Krooninen sairaus

tiivistelmä

Eturauhassyöpä on yleisin syöpä miehillä, ja useimmat potilaat ovat lokalisoitu taudin aikaan diagnoosi. Kuitenkin 4% jo etäpesäkkeitä. Epiteelin-mesenkymaalitransitioon on perustavanlaatuinen prosessi karsinogeneesissä, jonka on osoitettu olevan osallisena eturauhassyövän etenemiseen. Päätapahtuma epiteelin-mesenkymaalitransitioon on tukahduttaminen E-kadheriinin by transkriptiotekijät, mutta prosessi säädellään myös MikroRNA. Tutkimuksen tavoitteena oli analysoida geenin ja microRNA ilmentymisen mukana epiteelin-mesenkymaalitransitioon in paikallinen eturauhassyöpä ja metastasoituneen eturauhassyövän solulinjoissa ja korreloivat kliinispatologiset havainnoista. Tutkimme 51 tuore kudosnäytteitä potilailla, joilla paikallinen eturauhassyöpä (PCA) hoitaa eturauhasen ja kolme metastaattisen eturauhassyövän solulinjoissa (LNCaP, DU145, PC3). Ilmaisu 10 geenien ja 18 miRNA arvioitiin reaaliaikaisella PCR: llä. Potilaat jaettiin ryhmiin mukaan Gleason pisteet, patologinen vaiheessa ennen leikkausta PSA, biokemiallisten toistuminen, ja riskiryhmään korrelaatio kliinis havainnoista. Suurin osa paikallista PCa tapauksissa osoitti epiteelin fenotyyppi, yliekspressioon E-kadheriinin ja ali mesenkymaaliseen markkereita. MiRNA-200 perheenjäseniä ja miRNA 203, 205, 183, 373, ja 21 yliekspressoituina taas miRNA 9, 495, 29b, ja 1 oli ali-ilmentynyt. Low-ekspressiotasot miRNA 200b, 30a, ja 1 oli merkitsevästi yhteydessä patologinen vaiheessa. Alempi ilmentyminen miR-200b oli myös liitetty Gleason pisteet ≥8 ja lyhyemmät biokemiallinen uusiutumista elinaikaa. Lisäksi matala-ekspressiotasot miR-30a ja korkea-ekspressiotasot vimentiinista ja Twist1 havaittiin riskiryhmään. Verrattuna primaarikasvaimen, metastasoituneessa solulinjat osoittivat merkittävästi korkeampia ekspressiotasoja miR-183 ja Twist1. Yhteenvetona miRNA 200b, 30a, 1, ja 183 sekä geenien Twist1 ja vimentiinista voisi olla tärkeä rooli etenemistä eturauhassyövän ja voi lopulta tulla tärkeä ennustetekijöitä markkereita.

Citation: Katz B, Reis ST, viana NI, Morais DR, Moura CM, Dip N, et al. (2014) Comprehensive Study of Gene ja mikroRNA Expression liittyvät epiteelikasvaimet-mesenkymaalitransitioon eturauhassyövässä. PLoS ONE 9 (11): e113700. doi: 10,1371 /journal.pone.0113700

Editor: Aamir Ahmad, Wayne State University School of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 21 heinäkuu 2014; Hyväksytty: 28 lokakuu 2014; Julkaistu: 19 marraskuu 2014

Copyright: © 2014 Katz et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tätä työtä tukivat FAPESP (Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Sao Paulo) alle yhteyskäytäntönumero 2012 /50094-9. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Eturauhassyöpä (PCA) on yksi yleisimmistä kasvaimia miehillä, ja sen osuus 29% kaikista vasta diagnosoitu syövistä [1]. Antamisen jälkeen PSA, useimmat potilaat läsnä paikallisluonteisia PCA mutta 4% jo etäpesäkkeitä aikaan diagnoosi [1]. Tällä hetkellä kliinis kuten pysähdyspaikan, Gleason (GS), ja PSA-pitoisuudet ovat hyviä ennustetekijöitä markkereita [2] ja ovat tottuneet tekemään hoitopäätöksiä; mutta ne eivät ole riittävän tarkkoja erottamaan kasvaimia, jotka jäävät veltto ja ne, jotka myöhemmin edetä tulla metastaattisen. Itse asiassa ainutlaatuinen biologisia ominaisuuksia sekä heterogeeninen geneettiset taustat Eturauhassyövän [3] voidaan rajoittaa tehoa tavanomaisten kliinis parametreja ennakoivaa markkereita. Näistä syistä molekyyli biomarkkerit ovat yhä tutkittu auttaa ymmärtämään ja ennakoimaan syövän käyttäytymistä.

Epiteelin-to-mesenkymaalitransitioon (EMT) on käänteinen biologinen prosessi, joka on tärkeä rooli hyökkäyksen ja etäpesäkkeiden aikana syövän syntymistä. Epiteelisolujen-soluadheesiota vähenee, ja solut hankkia kara-muotoinen, erittäin liikkuvia fibroblastien fenotyyppi ja suurempi kyky muuttoliike ja hyökkäys [4]. Tärkein ominaisuus EMT on transkription vaiennettu E-kadheriinin [5], [6], joka ohjaa transkription sääntelyviranomaisten

ZEB1

,

ZEB2

,

SNAI1

(etana),

SNAI2

(Slug), ja

TWIST1

[5], [7], [8]. Lisäksi on myös säätelyä mesenkymaalisten markkereita, kuten vimentiinistä ja N-kadheriinin, prosessi, joka tunnetaan kadheriinin kytkentä [9].

roolit liittyvien geenien EMT PCA ei täysin ymmärretä, ja aiemmat tutkimukset kuvaavat menetys E-kadheriinin [10], jota seuraa lisääntynyt ekspressio N-kadheriinin, kadheriini-11 ja vimentiinin [9] immuunihistokemiallisessa analyysi. Ilmaisu tasot

ZEB1

, keskeinen säätelijä EMT PCA, liittyvät GS [11], ja Behnsawy et al ehdottivat EMT geeniekspressioprofiilien merkkiaineina biokemiallisten uusiutumisen jälkeen eturauhasen [ ,,,0],12].

MikroRNA (miRNA), uuden luokan ei-koodausta, sääntelyyn RNA: t, on osoitettu osallistua moniin liittyvät prosessit kehittymistä ja etenemistä syövän, kuten EMT [13]. Yksi tärkeimmistä miRNA mukana EMT on miR-200 perhe, joka indusoi epiteelin erilaistumista. Tämä ryhmä käsittää miR-200a miR-200b, miR-429, miR-200c, ja miR-141, joka syntyy kahden selostukset. Ensimmäiset kolme ovat peräisin kromosomista 1, kun taas kaksi viimeksi mainittua ovat peräisin kromosomista 12. Tämän ryhmän jäsenet ovat erittäin liittyvät peräkkäin, osoittaa, että ne todennäköisesti kohdistuvat samanlaista täydentää lähetti-RNA: iden [14].

Niistä tavoitteisiin miR-200 perhe ovat ZEB1 ja ZEB2 [15] – [17]. miR-200 jäsentä ilmentymisen inhiboimiseksi ZEB at transkription jälkeisellä tasolla sitoutumalla erittäin konservoituneiden kohdesivustoa niiden 3’UTRs [18], [19]. Mielenkiintoista, miR-200 jäsentä ovat transkription tavoitteita

ZEB1

ja

ZEB2

. Läheistä välinen toiminnallinen yhteys ZEB tekijöiden ja miR-200 perheen kaksinkertainen negatiivinen kierre tunnetaan ZEB /miR-200 takaisinkytkentäsilmukan [18], jossa aktivointi yksi ryhmä vaikuttaa kielteisesti ilmentymisen muiden ryhmä. Riippuen solunulkoisia signaaleja, tämä silmukka voi siirtyä toiselta puolelta toiselle puolelle ja vakauttaa joko epiteeli- tai mesenkymaaliset fenotyypin. Muita miRNA on myös osoitettu osallistua EMT, kohdistaminen

SNAI1

(miR-29b, miR-30a, miR-34a) [20], [21], ja

SNAI2

(miR -34a, miR-1, miR-200B) [22], [23]. Kuitenkin vain harvat tutkimukset ovat arvioineet miRNA mukana EMT PCA.

Tavoitteena on tulkita rooli geenien ja miRNA liittyvät EMT PCA tunnistaa profiilin, joka määrittelee PCa käyttäytymistä.

materiaalit ja menetelmät

Patient valinta

viisikymmentäyksi potilasta, jotka olivat kliinisesti paikallinen eturauhassyöpä ja tehtiin eturauhasen vuosien 2000 ja 2002 valittiin. Kaikkia potilaita hoidettiin samalla kirurgi (MS), ja kaikki patologiset näytteet analysoitiin samalla uropathologist (KRML). Potilaita seurattiin keskimäärin ajanjakso 63,06kuukausi.

Vertailuryhmä koostui kymmenen näytettä potilailta, joille tehtiin leikkaus eturauhasen hyvänlaatuisen liikakasvun, ja oli eturauhasen tilavuuden 50 cm

3 ultraääni, PSA-pitoisuudet 2,5 ng /ml, eikä syöpään patologisen näytteen.

eturauhasen kudosnäytteitä

Kaikki tuoreet pakastetut PCa näytteet saatiin meidän eturauhasen biopankki, ja kirjallinen tietoinen suostumus saatiin kaikilta potilailta. Tutkimus hyväksyi institutionaalisten hallitus etiikan (CAPPesq – Comissão de etica para análise de Projetos de Pesquisa) numerolla 5907. Tuore-pakastetut kasvaimia peräisin eturauhasen yksilöitä, ja 1 cm:

3 fragmentti eristettiin alkaen epäilyttävän alueen ja välittömästi snap-jäädytettiin -80 ° C: ssa. Jäljellä oleva kudos fiksoitiin 10% formaliinilla, rutiininomaisesti käsitelty, ja värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla histologista tutkimusta varten. Näytteet jälkeen tarkistetaan ja arvostellaan modifioitua Gleason luokitusjärjestelmä [24], ja siinä vaiheessa määritettiin seuraavat TNM 2010.

Solulinjat

eturauhassyöpäsolulinjoissa LNCaP, DU145, ja PC3 saatiin American Type Culture Collection (ATCC). LNCaP, DU145, ja PC3 pidettiin RPMI, DMEM, ja MEM media (Invitrogen, Carlsbad, CA, ELY), tässä järjestyksessä. Kaikki alustat täydennettiin 10% naudan sikiön seerumia ja 1% antibiootti /antimykootti-liuosta (Sigma, St. Louis, MO, USA), ja viljelmiä inkuboitiin 37 ° C: ssa ilmakehässä, jossa oli 5% CO

2 .

RNA ja miRNA eristäminen ja monistaminen

sekä RNA: n ja miRNA eristettiin eturauhasen kudoksia ja solulinjoja käyttäen Ambion Mirvana kit (Austin, TX, USA) valmistajan protokollan. cDNA tuotetaan RNA ja miRNA käyttäen TaqMan RNA Reverse Transcription Kit ja TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit, vastaavasti. Geenien ja miRNA vahvistus, TaqMan Reagent Kit käytettiin 7500 Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Reaktiot suoritettiin kahtena rinnakkaisena, ja

B2M

(β-2-mikroglobuliini) ja RNU-48 käytettiin endogeenisen säätimet geenien ja miRNA, vastaavasti.

Gene ja miRNA ekspressiotasot olivat saadaan suhteellisen kvantifioinnin käyttämällä 2

-ΔΔct menetelmällä. Kaava palveluksessa on ΔΔCT = DCT

1- DCT

2, jossa DCT

1 = CT tavoitteesta (kasvain näyte) – CT keskiarvon endogeenisen ohjaus (kasvain näyte), ja DCT

2 = CT keskiarvon normaalin valvonnan (hyvänlaatuinen eturauhasen kudosta) – CT keskiarvon endogeenisen ohjaus (hyvänlaatuinen eturauhasen kudosta). Arviointiin metastaattisen solulinjojen ”ohjaus” (DCT

2) katsottiin olevan pT2 kasvaimia. Lopullinen tulos saatiin soveltamalla 2

-ΔΔct menetelmällä. Havainnot suurempi tai pienempi kuin 1 katsottiin osoittavan yliekspressio tai ali, vastaavasti. Kaikki arvot olivat standardoituja suhteessa tavanomaiseen säätöarvot, jotka olivat edustettuina arvo 1.

Gene ja miRNA valinta

Valinta miRNA ja geenien arvioida tässä tutkimuksessa perustuu niiden rooli EMT prosessin eri syöpien riskiä. Suoritimme kirjallisuushaun kautta PubMed ja Web of Science käyttäen termejä ”epiteelin-mesenkymaalitransitioon”, ”syöpä” ja ”miRNA”. Tietojen perusteella julkaistu kirjallisuudessa, valitsimme 18 miRNA että kohdennettu tärkein osallistuvia geenejä EMT. Tiedot on esitetty taulukossa 1.

Tilastollinen analyysi

Jos haluat vertailla kliinis-potilailla paikallisluonteisia PCA potilaat jaettiin ryhmiin perustuu niiden GS (GS ≤6 vs GS ≥8), patologinen vaiheessa (pT2 vs pT3), pre-operative PSA ( 10 vs ≥10 ng /ml), ja läsnä ollessa tai ilman biokemiallisten toistuminen, määritellään PSA ≥0,02 ng /ml. Potilaat luokitellaan myös matalan riskin ja korkean riskin tautiryhmistä mukaan mahdollisesti olevista epäedullinen ominaisuus. Tässä skenaariossa ilmaisu arvot kasvainkudoksessa verrattiin vuonna hyvänlaatuista eturauhasen kudosta.

arvioimiseksi etäpesäkkeitä, kolme metastaattinen PCa solulinjoja analysoitiin yhdessä ja nimettiin metastaattisen ryhmään. Ilmentymistasojen geenien ja miRNA välillä solun ryhmä ja pT3 kasvaimia verrattiin suhteessa pT2 kasvaimia, joita pidetään ”ohjaus” ryhmä. Ajatuksena oli, että patologinen vaiheessa saattaa merkitä käytännön näyttöä EMT, ja käyttämällä tätä menetelmää, voisimme arvioida, mikä EMT markkereita ovat mukana etenemistä lokalisoidun kasvaimen etäpesäkkeiden.

Mann-Whitney U ja T testejä käytettiin vertaamaan GS, patologinen vaiheessa ennen leikkausta PSA-arvot, biokemiallisten toistuminen, ja riskiryhmät. Jakauma geenin ja miRNA ekspressiotasot oli vinossa, ja tiedot oli log-transformoitiin analysoitavaksi. Kaplan-Meier konstruoitiin analysoida biokemiallisten uusiutuminen elinaikaa. Tilastollinen merkitys kaikissa testeissä, kuten arvioidaan laskemalla kaksipuolisella

P

-arvoja, asetettiin 0,05.

Tulokset

Potilastiedot

keski-ikä potilailla oli 65 vuotta. Keskiarvo ja mediaani GS olivat 7,3 ja 7, vastaavasti. Kaksikymmentäkaksi potilasta (43%) oli vaiheen pT2, ja 29 (57%) potilaista oli vaiheen pT3. Seitsemäntoista (33%) potilaista oli biokemiallisten uusiutumisen keskimääräinen seuranta-ajan 63,06 kuukausi. Tiedot on esitetty taulukossa 2.

miRNA ja geenin ilmentymisen profilointi lokalisoitu PCa

miRNA 200a, 200b, 200c, 429, 141, 205, 203, 21, 183, ja 373 oli yli-ilmentynyt 35 (69%), 47 (92%), 38 (74%), 39 (77%), 42 (82%), 44 (86%), 38 (74%), 51 (100 %), 38 (74%), ja 33 (64%) näytettä, vastaavasti. miRNA 1, 29b, 9, ja 495 olivat ali-ilmentynyt 41 (80%), 41 (80%), 36 (71%), ja 42 (82%) näytteistä, vastaavasti. miRNA 34a, 155, 30a, ja 10b osoittivat vaihtelevan ekspressiomalli: miR-34a ja miR-155 oli ali-ilmentynyt 55% ja 57% näytteistä, vastaavasti, ja miR-30a ja miR-10b oli yli-ilmentynyt 51% näytteiden (taulukko S1 File S1).

E-kadheriinin yliekspressoitui 50 tapauksessa (98%). Geenit N-kadheriinin,

TGFB1

, ja

ZEB1

oli ali-ilmentynyt 36 (71%) potilaista, kun taas

SNAI2

ja vimentiinista oli ali-ilmentynyt 42 (82%) ja 41 (80%) potilaista.

ZEB2

,

SNAI1

, ja

PDGFD

osoitti vaihtelevan kuvion ilmaisun. Toisaalta,

TWIST1

oli ainoa EMT-indusoidun geeni, joka osoitti yli-ilmentyminen useimmissa tapauksissa (73%) (taulukko S1 File S1).

miRNA ja geenejä, jotka liittyvät kliinis-

taulukot 3 ja 4 esittävät tietoja, jotka koskevat miRNA ja geeni-ilmentymisen suhteen kliinis-, vastaavasti. Alhainen miR-200b, miR-30a, ja miR-1 liittyi pT3 tautiin. 18 miRNA tutkittu, kolme oli merkittävästi ali-ilmentynyt vuonna pT3 tauti (miR-200B – 7,73 vs 23.86,

P

= 0.02; miR-30a – 1,73 vs 3,79,

P

= 0,048; ja miR-1-0,72 vs 1,97,

P

= 0,04). Kun tarkastellaan sitä geenit, emme löytäneet mitään yhteyttä välillä ilmaisun ja patologinen vaiheessa.

arvioitiin yhdistys GS miRNA ilman GS 7, koska niiden epävarma käyttäytymistä. Viisitoista potilasta (29%) oli GS ≤6 ja 23 (45%) oli GS ≥8. Huomasimme, että miR-200B ilmentyminen oli merkitsevästi pienempi potilailla, joilla on GS ≥8 verrattuna potilaisiin, joilla on GS ≤6 (6,94 vs 18,67,

P

= 0,035). Ei assosioitunut GS ja muiden miRNA ja geenejä.

Kun potilaat ryhmiteltiin matalan riskin ja korkean riskin sairaus, korkean riskin sairaus oli merkittävästi alhaisempi miR-30a (1,70 vs 6,37,

P

= 0,039). Myös korkea vimentiinista ja

TWIST1

liittyi merkittävästi korkean riskin sairaus (0,27 vs. 0,90,

P

= 0,017; 1,81 vs 8,89,

P

= 0,018) .

koska merkitsevästi yhteydessä miRNA 200b, 30a, ja 1 patologinen vaiheessa ja niiden mahdollisuuksia ennustetekijöitä markkereita, selviytymisen analyysi. Kaplan-Meier-analyysi osoitti, että potilailla, joilla on alhaisempi miR-200b oli huomattavasti lyhyempi biokemiallisten uusiutuminen-elinaika (

P

= 0,049) (kuvio 1).

Potilaat, joilla miR-200b ilme tasot ≤14.690 osoitti huomattavasti lyhyempi biokemiallisten uusiutuminen elinaikaa.

Lisäksi miR-183 ja

TWIST1

ekspressiotasot olivat merkittävästi korkeammat metastaattisessa PCa solulinjoissa pitoisuuksiin verrattuna potilailla jossa pT3 sairaus ja korkea-asteen kasvaimet (taulukko S2 File S1). Solulinjoissa, MIR-183 ja Twist1 tasot olivat 2,64 ja 3,54, vastaavasti, kun taas pT3 kasvaimet, niiden tasot olivat 40,41 ja 14,45, vastaavasti (

P

= 0,009 ja

P

= 0,049, tässä järjestyksessä).

keskustelu

tärkeys EMT karsinogeneesis- on laajasti tutkittu viime vuosina, ja se on nyt pidetään yhtenä tärkeimmistä mekanismeista vastuussa syövän etenemiseen ja metastaattinen levittämiseen. Tutkimuksemme tavoitteena oli arvioida merkitystä ilmentymiskuviot useiden miRNA ja geenien EMT kliinisistä näytteistä on paikallinen eturauhassyöpä ja metastaattisessa solulinjoissa. Meidän tulokset on esitetty yhteenvetona kuviossa 2, joka esittää pääasialliset miRNA ja geenien EMT etenemisen PCa ja niiden mahdollinen vaikutusmekanismi.

Expression tasoilla miRNA 200b, 30a ja 1 pieneneminen kun kasvain hankkii korkealaatuista ominaisuuksia, kun taas ekspressiotasot TWIST1 ja vimentiinista lisäys. Kun kasvain tulee metastaattinen, lisääntyminen ekspressiotasot miR-183 ja TWIST1 havaitaan. Katkoviivat osoittavat geenit, jossa nämä miRNA tai geenejä saattaa toimia, joka perustuu aiemmin julkaistuihin tietoihin.

BR

= Biokemiallinen toistuminen.

Olemme osoittaneet, että miR-200b miR-30a, ja miR-1 oli merkitsevästi ali-ilmentynyt ei-elimeen rajoittunut kasvaimia ja saattaa olla mielenkiintoisia ennustavat tekijät. Tuore tutkimus tukee havaintomme osoittamalla, että miR-200B ja miR-1 indusoi mesenkymaalisten-epiteelin siirtyminen (MET) hiiren ja ihmisen PCa solut ja roolia näissä eturauhasen kasvainten synnyssä ja syövän etenemistä [23].

miR-200b yliekspressoitui PCA yksilöitä, ja tämä havainto on yhtäpitävä aiempien tutkimusten PCa [25], [26]. Jäsenet miR-200 perheen ovat tärkeimpiä miRNA mukana EMT [27], ja tutkimukset PCA soluissa ovat osoittaneet, että miR-200B estää EMT, kasvua ja etäpesäkkeiden [23], [28]. Oletamme, että miR-200B on suurimmat mahdollisuudet tulla prognostinen markkeri, koska pienempi ilmentyminen miR-200b merkitsevästi liittyy suuri GS, pT3 tauti, ja lyhyemmät biokemialliset uusiutumista elinaikaa. Rooli miR-200b on kuvattu muissa kasvaimissa, ja sen downregulation liittyy edenneen taudin vaiheessa [29] ja lyhyempi kokonaiselossaoloaika [30] – [32]. Samanlainen kuin meidän havaintojen Barron ym havaittu, että miR-200a: n pitoisuus väheni potilailla, jotka uusiutunut tutkimalla miR-200a ilmentymisen formaliinilla kiinnitetyt parafinoidut kudosta sairastavien potilaiden pT3 tauti [33], joka tukee potentiaalia miR-200 perhe markkerina biokemiallisten uusiutuminen.

Aiemmat tutkimukset osoittavat, että downregulation miR-200 voi myötävaikuttaa etenemistä PCa [15] [34]. Xu et ai havaittiin 80% vähennys miR-200b tasot kemiallisesti kastroitu LNCaP kautta RNA sekvensoinnilla [35]. Kehittyvät todisteet tukevat osallistumista EMT prosessien vapauttamisen androgeenin signaloinnin akseli, mutta tiedot ovat edelleen kiistanalaisia. Zhu ja Kyprianou totesi, että androgeenien aiheuttaa itsenäisesti EMT kuviointi sisällä eturauhasen syöpäsoluja, joilla on huomattavia muutoksia solujen invaasiota ja liikkuvuutta [36]. Aktivoitu androgeenireseptorin (AR) on äskettäin osoitettu edistävän EMT aktivointi tukahduttaminen E-kadheriinin ilmentymisen rintasyövän soluissa [37]. Toisaalta, Sun et al havaitsivat, että androgeenideprivaatio aiheuttaa EMT in vivo ja hankintaan mesenkymaalisten ominaisuuksia [38].

Tämä on toinen tutkimus liittyvät miR-1 ja ennusteen PCA. Hudson et al aiemmin todettu, että alempi ekspressiotasot miR-1 liittyi aiemmin biokemiallisten uusiutuminen PCA [39]. Nyt olemme osoittaneet, että miR-1 vaimentua ensisijaisen kasvaimen verrattuna hyvänlaatuinen eturauhasen kudosta, ja väheni merkittävästi ei-elin rajoittuu tauti. Uskotaan, että miR-1 säätelevä Slug [23], kautta histoni metylaatio ja asetylointi [39] ja myös ottaa tavoitteeksi liittyvistä geeneistä jakaantumiseen, kulkeutumiseen ja invaasio [40] on tärkeä rooli EMT PCA.

Data asemaa koskevien miR-30a PCA ovat niukkoja ja ristiriitaisia. Tutkimuksessamme miR-30a osoitti vaihteleva kuvio ilmaisun. miR-30a kuvattiin olevan vaimentua siinä tutkimuksessa Porkka et al [41], kun taas Carlsson et ai raportoineet säätelyä tämän miRNA [42]. Äskettäin Kao et al osoitti, että ETS liittyvä geeni (

ERG

), joka on useimmin yli-ilmentynyt onkogeeni PCA, on välittömänä kohteena miR-30 ja yli-ilmentyminen miR-30 PCA soluissa tukahduttaa EMT fenotyyppejä ja estää solujen vaeltaminen ja invaasiota [43]. miR-30 perheen estää myös solujen vaeltamiseen, invasiivisuus ja etäpesäkkeiden

in vitro

muissa kasvaimissa, kuten keuhko-, rinta-, ja maksan syöpä [21], [44] – [46], suuntaamalla

SNAI1

[21], [44] ja vimentiinista [45], [46]. Tässä tutkimuksessa suhdetta havaittu vähentynyt ilmentyminen miR-30, kehittyneet patologinen vaiheessa ja korkean riskin tauti vahvistaa miR-30 tuumorisuppressorina miRNA PCA. Cheng et ai havaittu, että alhainen miR-30a olivat ennustajia pitkälle ja imusolmuke etäpesäke in invasiivisen rintasyövän [45]. Wang et al osoitti, että alhainen ekspressiotasot miR-30a liittyivät merkittävästi suurempi ilmaantuvuus porttilaskimon kasvain Veritulppa maksasolukarsinoomassa [46].

Mitä geenit, havaitsimme yliekspressio E-kadheriinin lähes kaikissa tapauksissa, ja suurin osa mesenkymaaliset markkereita, mukaan lukien N-kadheriinin,

TGFB1

,

ZEB1

, vimentiinin, ja

SNAI2

, oli vaimentua. Tämä geeniekspressioprofiili viittaa vahvasti siihen, että lokalisoidut PCa ylläpitää epiteelin fenotyypin huolimatta kasvain eriyttäminen ja lisäämällä vaiheessa. Kuitenkin,

TWIST1

oli yli-ilmentynyt 73%: ssa tapauksista.

TWIST1

on helix-loop-helix transkriptiotekijä, joka aktivoi EMT epäsuorilla estämällä E-kadheriinin [47].

TWIST1

on osoitettu yliekspressoituvan PCa on immunohistokemialliset määritykset ja positiivisesti korreloi GS [48], [49]. On mielenkiintoista, että geeni tällaisia ​​merkitys EMT ja ennusteen arvioinnissa PCA yliekspressoituu lokalisoitu kasvaimia. Varhainen yli-ilmentyminen

TWIST1

voida osoittaa sen sääntelyä

NKX3-1

geeni [50], kasvain vaimennin, joka havaittiin ali-ilmentynyt alkuvaiheessa Eturauhassyövän [51 ], [52]. Kuitenkin varhainen säätelyä

TWIST1

ei näytä olevan riittäviä aloittaa EMT prosessi. Mukaan Casas et al,

TWIST1

indusoi

SNAI2

edistää EMT [53], mutta ehtyminen

SNAI2

täysin estää kyky

TWIST1

tukahduttaa E-kadheriinin ja aiheuttaa EMT.

Olemme osoittaneet, että korkeat

TWIST1

sekä vimentiinista, liittyvät merkittävästi potilaiden riskiryhmään ja

TWIST1

olivat myös merkitsevästi suurempi metastaattisen solulinjoissa. Tuoreessa tutkimuksessa, Behnsawy ym [12] osoittaa, että korkeat ekspressiotasot

TWIST1

ja vimentiinista arvioitiin immunohistokemiallisesti on itsenäinen tekijä liittyvät lyhyemmän biokemiallisten uusiutuminen elinaika, mikä viittaa siihen, että nämä geenit voivat olla mahdollisia merkkiaineita biokemiallisten uusiutumisen jälkeen eturauhasen.

TWIST1

näyttää olevan rooli erilaisissa vaiheissa EMT, ja sen rooli etenemistä PCa [49]. Vuonna tutkimuksessa Kwok et al,

TWIST1

ilme oli suurempi kudoksissa peräisin etäpesäkeleesioita luista ja imusolmukkeiden [48]. Rooli

TWIST1

tässä myöhemmässä vaiheessa EMT saattavat selittyä aktivoitumisesta kohteeseensa, miR-10b. miR-10b paitsi tukahduttaa E-kadheriinin [54], mutta myös estää käännös HOXD10 proteiinin, joka mahdollistaa ilmentymisen pro-metastaattinen geenituotteen,

RHOC

[55].

Olemme myös havainneet, että ekspressiotasot miR-183 olivat merkittävästi suuremmat metastaattisen ryhmässä. Ueno et ai havaittu, että korkeammat ekspressiotasot miR-183 liittyivät merkittävästi korkeampi PSA, korkeampi vaiheessa ja lyhyempi kokonaiselossaoloaika jälkeen eturauhasen, mutta sen käyttäytyminen PCA ehdottoman kiistanalainen jotkut osoittaa, että miR-183 edistää muuttoliikettä ja invaasiota [56] – [58], kun taas toiset viittaavat siihen, että se estää muuttoliike, invaasio, ja etäpesäkkeiden [59] – [61]. Jotkin kohteet miR-183 on ehdotettu,

DKK3

,

Smad4

[56],

EGR1

ja

PTEN

[57], joka muuttuu miR-183 yhteydessä riippuvainen miRNA. Tutkimustulosten perusteella ja mukaan aiempien tutkimusten kirjallisuudessa, uskomme, että miR-183 toimii oncomiR PCA, ja mekanismi saattaa liittyä

PTEN

joka liittyy PCa etenemisen ja etäpesäkkeiden kehittymisessä [62 ]. Ding et al osoitti myös, että samanaikainen

PTEN

ja

Smad4

inaktivaatiomenetelmät eturauhasen epiteelin pystyy tuottamaan täysin läpäisevät invasiivisen ja metastaattisen PCa fenotyypin hiirissä [63].

Lopuksi on tärkeää ymmärtää, että EMT vaikuttaa syövän etenemisen eri vaiheet läpi useita markkereita. Täällä kuvataan kattavan tutkimuksen miRNA ja liittyvistä geeneistä EMT PCA ja totesi, että ekspressiotasot miR-200b, miR-30a, miR-1,

TWIST1

ja vimentiinista voitaisiin käyttää päätöksenteon prosesseihin liittyvä ensisijainen tai apuaineen hoitoja tulevaisuudessa.

tukeminen Information

Tiedosto S1.

Yhdistetty tiedot tukevat taulukoita. Taulukko S1: Expression tasot miRNA ja geenien kulloinkin suhteessa BPH näytteitä. Taulukko S2: Expression tasot miRNA ja geenien pT3 kasvaimia ja solulinjoissa (suhteessa pT2 kasvaimia) B doi: 10,1371 /journal.pone.0113700.s001

(DOCX) B