Krooninen sairaus

tiivistelmä

epiteelikasvaimet mesenkymaalitransitioon (EMT) katsotaan korreloivan pahanlaatuisuuden syöpäsolujen ja vastaavien syövän eteneminen ja metastaasit. Raportoimme aikaisemmin, että kaukainen etäpesäke liittyi hypoksiaa mahasyövän. Siksi tutkittiin vaikutusta hypoksinen ehdon EMT mahalaukun syöpäsoluja. Mahasyöpä soluja viljeltiin normoksia (21% O

2) tai hypoksian (1% O

2) 24 tuntia. EMT arvioitiin prosentteina karan muotoinen solujen solua yhteensä. Vaikutus transformoivan kasvutekijän β1 (TGFp 1) tai tyrosiinikinaasiestäjiksi on EMT arvioitiin. Ilmaisu taso

TGFp 1

ja

TGFβR

arvioitiin reaaliaikaisen RT-PCR. TGFp 1 tuotanto syöpäsolujen mitattiin ELISA. Hypoksia stimuloi EMT of OCUM-2MD3 ja OCUM-12-soluissa, mutta ei että OCUM-2M solujen. Ilmaisu taso

TGFp 1

mRNA hypoksiaolosuhteissa oli merkittävästi suurempi kuin alle normoksia kaikissa kolmessa solulinjoissa. Ilmaisu taso

TGFβR

mRNA lisääntyi merkitsevästi hypoksia OCUM-2MD3 soluja, mutta ei OCUM-2M solujen. TGFβR estäjä, SB431542 tai Ki26894, suppressoi merkittävästi EMT OCUM-2MD3 ja OCUM-12. TGFp 1 tuotantoa OCUM-2MD3 ja OCUM-12-soluissa lisäsi merkittävästi hypoksiaolosuhteissa verrattuna, että alle normoksia. Nämä havainnot saattavat viittaavat siihen, että hypoksia stimuloi EMT mahalaukun syövän solujen kautta autokriininen TGF /TGFβR signalointia.

Citation: Matsuoka J, Yashiro M, Doi Y, Fuyuhiro Y, Kato Y, Šintolaisuus O, et ai. (2013) Hypoksia stimuloi EMT mahasyövän Cells kautta autokriininen TGF Signaling. PLoS ONE 8 (5): e62310. doi: 10,1371 /journal.pone.0062310

Toimittaja: Claudio M. Costa-Neto, University of São Paulo, Brasilia

vastaanotettu: 19 lokakuu 2012; Hyväksytty: 19 maaliskuu 2013; Julkaistu: 17 toukokuu 2013

Copyright: © 2013 Matsuoka et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tuettiin osittain National Cancer Center tutkimus- ja kehitysrahasto (23-A-9), ja jonka apurahat-in tuki Scientific Research (KAKENHI, nro. 20591573, 22390262 ja 23390329) alkaen opetus-, tiede-, Urheilu, kulttuurin ja tekniikan Japanissa. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat seuraavat edut. KS, TS, ja AM ovat työntekijöitä Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Ki26894, jota käytettiin tässä tutkimuksessa, on tuote Kyowa Hakko Kirin Co Ltd ei ole muita patentteja, tuotteiden kehittämiseen tai kaupan tuotteiden julistaa . Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamiseen ja materiaaleja, yksityiskohtaisena online-oppaassa tekijöille.

Johdanto

epiteelikasvaimet mesenkymaalitransitioon (EMT) on ominaista muutokset solun morfologiassa, jonka aikana epiteelisolujen hankkia mesenkymaaliset ominaisuuksia, mutta se menetti solu-vuorovaikutuksiin ja apicobasal napaisuuden [1], [2]. Vuonna epiteelin syövät, EMT on tunnustettu yhdeksi niistä mekanismeista aloittamisesta vastaavassa invasiivisen ja metastaattisen käyttäytymistä [3] – [5].

hapenpuuteympäristössä esiintyy joillakin alueilla kiinteiden syöpien, jotka osoittavat nopeaa kasvua, koska angiogeneesiä syövissä on heterogeeninen [6]. Hypoksia katsotaan liittyvän aggressiiviseen kasvaimen fenotyypit mahakarsinoomat [7], [8], mukaan lukien metastaattinen kyky syöpäsolujen [6], [9]. Kliiniset ja kokeelliset tiedot myös näyttöä yhdistyksen välillä hapenpuuteympäristössä ja huonon ennusteen [10], [11]. Näin ollen on tärkeää tulevan kehityksen syöpähoitojen selventää mekanismia etäpesäkkeiden aiheuttama hypoksia.

On raportoitu, että eri liukenevat tekijöistä, kuten transformoiva kasvutekijä-β1 (TGFp 1) [12], [ ,,,0],13], epidermaalisen kasvutekijän (EGF) [14], insuliinin kaltainen kasvutekijä-1 (IGF1) [15], fibroblastien kasvutekijä (FGF) [16], hepatosyyttikasvutekijän (HGF) [17] korreloivat EMT . TGF signaaleilla on tärkeä rooli eri näkökohtia metastaattisen leviämisen syöpäsolujen, kuten muuttoliike, invaasio, ja EMT [12], [13]. TGFp-ligandit sitoutuvat TGF-reseptorin tyypin II (TGFpRII), joka sitten muodostaa kompleksin joko TGFβR tyypin I tai II. TGFβR tyypin I (TGFβRI) lähettää signaaleja solussa kautta toisen messenger Smad proteiinit [13], [18]. Loppupään signaaleja levitetään kautta TGFβRI, joka fosforyloi reseptori-säännelty Smad proteiinit [19], [20].

Useat tutkimukset ovat raportoineet, että niukkahappiseen ehto saattaa aiheuttaa EMT syöpäsolujen [21] – [24], mutta molekyylimekanismin vastuussa EMT alle niukkahappiseen ehto jää epäselväksi. Siksi tutkittiin vaikutusta hypoksia on morfologisesti mahasyövän solujen selventää mekanismeja vastuussa hypoksian aiheuttaman EMT.

Materiaalit ja menetelmät

Soluviljely ja Solulinjat

Seitsemän mahasyövän solulinjoja käytettiin. OCUM-2MD3 [25], OCUM-12 [26], OCUM-2M [27], KATO III [28], ja MKN-45 [29], jotka ovat peräisin diffuusi-tyypin mahasyöpä. MKN-74 [29] ja MKN-7 [29] on saatu suoliston-tyyppiä. OCUM-2M, OCUM-2MD3 ja OCUM-12 oli establised laboratoriossamme, kuten aiemmin on raportoitu [25] – [27]. Lyhyesti, OCUM-12was peräisin askites liittyy diffuusi-tyyppinen mahasyöpä ja OCUM-2MD3 soluja, tytär solulinjan korkean potentiaalin vatsakalvon etäpesäkkeiden, vakiinnutettiin OCUM-2M solujen käyttäen potilaalle tehdä kasvain malli, emosolulinjassa askites liittyvä diffuusi-tyypin mahakarsinoo-. Muut solulinjat saatiin JCRB solupankista (Osaka, Japani) tai American Type Culture Collection (Rockville, MD). Soluja viljeltiin 37 ° C: ssa 21%: O

2 (normoksia) tai 1% O

2 (hypoksia). Hypoksinen olosuhteet säilytettiin käyttäen modulaarista hautomo kammio (Hirasawa, Tokio, Japani), jossa 5% CO

2 ja 1% O

2 tasapainossa N

2 kaasua. Viljelyalusta koostui Dulbeccon modifioidussa Eaglen väliaineessa (DMEM; Nikken Bio., Osaka, Japani), jossa oli 10% naudan sikiön seerumia (Nichirei Bio.), 100 IU /ml penisilliiniä (ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA), 100 ug /ml streptomysiiniä (ICN Biomedicals), ja 0,5 mM natriumpyruvaattia (Cambrex, Walkersville, MD).

Morfologiset muutokset

Cancer soluja viljeltiin normoxic tai hypoksisissa olosuhteissa 24 tuntia, ja solujen morfologia havaittiin mikroskoopilla. EMT määritettiin, kun monikulmainen tai kara muoto löydettiin syöpäsoluissa faasikontrastimikroskoopissa. Taajuus EMT arvioitiin nopeudella monikulmion tai kara-muotoisia soluja kaikissa syöpäsoluissa; EMT rate = määrä monikulmainen tai karan muoto solua /Solujen kokonaismäärä x 100 (%).

vaikutukset eri liukoisen tekijöiden morfologisia muutoksia

tutkinut, mitä vaikutuksia erilaisten liukoisten tekijöiden , kuten EGF (Pepro Tec, Rocky Hill, NJ), IGF1- (Pepro Tec), verisuonen endoteelikasvutekijä (VEGF; R tyrosiinikinaasin estäjä EGFR: ää ja ErbB2, Toronto Research Chemicals), ja PHA665752 (c-MET-inhibiittori, 2 uM, Pfizer, San Diego, CA, USA) käytettiin.

Quantitative real-time käänteistranskriptaasia-polymeraasia ketjureaktio (RT-PCR) B

kvantitatiivinen RT-PCR suoritettiin tutkimaan

TGFp 1

,

TGFβRI, TGFpRII,

ja

vimentiinista

mRNA ilmaisuja. Syövän soluja inkuboitiin happiolosuhteissa ja hypoksisissa olosuhteissa 24 tuntia. Inkuboinnin jälkeen kokonais-RNA uutettiin käyttäen Trizol-reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, CA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Poistamisen jälkeen genomisesta DNA: sta DNaasi, cDNA valmistettiin 2 ug RNA: ta, jossa Maloney hiiren leukemiaviruksen käänteistranskriptaasia (Invitrogen) käyttämällä satunnaisia ​​alukkeita (Invitrogen). Määrittää kertainen muutokset kunkin geenin, reaaliaikainen RT-PCR suoritettiin ABI Prism 7000 (Applied Biosystems, Foster City, CA), käyttäen kaupallisesti saatavilla geenin ilmentymisen määrityksissä

TGFp 1

(Hs00998130,),

TGFβRI

(Hs00610319),

TGFpRII

(Hs00559661),

vimentiinista

(Hs00958116),

Twist

(Hs01675818),

Zeb1

(Hs 00232783),

Snail1

(Hs00195591),

VEGFA

(Hs00900055). PCR suoritettiin 95 ° C: ssa 15 s ja 60 ° C: ssa 60 s 40 sykliä. Glyseraldehydi-3-fosfaattidehydrogenaasi (GAPDH) käytettiin sisäisenä standardina normalisoida mRNA-tasot eroja näytteen konsentraatio ja lastaus. Kertamuutoksia ilmaisemisessa kunkin kohde-mRNA suhteessa GAPDH laskettiin kynnyksellä (Ct) kuin 2

-Δ (ACt), jossa ACt = Ct tavoitteelliseen Ct GAPDH ja Δ (ACt) = ACt

hypoksia-ACt

normoksia. Kvantitatiivinen PCR-reaktiot suoritettiin kolminkertaisina.

Western blot-analyysi

tutkimalla vaikutusta hypoksia Smad2 fosforylaation, syövän soluja inkuboitiin normoxic tai hypoksisissa olosuhteissa 24 tuntia, vastaavasti. Solut lyysattiin lyysipuskurissa, ja alikvootit, jotka sisälsivät 50 ug kokonais-proteiinia tehtiin natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesi; proteiininauhat siirrettiin polyvinylideenidifluoridi (Millipore, Billerica, MA). Kaivoa inkuboitiin TBS-T: n (10 mM TBS ja 0,05% Tween 20), johon on lisätty 5% rasvatonta maitoa tai 5% naudan albumiinia (Sigma), huoneenlämpötilassa 1 tunnin ajan. Seuraavaksi kalvo pantiin TBS-T-liuosta, joka sisälsi primaarisen vasta-aineen p-Smad2 (Ser

465/467, 1: 1000; Cell Signaling Technology) tai Smad2 /3 (1: 1000, Cell Signaling Technology), vimentiinista (1: 1000, Cell Signaling Technology), anti-βactin (1: 1000, Sigma) ja annettiin reagoida 4 ° C: ssa yön yli. Sitten kukin vasta-aine pestiin kolme kertaa TBS-T: 10 min, ja peroksidaasilla leimattua sekundääristä vasta-ainetta (GE Healthcare, Buckinghamsire, UK) reaktiivinen ensisijaisen vasta-ainetta lisättiin. Bändit todettiin käyttäen parannetun kemiluminesenssi järjestelmä (Wako, Osaka, Japani).

Entsyymi-immunologinen määritys (ELISA) B

TGFp 1 tuotannosta syöpäsolujen mitattiin kvantitatiivisen sandwich entsyymi immunomääritys tekniikkaa käyttäen Quantikine ihmisen TGFp 1 ELISA kit, mukaan manufacturer`s ohje (R 0,05.

Tulokset

vaikutukset hypoksia syöpäsolun morfologia

hypoksinen kunnossa lisännyt huomattavasti monikulmion tai värttinän muotoinen läpikäyvien solujen EMT joukossa OCUM-2MD3 tai OCUM-12-soluissa, mutta ei joukossa OCUM-2M, MKN-7, MKN-45, MKN-74, tai KATO III-solujen (Fig. 1A ja kuvio. S1). Solu morfologia OCUM-2MD3 ja OCUM-12 alkoi muuttua kuluttua 4 h hypoksinen kulttuuriin. 12 tunnin kuluttua viljelyn korotettuun EMT nähtiin molemmissa solulinjoissa. EMT määrä OCUM-2MD3 ja OCUM-12-soluissa oli korkeimmillaan 24 h hypoksinen kulttuuri (Fig. 1 B). Koska morfologisia muutoksia olivat ilmeisiä 24 tunnin viljelyn hypoksiassa, molekyylitason mekanismeja EMT analysoitiin 24 tunnin viljelyn hypoksisissa olosuhteissa käyttämällä OCUM-2MD3, OCUM-12, ja OCUM-2M-soluissa.

(A) lisäys monikulmion tai kara-muotoinen soluja kirjattiin OCUM-2MD3 ja OCUM-12 soluja hypoksiaolosuhteissa, mutta ei OCUM-2M solujen. (B) morfologia OCUM-2MD3 ja OCUM-12-soluissa alkoi muuttua sen jälkeen, kun 4 h hypoksinen kulttuuriin. EMT of OCUM-2MD3 ja OCUM-12-soluissa oli ilmeisintä 24 tunnin viljelyn hypoksiaolosuhteissa. EMT määritettiin, kun monikulmainen tai kara muoto löydettiin syöpäsoluissa faasikontrastimikroskoopissa.

Effects of erilaisia ​​kasvutekijöitä syövän solumorfologiaan

Liukoiset tekijät käytettiin pitoisuuksissa 10 tai 100 ng /ml. OCUM-2MD3 ja OCUM-12-solut tulivat kara-muotoinen lisäyksen jälkeen TGFp 1 tai HGF, mutta ei lisäyksen jälkeen EGF: n, FGF2, FGF7, IGF1, VEGF tai PDGF-BB: 24 tunnin kuluttua alle normoksia (taulukko 1). Sen sijaan, OCUM-2M-solut eivät osoittaneet mitään morfologista muutosta lisäyksen jälkeen mahdolliset tekijät (Fig. 2).

morfologinen muutos havaittiin, kun läsnä on TGFp ja HGF 24 tunnin viljelyn in OCUM-2MD3 ja OCUM-12-soluissa, mutta ei FGF2.

vaikutukset neutraloivien vasta syövän solumorfologiaan hypoksiaolosuhteissa

EMT aiheuttama hypoksia osittain inhiboitui anti-TGF-β1 vasta-aine, 100 ug /ml, mutta ei anti-HGF-vasta-ainetta (taulukko 2).

vaikutukset hypoksia

TGFp 1

,

TGFβRI

, ja

TGFpRII

mRNA ilmentymistä mahalaukun syöpäsolujen

ilmaisu taso

TGFli

oli merkitsevästi (p 0,001) kasvanut alle hypoksinen ehto kaikissa OCUM-2MD3, OCUM- 12, ja OCUM-2M solujen, verrattuna tasoon alle normoksia (Fig. 3A). Ilmaisu tasot

TGFβRI

ja

TGFpRII

lisääntyivät merkitsevästi alle hypoksinen ehto OCUM-2MD3 soluissa. Sen sijaan, tasot

TGFβR1

ja

TGFβR2

ilmentyminen väheni merkittävästi alle hypoksinen ehto OCUM-2M-solut (Fig. 3B).

(A)

TGF

mRNA: n ekspressio oli merkittävästi (p 0,001) lisäsi alla hypoksinen ehto OCUM-2M, OCUM2MD3 ja OCUM-12-soluissa. (B) Ilmaisulla tasot

TGFβRI

ja

TGFpRII

olivat merkitsevästi (p 0,001) kasvanut alle hypoksinen ehto OCUM-2MD3, mutta ei OCUM-2M solujen. (C) TGFp 1 tuotanto OCUM-2MD3 ja OCUM-12-soluissa oli merkittävästi (p = 0,001 ja p 0,001) korkeampi hypoksiassa (232 pg /ml, 80 pg /m, vastaavasti) kuin alle normoksia (109 pg /ml, 34 pg /ml, vastaavasti). TGFp 1 tuotanto OCUM-2M solujen ei ollut eroa normoksia ja hypoksiaa.

vaikutus hypoksia TGFp 1 tuotannosta vapautuu mahalaukun syöpäsolujen

TGFp 1 tuotantoa OCUM-2MD3 ja OCUM- 12-soluissa oli merkittävästi (p 0,001) lisäsi hypoksiaolosuhteissa verrattuna normoksia, mutta ei peräisin OCUM-2M-solut (Fig. 3C).

vaikutukset hypoksia Smad2 fosforylaatiota mahalaukun syövän solulinjojen

OCUM-2MD3 ja OCUM-12-soluissa, Smad2 fosforylaatio nostettiin alla hypoksinen ehto, verrattuna alle normoxic kunnossa. Sen sijaan Smad2 fosforylaatio ei lisääntynyt alle hypoksinen ehto OCUM-2M solujen (Fig. 4).

Hypoxic edellytys 24 h lisääntynyt Smad2 fosforylaation OCUM-2MD3 ja OCUM-12-solut (nuolenpäät), mutta ei että OCUM-2M-soluja. Smad2 /3 käytettiin kansainvälisenä kontrollina p-Smad2.

Effects of fosforylaation estäjät EMT ja vimentiinista ilmaisun hypoksia

Kumpikin TGFβR fosforylaation estäjät, Ki26894 ja SB431542, esti morfologiset muutokset OCUM-2MD3 ja OCUM-12 soluja hypoksinen kunnossa, mutta kolme muuta estäjät, Lapatinibin, Sunitinibi, ja PHA665752, ei (kuvio 5A, 5B). Toisaalta yksikään estäjien ollut mitään vaikutusta morfologia OCUM-2MD3 ja OCUM-12-soluilla normoksia (tuloksia ei ole esitetty). Ilmaisu taso

vimentiinista

, jota käytettiin EMT merkki, lisääntyi merkitsevästi hypoksia, ja laskivat jompikumpi TGFβR estäjien Ki26894 ja SB431542 (kuvio 5C). Vimentiinista proteiini taso oli myös lisääntynyt hypoksiaolosuhteissa, ja laskivat jompikumpi TGFβR estäjien Ki26894 ja SB431542 (kuvio 5D).

(A, B) Hypoksia aiheuttama EMT oli merkitsevästi (p 0,01) estyy TGFβR estäjät (Ki26894 ja SB431542). Muut inhibiittorit (Lapatinibin, Sunitinibi ja PHA665752) ei vaikuttanut EMT hypoksiaolosuhteissa. (C)

vimentiinista

mRNA ilmentyminen lisääntyi merkitsevästi alle hypoksinen ehto OCUM-2M ja OCUM-12-soluissa, ja pieneni TGFβR estäjien (Ki26894 ja SB431542). (D) vimentiinista proteiini lisääntyi alle hypoksia OCUM-12 ja OCUM-2MD3, ja pieneni TGFβR estäjien (Ki26894 ja SB431542).

Effects of hypoksinen ehdon liittyvistä tekijöistä EMT.

Hypoxic kunnossa merkittävästi lisääntynyt

VEGF-A

mRNA tasolla OCUM-2M, OCUM-2MD3, ja OCUM-12-soluissa. Ilmaisu taso

Twist

tai

Zeb1

kasvatti merkittävästi hypoksia OCUM-2MD3 ja OCUM-12-soluissa, mutta aleni OCUM-2M solujen. Lisääntynyt ilmentyminen

Twist

tai

Zeb1

väheni joko TGFβR estäjien Ki26894 ja SB431542 in OCUM-12-soluissa. Hypoksinen ehto ei vaikuta sen ekspressiotason

Snail1

(kuva 6).

(A) hypoksia-kohdemolekyylin,

VEGF-A

mRNA tasolla OCUM -2M, OCUM-2MD3, ja OCUM-12 nostettiin hypoksiaolosuhteissa. (B, C) Hypoksinen ehto huomattavasti ilmentymistason

Twist

ja

Zeb1

in OCUM-2MD3 ja OCUM-12-soluissa, mutta ei että OCUM-2M solujen. (D) Ilmaisu taso Snail1 ei vaikuttanut hypoksinen kunnossa.

Keskustelu

Viime aikoina useat tutkimukset ovat raportoineet, että hypoksinen mikroympäristön ympäröivän kiinteän kasvaimen soluihin voisi myötävaikuttaa syövän etenemiseen [30] – [34]. Kuitenkin molekyylimekanismeja vastuussa syövän etenemisen hypoksian jää epäselväksi. On raportoitu, että hypoksian on yksi laukaisee EMT [35]. Esillä olevassa tutkimuksessa, hypoksinen edellytys indusoi EMT diffuusi-tyypin mahasyövän solulinjoja OCUM-2MD3 ja OCUM-12, mutta ei suoliston-tyypin soluja. Diffuusi-tyyppinen mahasyöpä on ominaista korkeampi pahanlaatuisuuteen kuin suoliston-tyyppinen mahasyöpä [36]. EMT potentiaalia syöpäsolujen hypoksiaolosuhteissa saattaa olla yksi syy korkean pahanlaatuistumisriskin hajanainen-tyyppinen mahasyöpä.

Useat tutkimukset ovat raportoineet, että useat molekyylit saattavat vaikuttaa EMT syöpäsolujen, mukaan lukien TGF [23 ], [37], EGF [38], ja PDGF [39]. Esillä olevassa tutkimuksessa, TGFp stimuloi EMT OCUM-2MD3 ja OCUM-12-soluissa, mutta EGF: n ja PDGF: n ei. Lisäksi EMT induktio alla niukkahappiseen ehto pieneni merkitsevästi anti-TGF neutraloiva vasta-aine tai TGFβR fosforylaation estäjät sekä OCUM-2MD3 ja OCUM-12-soluissa. Yhdessä nämä tulokset osoittavat, että tuotannon taso on TGFp syöpäsoluissa oli merkittävästi lisääntynyt hypoksiaolosuhteissa ja ekspressiotasot TGFβR ja Smad2 fosforylaatio korotettiin hypoksia. Vimentiinista on ominaista osa mesenkymaalisten solujen ja ei yleensä ilmaistu epiteelisoluissa. Koska ilmaus

vimentiinista

epiteelisoluissa on keskeinen rooli EMT kautta vuorovaikutuksessa aktiini ja muiden välissä säikeet [40], vimentiinistä käytettiin EMT merkki tässä tutkimuksessa. Ilmaisu taso

vimentiinista

kasvatti merkittävästi hypoksia, ja pienensi TGFβR fosforylaation estäjät Ki26894 ja SB431542. Nämä havainnot ehdotti, että EMT alla niukkahappiseen ehto liittyy autokriininen TGFp /TGFβR signalointia diffuusi-tyyppinen mahasyöpä. Useissa tutkimuksissa on raportoitu korrelaatiot EMT ja TGFp signalointia hypoksia. [2], [21], [23], [32], [37] mahasyövän, on raportoitu, että EMT korreloi pahanlaatuisuuden syöpäsolujen ja vastaavien syövän eteneminen ja metastaasit. Kuitenkin mekanismit vastuussa EMT mahalaukun syöpäsolujen jää epäselväksi. Tämä paperi selvennettävä, että EMT mahalaukun syöpäsolujen aiheutettiin kautta TGFli signalointi hypoksiaolosuhteissa. TGFβR inhibiittorit voisivat siis olla lupaava aineina mahalaukun syövän etäpesäkkeiden.

Hypoksia stimuloi EMT OCUM-2MD3 soluja, mutta ei, kun OCUM-2M-soluja. EMT on ollut mukana edistämisessä syövän eteneminen ja metastaasit. Vaikka OCUM-2MD3 on ”tytär” solulinja OCUM-2M [25], [34], OCUM-2MD3 soluilla on suurempi potentiaali etäpesäke vatsakalvon nude-hiirissä kuin OCUM-2M solujen [25], [34] . Syöpäsolut vapaasti siirtyä vatsaontelossa ovat alttiina hypoksia puutteen proksimaalisen ruokinta aluksen [41]. Ilmaisu taso

TGFp 1

mRNA hypoksiaolosuhteissa oli merkittävästi suurempi kuin alle normoksia kaikissa kolmessa solulinjoista. Sitä vastoin ilmaus taso

TGFβRI

ja

TGFpRII

mRNA oli merkittävästi lisääntynyt hypoksian in OCUM-2MD3 soluja, mutta ei OCUM-2M-soluja. Eri vastaukset

TGFβR

ilmaisun välillä normoksia ja hypoksia saattaa olla yksi tärkeimmistä syistä hypoksian aiheuttaman EMT. Raportoimme aikaisemmin, että mahan syöpäsolujen hypoksiaolosuhteissa osoitti EMT ja korkea muuttavien ja invasiivisia toimintoja verrattuna syöpäsoluja normoksia [34]. Ylös-säätely EMT hypoksisten syöpäsolujen saattaa olla yksi syy korkeampi mahdollisuudet etäpesäke vatsakalvon sisään OCUM-2MD3 solujen verrattuna OCUM-2M solujen.

Hypoxic kunnossa merkittävästi lisääntynyt ekspressiotaso on

Twist

ja

Zeb1

in OCUM-2MD3 ja OCUM-12-soluissa, mutta ei että OCUM-2M solujen. Hypoksian kasvava aktiivisuus

Twist

ja

Zeb1

ilmentyminen väheni TGFβR estäjien (Ki26894 ja SB431542) in OCUM-12-soluissa. EMT hypoksia saattaa osittain säädellään transkriptiotekijät,

Twist

ja

Zeb1.

Vaikka HGF vaikuttaa syöpäsolun morfologiaa OCUM-2MD3 ja OCUM-12-soluissa, hypoksian indusoiman EMT ei inhiboi anti-HGF neutraloiva vasta-aine tai c-Met: n estäjä joko OCUM-2MD3 tai OCUM-12-soluissa. HGF tuotanto ei havaittu OCUM-2MD3 tai OCUM-12-soluissa joko hypoksia ja normoksia (tuloksia ei esitetty). Suurin osa HGF on peräisin stroomasolut mahasyövän [42]. Vaikka HGF ehkä ole tärkeä rooli hypoksian aiheuttaman EMT, HGF saattaa stimuloida EMT syöpäsolujen kautta syöpää strooman vuorovaikutus.

hypoksian aiheuttaman EMT of OCUM-2MD3 solujen osittain inhiboitui TGFβR estäjät , mutta monia muita estäjät, mukaan lukien c-Met: n estäjä, PDGF-inhibiittori, EGFR-inhibiittorin, ja VEGFR-estäjä, ei ollut mitään vaikutusta hypoksian indusoiman EMT tässä tutkimuksessa. Nämä havainnot viittaavat siihen, että muu tekijä (t) saattaa liittyä hypoksian aiheuttamaa EMT joissakin syöpäsoluissa. Jatkossa tutkimuksissa, on tarpeen tutkia muita uusia tekijöitä, jotka voivat muuttaa syövän morfologiassa.

Yhteenvetona autokriinisen TGFp /TGFβR signalointi hypoksiaolosuhteissa saattaisi olla yksi niistä tekijöistä, jotka liittyvät aggressiivinen fenotyypin EMT mahasyöpä soluja. TGF /TGFβR signalointi inhibiittorit näyttävät olevan terapeuttisesti lupaava mahasyövän.

tukeminen Information

Kuva S1.

morfologisia muutoksia mahalaukun soluja niukkahappiseen kunnossa. In MKN-7, MKN-45, MKN-74, ja KATO-III, morfologisia muutoksia ei havaittu hypoksiaolosuhteissa.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0062310.s001

(TIF) B