Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että vähemmän erilaistunut T-solut ovat ihanteellisia adoptiovanhemmat T-solujen siirto terapia (ACT) ja että fibronektiini CH296 (FN-CH296) yhdessä anti -CD3 johti viljellyissä soluissa, jotka sisältävät suurempia määriä vähemmän eriytetty T-soluja. Tässä vaiheen I kliinisen tutkimuksen, me rakentaa tämän ennen tulosten arvioimalla turvallisuutta ja tehoa FN-CH296 stimuloitujen T-solujen potilailla, joilla on edennyt syöpä.

Methods

Potilaille tehtiin fibronektiinin CH296 stimuloduista T soluterapia jopa kuusi kertaa kahden viikon välein ja turvallisuutta ja antituumorivaikutuksen ACT arvioitiin. Sen määrittämiseksi immuunijärjestelmän toimintaa, kokoveren sytokiinitasoja ja lukumäärän reuna-säätelijä-T-solut analysoitiin ennen ACT ja seurannan aikana.

Tulokset

Siirretyt solut sisälsivät lukuisia vähemmän erilaistunut T-solut suuresti edustaa CD27 + CD45RA + tai CD28 + CD45RA + solu, jonka osuus on noin 65% ja 70% koko vastaavasti. Ei ACT liittyviä vakavia tai odottamattomia toksisuutta ei ole todettu. Vastausprosentti potilailla oli 22,2% ja taudin torjumiseksi oli 66,7%.

Johtopäätökset

saadut tulokset tässä vaiheessa I tutkimuksessa, osoittavat, että FN-CH296 stimuloitujen T-solujen hoito oli hyvin hyvin siedetty taso tehoa, joka on varsin lupaava. Olemme myös otaksua, että laajeneva T-solujen avulla CH296 on menetelmä, jota voidaan soveltaa muihin T- soluihin perustuvien hoitojen.

Trial rekisteröinti

Umin UMIN000001835

Citation: Ishikawa T, Kokura S, Enoki T, Sakamoto N, Okayama T, Ideno M, et al. (2014) vaiheen I kliinisen tutkimuksen Fibronektiinin CH296 stimuloidun T Cell potilaille, joilla Advanced Cancer. PLoS ONE 9 (1): e83786. doi: 10,1371 /journal.pone.0083786

Editor: William C. S. Cho, Queen Elizabeth Hospital, Hong Kong

vastaanotettu: 14 heinäkuu 2013; Hyväksytty: 5. marraskuuta 2013 Julkaistu: 31 tammikuu 2014

Copyright: © 2014 Ishikawa et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus oli osittain tuettu JSPS KAKENHI Grant Number 23590891. rahoittajat ei ollut roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen. Ei ylimääräistä ulkoista rahoitusta saanut tätä tutkimusta.

Kilpailevat edut: Takeshi Ishikawa, Satoshi Kokura, Tetsuya Okayama, ja Toshikazu Yoshikawa on kuuluminen lahjoituksella rahoittaman viranomaista TAKARA BIO Inc. Tämä ei muuta kirjoittajat ”noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamista ja materiaaleja.

Johdanto

Adoptive T-solujen siirto (ACT) on tällä hetkellä yksi harvoista immunoterapioiden joka voi aiheuttaa tavoite kliinisiä vasteita merkittävän määrä metastasoituneen kiinteä kasvain [1]. Luontaisia ​​ominaisuuksia ACT väestöstä, erityisesti sen tilasta erilaistumista, sanotaan olevan ratkaisevaa onnistumisen ACT lähestymistapoja [2] – [5]. Vähemmän eriytetty T-solut on suurempi proliferaatiopotentiaali ja ovat vähemmän alttiita apoptoosin kuin enemmän erilaistuneita soluja. Vähemmän eriytetty T-solut ilmentävät reseptoreita, kuten IL-7-reseptori α-ketjun (IL-7Rα), näin ollen nämä solut on mahdollista lisääntyä ja tulla täysin aktivoitu vasteena homeostaattisina sytokiinejä, kuten IL-7 [6]. Tulokset ennen Kliiniset tutkimukset osoittivat merkittävää korrelaatiota kasvaimen regressio ja prosenttiosuus pysyviä ACT siirretään soluihin perifeerisessä veressä [3], [7]. Nämä havainnot viittaavat siihen, että pysyvyys ja proliferaatiopotentiaali siirrettyjen T-solujen rooli kliininen vaste ja vähemmän erilaistunut T-solut ovat ihanteellisia ACT siirtoa hoitoa. Käyttäen standardi nopea laajeneminen protokollaa, T-solujen ACT yleensä laajentunut suuren annoksen IL-2 ja CD3-spesifisten vasta-ainetta noin 2 viikkoa. T-solut käyttävät tätä protokollaa aiheuttaa progressiivisen T-solujen erilaistumista kohti myöhään efektori tilassa. Vaikka IL-2 on välttämätön pysyvyyden ja kasvun T-solun se on myös ei-toivottuja ominaisuuksia, kuten sen kykyä edistää terminaalin T- solujen erilaistumisen [8]. Tämän seurauksena tällä hetkellä käytössä menettely johtaa fenotyypin ja toiminnallisia muutoksia T-solujen, jotka tekevät niistä vähemmän optimaalinen välittävä kasvainten vastainen vasteita in vivo. Tämän valossa, kehittää uusia menetelmiä saada vähemmän eriytetty T-solujen on ratkaisevan tärkeää parantaa nykyisiä T-solu-pohjainen hoitoja jotta potilaat voivat kehittää pitkäkestoinen positiivinen immuunivasteen.

On raportoitu, että fibronektiini (FN), joka on merkittävä soluväliaineen proteiini, toimii paitsi adheesiomolekyyli vaan myös signaalin indusoija sitoutumisen kautta integriinit ilmentyvät T-soluissa [9], [10]. FN toimii yhdessä anti-CD3 aiheuttamaan T-solujen lisääntymistä, jonka ajatellaan riippuvan integriinin hyvin myöhään aktivaatioantigeenin-4 (VLA-4) /CS1 vuorovaikutusta [11], [12]. Rekombinantti ihmisen fibronektiinin fragmenttia (FN-CH296, RetroNectin) on laajalti käytetty retroviruksen geeniterapiassa parantaa geeninsiirron tehokkuutta. FN-CH296 on myös raportoitu pystyä stimuloimaan perifeerisen veren T-solujen kasvua in vitro, kun käytetään yhdessä anti-CD3: n ja IL-2. Anti-CD3 /IL-2 /FN-CH296-stimuloitujen T-solujen sisälsi suurempi määrä vähemmän eriytetty T-solujen ja in vivo pysyvyys näissä soluissa oli merkittävästi korkeampi kuin solut stimuloidaan muilla menetelmillä [13]. Nämä havainnot johtivat meidät soveltaa FN-CH296 välittämää stimulaatio vähemmän eriytetty fenotyyppiin T-solut tuottamaan ”fit T-solujen” [2], [14], jotka ovat ihanteellisia ACT. Tällä tavoin voimme eteni arvioida turvallisuutta ja tehoa FN-CH296 stimuloimaa T-solujen potilailla, joilla on edennyt syöpä.

Methods

Protokolla tälle kokeelle ja tukevat TREND tarkistuslista ovat saatavana olevat tiedot; katso tarkistuslista S1 ja pöytäkirjan S1.

Tutkimusasetelma

kliininen protokolla hyväksyi eettinen komitea Kioton prefektuurin lääketieteellisen yliopiston ja suoritettiin noudattaen Helsingin julistuksen ja eettiset ohjeet Clinical Research (Ministry of Health, Labour and Welfare, Japani). Ensisijaisena tavoitteena vaiheen I kliinisen tutkimuksen oli arvioida turvallisuutta ja haitaton tapahtuma profiilit FN-CH296 stimuloimaa T-solujen potilailla, joilla on edennyt syöpä. Meidän Toissijaisena tavoitteena oli arvioida antituumorivaikutuksen ACT hoidon. Tutkimus tehtiin standardina 3 + 3 vaiheen muotoilu tutkinut annosta rajoittavaa toksisuutta (DLTS) esiintyy yli 28 päivän kuluessa toisen infuusion viljeltyjen lymfosyyttien. DLT määriteltiin luokan ≥3 tahansa haittavaikutuksen liittyy infuusio soluviljelmässä. Käytimme nopeutettua annosta suurennettiin turvallisuuden arvioimiseksi lukumäärän adoptiovanhemmat lymfosyyttien 1 x 10

9 (kohortti 1), 3 x 10

9 (kohortti 2), ja 9 x 10

9 ( kohortti 3) per henkilö. Jos ei DLTS havaittu ensimmäisen kohortin potilaista, toisen kohortin 3 potilasta hoidettiin seuraavaksi suurempaa annosta. Jos DLT havaittiin ainakin yksi potilas, kohortti laajennettiin 6 potilasta. Jos ≥2 DLTS havaittiin alkuperäisessä tai laajennettu kohortin lisäannosta eskalointien tehtiin ja maksimaalisesti siedetty annos (MTD) katsottiin ylitetty. Ei ollut mitään sisäistä potilaiden annoksen suurentaminen tässä tutkimuksessa.

Kirjallinen suostumus saatiin kaikilta potilailta. Tämä tutkimus on rekisteröity Umin Clinical Trials Registry tunnisteeseen UMIN000001835.

Potilaat

Potilaat osallistuivat tähän tutkimukseen täytti seuraavat kriteerit: histologisesti tai sytologisesti vahvisti ruokatorven syöpä, mahasyöpä, peräsuolen syöpä, haimasyöpä, sappiteiden syöpä tai ei-pieni keuhkosyöpä; sairautta jäljellä tavallinen hoito ilman muuta parantavaa hoitoa vaihtoehtoja; no aikoo saada kemoterapiaa muu kuin suun kautta fluorourasiili aihiolääkkeet, sädehoidon tai biologisen vasteen muuntajia; välillä 20-80 vuotta ikää; Itä Cooperative Oncology Group (ECOG) tehokkuustilana 2 tai vähemmän; elinajanodote vähintään kolme kuukautta; vähintään neljän viikon niiden viimeisimmästä kemoterapiaa tai sädehoitoa; ja riittävä vereen, maksaan, munuaisten ja sydämen toiminta.

Poissulkukriteerit olivat seuraavat: läsnäolo hallitsematon infektio; historia autoimmuunisairaus tai vaikea yliherkkyys, läsnäolo vakavia komplikaatioita, kuten epästabiili angina pectoris tai sydäninfarkti kuuden kuukauden kuluessa syövän puhkeamista, interstitiaalinen keuhkokuume tai keuhkofibroosia kanssa radiologisia löydöksiä, läsnäolo merkitty askites tai pleuraeffuusio, ileus, aktiivinen muu maligniteetti , vakava mielenterveyden vajaatoiminta, raskaus tai imetys, ja lääketieteellinen aiemmin aiheuttaneet voimakkaita yliherkkyysreaktioita.

valmistelu FN-CH296-stimuloitujen T-solujen

Perifeerisen veren (50-70 ml) otettiin syöpäpotilailla. Perifeerisen veren mononukleaarisia soluja (PBMC) erotettiin käyttäen Ficoll-Paque PREMIUM (GE Healthcare, Tokio, Japani). Sen jälkeen, 3-8 x 10

7-solut suspendoitiin uudelleen elatusaineeseen on CultiLife215 pussi (Takara Bio, Otsu, Japani), joka oli ennalta päällystetty sekä anti-CD3: n ja FN-CH296 (RetroNectin®, Takara Bio), joka on yhdistelmä-DNA-fragmentti, ihmisen fibronektiinin. Soluja viljeltiin seerumittomassa elatusaineessa, GT-T551 (Takara Bio), joka oli täydennetty 0,6-1,2% lämpöinaktivoitua autologista plasmaa ja 200 U /ml rekombinantti-IL-2 (Proleukin, NovartisPharma, Nürnberg, Saksa) . Päivänä 4 solut siirrettiin CultiLife Eva pussi (Takara Bio) ja GT-T551 väliaineessa, joka oli täydennetty 0,6-+1,2% lämpöinaktivoitua autologista plasmaa ja 200 U /ml IL-2: ta lisättiin. Päivänä 7, GT-T551 alustassa, joka sisälsi 200 U /ml IL-2: ta lisättiin. Päivänä 10 solut kerättiin ja suspendoitiin uudelleen 50-90 ml: aan kylmäsäilytetyn liuosta, joka koostuu CP-1 (Kyokutou Seiyaku, Tokio, Japani), RPMI1640 (KOHJIN BIO, Sakado, Japani) ja ihmisen seerumin albumiini (Albuminar; CSL Behring, PA, USA) luoda lopulliset solun tuote. Saadakseen määrätyllä lukumäärällä adoptiovanhemmat lymfosyyttien potilaista kohortit 1 ja 2 tarvitsi yhden kerran lymfosyyttiviljelmässä, ja potilaiden kohortissa 3 tarvitaan kolme lymfosyyttiviljelmät. Viljellyt lymfosyytit pakastettiin ja varastoitiin -80 ° C: ssa asti verensiirron.

Ennen infuusio potilaille, solu tuotteet arvioitiin $ \\ rasteri (80%) = ”RG1” $ elinkelpoisuus trypaanisinieksluusiolla määritys $ \\ rasteri (80%) = ”RG2” $ steriiliyden jonka Bact /ALERT (bioMérieux, Durham, NC, USA) mikrobiologinen tunnistusjärjestelmä, ja $ \\ rasteri (80%) = ”RG3” $ endotoksiinin kineettisen turbidometrisillä LAL-määritys. Sekä hedelmättömyyttä ja endotoksiini testit tehtiin sopimus FALCO Biosystems (Kioto, Japani). Edelleen fenotyyppisiä markkereita Pieni erä lopputuotteita tutkittiin jälkeen pakastamalla ja sulattamalla. Näin ollen, nämä merkit pidetään lähes samanlaisia ​​kuin infusoidun soluja.

kokoveri sytokiinimäärityksiä

Immuunitoiminta testattiin laskimoverta saatiin potilailta ennen annetaan niitä viljeltyjä soluja (lähtötilanne) ja seurannan aikana tapahtuneen 4 viikon kuluttua 2

nd ja kuudes viljelty soluinfuusion (Fig. 1). Menetelmät määrällisesti IFN-α tuotannon ihmisen kokoveressä on kuvattu aikaisemmin [15]. Lyhyesti, heparinisoi- ääreisverenkierron viljeltiin Sendai-viruksen (500 HA /ml) 8 h kuluessa kuluttua verinäytteen ottamisesta. Veri-virus seosta inkuboitiin 37 ° C: ssa 20 h, ja IFN-α aktiivisuus nesteissä määritettiin biomäärityksellä. Muiden sytokiinien määrä määritettiin menetelmien mukaisesti, kuvattu aiemmin [16], [17]. Heparinisoituihin kokoverta laimennettiin 4-kertaisesti Eaglen minimal essential väliaineessa (Nissui Pharmaceutical Co. Ltd., Tokio, Japani) ja stimuloitiin fytohemagglutiniinilla P (PHA-P, 25 ug /ml, Wako Pure Chemical Ind., Osaka, Japani ). Näytteitä inkuboitiin 37 ° C: ssa 48 tuntia, minkä jälkeen supernatantit kerättiin sentrifugoimalla 800 x

g

10 minuuttia, ja sen jälkeen säilytettiin -80 ° C: ssa, kunnes niitä tarvittiin analysoitavaksi. Sytokiinien tasot näytteissä mitattiin Bio-Plex multiplex sytokiini array-järjestelmä (, Bio-Rad Laboratories, CA, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Multiplex Th1 /Th2-helmi kit (Bio-Rad Laboratories) mitattiin seuraavat sytokiinit: IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12 (p70), IL-13, tuumorinekroositekijä (TNF ) -α, IFN-γ, ja granulosyytti-monosyytti pesäkkeitä stimuloiva tekijä (GM-CSF). Tietojen hankinta ja analysointi tehtiin kanssa Bio-Plex Manager Software, versio 5.0. Koska tasot sytokiinien ilman PHA-P-stimulaatio oli hyvin alhainen (tuloksia ei ole esitetty), me vain arvioida niitä, joilla on PHA-P-stimulaation tässä tutkimuksessa.

Kohteet saivat CH296-stimuloitujen T-solujen terapiassa päivinä 1 ja 15. Teimme turvallisuusarvioinnit ensimmäisen 6 viikon hoidon. Potilaat, jotka halusivat jatkaa hoitoa sai jopa 4 jatkokäsittely 2 viikon välein. Voit testata immuunijärjestelmän toimintaa, laskimoverta saatiin aiheista ennen hoidon aloittamista (lähtötilanne) ja seuranta-aikana yksi, joka sattui 4 viikon (2 hoidot) ja sen jälkeen 6 viljelty solu hallinnot.

Virtaussytometrinen analyysi

solut värjättiin FITC-, fykoerytriini (PE) -, fykoerytriini-TexasRed (ECD) -, tai fykoerytriini-syaniini (PC5) konjugoitua spesifinen mAb CD3, CD4, CD8, CD27 , CD45RA, CD56, HLA-DR (Beckman Coulter, Marseille, Ranska), CD28, NKG2D (eBioscience, CA, USA) ja CCR7 (R 0,05.

Vertailu tehtiin suhteen solun pinnan markkereita (eli CD27 + CD45RA +, CD28 + CD45RA +, CCR7- + CD45RA +).

myrkyllisyys

haittavaikutusten tässä tutkimuksessa on esitetty taulukossa 3. Yksi potilas, joka annettiin S-1, kokenut asteen 3 neutropenia kuitenkaan tämän jakson katsottiin liittyvän S-1 ja olla toimimatta. Grade kaksi tai alemman tason hematologista toksisuutta havaittiin pääasiassa potilailla annostella S-1, ja nämä luuydintoksisuuden olivat enimmäkseen ohimeneviä. Ei-hematologisten tapahtumien, kuten väsymystä ja ruokahaluttomuutta havaittiin, mutta nämä olivat lieviä. Ei ACT liittyviä vakavia tai odottamattomia toksisuutta ei ole todettu. Siten ei DLT havaittu tässä vaiheessa I tutkimuksessa.

kliinistä hyötyä

Yksi potilas (no.4) saavutti täydellisen vasteen (CR). CR Potilas kärsi imusolmukkeesta uusiutumisen jälkeen peräsuolen syövän toimintaa ja hän käsiteltiin mFOLFOX6 ensilinjan kemoterapiaa. Myöhemmin hän käsiteltiin Capecitabine toissijainen kemoterapiaa, mutta intrapelvic imusolmuke etäpesäke havaittiin FDG-PET. Sitten potilas sai ACT hoitoa yhdistettynä S-1. Kolmen kuukauden kuluttua 6 infuusioiden viljeltyjen T-solujen, vaurio täysin kadonnut. Potilaan no.8 kokenut osittainen vaste (PR). Hänellä oli tulenkestävä sappitiehyen syöpä, ja käsiteltiin GEM ensilinjan kemoterapiaa seurasi GEM /S-1 kuten 2

toinen linja kemoterapiaa. Kuitenkin 17 kuukautta sen jälkeen, kun kemoterapian aloittamista, koko primaarikasvaimen lisääntynyt ja etäpesäkkeitä kaulanikamansa havaittiin. Hän koki ACT hoitoa yhdistettynä S-1. Kahden kuukauden kuluttua 6 infuusioiden ACT, koko primaarikasvaimen hänen maksassa laski 35% ja etäpesäkeleesioita kohdunkaulan nikama hävinnyt kokonaan FDG-PET.

9 potilaasta, yksi (11,1% ) oli CR, yksi (11,1%) oli PR, 4 (44,4%) oli stabiili tauti (SD) ja 3 (33,3%) oli etenevä sairaus (PD) (taulukko 4). Vastausprosentti oli 22,2% (95% luottamusväli (CI) 2,8? 60,0%) ja taudin torjumiseksi korko (DCR; CR + PR + SD) oli 66,7% (95% CI 29,9-92,5%).

immuunijärjestelmän Monitoring

määrittämiseksi immuunivasteita potilailla, jotka saavat uusia ACT kokoverta sytokiinimäärityksiä ja oheislaitteiden Treg analyysi, joka voisi olla hyödyllinen immuuni valvonta [18] – [20], tehtiin käyttämällä laskimoverta saatiin potilailta. Ei ollut merkittävä muutos kokoveressä sytokiinitasoja (Fig. 4A) potilailla, kun ne infusoitiin viljeltyjä soluja; oli kuitenkin väheneminen IL-4, IL-5 ja IL-13 käsittelyn jälkeen. Tasot IFN-γ: n, TNF-α, IL-2, IL-12 ja GM-CSF: kohortin 3 kasvoi käsittelyn jälkeen; erityisesti IFN-γ, IL-12 ja GM-CSF kasvoi useita 10 tai useampia kertoja. Seuraavaksi arvioimme kokoveren sytokiinitasoja mukaan objektiivisten tuumorivasteita. Tasot IFN-γ, IL-2, IL-12 ja GM-CSF: potilailla, joilla PR /CR lisääntyi yli kaksi kertaa käsittelyn jälkeen, kun taas pitoisuudet, joilla SD- tai PD vähentynyt tai ei muuttunut merkittävästi käsittelyn jälkeen ( kuva 4B).

Keskimääräiset sytokiinien tasot lla kummankin kohortin (A) ja tasot eri tuumorivasteita (B) on esitetty.

Kuten Tregs, sekä määrä ja osuus näistä solujen ääreisverenkierron ei ollut merkittävää muutosta hoidon jälkeen, kun ne arvioidaan sen kohortin tai kasvaimen vaste (Fig. 4A, B).

keskustelu

Esitetyt tulokset tässä tutkimuksessa osoittavat, että FN-CH296-stimuloitujen T soluterapia oli hyvin siedetty potilaamme näytteessä. Mitään merkittäviä ACT liittyvä asteen 3 tai 4 haittavaikutuksia esiintyi tahansa potilaan ja ACT tuotetun kasvaimen regressio 2 potilaalla: CR yhdellä potilaalla peräsuolen syöpä ja PR toiseen kanssa sappitiehyen syöpä. Vastausprosentti oli 22,2%, ja DCR oli 66,7%. Huolimatta koko otoksen, nämä tulokset ovat lupaavia.

havainnot aiempien hiiren tutkimuksia ja kliiniset kokeet osoittivat, että vähemmän erilaistunut T-solut voivat olla optimaalinen väestön ACT-pohjainen immunoterapioiden koska niiden in vivo pysyvyys , korkea proliferaatiopotentiaali, omaksua homeostaattisina ja kostimulatorisia signaaleja, niiden homing toissijaiseen imukudos- ja niiden kyky erittää IL-2 [2] – [5]. Lisätään tähän, Yu et ai. ovat raportoineet, että FN-CH296 toimii anti-CD3 indusoida T-solujen lisääntymistä. Nämä todisteet osoittavat thats FN-CH296 /anti-CD3 stimulaatio voi olla tehokas tapa tuottaa suuri määrä vähemmän erilaistunut T-solut soveltuvat ACT johtanut korkeampiin ja kauemmin pysyvyys in vivo [13].

CD45RA , CD27, CD28, ja CCR7 tiedetään olevan erittäin ilmaistaan ​​vähemmän eriytetty T-soluja. Perustuen ihmisen virusinfektio tutkimuksia, lineaarinen malli T-solujen erilaistumista on ehdotettu jossa CD27 + CD28 + CD45RA + naiivi solujen edetä läpi CD27 + CD28 + CD45RA- varhaisen antigeenin kokenut fenotyyppi ja jatkaa sitten CD27 + CD28-CD45RA- /+ väli fenotyyppi ja lopulta CD27-CD28-CD45RA +/- myöhään antigeenin kokenut fenotyyppi. Tämä lineaarinen liike johtaa kasvuun sytotoksisen potentiaalin ja vähentää solujen proliferaatiota [21]. CD27 ja CD28 ovat kostimulatorista molekyyliä, jotka toimivat yhdessä T-solureseptorin (TCR) tukea T-solujen laajentamiseen [22]. On ehdotettu, että CD28-proteiinia ekspressoivien T-solut erittävät IL-2 ja indusoivat antiapoptoottisten molekyylit [23]. Viime aikoina rooli CD28 ilmentymisen ACT-pohjainen kliinisissä tutkimuksissa on ollut saada enemmän huomiota ja tarkempia tutkimuksia tehdään. Analyysi jatkuva ja ei-jatkuva TIL kloonit osoittavat suosivista selviytymisen clonotypes ilmentävät korkeita CD28, syytetään selviytymisen etu siirrettiin T-solujen CD28 + vähemmän eriytetty fenotyyppi [4], [5]. CD27 voi myös lisätä TCR-indusoitua T-solujen proliferaatiota ja tarvitaan luominen ja ylläpito muisti-T-solujen in vivo [24]. On näyttöä siitä, että taajuus ilmentävät T-solut CD27 kasvaa asteittain, kun ACT ja voi liittyä pitkäaikaisen ylläpidon vakaan määrän kasvaimen spesifisten T-solujen saatu vastetta [25]. Tässä vaiheen I kliinisen tutkimuksen, taajuudet sekä CD27 + CD45RA + ja CD28 + CD45RA + solujen lisääntynyt huomattavasti sen jälkeen, kulttuuriin ja niiden väestöä siirretään solut olivat noin 60%. Toisaalta, taajuus CCR7- + CD45RA + soluja, jotka oli ilmaistu myös vähemmän erilaistunut T-solut, eivät muutu, kun kulttuuri tuntemattomista syistä. Suhde ja vähemmän erilaistunut fenotyyppi T-solut (eli CD27 + CD45 +, CD28 + CD45RA +, ja CCR7 + CD45RA + solut) siirretään soluihin erosivat suuresti kullekin potilaalle. Vahva positiivinen korrelaatio löytyi suhteet CD27 + CD45RA + (ρ = 0,717, p = 0,037), CD28 + CD45RA + (ρ = 0,717, p = 0,037), CCR7- + CD45RA + (ρ = 0,733, p = 0,031) solut siirretään soluihin ja niille PBMC (ennen kulttuuri). On välttämätöntä parannella tai löytää uusia menetelmiä, joita voidaan tehokkaasti tuottaa suuria määriä vähemmän erilaistunut T-solut myös silloin, kun on olemassa muutamia vähemmän eriytetty T-soluja. Yhdenmukaisia ​​aiempien raporttien [13], huomasimme, että stimulaatio FN-CH296 /anti-CD3 valikoivasti laajennettu CD8 + solujen tässä tutkimuksessa. Yleisesti uskotaan, että vallitseva kasvaimia tuhoavaa efektori mekanismi on sytotoksinen tappaminen vaikutus CD8

+ T-soluja, mutta huolimatta merimetsotutkimuksen mennessä, vaikutus suosivista leviämisen CD8 T-solujen syövän immunoterapiaa vielä paljon pidemmälle tutkimuksessa.

Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että IFN-γ on tärkeä rooli syövän immunoterapiassa ja IFN-γ ekspressiota T-solujen katsotaan korreloivan hyvin terapeuttisen menestyksen. Olemme myös osoittaneet, että määritys kokoveren IFN-γ tasoilla oli tehokas arviointimenetelmä kliininen vaste syövän immunoterapian [19] [20]. Tässä tutkimuksessa, kokoveren IFN-γ tasot kohortin 3 kasvoi jopa 10 tai useampia kertoja, kun 6-infuusioiden soluviljelmässä. Kokoveri IFN-γ tasojen PR tai CR tapauksissa kasvoi yli kaksi kertaa, kun taas ne, PD tai SD tapauksia nähnyt mitään merkittävää kasvua käsittelyn jälkeen. Havainto meidän aiemmassa tutkimuksessa [20], että kasvu kokoveressä IFN-γ tasojen jälkeen ACT itsenäisesti liittyvät kokonaiselossaoloaikaa syöpäpotilailla painottaa merkitystä saatuja tuloksia tässä tutkimuksessa.

Vaikka mitään merkittäviä korrelaatio määrän infuusiona vähemmän eriytetty T-solujen ja kokoveren IFN-γ tasoa ei ole vahvistettu todennäköisesti johtuu pienestä otoksesta, me otaksua, että vähemmän eriytetty T-solut voivat edistää korkeus IFN-γ tasoilla. Tulevaisuudessa tutkimuksia tarvitaan tutkimaan vaikutusta määrä CD27 + CD45RA +, CD28 + CD45 + ja CCR7 + CD45RA + solujen kokoveren IFN-γ tasoilla.

Lisäksi IFN-γ muut Th1-sytokiini- tasot kuten kuten IL-2, IL-12 ja TNF-α myös lisääntynyt potilailla kohortissa 3, sekä potilailla, joilla PR /CR, kun taas Th2-sytokiinien tasot kuten IL-4, IL-5 ja IL-13 väheni käsittelyn jälkeen. Sitä paitsi, kokoveren GM-CSF tason lisääntynyt potilaalla kohortti 3 ja kokeneiden potilaiden PR /CR. Aikaisemmin raportoitiin, että soluvälitteisen immuniteetin on edullisesti aktivoitu Th1 sytokiinit, kun taas Th2-sytokiinien estää soluvälitteisen immuniteetin [26]. GM-CSF on pleiotrooppinen sytokiini, joka stimuloi dendriittisolut (DC) ja edistää oton kasvainantigeenien DC johtaa T-solujen rajat pohjustus ja aktivoimalla immuunijärjestelmän antigeenejä [27], [28]. Näin ollen tulosten perusteella siitä immuuni-seuranta tehty tässä esillä olevassa tutkimuksessa olemme taipuvaisia ​​uskomaan, että fibronektiini CH296-stimuloitujen T soluterapia voi käyttää antituumorivaikutuksia aktivoimalla soluvälitteisen immuniteetin. Vaikka olemme viime aikoina osoittaneet, että ACT on potentiaalia vähentää Tregs [29], analyysissä tehdään tässä tutkimuksessa määrä reuna-Tregs ei muuttunut merkittävästi hoidon jälkeen.

Kyky toimia immuunipohjaiset hoitojen vaihtelee kasvaintyypeille. Vaikka melanooman ja munuaisten syöpä ovat klassisesti pidetään immunogeeninen, useimmat epiteelin pahanlaatuisia kasvaimia eivät ole immunogeenisiä ja vastaavan huonosti immunoterapian. Meidän näyte, kaikki yhdeksän potilailla oli epiteelin pahanlaatuisia kasvaimia, kuten ruoansulatuskanavan syöpien ja keuhkosyöpä, joita perinteisesti pidetään immuuniksi immunoterapia. On huomattava, että tavoite vaste havaittiin potilailla, joilla on peräsuolen syöpä ja sappitiehyen syöpä. On yhä epäselvää, onko tämä uusi ACT on terapeuttista potentiaalia useita kasvaimen tyyppejä.