Krooninen sairaus

tiivistelmä

CPV1 (kutsutaan myös COPV) on papilloomaviruksen vastaa suun kautta papillomatosis nuorilla koirilla. Osallistuminen tämän viruksen tyyppiä suun oncogenesis on oletettu suun okasolusyöpää (SCC), mutta ei ole koskaan tutkittu muita syöpätauteja ja hyperplastiset suun haavaumia koiria. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli tutkia läsnäolo CPV1 eri neoplastisten ja hyperplastiset vaurioita, jotta voidaan arvioida sen merkitystä koiran suun oncogenesis; mukaan saadut tulokset, toisen tutkimuksen tarkoituksena oli määritellä, jos koira voidaan pitää kelvollisena eläinmallissa suun korkean riskin HPV-aiheuttama kasvain. Kahdeksankymmentäkahdeksan formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut (FFPE) koira suun haavaumia lukien 78 suullinen kasvaimia (papillomas, SCC, ihosyövän, ameloblastomas, suun adenokarsinoomien) ja 10 hyperplastic vauriot (ienhyperplasia) on tutkittu immunohistokemiallisesti esiintymisen papilloomaviruksen L1 proteiinia ja Real-Time PCR CPV1 DNA. RT-PCR RNA: lle suoritettiin valituilla näytteillä. Kaikki viruksen papillomas testattu oli positiivinen immunohistokemia ja Reaaliaikainen PCR. In 3/33 (10%) SCC, virus-DNA osoitettiin, mutta ei viruksen RNA löytyisi. Ei positiivisuus havaittu sekä immunohistokemia ja Real-Time PCR muissa hyperplastic ja uudisvaurioiden suuontelon koiria. Vaikka toteamus CPV1 DNA muutaman SCC in edessä negatiivisen immunohistokemia voisi tukea hypoteesin epäonnistuneessa infektion kehittymistä näiden vaurioiden puuttuminen viruksen RNA huomauttaa, että CPV1 todennäköisemmin edustaa viaton sivustakatsoja SCC oncogenesis. Tutkimus osoittaa vahvan yhteyden CPV1 ja suullinen virus papillomas taas viruksen panoksen patogeneesiin muiden suun haavaumia vaikuttaa epätodennäköiseltä. Lisäksi se viittaa siihen, että koiraeläinmallissa CPV1 infektion HPV-indusoidun syövän synnyn voi olla epätarkoituksenmukaista.

Citation: Porcellato I, Brachelente C, Guelfi G, Reginato A, Sforna M, Bongiovanni L, et ai. (2014) Retrospektiivinen Entistä Koirien papilloomaviruksen 1 (CPV1) Suun Onkogeneesin paljastaa Koirat eivät sovellu eläinmalli korkean riskin HPV-indusoitu Oral Cancer. PLoS ONE 9 (11): e112833. doi: 10,1371 /journal.pone.0112833

Editor: Xuefeng Liu, Georgetown University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 9. kesäkuuta, 2014; Hyväksytty 16. lokakuuta 2014; Julkaistu: 17 marraskuu 2014

Copyright: © 2014 Porcellato et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Kirjoittajat eivät tuki ja rahoitus raportoida.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä olemassa.

Johdanto

Papillomavirukset (PV) ovat ryhmä viruksia, jotka kuuluvat

papillomaviridae

perhe, jotka ovat erittäin lajispesifisiä, jotka voivat vaikuttaa nisäkkäät, linnut ja matelijat [1] . PV: itä on pyöreä kaksijuosteinen DNA-genomi on noin 8 kb, joka sisältää tyypillisesti kahdeksan ORF: ää (avoimet lukukehykset), koodaus aikaisin (E1, E2, E4, E5, E6 ja E7), ja myöhäinen (L1 ja L2) virusproteiineja [ ,,,0],2], [3]. E1 on DNA-helikaasi: n replikaatiolle välttämättömiä ja monistaminen viruksen episomi tumassa infektoituneiden solujen [4]. E2 proteiinit osallistuvat aloittamisen viruksen DNA-replikaation, mutta ovat keskeisessä asemassa transkription säätelyyn ja eristämisestä viruksen genomin sekä [5]. E6 ja E7 onkoproteiineja vastaavat solujen lisääntymistä ja muutosprosessit, E7 on tunnustettu yhdeksi tehokkaimmista solusyklin deregulator [6]. E4 yhdessä E5, on mukana säätelyssä virusgenomin vahvistusta ja edustaa runsain nauhoituksen tuottava vauriot [7], [8]. Late proteiineja (L1, L2) koodaavat rakenteellisia proteiineja viruskapsidin, jotka ovat keskeisiä loppuun PV elinkaari [8]. HPV (ihmisen Papillomavirukset) luokitellaan iho- ja limakalvon tyyppejä perustuu niiden tropismista ihon tai limakalvon epiteelissä, vastaavasti, ja voi joko jatkuvat oireettomasti tai aiheuttaa hyvänlaatuinen hyperproliferatiiviset sairauksia tai syöpäsairauksia [2], [9]. Limakalvojen HPV voidaan luokitella alaluokkiin osaksi korkean riskin ja matalan riskin tyyppejä suhteessa niiden yhdistyksen syövän kehityksen [10]. Tämä luokittelu perustui alun perin vain epidemiologisista ja myöhemmin vahvisti lisänäyttöä In vitro -testeistä [11]. Yli 170 HPV on tunnistettu tähän mennessä, kun taas koiran lääketieteessä vain 14 tyyppisiä CPVs (Canine Papillomavirukset) tiedetään tässä vaiheessa [12], [13]. Rooli CPVs patogeneesissä syövän ei ole selvästi selvitetty, eikä yksikään koiran viruksen tyypit on liitetty tiettyyn syöpään kokonaisuus. Päinvastoin, ihmisten lääkinnässä kasvaimia synnyttävän roolia korkean riskin HPV-tyypeille kuten HPV 16 ja HPV 18 on tunnettu ja pidetään osaltaan yli 70% kohdunkaulan syövistä [14]. Viime aikoina HPV-infektio on liittynyt myös pään ja kaulan alueen syöpä, erityisesti levyepiteelisyövän suunielun [15], [16]. Koirilla ensimmäinen PV tyyppi dokumentoitu on etiologinen koiran suun papillomatosis, alun perin nimeltään COPV (Koirien Oral papilloomavirus) ja hiljattain nimettiin CPV1 [2], [17]. DNA tämän viruksen on 8607 emäsparia pitkä ja sen vuoksi on suurin PV sekvensoitu [18]. Vaikka järjestely CPV1 genomin on samanlainen kuin muut PV, se ei ole E5 alueella, ja se on tunnettu siitä, että pitkän toisen ei-koodaavan alueen [19]. Koirien suun papillomatosis aiheuttama CPV1 on yleisempi koirilla noin vuoden iässä ja tyypillisesti aiheuttaa kukkakaali kaltainen exophytic syyliä; toisinaan, kasvaimet voidaan myös reunustama tai nodulaarinen. Vauriot yleensä lokalisoitu suun limakalvon, huulten ja ihon ja limakalvojen risteykset, mutta eivät rajoitu niihin sivustoja [17]. Ne yleensä tapahdu spontaania regressio, joka liittyy hallitseva tunkeutumisen CD4 + ja CD8 + lymfosyytit [20]. Vaikka CPV1 tyypillisesti liittyvät hyvänlaatuinen ja itsestään taantumassa papillomas, tämä virus tyyppi on toisinaan raportoitu non-regression vaurioita, erityisesti suun kautta ja perioral okasolusyöpää [21], [22]. Viime vuosina, kun läsnä on HPV-DNA on laajalti tutkittu ja osoitettu eri suun kasvaimia, kuten okasolusyöpä [23], ameloblastoma [24], sylkirauhassyöpä [25], [26], samoin kuin ihomelanooma [27] ja muut tuumorit [28], [29], [30]. Tutkimuksen tavoitteena oli tutkia eri koirien suun kasvaimia ja hyperplastic vaurioita läsnäolo CPV1 DNA ja RNA sekä virusantigeenillä lokalisointi vaurioita. Arvioidessaan viruksen esiintyvyys suullinen neoplastisten tapahtumiin koirilla voi saada tärkeää tietoa mahdollisesta roolista tämän erityisen viruksen tyyppi koiran suullista onkogeneesiin ja hyödyllisyydestä koiran mallin suun HPV aiheuttama oncogenesis ihmisillä. Tämä tutkimus suoritettiin epiteelialkuperää olevia tuumoreita, kuten levyepiteelikarsinoomat, ameloblastomas ja suun adenokarsinoomat. Joukko ihosyövän, jotka ovat yleisimpiä ja invasiivisia suusyöpä koirilla, katsottiin myös tässä tutkimuksessa. Koska se on yleisesti hyväksytty, että PV riippuvaisia ​​epiteelisolujen erilaistumisen loppuun elinkaarensa [8], tämä tutkimus sisälsi myös ryhmän ikenen hyperplastic vaurioita. Rutiini histologia, immunohistokemia ja Real-Time PCR käytettiin tässä tutkimuksessa. Tutkimuksemme keskittyi roolista CPV1 suun oncogenesis kautta takautuva immunohistokemiallinen ja molekyylitason analyysi monenlaisia ​​neoplastisten ja ei-neoplastisia suun haavaumia.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

Tämä retrospektiivinen tutkimus suoritettiin FFPE yksilöitä aiemmin lähetettiin meidän Osastot histopatologista diagnoosia eikä näin ollen hyväksyntää eettisen komitean tarvittiin.

Sample valinta ja histopatologia

Kaksikymmentäkaksi papillomas (Ps), 33 levyepiteelikarsinoomien (SCC), 11 melanoomat (Ms), 10 ameloblastomas (AMS), 2 suullinen adenokarsinoomat (ACS) ja 10 tapausta ienten hypertrofia /hyperplasia (GH), kerätään 2005-2012, valittiin arkistoista Department of Veterinary Medicine (University of Perugia, Italia), ja eläinlääketieteellinen tiedekunta (University of Teramo, Italia). Diagnoosi tarkistettiin 2 patologit hematoksyliini- eosiini dioja. Papillomas myöhemmin luokiteltiin viruksen papillomas (VPS) ja suomuinen papillomas (SP). VP oli diagnosoitu perustuu tyypilliset histologiset piirteet osoittavat virussytopaattista vaikutuksia kuten epiteeliproliferaation, koilosytoosi, hypergranulosis, liikasarveistuminen ja läsnäolo inkluusiokappaleisiin.

immunohistokemia

jaksot 2 um leikattiin 88 formaliinilla kiinnitetyt ja parafinoidut (FFPE) näytteet ja kiinnitetty positiivinen ladattuun dioja. Immunohistokemia suoritettiin käyttäen kaniinin polyklonaalista vasta-ainetta vastaan, erittäin konservoituneen L1 kapsidiproteiinia ja BPV1 (1:200 laimennus; Anti-naudan papilloomaviruksen /BPV1, BO580 DakoCytomation, Glostrup, Tanska), kuten on raportoitu muissa tutkimuksissa [31]. Lyhyesti, FFPE kudosleikkeiden poistettiin parafiini, vedettömät ja pestiin tislatulla vedellä. Ei-antigeeni haku suoritettiin. Endogeeninen peroksidaasi estettiin 3% H

2O

2 8 minuuttia huoneenlämpötilassa. Objektilasit pestiin sitten TBS: ssä ja niitä inkuboitiin primaarisen vasta-aineen 1 tunnin ajan kosteutetussa kammiossa huoneenlämmössä. Laseja inkuboitiin johdetun biotinyloidun yleinen sekundäärisellä vasta-aineella, jota seurasi peräkkäinen inkubointi peroksidaasilla leimattua streptavidiini (LSAB + /System-HRP, Dako, Glostrup, Tanska). Kolme-amino-yhdeksän etyylikarbatsolia käytettiin kromogeenina (AEC + Alustan-Kromogeeni Ready-to-use, Dako, Glostrup, Tanska) ja Carazzi hematoksyliinillä kuin vastavärinä. Peitelaseja asennettu vesipitoisella kiinnitysväliaine. Negatiiviset kontrollit käsiteltiin samalla tavalla, jättämällä primaarisen vasta-aineen ja inkuboimalla kudosleikkeiden kanssa TBS. Positiiviset kontrollit saatiin naudan ihon papillomas.

Primers suunnittelu

Koettimet suunniteltiin raportoituun sekvenssiin CPV1 [GenBank: L22695.1] erityisesti neljään tavoite ORF: E4, E7, L1 ja L2. Joukossa aikaisin virus tuotteita, E4 valittiin kohdegeenin sen korkean ilmentymisen (jopa 30% proteiinin kokonaismäärästä joissakin tuottavia syyliä) tuottavassa vaurioita ja E7 koska sen tunnustettujen onkogeenisten rooli [6], [7 ]. L1 ja L2, myöhään proteiinit olivat mukana, koska naisten keskeinen loppuun PV viruksen syklin [8]. Havaitsemiseksi kunkin viruksen geenin, eteen- ja taaksepäin-alukkeita ja koettimia suunniteltiin (taulukko 1). Koettimia E4, E7 ja L1 soveltuivat myös viruksen RNA havaitsemiseen. Suunniteltu alukkeet varmistettiin NCBI räjähdys analyysi ja ClustalWkohdistusohjelmaa analyysi varmistaa spesifisyyden.

Nukleiinihappojen uutto

DNA ja RNA uutettiin 5 um: parafiinileikkeillä kaupallisella kit seuraavia valmistajan ohjeita (Wizard Perimän DNA: n puhdistus Kit, Promega, Milano, Italia ja RECOVERALL- Total Nucleic Acid Isolation Kit, Ambion, Austin, Texas). Kokonais-DNA ja RNA kvantitoitiin fluorometrillä (Qubit 2.0, Invitrogen, Carlsbad, Kalifornia) käyttäen korkean herkkyys kaupallista pakkausta (Qubit dsDNA HS tai RNA HS Assay Kit, Invitrogen, Carlsbad, Kalifornia) kohti valmistajan ohjeiden.

Käänteinen transkriptio

noin 20 ng kokonais-RNA: ta käänteistranskriptio 20 ui iSCRIPT cDNA (BioRad, Hercules, CA) käyttäen sattumanvaraisia ​​heksameerejä mukaan valmistajan ehdotuksia. Ei-RT kontrollia sisällytettiin tarkistaa genomista DNA saastuminen.

DNA ja cDNA Real-Time PCR

Valmistajan mukaan ehdotuksiin, 4 ui DNA: ta (30-50 ng) tai 4 ui cDNA (1-10 ng) monistettiin käyttäen 12,5 ui Hot-Rescue Real-Time master mix (Diatheva, Fano, Italia), 0,125 ui Hot-Rescue DNA Polymerase (Diatheva Fano, Italia), 5 pmol koetinta , 10 pmol alukkeita (Integrated DNA Technologies, Coralville, IA), ja DNAasi /RNAasi-vapaata vettä 25 ui. Kaikki PCR-reaktiot suoritettiin Bio-Rad iCycler Real-Time PCR aluksi inkuboitu 95 ° C: ssa 15 min, mitä seurasi 45 sykliä 95 ° C 15 sekuntia ja 60 ° C 1 min, jonka aikana fluoresenssi tiedot kerättiin. Kukin näyte ajettiin kolmena kappaleena, ja tulokset laskettiin keskiarvo. Ct oli automaattisesti laskema kukin käyrä. Näyte monistus fidelity varmistettiin agaroosigeelielektroforeesilla. PCR-tuotteet puhdistettiin ja sekvensoitiin QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen, Valencia, CA). 18S käytettiin endogeeninen kontrolli normalisoida näytteen määrän vaihtelut aloittaa RNA-näytteet, kuten aiemmin on raportoitu [32]. Kunkin PCR aikavälillä ei templaattikontrollien ja nort kontrollia sisällytettiin varmistuakseen puuttuessa kontaminoivien gDNA.

Tulokset

Histologia ja immunohistokemia

histologinen tutkimus on rutiininomaisesti värjätään osat, papilloomat luokiteltiin VP (15/22) ja SP (7/22) arvioidaan tyypillisten sytopaattisen piirteitä PV-infektion (epidermaalinen proliferaatio, koilosytoosi, hypergranulosis, liikasarveistuminen ja inkluusiokappaleet) (kuvio 1). Yksi tapaus on lievä hypergranulosis ja polttoväli liikasarveistuminen oli vaikea luokitella puutteen vuoksi inkluusiokappaleiden ja koilocytes. Kuitenkin, kun mikrotomiamenetelmiä, satunnainen koilocytes havaittiin ja tapaus luokiteltiin VP. Histologinen ominaisuudet SP ja VP on esitetty taulukossa S1. Positiivinen intranukleaarinen Immunovärjäyksen vahvistanut kaikki VP aiemmin diagnosoidaan HE värjätyt leikkeet (kuva 2). Positiiviset solut olivat paikallisia etenkin interdigitating orvaskeden usein alueilla, joilla epiteelin leimasi vakava hypergranulosis. Vain yhdessä tapauksessa immunoleimaus oli pääasiallisesti nähtävissä pinnallinen desquamating soluissa. Kaikki muut kasvaimet ja hyperplastic vauriot olivat negatiivisia PV immunovärjäyksen. Kuitenkin, hienoksi rakeinen sytoplasminen värjäys havaittiin viidessä tapauksessa okasolusyövistä.

H 40x.

AEC ja Carazzi hematoksyliinillä; 40x.

Real-Time PCR-monistus DNA- ja RNA

DNA uuttosaanto vaihteli 50-90 ng /ul ja RNA-pitoisuus oli noin 20 ng /ul. Vahvistaminen immunohistokemiallinen tuloksiin, Real-Time PCR havaittu viruksen DNA kaikissa 15 VP. VP olivat positiivisia kaikissa neljässä koettimet on suunniteltu erityisesti havaitsemiseen CPV1. Kolme SCC ulos 33 johti positiivinen läsnäolo CPV1 DNA kaikkia neljää koettimia testattu. Ei päällekkäin viisi SCC hienoksi soluliman immunovärjäyksellä todistettiin. Sekvenssointi kaikki amplikonien osoitti täydellisen identiteetin (100%) sekvenssin GenBank-tietokantaan (hakunumero L22695.1). Ei virus-DNA: ta monistettiin kaikissa AMS rekrytoinnista ACs ja GH testattu. Real-Time PCR cDNA suoritettiin valikoima 5 VP, 5 SP, 8 SCC, joista 3 olivat niitä positiivisia CPV1 viruksen DNA. Kriteerit valinta Testattavien näytteiden perustui saatavuuteen materiaalin RNA: n eristykseen, kun aikaisemmat kokeet oli suoritettu. Sillä 3 tapauksissa SCC positiivinen virus-DNA, määrä kudosta rajoitettu (alle 1 mm

2 kohdat). Näissä tapauksissa kokonais-mRNA määrä oli erittäin alhainen (noin 1 ng /ul) johtuen niukasti jäljellä kudokseen jälkeen aikaisemmat kokeet. Viral papillomas käytettiin positiivisena kontrollina ja virusperäisen mRNA noudettiin niissä kaikissa. Kolme SCC positiivinen virus-DNA oli sen sijaan negatiivinen. RNA: n ja määrityksen Kokeet toistettiin kahdesti, jotta voidaan arvioida tuloksen ja sulkea pois ympäristön saastumista. Tulokset Real-Time PCR on esitetty taulukossa 2.

histologinen ominaisuudet CPV1 liittyvien SCC

tarkastelu CPV1 positiivisia SCC ei ilmennyt erikoinen histologisia ominaisuuksia, jotka voivat olla epäilyttäviä papilloomaviruksen infektio, verrattuna ryhmään CPV1 negatiivisen SCC (taulukko S2).

keskustelu

Tässä tutkimuksessa arvioitiin läsnäolo CPV1 eri hyperplastic /neoplastisia koira suun haavaumat, jotta roolin tutkimiseksi tämän viruksen suun oncogenesis. Ihmisen lääketieteessä oncogenetic rooli korkean riskin HPV on osoitettu kohdunkaulan syövän [16] ja lisää tietoisuutta kasvaa niiden roolia patogeneesissä pään ja kaulan SCC [15]. Lisääntyvä vastike maksetaan tutkimuksen PV eläinlääkinnässä on perusteltua sekä kasvava huomiota eläinten terveyteen ja mahdollisuuden käyttää koiran kokeellisena malli tutkia vuorovaikutusta PV-infektion ja syövän syntymistä ihmisessä [33], [ ,,,0],34]. Tästä huolimatta vain vähän tietoa on saatavilla noin yleisyydestä CPVs koirien kasvaimia. Tämän tutkimuksen me huomautti, että CPV1 liittyy vahvasti VP koirilla suun ja perioral sivustoja. Lisäksi havaitsimme läsnäolo viruksen DNA vain kolmessa SCC, kun taas mitään viruksen mRNA havaittiin osoittaa viruksen toimintaa. Tämä tulos vahvistaa sen, mitä on kuvattu eläinlääkärin kirjallisuudessa [22], [35], noin vähäinen pahanlaatuisen muutoksen liittyy CPV1 infektio. Perustuu tietoihin, koira ei pitäisi käyttää mallina tutkittaessa pahanlaatuisten vaurioiden aiheuttaman korkean riskin genotyyppien HPV.

saadut tulokset histologisen arvio kaikista suullisen papillomas sisältyvät esillä tutkimus osoitti, että koilosytoosi ja hypergranulosis oli selvempää VP verrattuna SP. Kuitenkin 2/7 SP osoitti lievää tai kohtalaista hypergranulosis, joten tämä morfologiset näkökohtaa yksinään ei voida pitää luotettavana indikaattorina virusinfektio. Saamiemme tulosten, läsnäolo koilocytes ja inkluusiokappaleita on tärkein histopatologisia merkki viruksen läsnäolon. Immunohistokemia ollut hyötyä paitsi vahvistaa histologinen luokitus ja arvioida tartunnan vaihe, mutta oli erityisen hyödyllinen tapauksissa myöhäisen vaiheen PV-infektion missä koilosytoosi ja inkluusiokappaleita eivät olleet ilmeisiä histologisesti. Näissä tapauksissa immunoleimaus rajoittui desquamating epidermiksen soluista. Sytoplasmisen positiivisuuden kohdanneet viisi SCC, erityisesti alueilla squamous erilaistuminen, tulkittiin artefakti johtuen siitä, että nämä kasvaimet olivat negatiivisia DNA: n monistamiseen.

Real-Time PCR vahvisti läsnäolo molempien CPV1 DNA kaikissa 15 VP tutkimuksen ja viruksen mRNA viiden valitun VP testattu. Tämä vahvistaa vahvan korrelaation CPV1 ja VP. Tutkimuksessamme kaikkein VP oli havaittu mucocutaneous risteyksissä ja vain yksi tapaus koepala ihosta leuka, yhteisymmärryksessä aiempien tutkimusten raportointi mahdollisesti esiintyvän CPV1 in ihovaurioiden [17], [22], [36]. Siksi CPV1 tuntuu näyttävän vähäisempää tropismista limakalvojen verrattuna Alpha-HPV, jotka käsittävät korkean riskin tyyppejä. Alpha-HPV-infektioita todella yleensä vain suun limakalvojen ja voidaan harvoin löytyy ihovaurioiden [37], [38], [39].

puuttumisesta huolimatta PV-immunoleimaus, PCR paljasti virus-DNA: 3/33 SCC testattu. Tämä rajoitettu määrä CPV1 DNA positiivisia tapauksia ei salli meidän tehdä tilastollisesti merkittäviä päätelmiä mahdollisista histomorphologic kriteerejä, joita voidaan liittyvät viruksen esiintymistä. Kukin kolmesta tapaukset osoittavat eri histologisia asteita erilaistumista, solu- atypia ja tulehdusta. Huomionarvoista on, että etsintä viruksen mRNA näissä kolmessa SCC positiivisia CPV1 DNA ei tuottanut positiivisia tuloksia. Eri hypoteeseja voidaan perustella tämän tuloksen. Ensinnäkin määrä materiaalia FFPE koepaloja SCC oli erittäin vähäistä, kun leikataan RNA ja tämä on saattanut johtaa liian pieni määrä virus mRNA kokonais-mRNA uutettu, ei sallita vahvistusta Real-Time PCR. Toisaalta, koska positiivisuus viruksen mRNA havaittiin kaikissa VP käytettiin positiivisena kontrollina, voimme olettaa, että CPV1 voitaisiin tulkita viaton sivustakatsoja yhteydessä SCC. Vaikka terveen ihon ihmisten ja koirien voi toimia mahdollisena varastona PV-infektion [40], [41] yksilöiden Tämän tutkimuksen oli aiemmin hoidettu formaliinilla, joten hypoteesi pinnallinen saastuminen näyttää epätodennäköiseltä.

negatiivinen PV-immunoleimaus liittyy kielteisiä Real-Time PCR tulokset (sekä virus-DNA: n ja mRNA) kaikissa muissa vauriot (hyperplastic ja neoplastisten) sisältyvät esillä tutkimus osoittaa, että CPV1 ei todennäköisesti ole roolia patogeneesissä koiran suun vaurioita eroaa VP.

Yhteenvetona kanssa tässä tutkimuksessa tutkittiin miten CPV1 on laaja valikoima erilaisia ​​neoplastisia ja hyperplastiset vaurioita, jotka johtuvat suuontelossa koira. CPV1 oli voimakkaasti yhteydessä VP. Koska läsnäolo ja transkriptionaalista aktiivisuutta CPV1 ovat vain osoittautuneet VPS, on epätodennäköistä, että CPV aiheuttaa suuren riskin neoplastisen etenemisen. Lisäksi laajentaa monissa tapauksissa testattiin läsnäolo CPV1, olisi tärkeää tutkia myös muiden tyyppisten CPVs patogeneesissä yleisimmistä syövistä suuontelon koirilla. Ottaen huomioon tuloksemme, uskomme, että CPV1 aiheuttama vaurioita on alhainen riski pahanlaatuisten etenemisen ja että käyttö CPV1 mallina HPV: hen liittyvän pään ja kaulan alueen syöpä eivät siis tue tietomme, varsinkin kun esiintyvyys CPV1 vuonna testatut SCC oli hyvin alhainen.

tukeminen Information

Taulukko S1.

histologinen ominaisuudet 22 squamous ja virusperäisen papillomas tässä tutkimuksessa. Ominaisuudet eri kasvaimia luokiteltiin: 1 = heikko /lievä; 2 = kohtalainen; 3 = korkea /vaikeaa.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0112833.s001

(DOCX) B Taulukko S2.

histologinen ominaisuudet 33 SCC tämän tutkimuksen. IB = inkluusiokappaleita; IHC = immunohistokemia. Ominaisuudet eri kasvaimia luokiteltiin: 1 = heikko /lievä; 2 = kohtalainen; 3 = korkea /vaikeaa. Immunohistokemialliset määritykset oli epävarma tulos (?) Luokiteltiin negatiiviseksi ja epävarmaa positiivisuus kohtasi pidettiin artefakti. N /A = ei tehty, koska niiden niukat materiaalia saatavilla RNA.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0112833.s002

(DOCX) B

Kiitokset

Kirjoittajat kiittää tohtori Emilia del Rossi ja Luca Stefanelli heidän toimiaan ja teknistä tukea tässä tutkimuksessa.