solut toimivat kasvaimeen liittyvät fibroblastit, että orchestrate desmoplastic reaktio [9].

vakuuttavaa näyttöä tukee käsitystä, että luuytimestä peräisin olevia soluja on tärkeä rooli säätelyssä kasvainangiogeneesissä ja etenemiseen [10-12] ja saattaa osaltaan tuumoriangiogeneesissa erittämällä pro-angiogeenisten tekijöiden tai lisätä suoraan kasvaimeen verisuonisto [13,14]. Kiertävä EPC liikkeelle luuytimestä on havaittu perifeerisessä veressä useiden lajien ja niiden on osoitettu olevan osallisena neoangiogeneesiin kasvaimissa sekä muodostetaan uusia aluksia jälkeen trauma, palovamma, ja sydäninfarkti [15-17 ]. Lisäksi olemme aiemmin dokumentoitu, että hiiren luuytimestä peräisin CXCR4-positiivisia progenitorisolujen edistää kasvaimen kasvua edistämällä kasvaimen angiogeneesiä [18].

kuitenkin kertynyt näyttöä siitä, että luuytimestä peräisin olevien kantasolujen on erilaisia ​​rooleja tulehdusvasteissa aikana syövän etenemiseen. Luuytimestä peräisin tulehduksellisten solujen kasvaimen mikroympäristössä edistää kasvaimen angiogeneesi, tuumorin lisääntymistä, eloonjääntiä ja invaasion ja estää spesifisen anti-kasvain immuunivasteen CD4 ja CD8-lymfosyyttien [19]. Näin ollen, on tärkeää määritellä suhde luuytimestä peräisin olevia soluja ja erityisiä immuunijärjestelmän solujen, sytokiinien ja kemokiinien aikana karsinogeneesiin. Kaikki lymfosyytit ovat peräisin luuytimessä yhteisestä lymfaattisen kantaisä ennen erilaistumaan niiden erilliset lymfosyyttien tyyppejä. B-solut kypsyvät B-lymfosyyttejä luuytimessä, kun taas T-solut vaeltavat ja kypsä kateenkorvassa. Sen jälkeen kypsyminen lymfosyytit anna liikkeeseen ja oheislaitteiden imukudoselinten, jossa he etsi hyökkääviä taudinaiheuttajia ja kasvainsoluja [20]. Muunlaiset solujen, mukaan lukien dendriittisolut (DC), neutrofiilit, ja eosinofiilit, on myös raportoitu edistää kasvaimen angiogeneesiä [13,21]. DC katsotaan olevan tärkeä rooli kasvainten immunologiseen valvontaa nostattamaan kasvain spesifisten T-solujen vasteita. Viimeaikaiset todisteet osoittavat, että DC voi myös edistää tuumoriangiogeneesissa vapauttamalla proangiogeeninen tekijät, kuten VEGF ja IL-8, vastauksena hypoksia [22].

Nämä havainnot yhdessä luontainen plastisuus luun marrow- peräisin olevat solut ja tulehdussolujen vasteena microenvironmental vihjeitä ja pysyvyys polarisoivasta signaalien kasvaimen mikroympäristössä, viittaavat siihen, että luuytimestä peräisin olevia soluja kasvaimen mikroympäris- voisi lopulta tuottaa angiogeneesiä ja pro-invasiivisen tekijöitä, jotka edistävät kasvaimen etenemistä [19] .

tässä tutkimuksessa olemme perustamassa yhdessä BM elinsiirrot ja koliitti liittyvän peräsuolen syövän malli määritellä jakelua BM johdettujen endoteelisolujen CD11 c

+ DC ja CD4

+ T-solujen kasvaimia. Tämä malli tarjoaa tehokkaan työkalun tutkimiseen panosta monipuolinen BM peräisin olevien solujen aikana koliitti liittyvä peräsuolen syövän etenemiseen ja voi paljastaa uusia BM-johdettu solutyyppejä ja toimintoja, jotka voitaisiin soveltaa tulevaisuudessa hoitostrategioita.

Materiaalit ja menetelmät

Eläimet ja solujen

C57BL /6, BALB /c- ja GFP hiiret hankittiin laboratoriosta eläin keskus, Shanghai, Kiina. Kaikki toimenpiteet, joissa koe-eläimillä suoritettiin protokollien mukaisesti komitean hyväksymiä Eläinten Research yliopiston Xiamen ja noudattanut oppaan Care ja käyttö Laboratory Animals (NIH-julkaisu nro 86-23, tarkistettu 1985). Hiiriä pidettiin tietyllä patogeenittomassa (mukaan lukien

Helicobacter

vapaa ja parvovirus-vapaa) ympäristö ja käytettiin yleensä välillä 6 ja 8 viikon iässä. CT26-WT ja CMT93 solut olivat peräisin BALB /c- ja C57BL /6-hiirille. CT26-WT ja CMT93 soluja (kaupallisesti hankittiin ATCC, USA) viljeltiin DMEM: ssä, ja jota oli täydennetty 10% naudan sikiön seerumia, 100 U /ml penisilliiniä, 100 mg /ml streptomysiiniä, 2 mM glutamiinia, 1 mM natriumpyruvaattia ja 0,1 mM ei-välttämättömiä aminohappoja 37 ° C: ssa ja 5% CO2.

Luuydinsiirto

luuydintä kuolettavasti säteilytettyä C57BL /6-hiirten rekonstituoitiin siirtoistutusten luuytimen soluja GFP kimeerinen hiiriä (GFP-BMT hiiret). Lyhyesti, villityypin C57BL /6-hiiriä kuolettavasti säteilytettiin annoksella 950 rad, jonka jälkeen 2×10

6 luuytimen soluja GFP-hiiriin ruiskutettiin häntälaskimoihin säteilytetyn vastaanottajan hiirillä. Luuytimen solujen GFP-BMT hiiriä arvioitiin 4 viikkoa luuydinsiirron jälkeen, ja aste kimerismi mitattiin virtaussytometrialla. Yli 90% soluista kiertävässä mononukleaariset solut korvattiin GFP-positiiviset solut näissä koeolosuhteissa.

Colitis liittyvä peräsuolen syöpä (CAC) ja kasvaimen istutuksen mallin

GFP -BMT hiiriin injektoitiin ip 10 mg /kg AOM 0,2 ml suolaliuosta. Viikon kuluttua AOM annon, 3% DSS annettiin juomavedessä 7 päivän ajan ja sitten vaihtuu normaaliin juomaveteen 14 päivää. Tämä menettely toistettiin 3 sykliä, jonka jälkeen kytkin tavallista vettä. Kasvaimia indusoitiin s.c. injektio 2×10

6 CT26-WT ja CMT93 solujen kylkeen 4 viikon kuluttua luuydinsiirron. Suuri kasvaimia havaitaan tyypillisesti 4 viikon kuluttua kasvaimen istutuksen, ja kasvaimen kudokset kerättiin histologista analyysiä.

Konfokaalimikroskopia

GFP-BMT CAC hiiret, verisuonet värjättiin 50 ug Alexa Fluor® 647 WGA (Molecular Probes, Invitrogen), joka ruiskutettiin retrorbitally. Seitsemän minuutin kuluttua Alexa Fluor® 647 WGA hallinto, hiiret tapettiin CO2 tukehtumisen. Kaikki toimenpiteet suoritettiin anestesiassa (0,5 ml Avertin, i.p.). Kudokset poistettiin välittömästi, avattujen pitkittäinen viilto ja huuhdeltiin PBS: lla. Elävän kasvainkudoksen näytteet kuvattiin Bio-Rad Radiance 2000 konfokaalimikroskoopilla (Bio-Rad, Hercules, CA). Kuvan hankinta suoritettiin Laser Sharp Skannausohjelmiston (Bio-Rad), ja 3D rekonstruktiot saatettiin päätökseen Volocity ohjelmisto (Waltham, MA).

Virtaussytometrianalyysi

Tuumorikudos eristettiin GFP-BMT CAC hiiret ja paloitellaan 1 mg /ml kollagenaasi ⅳ. Kollagenaasikäsittelyn suoritettiin kollagenaasi liuos 45 minuutin ajan 37 ° C: ssa. Eluoidut solut johdettiin 70 ul: n solusiivilän. Soluja sentrifugoitiin 10 minuutin ajan 1400 rpm: llä huoneen lämpötilassa, ja kerätään. Sitten solut inkuboitiin 10%: aasi seerumia ja Fc estetty (BD Pharmingen, San Jose, CA) 20 minuutin ajan 4 ° C: ssa, minkä jälkeen ne värjättiin fluoresoivalla konjugoiduilla vasta-aineilla. APC-konjugoitu anti-hiiri-CD11 c (HL-3) ja PE-konjugoidun anti-hiiri-CD4 (OX-38) hankittiin BD Pharmingen (San Diego, CA) ja käytettiin FACS-analyysiä. Solut analysoitiin FACSCaliber sytometrillä (BD Bioscience, San Diego, CA) ja sitten analysoitiin käyttämällä FlowJo ohjelmistoa (Puu Star, Ashland, OR).

immunofluoresenssi

C57BL /6-hiiret tapettiin CO

2 tukehtumisen, ja paksusuolen kudokset poistettiin välittömästi, vahvistettu 4-5 tuntia huoneenlämmössä GFP kiinnittäminen puskurissa, upotettu Tissue-Tek lokakuu yhdistettä (Miles Inc., Elkhart, iN) ja pakastettiin nopeasti ja säilytettiin -80 ° C: ssa, minkä jälkeen 5-10 um: n leikkeitä leikattiin kryostaatissa ja siirretään lasi mikroskoopin pre-päällystetty poly-lysiinillä (Sigma-Aldrich). Sitten leikkeitä kiinnitettiin kylmässä asetonissa 20 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Kiinteät osat pestiin kolme kertaa PBS: llä ja inkuboitiin 5% tavallista aasi seerumia ja 0,02% BSA-PBS: ssä yhden tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Ensisijainen käytetyt vasta-aineet olivat spesifisiä CD31 (alkuperäisestä pitoisuudesta, 0,5 mg /ml; laimennus, 1/500, eBioscience), CD4 (laimennus, 1/200, BD), CD11 c (laimennus, 1/1000, BD), ja Ly6C (laimennus, 1/100, BD). DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA) käytettiin tuman värjäytymisen.

Tilastollinen analyysi

Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD. Vertailut ryhmien välillä analysoitiin käyttäen Studentin

t

-testi.

P

0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

perustaminen yhdistämällä luuydinsiirron ja koliitti liittyvä kolorektaalisyöpä malli

Wild-type C57BL /6-hiiriä kuolettavasti säteilytetään yhteensä annos 950 rad, jonka jälkeen 2×10

6 luuytimen soluja GFP-hiiriin ruiskutettiin häntälaskimoihin säteilytetyn vastaanottajan hiirillä. Neljä viikkoa luuydinsiirron jälkeen, paksusuolen kudosta eristettiin GFP-BMT hiirille konfokaalimikroskopialla analyysi, ja aste kimerismi mitattiin virtaussytometrialla. Huomasimme, että suoli oli täynnä vihreän fluoresenssin, ja yli 90% verenkierrossa mononukleaaristen solujen vastaanottajan hiiret olivat GFP-positiivisia (kuvio 1 C, D).

(A) MAKROSKOOPPINEN näkymässä on useita paksusuolen kasvaimia distaalisessa kaksoispisteet hiirten mallissa. (B) H Tämä vuorottelu toistettiin 3 sykliä. Havaitsimme suoliston kasvaimia useimmissa hiiret, ja kasvaintyypeissä vahvistettiin histologista analyysiä varten (kuvio 1A, B).

Bone-luuytimestä johdettujen endoteelisolujen osaltaan angiogeneesin aikana koliitti liittyvät kolorektaalisyövän

sen tutkimiseksi, BM-johdettujen endoteelisolujen osaltaan kasvaimen angiogeneesiin tässä mallissa, olemme analysoineet GFP endoteelin kasvainten GFP-BMT hiirissä paksusuolentulehduksen indusoinnin liittyvän paksusuolen syöpä. Konfokaalimikroskopia analyysi elävien kudosnäytteiden osoitti, että GFP-positiiviset solut laajasti suodattunut kasvaimen peruskudos, ja jotkut solut juuttuneet jonka WGA-positiivinen marginaali kasvaimen endoteelin. WGA ja GFP kaksinkertainen positiivisia soluja havaittiin vuori alukset (kuvio 2A). Jäädytetyt kasvaimen leikkeet värjättiin anti-CD31-vasta-ainetta (n = 5), ja kuten on esitetty kuviossa 2B, GFP-positiivisten solujen tunkeutunut kasvaimen endoteelin. Yhdessä meidän tiedot osoittivat, että BM-johdettujen endoteelisolujen osaltaan koliitti-liittyvän paksusuolen syövän angiogeneesiä.

(A) Verisuonet värjättiin 647 WGA (sininen), joka injektoitiin retrorbitally. Konfokaalimikroskopia analyysi elävää kudosta yksilöitä osoitti, että BM-peräisin olevat solut (vihreä) tunkeutunut strooman, ja osa soluista oli päärme, jonka WGA-647-positiivinen (sininen) marginaali kasvaimen endoteelin. Double-positiivisia soluja havaittiin vuori aluksia. (B) Jäädytetyt kasvaimet leikkeet värjättiin anti-CD31-vasta-aineen havaitsemiseksi BM-johdettujen endoteelisolujen (vihreä). GFP-positiiviset solut (vihreä) kanssa CD31-positiiviset marginaalit nähtiin kasvaimen endoteelin. C (CMT93) ja D (CT26) -ksenografti tuumorikudoksista eristetty BM elinsiirron hiiristä värjättiin anti-CD31 (punainen) vasta-aineita. GFP-positiivisia soluja havaittiin noin kasvain alukset, ja jotkut vuorattu endoteeliin.

Lisäksi vastaa meidän edellisessä raportissa (22), havaitsimme GFP-positiivisten endoteelin CMT93 ja CT26 ksenograftikasvaimina GFP-BMT hiirissä (kuvio 2C, D).

Distribution luuytimen peräisin olevien CD11 c

+ dendriittisolujen ja CD4

+ T-solujen koliitti liittyvien kolorektaalisyöpä

määrittämiseksi jakelu BM-johdettujen inflammatoristen solujen kasvaimen mikroympäristössä, olemme analysoineet hiirillä, jotka on jalostettu luuydinsiirron seuraa paksusuolentulehduksen indusoinnin liittyvien peräsuolen syövän konfokaalimikroskopialla. Kuten näyttää kuviossa 3A, B ja C, kasvaimen kudokset laajasti soluttautuneet CD11 c

+, Ly-6C ja CD4

+ immuunisolujen, joista useimmat ilmaisivat GFP. Lisäksi olemme havainneet GFP-positiiviset CD11 c + DC: iden ja CD4 + T-solujen kasvain CMT93 ja CT26 ksenograftikasvaimina GFP-BMT hiirissä (kuvio 3D, E, F ja G).

(A C) immunofluoresenssivärjäyksellä yhdistetyn BMT ja koliitti liittyvä kolorektaalisyöpä näytteitä anti-CD11 c, Ly-6C ja CD4-spesifisten vasta-aineiden (punainen). (D-E) CMT93 tuumorikudoksissa eristetty BM elinsiirron hiiret värjättiin anti-CD11 c: n ja CD4-spesifistä vasta-ainetta (punainen). (F-G) CT26 tuumorikudoksissa eristetty BM-istutetut hiiret värjättiin anti-CD11 c: n ja CD4-spesifistä vasta-ainetta (punainen).

kvantitatiivisesti määrittää jakelu BM-johdettu CD11 c + DC ja CD4 + T-solut meidän koliitti liittyvien kolorektaalisyöpä malli, me eristetty kasvaimeen infiltroituvat solut hiirestä kasvain kudosten ja suoritettiin FACS-analyysi. Meidän eristäminen protokollan tiedot osoittivat, että yksi kasvaimeen infiltroituvat solut, 4,16 ± 0,12% oli GFP-positiivisia soluja, 14,2 ± 0,34% oli CD4 + soluja, ja 2,05 ± 0,23% oli CD11 c + DC: iden (kuvio 4A). Yllättäen GFP-positiiviset CD11 c + DC-soluja kolmasosa GFP + /CD11C- soluja, ja puolet DC: iden (0,96% vs. 1,02%) olivat GFP-positiivisia luuytimen alkuperäisten solujen. Suurin osa CD4 + -T-soluja GFP-negatiivinen (12,02% vs. 1,9%). Mielenkiintoista on, olemme löytäneet uuden CD4 + CD11 c + DC osajoukko (0,34% vs. 1,64%) tässä mallissa (kuvio 4B, C).

(A) eristäminen soluja kasvainkudoksen seuraa FACS-analyysi osoitti, että osuus luuytimestä peräisin olevia soluja, CD4

+ -solujen ja CD11 c

+ DC paksusuolessa kasvainkudoksessa. (B-C) kokoonpano CD11 c

+ ja CD4

+ T-soluja, jotka ovat peräisin luuytimestä. (C) Pylväät edustavat keskiarvoa ± SD; Näyte analyysit tehtiin kolmena kappaleena.

Keskustelu

Tulehduksellinen suolistosairaus (IBD) voi johtaa lisääntyneeseen riskiin sairastua peräsuolen syöpä (CRC). Molekyyli- patogeneesi IBD-liittyvää peräsuolen syövän eroaa satunnaista CRC [23]. Tulehdus on keskeinen tekijä syövän synnyn, ja krooniset tulehdussairaudet, kuten IBD aloittaa monimutkaisia ​​reittejä neoplasiaksi [24]. Tässä tutkimuksessa käytimme voimakas syöpää aiheuttava aine, AOM, joka indusoi DNA adduktit kautta alkyloivan lajeja. Nämä adduktit muodostuu kovalenttisia sidoksia reaktiivisen karsinogeeni ja perimän DNA, jolloin mutaatiot aikana DNA: n korjaukseen ja edistää kasvainten kehittymiseen. Tällaiset mutaatiot sisältävät hiiren geneettisiä mutaatioita kasvainten synnyssä väyliä (APC, p53, MSH2) [25]. Pitkäaikaisessa annostelussa tai toistuvien DSS, kemikaali, joka aiheuttaa epiteelivamma, voi aiheuttaa krooninen koliitti ja myöhemmin dysplasia jyrsijöillä [26].

Kuluneen vuosikymmenen aikana, huomattavaa on edistytty ymmärtämisessä kantasolujen biologiaan ja rooli kantasolujen sairauksien kuten CRC [27]. Erityisesti liittyviä löydöksiä valvontaan kantasolujen lisääntymistä ja kuinka dysregulaatio leviämisen johtaa kasvaimen synnyssä ovat olleet eturintamassa. Niinpä loimme yhdistetty luuydinsiirron ja koliitti liittyvä peräsuolen syövän malli määrittelemään ja sen toiminta BM johdettujen solujen paksusuolensyöpä.

Äskettäin kiertävä EPC liikkeelle BM on havaittu ääreisverenkierron useiden lajien ja niiden on osoitettu olevan osallisena neoangiogeneesiin kasvaimissa sekä muodostetaan uusia aluksia jälkeen trauma, palovamma, ja sydäninfarkti [28,29]. Useimmat kiinteät kasvaimet vaativat verisuonten syöttö tarjota happea ja ravinteita parantaa kasvaimen etenemistä ja invaasio. Kasvain voi joko hyödyntää olemassa olevia aluksia, tai rekrytoida ja mobilisoida BM peräisin oleva solu aiheuttaa uudissuonittumisen [30]. EPC peräisin BM peräisin oleva solu ja on kapasiteettia erilaistua kypsiksi endoteelisolujen, edistää monimutkainen prosessi kasvaimen uudissuonittumisen. On näyttöä siitä, että kasvaimen angiogeneesiä voidaan stimuloida tuumorisolujen erittyy CXC-kemokiini ligandien CXCL5 ja CXCL8, kautta yhteiseen reseptoriin CXCR2 [31]. Audollent ym osoittavat, että Luuytimen johdettu endoteeli- ja hematopoieettisten esiasteiden solujen parantaa etäpesäke paksusuolisyövän potilaalle tehdä nude hiirimallissa [32]. Edellisessä raportti osoitti, että BM-johdettujen endoteelisolujen havaittiin ksenograftikasvaimissa käyttäen Colon38 ja Panco2 soluihin [18]. Tässä tutkimuksessa osoitimme kautta konfokaalimikroskopia analyysi että BM johdettuja endoteelisolujen osallistui koliitti liittyvien paksusuolensyöpä angiogeneesiin. Lisäksi havaitsimme ilmaus GFP endoteelissä CMT93 ja CT26 tuumoriksenografteissa GFP-BMT hiiriä, vastaa meidän edellisessä raportissa [18].

Kuten muillakin kiinteitä pahanlaatuisia kasvaimia, peräsuolen ja paksusuolen tulehdus liittyvät kasvaimet ovat soluttautuneet eri immuunisolujen [33]. Solut luonnollinen immuniteetti, kuten neutrofiilien, syöttösolut, luonnollisten tappajasolujen (NK-solut), dendriittisolut, ja kasvaimeen liittyvät makrofagit, voidaan helposti havaita näiden kasvainten. Lisäksi kehittyneet kasvaimet rekrytoida erityisiä myelooisessa osajoukkoja, jotka edustavat fenotyypiltään heterogeeninen mutta toiminnallisesti samanlainen väestö CD11

+ Gr1

+ soluja, jota kutsutaan nimellä myeloidinen johdettuja suppressorisolut [34,35]. Nämä solut jakaa joitakin ominaisuuksia, joilla monosyyttien, makrofagien, neutrofiilien ja DC ja auttaa tukahduttaa antitumor immuunivasteita ja kasvaimen angiogeneesiä. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että BM-johdetut APC: t ovat ensisijaisesti vastuussa induktion kasvainten aiheuttaman T-solujen toleranssin [36]. BM-johdettu DC, klassinen merkkiaine CD11 c, voi kaapata ja läsnä ääreiskudoksessa antigeenejä naiivi CD8

+ T-soluja, mikä johtaa niiden poistamiseen [37]. On myös edellyttää käsittelyn parenkymaalinen itse antigeenin isännän DC induktio CD4

+ T-solujen toleranssin kasvain. BM-johdettu DC BALB /c-hiirten pystyvät edistämään laajentumista CD4

+ CD25

+ Foxp3

+ T-solujen

in vitro

ja että tämä tapahtuu riippumatta kypsymisasteeseen DC: istä kuin kypsät ja epäkypsät solut pystyvät laajentamaan Foxp3

+ solupopulaation [38,39]. Tämä immuuni tietämättömyys ja immuunijärjestelmän toleranssi mekanismeja edistää kasvainten kehittymiseen. Osoitimme jakelu BM-johdettujen tulehdussolujen (CD11 c

+, Ly-6C ja CD4

+ T-solut), kasvaimen mikroympäristössä. Yllättäen GFP-positiiviset CD11 c + DC-soluja kolmasosa GFP + /CD11C- soluja, ja puolet DC olivat GFP-positiivisia BM alkuperäisten solujen. Olemme myös löytäneet uuden CD4

+ CD11 c

+ DC alaryhmä (0,34 vs. 1,64) meidän koliitti liittyvien kolorektaalisyövän malli. Solut adaptiivisen immuunijärjestelmän rekrytoidaan peräsuolen ja paksusuolen tulehdus liittyvä kasvaimiin, jossa he pelata joko pro- tai antitumorigenic rooleja [40]. T-soluja, esimerkiksi vaaditaan paitsi tulehduksen, syövän kehitystä, ja syövän etenemistä, mutta myös syövän vastaista immuniteettia [41].

onnistunut yhdistetyn BM elinsiirrot ja koliitti liittyvä kolorektaalisyövän malli. Tämä malli tarjoaa tehokkaan työkalun tutkimiseen panosta monipuolinen BM peräisin olevien solujen etenemisen aikana koliitti liittyvien peräsuolen syövän ja voivat paljastaa uusia BM-johdettu solutyyppejä ja toimintoja, jotka voitaisiin soveltaa tulevaisuudessa hoitostrategioita.