Krooninen sairaus

tiivistelmä

Mesothelin (

MSLN

) geeni koodaa 71 kilodaltonin (kDa) prekursoriproteiinin, joka jalostetaan megakaryosyyttistä tehostava tekijä (MPF), joka on 31 kDa: n proteiini, joka erittyy solusta, ja kypsä Mesothelin (mMSLN), 40 kDa: n solun pinnan proteiini. MMSLN sitoutuu CA125, vuorovaikutus, joka on ollut mukana sisäisen cavitary leviämisen mesoteliooma ja munasarjasyöpä. Määritellä paremmin roolin MPF ​​ja mMSLN, kasvu keuhkosyövän A549 arvioitiin immuunivajavaisissa hiirten inaktivointi

Msln

geeni. Havaitsimme, että

Msln

– /- hiirillä ksenosiirrettyjä kanssa vatsaonteloon A549 kasvaimia hengissä merkittävästi pitkään kuin kasvain

Msln + /+

hiirillä. Kun kasvain

Msln

– /-

hiiret

täydennetään rekombinantti MPF (ja vähemmässä määrin mMSLN), suurin osa tästä selviytymisen etu menetetään. Nämä tutkimukset osoittavat, että MPF ja mMSLN on tärkeä rooli kasvun keuhkosyövän solujen

vivo

ja esiin mahdollisuuden, että inaktivointi MPF voi olla hyödyllinen hoito keuhko- ja muiden MSLN ilmentäviä syöpiä.

Citation: Zhang J, Bera TK, Liu W, Du X, Alewine C, Hassan R, et ai. (2014) megakaryosyyttistä tehostava tekijä ja Aikuinen Mesothelin edistää kasvua on Lung Cancer Cell Line vatsaonteloon Hiirien. PLoS ONE 9 (8): e104388. doi: 10,1371 /journal.pone.0104388

Toimittaja: Prasad S. Adusumilli, Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 24 huhtikuu 2014; Hyväksytty: 12 heinäkuu 2014; Julkaistu: 13 elokuu 2014

Tämä on avoin-yhteys artikkeli, vapaa kaikki tekijänoikeudet, ja saa vapaasti jäljentää, levittää, välittää, modifioitu, rakennettu, tai muuten käyttää kuka tahansa laillista tarkoitusta. Teos on saatavilla Creative Commons CC0 public domain omistautumista.

Data Saatavuus: Kirjoittajat vahvistaa, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperin.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukee Intramural tutkimusohjelma NIH, National Cancer Institute, Center for Cancer Research. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Mesothelin

(MSLN) B-geeni koodaa linjaa rajoitettu kasvaimen antigeeni, joka ilmentyy normaaleissa mesoteelisolujen vuori keuhkosairaudet, vatsakalvon ja sydänpussin. Se on myös hyvin ilmaistaan ​​epitheliod mesotelioomatapausten, jotka on johdettu normaalista mesoteelisolujen, ja poikkeuksellisesti monissa muissa syövissä, mukaan lukien munasarjojen, haiman, keuhkon, maha, kolangiokarsinooma ja kolmen rintasyöpä [1] – [4].

MSLN

geeni koodaa 71 kDa prekursoriproteiinina on käsitelty kahteen valmiiden proteiinien: megakaryosyyttistä tehostava Factor (MPF) ja kypsä MSLN (mMSLN). MPF on 31 kDa: n glykoproteiini, jota erittyy solusta vereen. MMSLN on 40 kDa: n glykoproteiini, proteiini, joka on edelleen sitoutunut solukalvoon, jonka inositoli [5], [6], mutta suojista solun pinnalta ajan toiminnan välityksellä TNF-α konvertoivan entsyymin (Fig. 1) [7 ]. MMSLN on osoitettu sitoutuvan MUC16 (CA125); Tämä vuorovaikutus on liitetty sisäisen cavitary leviämisen mesoteliooma ja munasarjasyövän [8]. Tutkimukset

Msln

geenin knock out (- /-) hiirillä osoittavat, että geeni ei ole välttämätön normaaliin kehitykseen ja lisääntymiseen, mutta useat viimeaikaiset tutkimukset ovat esiin mahdollisuuden, että

MSLN

voisi säädellä syöpään solujen kasvua [9] – [12]. Vuonna Eker rottien kehittäminen mukuloita skleroosi-2-indusoidun munuaisen karsinooma väheni merkittävästi ilman homologin

MSLN

geenin [13], [14]. Haiman syöpäsoluja yli ilmentyminen

MSLN

on liitetty merkittävää parannusta tuumorin solujen kasvua ja muuttoliike

vitro

[11]. Äskettäin ilmentymisen taso MSLN proteiinin korreloi kasvaimen aggressiivisuus sekä vähentynyt eloonjäämisaste potilailla, joilla on varhaisen vaiheen keuhkoadenokarsinooma [15], mutta molekyyli mekanismi, joka edistää näiden fenotyypit eivät ole hyvin ymmärretty. CA125, kalvoon liittynyt munasarjasyövän antigeeni, on raportoitu olevan vuorovaikutuksessa MSLN, ja on ehdotettu, että tämä vuorovaikutus voi helpottaa munasarjasyöpä etäpesäke. Vaikka sitoutuminen MSLN ilmentävien solujen CA125 on osoitettu soluviljelmässä [8], [16], ei ole olemassa eläinkokeiden osoittaa, että tämä vuorovaikutus on tärkeää kasvaimen kantavien hiirten.

GPI, glykosyylifosfatidyyli.

Olemme syntyy kateenkorvattomia nude-hiiriin, joissa

Msln

-geeni on inaktivoitu, estää tuotannon mMsln ja Mpf proteiinia. Nämä hiiret lisäänny normaalisti eikä poikkeavuuksia niiden kasvun tai muita ominaisuuksia ei ole havaittu. Koska nämä hiiret eivät tee Mpf ja ei ole Msln soluihin, että linja vatsaonteloon, olemme käyttäneet niitä tutkimaan, onko puuttuminen Msln kasvu vaikuttaa keuhkosyövän soluja ympättiin sisällä vatsaonteloon näiden hiirten.

Materiaalit ja menetelmät

Solulinjat ja immunohistokemia

keuhkosyövän A549 saatiin tri Hisataka Kobayashi (National Cancer Institute, NIH, Bethesda, USA) ja sen identiteetti varmistettiin DNA-sormenjälkien avulla Short Tandem toistaa määrityksen. Ihmisen epidermoidikarsinooma A431 hankittiin ATCC (Mananasas, VA) ja ylläpitää laboratoriossa kuin suositellaan. Immunohistokemiallinen värjäys MSLN ja CA125 suoritettiin Histoserv, Inc (Germantown, MD) käyttäen hiiren anti-MSLN 5B2 (Novocastra reagenssit Leica Biosystems, Buffalo Grove, IL) kuten aiemmin on kuvattu [17], ja hiiren anti-CA125 OC125 (Zymed Laboratories) klo 1:50.

eläinkokeet

eläinten Study ehdotukset (LMB-053 ja LMB-014) on hyväksynyt NIH Animal Care ja käyttö komitea. Kaikki eläinkokeet mukaan lukien käsittely ja uhri tehtiin mukaan institutionaalisten suuntaviivat NIH. Kateenkorvattomiin nude-hiirten (NCR-nu /nu) ja Nude /

Msln

– /- hiiret saatu NCI-Frederick asutettiin mikro-eristäjä häkeissä koko kokeen ajan. Kaikki hiiret käytettiin kokeissa oli naisia, paino (15-20 g) ja ikä (7-10 viikkoa) Hyväksytty. Kaikki injektiot olivat vatsaonteloon (IP), ellei toisin mainita. A549 ja A431 IP ksenograftit määritettiin siirrostamalla 2 x 10

6 solua 200 ul: ssa solususpensiota fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa (PBS). Sillä ihonalaisen mallissa, 2 x 10

6 A549-solut ruiskutetaan oikea reisi. Kaikki rekombinanttiproteiini käsittelyt tehtiin IP-injektiolla 25 ug tutkimuksen proteiinia 200 ul: ssa PBS: ää kolme kertaa viikossa yhteensä kolmen viikon ajan. Hengissä tutkimuksissa hiiriä tarkkailtiin päivittäin ja tapetaan CO

2 hengitettynä kun kuolemaisillaan.

sukupolvi

Msln

– /- Kateenkorvattomiin Nude hiiret

Male

Msln

null hiiret C57 /BL6 geneettinen tausta (

Msln

– /-) [9] käytettiin tukemaan risti naaras BALB /c villityypin (WT) hiiret ja pentueet seulottiin

Msln

heterotsygoottinen alleeli. Mies heterotsygootti hiirtä kustakin sukupolven käytettiin tukemaan risti WT BALB /c naaraat ja takaisin ylitys tehtiin yli kymmenen sukupolvea. Urokset heterotsygoottinen

Msln

BALB /c geneettinen tausta oli risteyttää atyymisissä nude (Fox N) naaraita tuottaa Fox N null /

Msln

– /- hiirissä. Koska Fox N null /

Msln

– /- naarashiirillä eivät ole hyviä kasvattajia, käytimme

Msln

– /- /Fox N Het naisilla kuin kasvatus kumppaneita Fox N null /

Msln

– /- miehet ylläpitää ja tuottaa Fox N null /

Msln

– /- naaraat meidän kokeita.

Generation of MPF-Rabbit (r) Fc, mMSLN- rFc ja CD22-rFc fuusioproteiinien nisäkässoluissa

rekombinantti versiot mMSLN ja MPF, mMSLN-rFc ja MPF-rFc ilmaistiin fuusioproteiineina kani-IgG (rFC) on HEK293T-soluissa ja puhdistettiin, kuten edellä on on kuvattu [18]. CD22-rFc fuusioproteiini valmistettiin käytettäväksi kontrollina.

virtaussytometria

Solut kerättiin, pestiin ja suspendoitiin uudelleen jääkylmään FACS-puskurilla (PBS, jossa 5% FBS: ää ja 0,1 % natriumatsidia), inkuboitiin sitten anti-Mesothelin-vasta-aine, MN (Rockland Immunochemicals Inc., Gilbertsville, PA) tai Morab-009 (Morphotek Inc, Exton, PA), tai anti-MUC16-vasta-aine, OC125 (Abcam, Cambridge, MA) pitoisuudella 5 ug /ml. Isotooppi-täsmäsi vasta-ainetta käytettiin kontrollina. Sitoutumisen primaaristen vasta-aineiden tuumorisoluihin havaittiin käyttäen joko vuohen anti-hiiri-konjugoitu R-fykoerytriini (R-PE) (Invitrogen) tai vuohen anti-hiiri-konjugoituna FITC: n kanssa (Biosource). Fluoresenssi, joka liittyy elävien solujen määritettiin käyttäen FACS Calibur (BD Biosicences). Geometriset keskiarvot ilmaistiin fluoresenssin keskimääräinen intensiteetti (MFI). MFI-solujen verrattiin MFI standardikäyrästä R-PE-konjugoitu kalibrointi helmiä (BD QuantiBRITETM PE kvantitointi kit, BD Biosciences) ja määrä mMSLN sivustoja solua kohti arvioitiin. Tulokset olivat samanlaiset, MN (n = 2 koetta) tai Morab-009 (n = 3 koetta).

MPF kvantifiointi

A549-soluja transfektoitiin stabiilisti joko vektorisäädön (A549 /pcDNA) tai MPF ekspressiovektori (A549 /MPF) maljattiin maljoille, jotka sisälsivät saman määrän täydellistä alustaa ja inkuboitiin 48 tunnin ajan. Yhteensä solupopulaatio laskettiin käyttäen Cellometer Vision solulaskijalla (Nexcelom, St. Lawrence, MA) equivolume alikvootti elatusaine poistettiin jokaiseen maljaan ja pitoisuus MPF liuoksessa kvantitoitiin käyttäen omaa ihmisen MPF ​​entsyymi-immunologinen iinianalyysikitissä (Morphotek, Easton, PA).

Soft agar Pitoisuus

A549 /pcDNA tai A549 /MPF stabiilit transfektantit suspendoitiin 0,35% agaria, maljataan 6-kuoppaisille levyille (2 x 10

3 solua /kuoppa), ja inkuboitiin 15-21 päivää 37 ° C: ssa. Sen jälkeen, kun Crystal Violet värjäämällä levyt pestiin 1 tunti ja sitten skannattu tuottaa digitaalisia kuvia. Pesäkkeet laskettiin sisällä ennalta määritelty, keskeisesti sijoitettu neliö kentän sivun pituus yhtä suuri kuin yksi kolmasosa hyvin halkaisija. Useita kaivoja (n) laskettiin kunkin kolmen erillisen kokeen. Keskimääräinen pesäkkeiden määrä kunkin kokeen raportoidaan keskihajonta (SD). KB-soluja käytettiin positiivisena kontrollina pesäkkeiden muodostumista.

Tilastollinen analyysi

selviytymisen tutkimuksia, Kaplan-Meier -käyrät piirrettiin ja verrattiin käyttäen log-rank-testi. Mann-Whitneyn testiä käytettiin tilastollisen vertailun Eloonjääntitulokset. P 0,05 käytettiin kynnyksen tilastollisen merkitsevyyden. Kaikki tilastollinen analyysi tehtiin käyttämällä Prism (versio 5) Mac (GraphPad software).

Tulokset

Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että mMSLN vuorovaikutuksessa munasarjasyöpä kasvain antigeeni CA125 ja että tämä vuorovaikutus voi olla tärkeää metastaaseja munasarjasyövän läpi vatsaonteloon [8], [16], [19]. Voit arvioida MSLN IP kasvuun ihmisen syöpäsoluja, loimme Fox N null /

Msln

– /- hiirissä. Sen varmistamiseksi, että

Msln

geeni oli inaktivoitu, ja että hiiret eivät tee Msln ensin vahvisti poistetaan käyttäen polymeraasiketjureaktiota seulomiseksi poistetaan alleelien

Msln

geeni (tietoja ei ole esitetty). Puute mMsln proteiinin ekspressio varmistettiin immunohistokemiallinen analyysi hiiren kudoksissa käyttäen kaniinin polyklonaalista anti-Msln vasta-ainetta ja sen jälkeen värin havaitseminen, kuten aikaisemmin on kuvattu [9] (Fig. 2). Immuunijärjestelmän tukahduttaminen aiheuttama FoxN poisto mahdollistaa ksenografti koe ihmisen syöpäsoluja. Käytimme keuhkosyövän solulinjassa A549, joka on hyvin alhainen ilmentyminen MSLN (keskimäärin 3,5 × 10

3 mMSLN sitoutumiskohtiin /solu), mutta vankka ilmaus CA125 (Fig. 3). Olemme injektoitiin kaksi miljoonaa A549-soluja vatsaonteloon on

Msln

– /- ja

Msln + /+

nude-hiirissä, seurataan sitten selviytymisen eläimiä. Kuten kuvassa 4A on esitetty, oli tilastollisesti merkitsevä ero selviytymisen välillä hiirten ryhmissä. Mediaanielossaolosta

Msln + /+

hiirillä oli 31 päivää, mutta kasvoi 46 päivää

Msln

– /- hiirissä (p 0,0001). Lähes 25%

Msln

– /- hiiret selvisivät yli neljän kuukauden (taulukko 1), kun taas kaikki

Msln + /+

hiiret kuolivat 50 päivän sisällä (kuvio. 4A). Ei samanlainen säilyä nähtiin, kun A431 epidermaalisiin syöpäsolut (Fig. 4B), jotka ilmentävät ei MSLN eikä CA125, istutettiin intraperitoneaalisesti. Kasvaimen kasvu arvioitiin myös silloin, kun A549 keuhkosyövän soluja istutettiin ihonalaisesti. Tässä mallissa kasvaimet

Msln

–

/

– ja

Msln + /+

hiirillä kasvoi samaan tahtiin (Fig. 4C) osoittaen, että

Msln

ilmaisu ei ole vaikutusta kasvaimen kasvuun tämän osaston.

osa keuhkojen kudoksia kiinnitettiin 4% paraformaldehydillä upotettiin parafiiniin ja leikattiin 5-6 um paksuus, sitten värjättiin MSLN. A-C: Keuhkokudosta muodossa

FoxN null /Msln

(+ /+) värjättiin anti-Msln vasta-(A: 100X; B: 200X suurennos); tai sekundaarinen vasta-ainetta ainoastaan ​​(C: 100X suurennos) negatiivisena kontrollina. D-F: Keuhkokudosta muodossa

FoxN null /Msln

(- /-) värjättiin anti-Msln vasta-aine (D: 100X; E: 200X suurennos); tai sekundaarinen vasta-ainetta ainoastaan ​​(F: 100X suurennos) negatiivisena kontrollina. Kuten odotettavissa on voimakas Mesothelin ekspressiota havaittiin mesothelial teelisolupinta keuhkojen välillä

FoxN null /Msln

(+ /+) hiirissä, mutta ei ekspressiota keuhkoissa päässä

FoxN null /Msln

(- /-) hiirillä.

Soluja inkuboitiin ilmoitetuilla primaaristen vasta-aineiden tai isotoopin kontrollivasta-aineiden, ja tarvittaessa sekundaarista vasta-ainetta (vuohen anti-hiiri-IgG, R-PE-tai vuohen anti-hiiri-FITC). Tulokset esitetään histogrammit sitoutumiselle ensisijaisen vasta-aineen (musta jälki) tai isotyyppikontrollia (harmaa jälki). A431-solut ovat negatiivisia sekä MSLN ja CA125. A549-soluja on alhainen Mesothelin lauseke (3.5 x 10

3 sivustoja /solu), mutta erittäin express CA125.

(A) graafinen esitys hiirten eloonjääntiin saatuaan IP injektion A549-solut; eloonjäämismediaani

Msln

– /- hiirillä on 46 päivää ja

Msln (+ /+) B-hiirillä on 31 päivää (

p

0,0001). (B) käyrä, joka esittää selviytymistä

Msln

(-

/

-) tai

Msln

(+ /+) hiirissä IP injektion A431 soluja. (C) Plot osoittaa eloonjäämistä

Msln

(-

/

-) tai

Msln (+ /+) B-hiirissä ihon alle annetun A549-solut (D) Survival of A549 -ksenografti laakeri

Msln

(- /-) hiirillä saatuaan MPF-rFc tai mMSLN-rFc tai CD22-rFc proteiineja.

vatsaonteloon mallissa abdomens A549-kasvaimen kantavien hiirten turposivat juuri ennen kuolemaa. Ruumiinavauksessa kasvain massat kasvavat vatsakalvon seinään, omentum, ja suurella ja ohutsuolessa. IHC osoittaa, että nämä A549 kasvaimia tee mitään havaittavaa MSLN (Kuva. 5A), mutta älä tee CA125 (Fig. 5B). Nämä tulokset osoittavat, että MPF, mMSLN tai molemmat voivat parantaa aggressiivisuus A549 kasvaimia vatsaonteloon.

kateenkorvattomiin nude-hiiri lopetettiin 26 päivää sen jälkeen, kun IP-inokulaation A549-soluja. Kasvaimia immunovärjättiin (A) anti-MSLN ja (B) anti-CA125 monoklonaalisia vasta-aineita. Nämä kasvaimet olivat negatiivisia MSLN mutta positiivisia CA125 ilmentymisen mistä on osoituksena ruskea värjäytyminen kasvainsolujen.

Oletimme, että jos menetys

Msln

olivat vastuussa hidastui syövän etenemisen

Msln

– /- hiirissä, niin eksogeeninen korvaaminen sen proteiinin tuotteita, MPF tai mMSLN, voisi palauttaa aggressiivisempi taudin kulun nähtävissä

Msln

(+ /+) hiirissä. Siksi me syntetisoida rekombinantti-MPF-rFc, mMSLN-rFc, ja ohjaus- CD22-rFc proteiinia. Strateginen lisäämällä kanin Fc-osa lisää merkittävästi puoliintumisaika näiden molekyylien, mutta ei odoteta vaikuttavan toiminnon. A549-soluja injektoitiin vatsakalvon onteloihin

Msln

– /- hiirissä, kuten ennen, niin, alkaen siitä päivästä implantaation, hiiret käsiteltiin yhdellä rekombinantti-Fc-proteiineja joka toinen päivä yhteensä kuusi annosta. Jotka esitetään taulukossa 1 ja kuviossa 4D, mediaanielossaolosta

Msln

– /- hiirille on annettu CD22-rFc verrokkipeptidin säilyi 46 päivää. Kuitenkin eloonjäämismediaani käsiteltyjen hiirien MPF-rFc laski 31 päivää, samanlainen selviytymisen

Msln

(+ /+) hiirissä injektoitiin A549-solut (Fig. 4A). Injektio mMSLN-rFc myös tuottanut tilastollisesti merkittävä lasku mediaanielossaolosta, vaikka vaikutus oli vähäisempi (42 päivää, p 0,016). Tulokset Tämän kokeen mukaan menetys Mpf sijaan mMsln on ensisijaisesti vastuussa pitkäaikainen selviytyminen

Msln

– /- hiirillä ksenosiirrettyjä A549-solut.

Voit selvittää MPF vaikuttaa suoraan A549-solut parantaa niiden kasvua tai aggressiivisuus, me pysyvästi transfektoitu

MPF

cDNA A549-soluja. MPF ilmentyminen arvioitiin muutettu ELISA-määrityksen kunnostettua alustaa ja tuottama määrä 1 x 10

6 solua laskettiin standardikäyrän rekombinantin MPF. Kun taas A549 /MPF kloonit tuottivat noin 400 ng MPF 48 tuntia, ei MPF havaittu kunto väliaineessa A549-soluja, jotka on transfektoitu vektorilla ohjaus (A549 /pcDNA). Totesimme mitään selvää eroa kasvuvauhti tai morfologia

MPF

-transfected A549-soluja verrattuna vektorin-transfektoidut ohjaus (tuloksia ei ole esitetty). Kiinnittymisestä riippumattoman kasvun näiden solujen pehmeässä agarissa arvioitiin myös. Kuten on esitetty taulukossa 2 ei ole tilastollista eroa pesäkkeiden muodostuminen

MPF

-transfected A549-soluja ja vektori transfektoitiin ohjauslinjan. Nämä kokeet viittaavat siihen, että MPF ei suoraan kasvun edistämiseksi A549-solut.

Keskustelu

Tutkimuksessamme loimme hiirimallissa, josta puuttuu

Msln

-geenin ja on salliva kasvua ihmisen syöpäsoluja. A549 keuhkosyövän solulinjaa käytettiin muodostamaan IP kasvaimia kokeissa tekee vain vähäisiä määriä mMSLN, niin että kaikki MPF ja mMSLN on eksogeenisesti. Havaitsimme tilastollisesti merkitsevä 15 päivää eroa eloonjäämisen välillä

Msln + /+

ja

Msln

– /- hiirillä vatsaonteloon A549 kasvaimia. Tämä havainto oli solu- rata- ja kiinnostavaa, ei havaittu ihonalaisen malli. Nämä tulokset osoittavat, että tuote

Msln

geeni on tärkeä rooli

vivo

kasvaimen kasvua ja etenemistä tietyntyyppisten syöpäsolujen kasvaa sisällä vatsakalvon onkalo.

MPF ja mMSLN ovat molemmat proteiini valmistamien ilmaus

MSLN

geeni. Molemmat proteiinit ovat erittäin ilmaistaan ​​useita kiinteän kasvaimen pahanlaatuisten kasvainten, mukaan lukien mesoteliooma, haima- ja munasarjasyövät [1], [4]. Useat tutkimukset ovat tutkineet miten muutokset ilmaus

MSLN

geeni voi muuttaa kasvaimen kasvua, eteneminen tai invasiivisuus tuottaa aggressiivisempi kasvaimen fenotyypin. Yliekspressio

MSLN

geenin osoitettu lisäävän interleukiini (IL) -6 signalointi [11], ja resistenssin tuumorinekroositekijän (TNF) -a välitteistä apoptoosia haimasyövän solulinjoissa [20]. Kohdunulkoinen ilmaus

MSLN

geenin ihmisen rintasyövän solulinjaa edistetään solujen eloonjäämistä ja ankkurista riippumaton kasvu

vitro

[10]. Muut tutkimukset ovat osoittaneet elintärkeä rooli

MSLN

geenin säätelyssä kasvun ja apoptoosin kautta sekä p53-riippuvainen ja riippumaton reittejä haimasyöpäsoluissa [12]. Kaikissa näissä

vitro

tutkimukset, pro-tuumorigeenisen vaikutukset

MSLN

geenimanipulaation oletettiin välittävän ilmentymisen muutosten mMSLN, vaikka geneettisen käsittelyt kokeissa pitäisi samanlaisia ​​korjauksilla MPF tasoilla.

Jos haluat erottaa panoksen MPF ​​tai mMSLN sen fenotyyppi havaitsimme tutkimuksessamme, toimitimme eksogeeninen yhdistelmä-proteiinin

Msln

– /- hiirissä. Olemme havainneet, että MPF lisäravinteena laski eläinten eloonjäämisen 15 päivä verrattuna hiiriin, käsiteltiin kontrolli-proteiinia. Kun taas täydentäminen mMSLN ei vähennä selviytymisen tilastollisesti merkitsevä 4 päivää, on selvää, että MPF on tehokkaampi tekijä mallissamme.

MPF tunnistettiin alun perin kasvutekijä, joka voisi edistää pesäkkeiden muodostumista megakaryosyyttien, kun sitä annetaan yhdistelmänä IL-3 [5]. Tähän mennessä ei MPF-reseptori on tunnistettu megakaryosyyttien tai muita soluja. Kumpikaan ovat teorioita on esitetty selittää, miksi proteiiniin tavallisesti ilmaistaan ​​yksinomaan mesoteelisolujen pitäisi olla ensisijainen tehtävä kuin megakaryosyyttien stimuloiva tekijä. Mielenkiintoista on, että meidän kokeita, kun taas MPF lisääntynyt kasvaimen aggressiivisuus

vivo

, pakko yliekspressio MPF ei tuottanut kasvua etua

vitro.

ehdottaa, että vaikutus MPF kasvaimen aggressiivisuuden ei välitä suoraa toimintaa MPF kasvaimen, mutta ehkä työskentelemällä epäsuorasti muihin soluihin. Vaikka se voisi olla houkuttelevaa ajatella, että MPF voi olla immuuni efektorifunktio, meidän kokeita lymfosyyttien-hiirillä, mikä viittaa siihen, että toinen mekanismi on todennäköisesti vastuussa. Tunnistetiedot solutyypin (t) vastaa välittävät tätä vaikutusta MPF ei kuulu nykyisen tutkimuksen.

Vaikka havaintoja tehtiin käyttämällä yhden solutyypin, vaikutus huomaamistamme selviytyminen oli syvällinen ja hyvin toistettavissa. Tuloksemme viittaavat siihen, että MPF voisi olla tärkeä välittäjäaine kasvaimen aggressiivisuutta vatsaonteloon, ja että estoa tai takavarikoimista MPF voisi olla kliinisesti käyttökelpoinen hidastaa kasvua joidenkin syöpien, jotka kasvavat vatsaonteloon. Tutkimukset testata tätä hypoteesia on aloitettu.