Krooninen sairaus

tiivistelmä

Vasta viime vuosina on fosfolipaasi

2 entsyymit (PLA

2s) tullut syöpä tavoitteita. Tässä työssä me raportoimme ensimmäistä havaitseminen kohonnut PLA

2 toimintaa plasmassa potilailla, joilla peräsuolen, keuhko-, haima-, ja virtsarakon syövät verrattuna terveisiin verrokkeihin. Riippumaton sarjaa kliinistä plasmanäytteet saatiin kahdessa eri paikassa. Ensimmäinen oli potilailta, joilla peräsuolen syöpä (CRC; n = 38) ja terveiden verrokkien (n = 77). Toinen oli sairastavien potilaiden keuhkojen (n = 95), virtsarakon (n = 31), tai haiman syöpiä (n = 38), ja terveillä verrokeilla (n = 79). PLA

2 toimintaa analysoitiin validoidulla kvantitatiivinen fluoresenssimäärityksellä menetelmä alatyyppi PLA

2 toiminta määriteltiin läsnäollessa selektiivisiä. Luonnollinen PLA

2 aktiivisuus sekä kunkin alatyypin PLA

2 aktiivisuus kohosi kunkin syöpää ryhmässä verrattuna terveisiin verrokkeihin. PLA

2 toimintaa korotettiin myöhäisessä vaiheessa vs. varhaisessa vaiheessa tapaukset CRC. PLA

2 toiminta ei vaikuttanut sukupuoli, tupakointi, alkoholin tai painoindeksi (BMI). Näytteitä kahden itsenäisen sivustoja vahvistivat tulokset. Plasma PLA

2 toiminta oli noin 70%: n spesifisyys ja herkkyys havaita syöpä. Merkitsin ja kohdistusarvoja PLA

2 aktiivisuus on ehdotettu.

Citation: Cai H, Chiorean EG, Chiorean MV, Rex DK, Robb BW, Hahn NM, et al. (2013) Kohonnut fosfolipaasi

2 Toiminta plasma- näytteet Multiple Syövät. PLoS ONE 8 (2): e57081. doi: 10,1371 /journal.pone.0057081

Editor: Mohammad O. Hoque, Johns Hopkins University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 27 syyskuu 2012; Hyväksytty: 17 tammikuu 2013; Julkaistu: 22 helmikuu 2013

Copyright: © 2013 Cai et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukevat osittain Cancer Care Engineering Project, Department of Defense, USAMRMC, W81XWH-08-1-0065 ja W81XWH-10-1-0540 (https://www.grants.gov/search/search.do?mode = AGENCYSEARCH virasto = DOD), sekä National Institutes of Health R21 CA133744 (https://www.cancer.gov/researchandfunding) ja Mary Fendrich Hulman Charitable Trust YX. Rahoitus Hoosier Oncology Group Study tarjosi Walther Cancer Institute Foundation, Indianapolis, IN. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä olemassa. Kirjoittajat ovat täytetty PCT-patenttihakemus ”PLA2 Aktiivisuus merkkiaineena munasarjojen ja muut naistentautien syövät” vuonna 2011. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamista ja materiaaleja.

Johdanto

Syöpä on yksi suurimmista terveydenhuollon taakkaa maailmanlaajuisesti. Yli 1,6 miljoonaa uutta syöpätapausta ja yli 577000 syöpäkuolemaa ennustetaan esiintyvän Yhdysvalloissa vuonna 2012 [1]. Keuhkosyöpä (LC) ja peräsuolen syöpä (CRC) ovat yksi yleisimmistä syöpiä. Haiman ja virtsarakon syöpien lasketa (3-7% kaikista syövistä), mutta haimasyöpä (PC) on yksi deadest syöpien, jossa on synkkä 5 vuoden pysyvyys on 6% [1]. Onnistuminen nykyisen syöpähoitojen riippuu voimakkaasti diagnoosivaiheessa, jossa havaita varhain ja korkean riskin potilasryhmissä tuloksena suotuisin yleistä eloonjääneiden näissä sairauksissa [1], [2]. On odotettavissa, että varhainen havaitseminen ja seulonta korkean riskin potilasryhmissä voi olla merkittävin vaikutus muuttamalla eloonjäämiseen näissä sairauksissa. Siten on kiireesti tehokkaita ja herkkiä varhaisen havaitsemisen menetelmät [3]. Vaikka kuvantaminen perustuva tunnistus menetelmiä, kuten kierre atk aksiaalinen tomografia (CT) ja kolonoskopia ovat tehokkaita varhaisen havaitsemisen menetelmät LC ja CRC vastaavasti [4], ne ovat melko kalliita ja hankalaa. Lisäksi modernit kuvantamismenetelmät ovat yleisyydestä löytämisen keuhkojen kyhmyjä, joista monet ovat vääriä positiivisia, mutta silti vaatii ylimääräisiä ja joskus tuskallista tutkimukset [5]. Molecular lähestymistapoja syövän diagnoosin kautta biomarkkerit mitataan ei-invasiivisia keinoja voisivat merkittävästi parantaa spesifisyys ja herkkyys syövän havaitseminen [5]. Erityisesti serologinen biomarkkereiden voi olla hyödyllisin varhaiseen havaitsemiseen takia minimaalinen invasiivisuus, kustannustehokkuus, ja mukavuutta. Lisäksi serologinen biomarkkerit identifioida uusia syöpään liittyvien geenien ja /tai molekyylit voivat tarjota uutta tietoa biologia syöpien ja voi myös tulla houkuttelevia kohteita hoitoon [3].

fosfolipaasi

2 entsyymejä (PLA

2s) ovat suuria entsyymejä, jotka tuottavat syklo-oksigenaasi-2 (COX-2) substraatti, arakidonihappo (AA), sekä lysofosfolipidit. Molemmat tuotteiden ryhmiä ovat molekyylejä mukana syövissä. Kuitenkin vasta viime vuosina on PLA

2s tullut syöpä tavoitteet [6]. Yli 30 entsyymejä, jotka omistavat PLA

2 tai liittyvää toimintaa on havaittu nisäkkäillä [7]. Ne on jaettu neljään ryhmään niiden sijainti solun, substraattispesifisyys, ja kalsium-riippuvuus [8], mukaan lukien soluliman (CPLA ​​

2), kalsium-riippumaton (IPLA

2), erittynyt (SPLA

2), ja lipoproteiiniin liittyvän PLA

2 (Lp-PLA

2). Syövän, suurin osa huomio on keskittynyt SPLA

2 ja CPLA

2 [8]. Me ja muut ovat osoittaneet, että IPLA

2 on toiminnallisesti mukana edistämällä munasarjasyöpä (OC) ja muiden syöpien,

in vitro

ja

in vivo

[9] – [ ,,,0],13]. SPLA

2 ja Lp-PLA

2 erittyvät entsyymejä. Sitä vastoin sekä CPLA

2 ja IPLA

2 ovat sytosolientsyymien ja niiden solunulkoisen olemassaolo on osoitettu ainoastaan ​​liittyvän eksosomeiksi mistä RBL-2H3 soluja (maston ja basofiilisolulinjan linja) [14]. Eksosomit ovat 40-100 nm halkaisijaltaan membraanivesikkeleihin vapautuu multivesikulaarisista elinten ehjien solujen ja tiedetään osallistua Parakriiniset [15]. Olemme äskettäin havainneet extracellular- ja eksosomi vapaa IPLA

2 ja CPLA

2 toimintaa vatsaonteloon sekä kudoksissa OC potilaista [16].

Nykyisessä työssä olemme keskittyneet PLA

2 toiminta sijasta ilmaisua yksittäisten PLA

2 entsyymejä ja tutkittiin PLA

2 toimintaa veriplasmanäytteistä potilaista, joilla eri syöpiä, verrattuna niihin peräisin terveiden verrokkien. Käytimme äskettäin validoitu kvantitatiivinen, kätevä, hyvin toistettavissa PLA

2 määritysmenetelmällä [16] ja osoittivat ensimmäistä kertaa, että plasman PLA

2 toimintaa potilailla, joilla on CRC, LC, PC, ja virtsarakon syöpä (BC) olivat merkittävästi korkeammat kuin terveiden verrokkien. Lisäksi PLA

2 toiminta korreloivat kasvaimen vaiheissa CRC. Muut mahdolliset vaikuttavien tekijöiden, kuten sukupuoli, ikä, tupakointi ja alkoholin kulutus tutkittiin tässä tutkimuksessa.

Materiaalit ja menetelmät

Ihmisen näytteen keräämiseen ja käsittelyyn

Kahdet itsenäisesti kerättiin kliinistä plasmanäytteet otettiin tätä tutkimusta varten. Ensimmäiset päässä Indiana University School of Medicine (IUSM) keskittyi CRC potilaiden ja terveiden verrokkien seulottiin kolonoskopia ja selvinnyt adenomatoottisten polyypit ja CRC. Verinäytteet kerätään EDTA: n läsnäollessa sentrifugoitiin 1750 g: ssä 15 minuutin ajan 15-24 ° C: ssa, alikvootit silikonoitujen Eppendorf-putkiin, ja niitä säilytettiin -80 ° C: ssa. Toinen näytesarja oli potilailta keuhkosyöpää, virtsarakon, haiman tai syövät, sekä terveiden verrokkien. Nämä näytteet kerättiin Hoosier Oncology Group (HOG) Indianapolis, IN osana tutkimuksen nimeltä ”biologinen näyte kokoelma pöytäkirja potilaan kanssa ja ilman Metastaattinen Solid Organ Maligniteetit: Hoosier Oncology Group Study BANK09-138”. Verinäytteet sentrifugoitiin 3500 rpm 30 min. Sisältävä eriin näytteitä säilytettiin -70 ° C: ssa. HOG on voittoa lääketieteellisen tutkimuksen organisaatio. Vaikka se on erillinen kokonaisuus, IUSM on tukeva järjestö Kartongin nimitykset ja IRB hyväksynnät HOG. Kolme erillistä IRB protokollia keräämiseen ja /tai käyttää verinäytteiden liittyvät tähän työhön on hyväksynyt saman IUSM Institutional Review Board (Protocol numerot: 0670-81, 0808-24, 0905-20). Kirjallinen suostumuslomakkeet saatiin kaikkien aineiden ja kaikkien kliinisiä tutkimuksia oli tehty periaatteiden mukaisesti ilmaistu Helsingin julistuksen.

Reagenssit ja inhibiittorit

PLA

2 alustaan ​​1 O- (6-Dabcyl-aminoheksanoyyli) -2-O- (6- (12-BODIPY-dodekanoyyli) aminoheksanoyyli) -sn-3-Glyceryl fosfatidyylikoliinia (DBPC) oli Echelonilta Bioscience (Salt Lake City, UT, USA) . Bromoenol laktoni (BEL) ja metyyli arachidonylfluorophosphonate (MAFP) oli Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA).

PLA

2 entsyymiaktiivisuus analysoidaan

PLA

2 toimintaa analysoitiin käyttämällä fluoresoivaa substraattia DBPC, fluorogeenistä fosfatidyylikoliini substraattia [17]. Plasma näytteet (0,1 ui) sekoitettiin DBPC (0,2 ug PBS: ssä), jolloin lopullinen tilavuus 200 ui. Fluoresenssi luettiin välein usean tunnin ajan Victor

3V levynlukijaa (Perkin Elmer, Waltham, MA, USA). PLA

2 toiminta ilmaistiin muutos fluoresenssin intensiteetissä /min /ui plasmaa. Kuten aiemmin on kuvattu [16], valitsimme olosuhteissa erottaa PLA

2 aktiivisuus peräisin eri alatyypeistä: a) ”luonnollinen” PLA

2 aktiivisuutta ilman mitään eksogeenista lisäaineita, b) IPLA

2 aktiivisuutta kun läsnä oli 5 mM EDTA (kaksiarvoisen kationin kelaattorin estää kaikki PLA

2s vaatii kalsiumia, mukaan lukien SPLA

2 ja CPLA

2), c) SPLA

2-aktiivisuutta, kun läsnä oli 1,2 mM kalsiumkloridia (luonnollinen ionisoituneen kalsiumin pitoisuus veressä [18]) ja MAFP (10 uM, dual estäjä CPLA

2 ja IPLA

2), ja d) CPLA

2 aktiivisuutta läsnä oli 100 uM kalsiumkloridia ja bromoenol laktoni (BEL, 10 uM, selektiivinen varten IPLA

2).

tilastollinen analyysi

Categorical muuttujat tiivistää laskee prosenttiosuudet ja jatkuva muuttujat tiivistää tarkoittaa kanssa standardipoikkeamat (SD) poikki terveillä verrokeilla, ja syöpä ryhmät. Chi-square testiä käytettiin testaamaan assosiaatioita tauti statukset ja kategorisen covariates kuten sukupuoli, rotu, tupakointi, ja alkoholinkäytön. Jatkuvaan covariates kuten ikä ja BMI, yksisuuntainen ANOVA käytettiin testaamaan yleistä eroa ja Student

t

-testi käytettiin testaamaan pareittain ero poikki tauti statukset. Lineaarinen regressio käytettiin arvioimaan yhden muuttujan assosiaation PLA

2 mittausta ja kovariantteja. Logistinen regressio käytettiin arvioimaan luokituksen suorituskykyä PLA

2 mittausta. Bootstrap käytettiin sisäisesti vahvistaa luokituksen suorituskykyä käyttämällä 1000 näytteitä [19]. Kukin näyte oli samankokoinen kuin alkuperäinen datasarja ja käytettiin kehittää mallia. Tulokset testattiin sitten alkuperäisen datan. Alueet käyrän alla (AUC) laskettiin jokaiselle toista. Kaikki testit olivat kaksipuolisia. Koska valmisteleva luonne tutkimuksessa ei säätöjä monimuuttujille hyväksyttiin.

P

arvojen 0,05 katsottiin olevan tilastollisesti merkitsevä. Kaikki analyysit suoritettiin käyttäen SAS-ohjelmiston versio 9.3 (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA).

Tulokset

Aihe väestötiedot

demografiset Aineisto osallistujia on esitetty yhteenvetona taulukossa 1. IUSM CRC joukko näytteitä, 41,7% koko osallistujat olivat miehiä, 88,7% oli valkoisia, ja keski-ikä oli 53,1 vuotta. Ikä, sukupuoli, ja rotu koostumus eivät olleet merkittävästi erilaiset hallinnassa vs. CRC ryhmät (

P

arvot 0,05, taulukko 1). Toisen näytesarja, ikä tervettä kontrolliryhmässä oli merkitsevästi nuorempi kuin kussakin kolmessa syövän ryhmään (taulukko 1). Vaikka miehillä oli hallitseva kussakin ryhmässä, he eivät olleet merkittävästi erilaisia ​​kuin toisen sarjan tervettä verrokkia. 71,2% koko osallistujat olivat miehiä, 90,4% oli valkoisia, ja keski-ikä oli 58,3 vuotta (taulukko 1).

toistettavuus ja vakautta PLA

2 määrityksissä

Olemme hiljattain vahvistanut määrälliset luonne DBPC perustuvan PLA

2 määrityksiä ja optimoitu edellytykset biologisia nesteitä ja kudosnäytteistä [16]. Kun kukin 8 edustavien plasmanäytteistä analysoitiin kolme kertaa, PLA

2 aktiivisuuden arvot toistettavissa, joiden keskimääräinen keskihajonta (SD) 13,5 (1,3%). Testasimme myös PLA

2 aktiivisuuden vakauden vertaamalla niitä näytteissä ennen varastointia kuin samoissa näytteissä säilytettiin -80 ° C: ssa yhden kuukauden sekä vaikutusta jäädytys-ja-sulatus on PLA

2 toiminta 8 edustavia näytteitä. Kuten aikaisemmin ilmoitettiin [16], PLA

2 toiminta oli stabiili SDS 35,8 (5,8%). Lisäksi olemme osoittaneet, että kun läsnä on kaikkia muita määrityksen komponentit, mukaan lukien inhibiittori (t), joita käytetään tässä tutkimuksessa, mutta ilman verta tai muita biologisia näytteitä, ei-spesifinen hydrolyysi DBPC substraatin oli negatiivinen ja vähäinen (data ei esitetty).

luonnollinen PLA

2, CPLA

2, IPLA

2, ja SPLA

2 toiminta oli koholla syöpänäytteissä vs. terveiden verrokkien

Veren IPLA

2 ja CPLA

2 toimintaa ei ole aiemmin raportoitu ihmisen näytteitä. Analysoimme luonnon PLA

2 (määritelty PLA

2 toimintaa mitattiin olosuhteissa ilman määritteet, joka voi olla pienempi kuin summa alaryhmän PLA

2 toimintaa mitataan muutettu olosuhteissa), kuten sekä CPLA

2, IPLA

2, ja SPLA

2 toimintaa plasmanäytteissä.

Lukuun ottamatta terve vs. CRC CPLA

2 toimintaa, kaikki muut vertailut osoittivat, että PLA

2 toiminta oli merkittävästi kohonnut syövän ryhmissä (Fig. 1A ja 1B). PLA

2 toiminta-arvot vastapäätä plasmanäytteistä LC, BC, ja PC potilaat eivät eronneet merkittävästi (

P

arvot 0,05).

Comparison of PLA

2 toiminta että terveillä verrokeilla (normaali kolonoskopia; n = 77) ja CRC (n = 38) ryhmät. A. Vertailu PLA

2 toimintaa terveen (n = 79) ja muiden syöpään ryhmiä. Keuhkosyöpä (LC, n = 95), virtsarakon syöpä (BC, n = 31) ja haimasyöpä (PC, n = 38). Jakauma luonnon ja yksittäisten ryhmien PLA

2 toimintaa analysoitiin kuvatulla Materiaalit ja menetelmät. Keskiarvot PLA

2 toiminta oli esittämä ”+” kuvassa. *

P

0,05; **

P

0,01; ***

P

0,001.

Koska SPLA

2 erittyy, se oli odotettavissa, että SPLA

2 toiminta olisi muodostavat suurimman osan PLA

2 havaitaan toimintaa veressä. Kuitenkin meidän tulokset, korkeat IPLA

2 ja CPLA

2 ja alhainen SPLA

2 toimintaa havaittiin kaikissa plasmanäytteistä. Veri eksosomeiksi voi olla kantajia näiden toimien [15]. Käytimme differentiaalisentrifugointia vaiheita kuvasimme äskettäin [16], onko näitä toimintoja voisi liittyä verihiutaleiden eksosomeiksi tai muita mikrovesikkeleitä. Verinäytteet sentrifugoitiin ensin 1750 g: ssa 15 minuutin ajan pääosan poistamiseksi verisolujen ja supernatantti nimettiin S1. S1 sentrifugoitiin 20000

g

20 min ajan, mikä johti S2 ja pelletti 2 (P2; solu- fragmentit ja suuret rakkulat). S2 oli ultrasentrifugoitiin 110000

g

2 h, mikä johti S3 ja P3 (eksosomeiksi). Lopullinen sentrifugoimalla S3 200000

g

2 h johti S4 ja P4 (muut mikrovesikkeleitä). Huomasimme, että kaikki PLA

2 toiminta oli säilytetty S1 S4 jakeet, ikään kuin he olivat ”vapaa” eikä liittynyt mikrovesikkeleille (yksityiskohtaisia ​​tietoja ei esitetty). Tämä on samanlainen kuin mitä olemme viime aikoina raportoitu ihmisen munasarjasyövän vatsaonteloon sekä uusia erityksen mekanismeista IPLA

2s ja CPLA

2s voi olla mukana [16].

Kliininen parametrit ja PLA

2 toiminta syövän plasmanäytteistä

Mielenkiintoista, luonnollinen, IPLA

2, ja SPLA

2 toimintaa plasmassa CRC potilasta suurempi potilailla, joilla loppuvaiheissa (III ja IV) verrattuna varhaisemmassa vaiheessa (I ja II) tauti (

P

= 0,0335, 0,0367, 0,0778, ja 0,0345 PLA

2, IPLA

2, CPLA

2, ja SPLA

2 vastaavasti; Fig. 2), mikä viittaa siihen, että nämä entsymaattisia toimet voivat olla mukana CRC etenemistä. Vertasimme PLA

2 toimintaa paksusuolessa (n = 24) vs. peräsuolen (n = 14) näytteitä. Vaikka luonto, samoin alaryhmä PLA

2 toimintaa paksusuolensyöpä potilaat olivat korkeammat kuin peräsuolen syöpäpotilaita, erot eivät olleet tilastollisesti merkitseviä (

P

0,05 kaikissa tapauksissa ; taulukko 2). Lisäksi mitään eroa havaittiin PLA

2 toimintaa eri alaryhmien CRC potilaille, joilla hoitoja (kirurgia, kemoterapia, sädehoito, tai hoitamaton; taulukko 2). Sen sijaan havaitsimme, että PLA

2 toiminta ei korreloi joko T tai N vaiheissa LC, BC, tai PC (taulukko 3).

luonnollinen ja yksittäiset ryhmät PLA

2 toiminta oli vähitellen lisääntynyt kasvaimen vaiheesta. Vaiheen I ja II (n = 7), vaihe III ja IV (n = 31). * Studentin t-testi,

P

0,05.

Muiden tekijöiden vaikutus on PLA

2 aktiviteetti

koonneet muita tekijöitä, jotka saattavat vaikuttaa PLA

2 toimintaa, kuten tupakointi, alkoholin kulutus, ja painoindeksi (BMI). CRC tutkimus, alkaen 80 potilaalla on käytettävissä tupakointi tiedot (27 CRC ja 53 tervettä tapauksissa), suurin osa (96%) ihmiset eivät tupakoi, kun näytteet kerättiin, ja keskimäärin 50,5% ihmiset koskaan tupakoineet ja 45,7% menneisyyden tupakoitsija, ja vain 9,4% ja 19,2% ihmisiä oli toisen käden tupakointi altistuminen kussakin ryhmässä. Tupakoinnin statukset olivat samalla jaettu kahteen ryhmään (

P

arvot 0,05, yksityiskohtaiset tiedot taulukossa 4) ja ei ollut tilastollista eroja PLA

2 toimintaa eri tupakointi tilojen (Fig. 3A ). Toisessa joukko tutkimuksessa tupakointi tilat olivat merkitsevää eroa terveiden verrokkien ja kukin syövän ryhmien osuus on suurempi ihmisiä, jotka olivat nykyinen, ohi, tai toisen käden tupakoitsijoita syövän ryhmissä (

P

arvot 0,05, paitsi yhdessä verrattuna, taulukko 5). Tästä huolimatta ei tilastollisia eroja ei havaittu PLA

2 toimintaa eri tupakointi tilat, joka tukee käsite saatu ensimmäiset tutkimuksessa, että plasman PLA

2 toiminta ei vaikuta tupakointia (Fig. 3B).

PLA2 toimintaa terveillä ja CRC näytteitä eri tupakointi tilojen (a) ja passiivisesta tupakoinnista tilat (b). A. Vertailu PLA2 toiminnan eri tupakointi tilojen (a) ja passiivisesta tupakoinnista tilat (b) osallistujille LC, BC, ja PC.

Alkoholi kulutus ohjaus ja CRC ryhmät eivät eronneet merkittävästi (taulukko 4). Alkoholi kuluttajat CRC ryhmissä yleensä korkeampia plasman PLA

2 toimintaa, mutta erot eivät olleet tilastollisesti merkitseviä (Fig. 4). Kuitenkin, johtuen alhaisesta numeroita kuin alkoholin kulutuksen ryhmässä (n = 7), meidän tulisi tulkita näitä tietoja varoen. Muiden syöpien, saatiin samanlaisia ​​tuloksia. Vaikka oli merkittävästi korkeammat prosenttiosuudet alkoholinkulutuksen aiheista muu syöpä ryhmissä (taulukko 5), PLA

2 toimintaa ei ole merkittävästi alkoholiin (Fig. 5).

Comparison of PLA2 toiminnan välillä ” alkoholiton ”ja” alkoholi ”ryhmien kanssa terveen ja CRC osallistujaa. A. Vertailu PLA2 toiminnan välillä ”ei-alkoholi” ja ”alkoholi” groupsin toinen joukko tutkimuksia terveitä, LC, BC, ja PC osallistujia.

PLA2-aktiivisuuden vertailu miehillä ja naisilla terve ja CRC ryhmiä. A. PLA2 aktiivisuus verrattuna miehillä ja naisilla on terve ja muiden syöpään ryhmiä. Tiedot kaikista aiheista kussakin sarjassa tutkimuksia esitetään myös.

Erot PLA

2 toimia sukupuolten välillä ei saavuttanut tilastollista merkitystä valvonnassa tai syöpä ryhmät jompaa kumpaa tutkimukset (kuviot. 5A ja 5B). Samoin ei ollut eroa tai korrelaatiota PLA

2 toimintaa henkilöillä, joiden BMI 25 vs. BMI ≥25 ryhmien CRC tutkimuksessa (kuviot. 6A ja 6B), vaikka keskimääräinen BMI CRC ja PC ryhmien olivat huomattavasti pienempiä kuin kontrolliryhmissä (taulukot 4 ja 5).

altistetaan terveillä ja CRC ryhmät jaettiin kahteen ryhmään: BMI 18,5 25 (Sillä kaikki aiheet, n = 43) ja BMI 25 (Sillä kaikki aiheet, n = 80). A. alistetaan terveillä ja muu syöpä ryhmät jaettiin kahteen ryhmään: BMI≤25 (kaikille kohteille, n = 80) ja BMI 25 (Sillä kaikki aiheet, n = 148).

ikä on yksi selkeästi riskitekijöitä CRC ja muita syöpiä. American Cancer Society ja Yhdysvaltain Preventive Services Task Force suosittelevat, että ihmiset saavat kolonoskopia näytökset 10 vuoden välein alkaa iässä 50. Näin analysoidaan iän vaikutuksia PLA

2 toimintaa jakamalla aiheet kahteen ryhmään (ikä 50 vuotta, n = 37 ja ≥50 vuotta, n = 78). Vaikka oli ollut lisääntymässä PLA

2 toimintaa ≥50 vuotta vanha ryhmä CRC ryhmä, erot eivät olleet tilastollisesti merkitseviä (Fig. 7A). Vastaavasti mitään eroa ei havaittu näiden kahden ikäryhmien LC, BC, ja PC asettaa, mutta kun kaikki aiheet (myös terveiden verrokkien) yhdistettiin, oli merkittävä nousu PLA

2 aktivoi vanhemmissa aiheista ( kuva 7B).

osallistujat terve ja CRC ryhmät jaettiin kahteen ryhmään: ikä 50 (Sillä kaikki aiheet, n = 42) ja ikä ≥50 (kaikista aiheista, n = 153). Studentin t-testi suoritettiin analysoida eroja näiden kahden ryhmän välillä. A. Osallistujat terveillä ja muu syöpä ryhmät jaettiin kahteen ryhmään: ikä 50 (Sillä kaikki aiheet, n = 61) ja ikä ≥50 (Kaikista aiheista, n = 144). Studentin t-testi suoritettiin analysoida eroja näiden kahden ryhmän välillä. *** P 0,001.

suora vertailu näiden kahden terveen kontrollin osoitti, että vaikka niiden sukupuoli, ikä, toisen käden tupakointi ja alkoholinkäyttö olivat erilaiset, ei ollut eroja tahansa PLA

2 aktiivisuus mitattiin (taulukko 6). Tämä tukee lisäksi, että plasman PLA

2 toiminta ei vaikuta merkittävästi iän, sukupuolen, alkoholin kulutus, ja /tai tupakointia.

luokittelu suorituskykyä plasman PLA

2 toiminta

regressiomalli käytettiin arvioimaan luokituksen suorituskykyä PLA

2 toimintaa syövissä. Kaikki neljä PLA

2 mittauksia pidettiin ennustajina riippumatta niiden merkityksestä. Luokittelu esityksiä yhteenvedon vastaanotin toimii (ROC) käyriä (Fig. 8). Ennustekaavoissa luotiin käyttämällä parametriestimaatit.

CRC tapauksissa vs. terveillä koehenkilöillä. A. Kaikki syövät vs. terveille toinen setti. B. Keuhkosyöpä vs. terveillä koehenkilöillä. C. Virtsarakon syöpä vs. terveillä koehenkilöillä. D. Haimasyöpä vs. terveillä koehenkilöillä. E. Kaikki syövät vs. kaikki terveillä henkilöillä, joiden yhteenlaskettu kahdet.

ennuste kaava erottamaan CRC tapauksia terveillä henkilöillä on: missä ”

P

CRC” seisoo että todennäköisyys, jolla CRC. ROC-käyrä on esitetty kuviossa. 8A on alue käyrän alla (AUC) = 0,7502.

Koska ulkoisen vahvistusten vaatisi riippumattoman tutkimuksen, me sen sijaan hyväksynyt oman menetelmiä vahvistaa luokittelun esityksiä. Joukossa erilaisia ​​sisäisiä validointimenetelmiä, on osoitettu, että bootstrap päihittää jackknife, ristivalidointi ja data-halkaisu menetelmiä [19]. Siksi bootstrap hyväksyttiin vahvistettavaksi. Erityisesti ennuste kaavan saatiin sovittamalla sama malli jokaiselle bootstrapped näytteen. Kaavan levitettiin alkuperäisen datan laskemiseksi ennusteen todennäköisyydet. Suorituskyky tälle nimenomaiselle bootstrap näyte tiivistää AUC ROC käyrä. Yleistä suorituskykyä arvioitiin yhteenveto AUC poikki 1000 bootstrapped näytteitä. 95% 1000 bootstrapatun näytteet, AUC: t ovat korkeammat kuin 0,7143 CRC vs. terveiden. Siksi nämä tulokset sisäisesti vahvistavat luokittelu esityksiä kehitettyjen mallien yllä.

ennustaminen kaava ja ROC käyrä erottaa kaikista syöpätapauksista alkaen terveille toinen joukko tutkimuksen ovat seuraavat ja kuvassa. 8B, AUC = 0.8337.This suorituskyky validoitiin 1000 bootstrapped näytteissä. 95% 1000 bootstrapped näytteet, AUC ovat korkeammat kuin 0,8205 LC, PC, BC yhdistetään vs. toinen joukko tervettä verrokkia.

ennustekaavoissa ja ROC käyrät erillisen LC, BC, ja PC tapauksia terveille toinen joukko tutkimus on lueteltu alla ja kuviot. 8C 8E, jossa AUC 0,811, mikä osoittaa hyvää luokittelu esityksiä testeistä. LC vs. terveillä verrokeilla, AUC = 0,8119 (Fig. 8C). 95% 1000 bootstrapped näytteen AUC: t ovat korkeammat kuin 0.7923.For BC verrattuna terveisiin, AUC = 0,8624 (Fig. 8D). 95% 1000 bootstrapped näytteen AUC: t ovat korkeammat kuin 0.8161.For PC verrattuna terveisiin, AUC = 0,8671. 95% 1000 bootstrapped näytteen AUC: t ovat korkeammat kuin 0,8426.

Lisäksi, koska olemme havainneet, että PLA

2 toiminta oli olennaisesti mitään eroa näiden kahden terveiden kontrollien, yhdistimme kaikki terveiden verrokkien ja kaikista syöpätapauksista kummassakin tutkimusten ja syntyy yhdistetty kaava, AUC = 0,8011 (Fig. 8F). 95% 1000 bootstrapped näytteet, AUC: t ovat korkeammat kuin 0.7907.The herkkyydet ja spesifisyydet voidaan saada ROC-käyrät on esitetty kuviossa. 8. CRC joukko tutkimuksen, 60,5% herkkyys ja 77,9% ja spesifisyys saatiin (taulukko 7). Jotta 2

toinen joukko tutkimuksen ja tietojen yhdistetään molempien, herkkyydet 80% ja erityispiirteet 66% saatiin kaikissa tapauksissa (taulukko 7).

Euroopan panoksesta muiden tekijöiden

Vaikka useimmat muut demografiset ja /tai ympäristötekijöistä testattu eivät olleet merkittävästi erilaiset syövän ja kontrolliryhmissä (kuviot 3-7), testasimme niiden mahdollinen osuus suorituskykyä, kun niitä arvioidaan yksittäin. Pidimme kaikki neljä PLA

2 mittauksia malleissa, mutta anna muita ennustajia kohteena mallintaa valintojen huomattavat 0.05.

ennustaminen kaava ja ROC käyrä erottaa CRC terveistä kohteista ensimmäisessä joukko tutkimuksen ovat seuraavat ja kuvassa. 9A, AUC = 0,8162. 95% 1000 bootstrapped näytteen AUC ovat korkeammat kuin 0.7589.The ennustus kaava ja ROC käyrä erottaa kaikista syöpätapauksista alkaen terveille toinen joukko tutkimuksen ovat seuraavat ja kuvassa. 9B, AUC = 0.9728.This suorituskyky validoitiin 1000 bootstrapped näytteissä. 95% 1000 bootstrapped näytteet, AUC ovat korkeammat kuin 0,9625 LC, PC, ja BC yhdistetään vs. toinen joukko tervettä verrokkia.

CRC tapauksissa vs. terveillä koehenkilöillä. A. Kaikki syöpätapausta vs. terveille toisesta. B. Keuhkosyöpä vs. terveillä koehenkilöillä. C. Virtsarakon syöpä vs. terveillä koehenkilöillä. D. Haimasyöpä vs. terveillä koehenkilöillä. E. Kaikki syövät vs. kaikki terveillä henkilöillä, joiden yhteenlaskettu kahdet.

ennustekaavoissa ja ROC käyrät erillisen LC, BC, ja PC tapauksia terveille toinen joukko tutkimus ovat alla ja kuviot. 9C 9E, jossa AUC 0,968, mikä osoittaa korkea herkkyydet ja määritellään, testien. LC vs. terveillä verrokeilla, AUC = 0,9742. 95% 1000 bootstrapped näytteen AUC: t ovat korkeammat kuin 0.9598.For BC verrattuna terveisiin, AUC = 0,9682. 95% 1000 bootstrapped näytteen AUC: t ovat korkeammat kuin 0.9398.For PC verrattuna terveisiin, AUC = 0,9907. 95% 1000 bootstrapped näytteen AUC ovat suuremmat kuin 0,9740.

Lisäksi, koska olemme huomanneet, että PLA

2 toiminta oli olennaisesti eroa näiden kahden terveen kontrollin, yhdistimme kaikki terveet valvontaa ja kaikista syöpätapauksista kummassakin tutkimusten ja syntyy yhdistetty kaava, AUC = 0,9140 (Fig. 9F). 95% 1000 bootstrapped näytteet, AUC ovat korkeammat kuin 0.9018.The herkkyydet ja erityispiirteet on saatu näillä ROC käyrät ylimääräisiä parametreja korotetaan 85% (paitsi CRC vs. terveitä tapauksissa taulukko 7).

keskustelu

tässä työssä olemme esittäneet ensimmäiset mittaukset plasman luonnollinen alatyyppi PLA

2 toimintaa ja niiden suorituskyky mahdollisina merkkiaineita neljälle eri syöpiä, CRC, LC, BC, ja PC. Olemme mitanneet PLA

2 toimintaa yli 20 verinäytettä tai lisäämättä 1,2 mM kalsiumia (luonnollista ionisoituneen kalsiumin pitoisuus veressä) lopulliseen Analyysiseokset ja ei havaittu mitään merkittäviä eroja. Siksi me määrittelemme PLA

2 toiminta saadaan ilman lisäaineita kuin ”luonnollinen” PLA

2 toimintaa. Olemme valinneet optimaaliset olosuhteet mitata kunkin osa-perheen PLA

2 toimintaa. Nämä muutetut ehdot eivät rinnakkain veressä. Näin ollen ei ole yllättävää, että summa alaperheen PLA

2 toiminta on suurempi kuin ”luonnollisen” PLA

2: n aktiivisuutta. On kuitenkin tärkeää huomata, että vaikka muutetut ehdot käytettiin saamiseksi toimintaa subfamilies PLA

2s, lopulliset tulokset ovat peräisin luonnon PLA

2s läsnä verinäytteistä.

Vaikka etuja käyttämällä käteviä serologisia markkereita ovat ilmeisiä, ei ole luotettavaa veren merkkiaineita jokin näistä syövistä on tällä hetkellä saatavilla. CRC, kehittämällä /validointi ei-invasiivisia tai mahdollisimman vähän invasiiviset tunnistusmenetelmiä on tärkeä painopiste alalla. Nykyinen menetelmiä ovat uloste ja verikokeita, kuten ulosteen immunokemiallinen testit (sopii) ja guajakkipohjainen ulosteen piilevän veren testaus (sai). Vaikka spesifisyys on korkea ( 85%), nämä testit on alhainen herkkyys ( 23%) ja peräsuolen adenoomien ja ovat siten todennäköisesti pysty lisäämään varhaisen havaitsemisen CRC [20], [21]. Geneettinen ulostetestit havaita mutaatioita ulosteesta että löytyy CRC.