Krooninen sairaus

tiivistelmä

Matrix metalloproteinaasi 7 (MMP7), joka on metallohydrolase mukana kehittämässä useita syöpiä, on vaimentua

APC

Min /+

paksusuolisyövän hiirimallissa seuraavat sulindaakki hoitoon. Sen määrittämiseksi, onko tämä vaikutus on merkitystä ihmisen kunnossa, HT-29 ihmisen paksusuolen syövän soluja käsiteltiin sulindaakilla ja sen aineenvaihduntatuotteet ja verrattiin saatuja tuloksia

in vivo

hiiren tutkimuksia. Ilmaisu on

MMP7

seurattiin. Tulokset osoittivat, että sulindaakkisulfidilla tehokkaasti vaimentua sekä

MMP7

ilmaisun ja toimintaa. Lisäksi toiminta-pohjainen proteomiikan osoitti, että sulindaakkisulfidilla dramaattisesti vähentynyt aktiivisuus leukotrieeni A4 hydrolaasin HT-29-solujen kuten heijastuu tason lasku sen tuotteen, leukotrieeni B4. Tämä tutkimus osoittaa, että vaikutus sulindaakin hoito hiirimallissa paksusuolen syöpä voi olla merkitystä ihmisen vastine ja korostaa vaikutusta sulindaakin hoidon metallohydrolases.

Citation: Guillen-Ahlers H, Tan J, Castellino FJ, Ploplis VA (2011) vaikutus sulindaakkisulfidin on Metallohydrolases Human koolonisyöpäsolulinja HT-29. PLoS ONE 6 (10): e25725. doi: 10,1371 /journal.pone.0025725

Editor: Matthew Bogyo, Stanford University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 03 helmikuu 2011; Hyväksytty: 09 syyskuu 2011; Julkaistu: 03 lokakuu 2011

Copyright: © 2011 Guillen-Ahlers et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat National Institutes of Health (National Heart, Lung, and Blood Institute) avustus PO1HL07375 (ja FJC). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Ei-steroidiset tulehduskipulääkkeet (NSAID), kuten sulindaakki, ovat kemiallis-ennaltaehkäisevää reagenssien kohti kolorektaalisyövissä [1], [2], [3]. Tämä vaikutus on sopusoinnussa havaintojen

in vitro

ihmisen paksusuolen syöpäsoluissa [4], sekä

in vivo

APC

Min /+

hiiri malli, jossa suuri lasku kasvaintaakkaa havaitaan [5]. Maha komplikaatioita, jotka kehittyvät tulehduskipulääkkeen käyttäjää on hyvin dokumentoitu [6], ja edustaa esteen näiden lääkkeiden käytöstä kuten kemoterapian tumisenestoaineiden. Pleiotrooppinen vaikutukset sulindaakin paksusuolen syövän ehkäisyyn ovat vielä epäselviä ja kehityksen esteenä tarkempia hoitoja heikentynyt sivuvaikutuksia. Tästä asiasta, on osoitettu, että sulindaakki hoito aiheuttaa muutoksia soluväliaineen remodeling tapahtumia, kuten downregulation matriksimetalloproteinaasi 7 (

MMP7

) suoliston adenoomien on

APC

Min /+

hiirillä [7].

MMP7 kuuluu ryhmään metalli-ioni-proteaasien. Mukaan MEROPS tietokantaan (www.merops.sanger.uk), matriksimetalloproteaaseja (MMP: t), joka koostuu 24 jäsentä, sisältää M10 alaryhmän MA perheen metallohydrolases klaanin M. MMP: t ovat voimakkaasti osallisina kehittämiseen monia syövät. Poistaminen

MMP2

ja

MMP-9

hiirillä on osoitettu vähentävän haiman kasvaimien syntyyn vähentämällä angiogeneesi [8]. Merkitystä tässä tutkimuksessa,

MMP7

poiston

APC

Min /+

hiirillä on osoitettu vähentävän huomattavasti suoliston kasvaintaakkaa [9]. Nämä havainnot sotkea MMP7 toteuttamiskelpoisena tavoitteena oli kehittää uusia hoito-ohjelmien.

Nykyinen tutkimus määritti sulindaakin hoidon MMP7 ihmisen koolonisyöpäsolulinja, HT-29, ja hyödyntää kokonaisvaltaisen lähestymistavan havaita muuttuneen toiminnan muiden metallohydrolases. Tulokset näistä tutkimuksista on kuvattu.

Materiaalit ja menetelmät

Soluviljely

HT-29-soluja (American Type Culture Collection, Manassas, VA) pidettiin McCoyn 5A (Gibco, Grand Island, NY), jossa 10% naudan sikiön seerumia, 37 ° C: ssa ilmakehässä, jossa 95% ilma /5% CO

2. Sulindaakki, sulindaakkisulfidi, ja sulindaakkisulfoni ostettiin Sigma Aldrich (St. Louis, MO). Nämä lääkkeet laimennettiin dimetyylisulfoksidiin (DMSO). DMSO lisättiin median lopulliseen konsentraatioon 1%, ja soluja viljeltiin 6-kuoppaisille levyille. Kun solut olivat 80% konfluentteja, niitä käsiteltiin eri pitoisuuksilla sulindaakin ja sen metaboliittien. 24 tunnin kuluttua solut trypsinoitiin ja elävät solut laskettiin käyttämällä trypaanisinistä menetelmällä.

Geenien ilmentyminen

HT-29-solujen, aikaan sadonkorjuun, trypsinoitiin, sentrifugoitiin, ja solupelletti käytetään erottamaan RNA jälkeen Qiagen protokollaa. Pitoisuus ja näytteiden laatu arvioitiin käyttäen spektrin profiili saatu NanoDrop-1000 (Thermo Scientific, Wilmington, DE). Reaaliaikainen käänteistranskriptio-polymeraasiketjureaktio (RT-PCR) suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [7]. Alukkeet ja koettimet on suunniteltu ihmisen

MMP7

,

MMP25

,

Trypsin1

, ja

RPL-19

on esitetty taulukossa 1.

RT-PCR tutkimukset, kokonais-RNA uutettiin HT-29-soluja, käsiteltiin DMSO: lla tai 100 uM sulindaakkisulfidin 24 tunnin ajan käyttäen Qiagen-protokollaa. RT-PCR-reaktiossa sisältyy 2,5 x Hotmaster Mix (5 Primer Inc., Gaithersburg, MD), RNaasi-inhibiittori Multiscribe RT-entsyymin, passiivinen viite väriaine ROX, ja SYBR Green. Kokonais-RNA (25 ng) oli revere-transkriptoidaan 30 ul: ssa reaktioseosta 48 ° C: ssa 30 minuutin ajan. Seuraavia olosuhteita käytettiin monistamiseen: pre-denaturaatio 5 minuutin ajan 95 ° C: ssa, 30 sykliä denaturointi 95 ° C: ssa 20 sekuntia, pariutuminen 59 ° C: ssa 20 sekunnin ajan, ja pidennys 72 ° C: ssa 25 sekunnin ajan. PCR-tuotteet erotettiin elektroforeesilla 3% agaroosigeelissä, joka sisälsi etidiumbromidia. 50 emäsparin DNA-ladder (Promega, Madison, WI) käytettiin molekyylipainomarkkerin.

Western blotting

proteomeja uutettiin HT-29-soluja ja sitten käsiteltiin sulindaakkisulfidin (100 uM) 24 tunnin ajan 80%: n konfluenssiin. Solut trypsinoitiin, sentrifugoitiin, ja sitten pestiin PBS: ssä. Sitten solupelletit Dounce homogenisoitiin ja sonikoitiin. Proteomi sentrifugoitiin 100,000 x

g

erottaa sytosolin ja membraanifraktioiden. Eritetty fraktio saatiin sentrifugoimalla solun median 100000 x

g

. Proteomin saostettiin lisäämällä ammoniumsulfaattia. Näytteet vietiin PD-10 suolanpoistopylväässä (GE Healthcare, Piscataway, NJ) ja proteiinikonsentraatiot määritettiin käyttämällä NanoDrop-1000 (Thermo Scientific, Wilmington, DE). Näytteet olivat kuorman päälle 10% polyakryyliamidigeelillä, elektroforeesi ja siirrettiin PVDF-kalvolle. Membraaneja inkuboitiin yön yli 4 ° C: ssa polyklonaalisella kanin-anti-ihmisen MMP7 (Abcam, Cambridge MA), ja polyklonaalinen kanin anti-ihmis-aktiivisen MMP7 (Abcam) 1 ug /ml estopuskurissa (PBS, 3% rasvatonta kuivamaitoa , 0,1% Tween 20). Sillä MMP25 ja α-tubuliinin kanin anti-humaani MMP25 (Abcam) ja hiiren anti-ihmis-α-Tubulin (Santa Cruz Technology), vastaavasti, on käytetty. HRP-konjugoitua anti-kani-lgG-vasta-aineen tai HRP-konjugoitua anti-hiiri-IgG: tä (Cell Signaling Technology, Boston MA) on estopuskurissa käytettiin sekundaarisena vasta-aineena. Blotit kehitettiin käyttäen LumiGLO reagenssit (Protein Research Products, Gaithersburg, MA) tai Länsi Lightning ECL Substrate (Perkin Elmer Inc., Waltham, MA).

toimintopohjainen proteomiikan tunnistamiseksi aktivoitujen metallohydrolases

proteomeja säädettiin pitoisuuteen 1 mg /ml PBS: ssä. Cocktail alkyynin antureista kohdistaminen aktiiviseen kohtaan metallohydrolases oli antelias lahja Benjamin F Cravatt (Scripps Research Institute, La Jolla, CA). Leimaus suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu [10]. Lyhyesti, koettimet lisättiin lopulliseen konsentraatioon 1 uM, ja niitä inkuboitiin UV-valon alla 1 tunnin ajan. Rodamiini atsidi sitten sidottu koettimia käyttäen click kemiaa [11]. Näytteet elektroforeesi 10% polyakryyliamidigeelillä ja skannataan käyttäen joko Hitachi FMBio IIe tasokuvanlukija (MiraBio, Alameda, CA) tai KODAK In-Vivo monispektriset System FX (Carestream Health, Rochester, NY).

tunnistaminen toimintoperusteisen leimattujen proteiinien

Real-size geeli scan tulosteita käytettiin mallina poimia halutut bändejä ja skannataan jälkeenpäin varmistaa oikea viipaloinnin geelin. Kukin geeli tulppa pelkistettiin 10 mM ditiotreitoli ammoniumbikarbonaattia ja alkyloitiin 55 mM jodiasetamidilla. Näytteet pilkottiin 0,1 ug trypsiiniä (Promega, Madison, WI) 100 ul: ssa 10 mM ammoniumbikarbonaattia ja inkuboitiin yön yli 37 ° C: ssa. Trypsiinipeptidit uutettiin geelistä tulpat 50% asetonitriili /49,9% H

2O /0,1% trifluorietikkahappo ja sen jälkeen 100% asetonitriiliä ja lopuksi 0,1% trifluorietikkahappoa.

trypsiinipeptidit kromatografoitiin 100 pm x 10 cm: n C18-pylväs (partikkelikoko: 5 um) ja eluoitiin käyttäen lineaarista gradienttia 3-45% asetonitriiliä H

2O yli 70 minuuttia huoneenlämpötilassa, virtausnopeudella 500 nl /min. Eluentti oli sähkö- ruiskutetaan lineaarinen kvadrupolin ioniloukku (LTQ) massaspektrometrillä (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). Sequest ja X! Tandem algoritmeja käytettiin etsiä tietokannasta hyödyntäen kansainvälistä proteiini indeksi (IPI) hiiri tietokantaan.

leukotrieeni B4 entsyymi-immunomääritys

80% konfluenssiin, HT-29-soluja inkuboitiin joko sulindaakkisulfidilla tai DMSO: ssa 24 tunnin ajan. Erittynyt Proteome saatiin ja konsentroitiin vakuumisentrifugoinnilla. Proteomeja säädettiin 5 mg /ml ja LTB4 määrällisesti entsymaattisella immunomääritys kit (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI).

Tulokset

Pienentynyt metaboliitti sulindaakin, sulindaakkisulfidin, valikoivasti kasvattaa solukuolema HT-29-solujen

HT-29-soluja käsiteltiin sulindaakilla, sulindaakkisulfidi, ja sulindaakkisulfoni pitoisuuksina 10-1000 pM (kuvio 1). Alkaen 250 uM, sulindaakkisulfidilla huomattavasti solukuoleman, saavuttaa 100% solukuolemaa 500 uM. Sen sijaan, sulindaakki ja sulindaakkisulfoni ei merkittävästi lisätä solukuolemaa, jopa silloin, kun lääkkeitä, joilla lisätään mM pitoisuuksilla.

80% konfluenssiin, soluja käsiteltiin kasvavilla pitoisuuksilla sulindaakin (harmaa), sulindaakkisulfidi ( valkoinen), ja sulindaakkisulfonin (musta).

Sulindaakkisulfidin vähentää

MMP7

mRNA, proteiini, ja toiminnan tason

kerrottiin, että kaksi päivää of sulindaakin hoito riittää downregulate MMP7 kasvaimissa on

APC

Min /+

hiirillä [7]. Sen määrittämiseksi, joka metaboliitiksi tehokkaasti vähentynyt MMP7, HT-29-soluja käsiteltiin sulindaakilla ja sen metaboliitit 100 uM, jonka pitoisuus ei ole myrkyllinen soluille kuten on osoitettu kuviossa 1, 24 tunnin ajan. Ilmaisu profiilia

MMP7

verrattiin tuloksiin aiemmin saatu hiiren tutkimuksissa (kuvio 2A). Vain aktiivisen metaboliitin, sulindaakkisulfidi, kykeni vähentämään merkittävästi ilmaus

MMP7.

Titrauskäyrään käyttämällä erilaisia ​​pitoisuuksia sulindaakkisulfidin kävi ilmi, että jopa 50 uM,

MMP7

osoitti pientä (14%), mutta tilastollisesti merkitsevä downregulation ilmaisun (p = 0,044) (kuvio 2B). 100 uM, laskua 65% havaittiin (p = 0,000001). Ero 100 uM ja 200 uM oli vähemmän dramaattinen (11%), mutta oli silti merkittävästi erilainen näiden kahden pitoisuuksina (p = 0,017).

(A) Reaaliaikainen RT-PCR RNA: HT 29 solut 24 tunnin kuluttua hoidon DMSO, sulindaakin (S), sulindaakkisulfidilla (Sd) ja sulindaakkisulfonin (Sn). Tulokset saatiin käyttämällä ΔΔCt menetelmällä

hRPL-19

kuin taloudenhoito geeni. C

T arvojen välillä 20.10 ja 20.56 kaikissa näytteissä osoittaa vakaan

hRPL-19

ilme. (B) ekspressio

hMMP7

24 tunnin kuluttua sulindaakin hoidon. Vaimennussäätely

hMMP7

oli merkitsevä kaikissa pitoisuuksissa. Tulokset saatiin käyttämällä ΔΔCt menetelmällä

hRPL-19

kuin taloudenhoito geeni. C

T arvojen välillä 23.22 ja 23.56 kaikissa näytteissä osoittaa vakaan

hRPL-19

ilme. (C) Sytosoliset, kalvo, ja erittävät proteomia jakeet erotetaan DMSO ja sulindaakkisulfidilla käsitellyn HT-29-soluja altistettiin western blot-analyysi käyttäen vasta-ainetta, joka ei tee eroa aktiivisen ja aktiivinen MMP7 (ylhäällä), ja vasta-aine, joka tunnistaa vain aktiivisen kohdan (alhaalla). Odotettavissa bändi MMP7 ilmestyy 28 kDa, mutta bändi 45 kDa on usein raportoitu, mahdollisesti dimeeri. Cyto merkitsee sytosolifraktion; Mem, membraanifraktio, SECR, erittyy osa, ja aMMP7, aktiivinen MMP7.

Western blottaus MMP7, sekä aktiiviseen kohtaan MMP7, suoritettiin sytosolin, kalvo, ja erittävät jakeet HT-29 proteomeja jälkeen 24 tunnin sulindaakkisulfidin hoitoa 100pM (kuvio 2C). Molemmissa tapauksissa, MMP7 havaittiin vain erittyneen jakeet proteomin. Sulindaakkisulfidilla käsittely osoitti selvästi vähentämään MMP7 että erittyvän jae on 100 uM. Western blot-analyysi kohdistuvat aktiiviseen kohtaan MMP7 paljasti täydellistä häviämistä havaittavissa aktiivisen MMP7 jälkeen sulindaakkisulfidin hoidon.

Sen määrittämiseksi, jos muut MMP: t, muut proteaasiluokissa, ja siivous-geenin, RPL-19, vaikuttivat sulindaakki HT-29-solujen, RT-PCR: llä (kokosoluekstraktien) ja Western blot (erittyy, sytosolisia, ja fraktiot) analyysit suoritettiin. mRNA MMP25, trypsin1, ja RPL-19 ei ole muutettu sen jälkeen kun sulindaakkisulfidin hoidon (kuvio 3A, B). Western blot-analyysi kalvon osa näiden solujen vahvistettiin RT-PCR-tulokset MMP25 (kuvio 3C).

(A) PCR-tuote RT-PCR RNA: HT-29-solujen 24 tunnin kuluttua hoidon DMSO: ssa tai sulindaakkisulfidin. Kaista 1, 50 emäsparin DNA-tikkaat; kaista 2,

MMP25

jälkeen sulindaakkisulfidilla hoidon; kaista 3,

MMP25

jälkeen DMSO hoidon; kaista 4,

Trypsin1

jälkeen sulindaakkisulfidilla hoidon; kaista 5,

Trypsin1

jälkeen DMSO hoidon; kaista 6,

MMP7

jälkeen sulindaakkisulfidilla hoidon; kaista 7,

MMP7

jälkeen DMSO hoidon; kaista 8

RPL-19

jälkeen sulindaakkisulfidilla hoidon; kaista 9,

RPL-19

jälkeen DMSO hoidon. Tulokset osoittavat, että vain

MMP7

ilmentyminen vaikuttaa sulindaakkisulfidilla hoitoa. (B) Kvantitatiivinen RT-PCR

MMP25

,

Trypsin1

, ja

MMP7

jälkeen DMSO: ssa tai sulindaakkisulfidin hoitoon. Tulokset saatiin käyttämällä ΔΔCt menetelmällä

hRPL-19

kuin taloudenhoito geeni. Tulokset osoittavat määrälliset erot

MMP7

ilmaisun jälkeen sulindaakkisulfidilla hoidon suhteen DMSO hoitoon. (C) Western blot eritetyn osa HT-29-soluja, jotka osoittavat, että proteiinin tasot MMP25 kalvon osa on samankaltainen sulindaakkisulfidilla ja DMSO käsiteltyjä soluja.

Toiminta-pohjainen proteiini profilointi kohdistaminen metallohydrolases paljastaa lasku LTA4H aktiivisuuden

proteomeja uutetaan HT-29-solujen 24 tunnin kuluttua hoidon sulindaakkisulfidin tai DMSO leimattiin koetin cocktail kohdistettu metallohydrolase superperheen ja ajettiin 1D geeli. Vahva bändi välillä 60 ja 65 kDa havaittiin HT-29-solujen käsitelty DMSO. Sulindaakkisulfidilla käsiteltyjä soluja osoitti heikko bändi samanlainen molekyylipaino. Bändit irrotettiin ja analysoitiin massaspektrometrialla. Näytteet ajettiin lineaarisella kvadrupolisten MS /MS (kuvio 4), ja tulokset sovitettu yhteen MEROPS tietokantaan metallohydrolases. Oli kaksi peptidejä (LTYTAEVSVPK ja LVVDLTDIDPDVAYSSVPYEK) havaittiin -70 kDa jotka täsmäsi leukotrieeni A4-hydrolaasi (LTA4H). Ennustettu molekyylipaino LTA4H on 69 kDa. LTA4H on aiemmin osoitettu olevan tavoite tämän metalloproteaasi koetin cocktail (10).

Metallohydrolase toimintaan perustuva merkitseminen HT-29-solujen erittämä proteomeja. MMP2 ja MMP7 standardit lisättiin solu- proteomeja (nuolet). Bändi näytetään voimakas lasku (*) jälkeen sulindaakkisulfidilla hoidon uutettiin ja analysoitiin massaspektrometrialla. MS /MS-spektrit LVVDLTDIDPDVAYSSVPYEK ja LTYTAEVSVPK peptidit vastasivat aminohappoja 366-386 ja 155-165, vastaavasti, LTA4H proteiinia. Proteiinipitoisuus kaikkien näytteiden säädettiin 1 mg /ml ja vastaa 15 ug prote- lisättiin kaistaa kohti. MW tarkoittaa molekyylipaino; Sukupuolitaudit, standardit, Sd, sulindaakkisulfidilla saaneista ja D, DMSO-käsitelty.

Jotta vahvistaa vähentämistä LTA4H toimintaa, entsymaattinen immunomääritys käytettiin mittaamaan leukotrieeni B4 (LTB4) tasot jälkeen sulindaakki käsittely (kuvio 5). Sulindaakkisulfidin-käsitellyt solut osoittivat voimakkaasti alhaisempia LTB4 verrattuna DMSO-käsiteltyihin soluihin.

eritetty proteomeja DMSO-käsiteltyjen ja sulindaakkisulfidin käsiteltyjä soluja analysoitiin LTB4 tasolla käyttäen entsymaattista immunomääritys.

keskustelu

esillä oleva tutkimus osoitti, että sulindaakkisulfidi pystyy vähentämään RNA ja proteiini tasoilla MMP7, joka on yhdenmukainen sen kanssa, mitä havaittiin hiiren tutkimuksissa [7]. Kautta toiminta-pohjainen proteiini profilointi, osoitettiin, että sulindaakkisulfidilla dramaattisesti vähentää aktiivisuutta LTA4H. Tämä tulos oli validoitu alentuneesta LTB4.

osallistuminen metalloproteaasien paksusuolen syöpä on aiemmin tunnistettu, mutta hoidon kehittämiseen strategioiden kohdentamalla näiden entsyymien on hävinnyt [12]. Yksi ongelma on alhainen spesifisyys metalloproteaasin estäjät, jotka ovat tehneet sen kliinisissä tutkimuksissa. MMP7 on kuitenkin johdonmukaisesti havaittu olevan merkitystä paksusuolen syövän ja sen eläinmalleissa [9], [13]. Tämä tutkimus osoitti, että sulindaakkisulfidilla pystyy vähentämään ilmentymistä

MMP7

ihmisen koolonisyöpäsolulinja HT-29, joka havaittiin myös,

in vivo

, vuonna

APC

Min /+

hiirillä [7]. Sen määrittämiseksi, jos muut MMP: t tai muut proteaasiluokissa myös muuttaa, MMP25, joka on kalvoon liittyvä MMP, joka ilmentyy voimakkaasti syöpäsoluissa [14], ja trypsin1 analysoitiin ja sen osoitettiin olevan ei vaikuta sulindaakkisulfidin hoitoon. Lisäksi taloudenhoito geeni RPL-19 ei myöskään vaikuta NSAID. Nobiletin, toisen aineen syövän vastaisten ominaisuudet, on myös osoitettu säätelevät vaimentaen

MMP7

[15] HT-29-soluja. Useita mekanismeja on ehdotettu, jonka MMP7 edistää kasvaimen kasvua. Useat näistä tutkimuksista viittaavat MMP7 kanssa häiritsi Fas-välitteisen apoptoottisen vasteen [16], [17], [18], ja tulehduksen liittyvät helpottamista kasvaimen kasvun on ehdotettu johtuvan MMP7 pilkkomalla Fas-ligandin [19].

Sinkki metallopeptidases 12 jäsentä ja kuuluvat perheeseen metallohydrolases. Nämä proteaasit ovat sekaantuneet useisiin syöpiin kuten aminopeptidaasi N paksusuolen syöpä [20], kystinyyli aminopeptidaasi munuaisten syöpä [21], ja LTA4H keuhkoissa ja paksusuolen adenokarsinoomien [22]. Tämä on ensimmäinen tutkimus, joka yhdistää sulindaakki sääntelemiseksi LTA4H. Vaimennussäätely toiminnan LTA4H, ja lasku kasvaintaakkaa, kun sulindaakki hoidon tukee tutkimuksia, joissa on osoitettu olevan yliaktiivista paksusuolensyöpä. Lisäksi [6] -gingerol, luonnollinen komponentti antitumorigenic ominaisuuksia, on todettu tukahduttaa syövän kasvua LTA4H inhibition [23]. Väheneminen LTA4H aktiivisuuden validoitiin se havainto, että alempi LTB4 määrän todettiin jälkeen sulindaakin hoidon. LTB4 on tunnettu eikosanoidin kanssa kemotaktinen ominaisuuksia ja on osoitettu stimuloida,

in vitro

, HT-29 koolonsyöpäsoluihin [24].

ei ole ollut muuta raportti n osallistuminen sulindaakin tai muita NSAID puolesta MMP7 tai LTA4H ilme. Kuitenkin alustavat tutkimukset, olemme osoittaneet, että sulindaakki ole ainoa NSAID, joka kykenee vähen- tämisessä

MMP7

, eli aspiriini (tuloksia ei ole esitetty), mikä viittaa siihen, että

MMP7

on vaimentua, jonka jaettua NSAID mekanismi [7], [25] eikä ainutlaatuinen ominaisuus sulindaakin.

Yhteenvetona tämän tutkimuksen tunnistettu kaksi ehdokasta, aiemmin raportoitu olevan erittäin merkityksellinen kasvainten kehittymiseen, jotka ovat muuttuneet jälkeen sulindaakki hoidon . Uusia hoitomuotoja valikoivasti kohdistettu MMP7 ja LTA4H, yksittäin tai yhdistelmänä, tarjoavat uusia hoitomenetelmiä, jotka hyödyntävät edut sulindaakin hoitoa, mutta mahdollisesti ilman haitallisia sivuvaikutuksia tämän huumeen.

Kiitokset

kirjoittajat kiittää Benjamin Cravatt (Scripps Research Institute, La Jolla CA) alkyyni antureista kohdistuvat aktiiviseen kohtaan metallohydrolases ja Sherry Niessen ja Eranthie Weerapana (Scripps Research Institute, La Jolla CA) tekninen apu, jonka proteomiikan kokeiluja.