Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Alpha B-kristalliini (CRYAB) on proteiini, joka toimii ”molekyyli kaitsijana” säilyttämisessä solunsisäinen arkkitehtuurin ja solukalvon. Myös CRYAB on erittäin antiapoptoottisten. Epänormaali CRYAB ilme on ennustetyövälineenä biomarkkeri suusyöpää, kun taas sen genomista muunnelmia ja yhdessä syövän synnyn ole koskaan tutkittu.

Menetelmät /löytäminen

Siksi arveltu, että

CRYAB

yhden emäksen monimuotoisuus saattaa liittyä suullinen syöpäriskiä. Tässä sairaalassa perustuva tutkimus, yhdistys

CRYAB

A-1215G (rs2228387), C-802G (rs14133) ja intron2 (rs2070894) polymorfismit suun kautta syövän Taiwanissa väestön tutkittiin. Kaikkiaan 496 suun syöpäpotilaiden ja 992 iän ja sukupuolen terveisiin genotyypattiin ja analysoitiin. Merkitsevästi eri taajuudella jakautuminen havaittiin

CRYAB

C-802G genotyyppien, mutta ei A-1215G ja intron2 genotyyppien välillä suun syövän ja kontrolliryhmiin.

CRYAB

C-802G G-alleelin siirrettävä suurentunut suusyövästä (

P

= 1.49 x 10

-5). Potilaat kuljettavat CG /GG osoitteessa

CRYAB

C-802G olivat alhaisemmat 5 vuoden pysyvyys ja korkeampi uusiutumisriski kuin CC (

P

0,05).

Päätelmä /merkitys

tulokset ovat ensimmäinen näyttö siitä, että G-alleelin

CRYAB

C-802G korreloi suullista syöpäriski ja tämä polymorfismi voi olla hyödyllinen markkeri suun syövän uusiutumiseen ja selviytymistä ennuste kliinistä käyttöä varten.

Citation: Bau DT, Tsai CW, Lin CC, Tsai rY, Tsai MH (2011) yhdistys

Alpha B-kristalliini

genotyypit Oral Cancer herkkyys, Survival, ja uusiutuminen Taiwanissa. PLoS ONE 6 (9): e16374. doi: 10,1371 /journal.pone.0016374

Editor: Songtao Shi, University of Southern California, Yhdysvallat

vastaanotettu: 18 syyskuu 2010; Hyväksytty: 18 joulukuu 2010; Julkaistu: 07 syyskuu 2011

Copyright: © 2011 Bau ym. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat tutkimusmäärärahat National Science (NSC 98-2320-B-039-010-MY3) (https://nscnt12.nsc.gov.tw/RS09/Modules/Personal/Personal_Researcher_index.aspx). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Suun syöpä, joka on johtava kuolinsyy ja disfigurement ympäri maailmaa [1] – [4], on sijoittunut myös 4

th syövän Taiwanin miesväestöstä [5]. On kiireellisesti kehitettävä rutiini preoperative markkereita säästää potilaille, joilla on huono ennuste leikkauksen jälkeen tai muu käsittely sekä toisaalta, tunnistaa potilaat vaarassa varhain toistumista ja perustella ennalta ehkäisevää kauladissektio ja adjuvanttia samanaikaista sädehoitoa sekä ne, jotka voisivat hyötyä eri hoidoista riippumatta kasvaimen koon tai lavastus. Ne, jotka tunnistetaan suurempi riski suun syövän uusiutumiseen ja /tai etäpesäkkeitä tulisi havaita aikaisemmin ja seurataan useammin nauttia pitempään kehittämisen kanssa hyödyllisiä merkkiaineita ennustetta ennustamiseen.

Alpha B-kristalliini (CRYAB ) kuuluu pieni lämpöshokkiproteiini (sHSP) perheen ja molekyyli- kaperonin ilmaistaan ​​eri kudoksissa [6], [7]. Viimeaikaiset todisteet on vahvistettu, että CRYAB esittelee paitsi silmä, mutta myös sydän, iho, aivot, selkäydin, ja keuhkojen kudoksia [6], [8]. Nisäkkäillä on kolme luokkaa kristalliinien: alfa, beeta ja gamma, kukin osaltaan yhtä kokonaismassaan linssin. Vuodesta proteomiikka tai proteiinin tasolla tutkimuksissa on hiljattain tunnustettu, että CRYAB voi olla rooli syövän kehittymisessä. Vuonna 2005 on raportoitu, että

CRYAB

oli alassäädetty mRNA tasolla suun syöpäpotilaiden verrattuna normaaliin suun limakalvojen [9]. Toisin kuin erittäin ilmentymistä normaalissa suun limakalvojen, potilailla, joilla on negatiivinen tai alempi CRYAB havaittu niiden tuumorikohdat oli parempi taudista vapaan eloonjäämisaste kuin potilaat, joiden kasvaimet värjätään voimakkaasti. Päinvastoin todettiin, että siitä proteomiikan seulonta Taiwanissa, CRYAB oli merkitsevästi säädellään ylöspäin ensisijaisen kudoksen suun kautta syöpäpotilaiden [10]. Vuonna 2010, samanlaisia ​​tuloksia raportoitu hiirissä oraalisen syövän mallin kautta samanaikaisesti 8 viikon hoidon 4-NQO (200 ug /ml) ja arekoliini (500 ug /ml), [11]. Huolimatta erimielisyyksistä herättämät eri etiikan ja väestön tutkittu, genomiseen asemaan

CRYAB

ja välistä yhteyttä sen genotyypin ja kliiniseen tulokseen ovat suurelta osin tuntemattomia.

Jotta ymmärtää genomiseen roolin

CRYAB

suun syöpä, olemme valinneet kolme yhden nukleotidin polymorfismien (SNP: t) on

CRYAB

, A-1215G (rs2228387), C-802G (rs14133), intronin 2 (rs2070894), ja tutkittiin niiden genotyypin jakelemiseksi suuri taiwanilainen suusyöpä väestöstä. Lisäksi kaksi kliinisiä tuloksia edistävät korkein kuolleisuus suusyövän, etäpesäke ja toistuminen, analysoitiin niiden yhdistysten

CRYAB

genotyyppejä.

Tulokset

kliiniset ominaisuudet suullista syöpäpotilaiden ja ohjaimet on esitetty taulukossa 1. ei ollut merkittävää eroa molempien ryhmien iän ja sukupuolen, kun potilaat ovat paljon korkeammat alttiina ympäristön riskialtista tekijät suusyöpää Taiwanissa, tupakointi, alkoholin juominen ja betel mälli pureskelu tottumukset (taulukko 1). Taajuudet genotyyppien ja alleelien

CRYAB

A-1215G, C-802G, ja intronin 2 osallistujille on esitetty taulukossa 2. genotyyppi jakelu eri geneettisten polymorfismien

CRYAB

C-802G eroaa huomattavasti toisistaan ​​suusyövän ja kontrolliryhmissä (

P

0,05), kun taas A-1215G tai intronin 2 eivät olleet merkittäviä (

P

0,05) ( Taulukko 2). Myös alleelin jakaumat

CRYAB

C-802G (

P

= 1.49 * 10

-5, OR = 1,51, 95% CI = 1,25-1,83), ei niitä A-1215G (

P

= 0,8593, OR = 0,91, 95% CI = 0,31-2,62) tai intron2 (

P

= 0,1366, OR = 1,16, 95% CI = 0.95- 1,41), on todettu liittyvän alttiuteen suun syöpä (taulukko 2). Yhteenvetona voidaan todeta, G-alleeli GG tai CG genotyyppi

CRYAB

C-802G liittyy suun kautta syöpäriski ja ne voivat olla biomarkkereita suullinen syövän havaitsemiseen. Edustavien PCR-pohjainen rajoitusta analyysit

CRYAB

C-802G polymorfismien on esitetty kuviossa 1.

M: 100 bp: n DNA koko markkeri, G /G: entsyymi sulamatonta homotsygootti, C /G: heterotsygootti, ja C /C: entsyymi sulavaa homotsygoottisia.

arvioimiseksi ennustetekijöiden arvo

CRYAB

genotyyppejä, välisiä suhteita tautivapaan elinajan , toistuminen, etäpesäke ja

CRYAB

C-802G genotyypit analysoitiin. Ensinnäkin, suullinen syöpäpotilaille kuljettaa

CRYAB

C-802G CG oli merkittävä suuntaus vähentynyt tautivapaan elinajan, ja potilaat kuljettaa

CRYAB

C-802G GG oli lyhin sairaus- elinaika aikana (kuva 2). Lyhyen taudista vapaan voi heijastaa pääasiassa paikallisen uusiutumisen. Yli 80% (30 37) potilaista kuljettaa

CRYAB

C-802G GG oli solmukohtien toistumisen ilman kehittynyt N vaiheessa (N0-1) ensimmäisessä diagnoosi. Mielenkiintoista, potilaat olisivat toistuvia ja korkea toisen primaarikasvaimen hinnat seuraavien viiden vuoden aikana. Toiseksi, verrattuna kanssa CC-genotyyppi, potilaat kuljettaa

CRYAB

C-802G CG tai GG-genotyyppi oli suurempi toistumisen määrä seuraavien viiden vuoden aikana (

P

= 0,228, OR = 2,08 , 95% luottamusväli = 1,11-3,92), mutta ei korkeampi etäpesäke määrä (taulukko 3).

tilastollinen analyysi suoritettiin log-rank-testi.

keskustelu

tutkimuksen tavoitteena oli selvittää yhdistyksen

CRYAB

genotyypit ja clinicopathopogical vaihtelut Taiwan suun syöpäpotilailla. Äskettäin on tunnustettu, että CRYAB proteiini voi olla rooli suullinen syövän kehittymisen. Aiemmissa kirjallisuudessa on raportoitu, että CRYAB oli merkittävästi ilmaistaan ​​ensisijaisen kudoksen suun syöpäpotilaiden Taiwan [10]. Vuonna 2010, on kielen syövän hiirimallissa suoritetaan samanaikaisesti 8 viikon hoidon 4-NQO (200 ug /ml) ja arekoliini (500 ug /ml) ja peruuttaa seuraavissa 20 viikkoa, solut tuumorikohdat oli korkeammat ilmaus CRYAB kuin vastine solujen sham-käsiteltyihin hiiriin [11]. Joukossa oli kuitenkin myös joitakin havaintoja haastavampaa ylössäätöä yhdistys [9], [12]. Tämä voi johtua, että eri populaatioissa eri etiikan, geneettinen tausta, kulttuureissa, ja ympäristö altistumisen tutkittiin. Näkökulmista teissolulinjasta perustuvat tutkimukset, osoitettiin, että yliekspressio CRYAB transformoiduissa ikuisti ihmisen maitorauhasen epiteelisolujen osoittanut neoplastisia ominaisuuksia ja luminaalisen kasvua ja nämä muutokset estetty, kun CRYAB ilmentyminen hiljennettiin käyttäen RNA-interferenssi [13]. N yli-ilmentyminen CRYAB ihmisen maitorauhasen epiteelisoluissa myös muodostunut invasiivisia nisäkarsinoomia nude-hiirissä, indusoi kasvutekijän ja ankkurointi riippumatonta kasvua, solujen vaeltamiseen ja invaasiota, ja aktivoitu mitogeeniaktivoidut proteiinikinaasi /ekstrasellulaarisen signaalin säädelty kinaasi (MEK /ERK ) polku, viittaa siihen, että CRYAB voitaisiin pitää onkoproteiini [14]. Kuitenkaan ei ole mitään tutkimusta suoritetaan DNA-tasolla tutkimaan tärkeää roolia

CRYAB

karsinogeneesissä.

Perustuen edelliseen ero ilmaisun todisteita, olimme hyvin kiinnostunut ja valitsi kolme SNP

CRYAB

, kaksi promoottorialue (A-1215G ja C-802G) ja yksi introni 2 (intron2), tutkia niiden yhteenliittymien suun kautta syöpäriski ja ennusteeseen. Huomasimme, että

CRYAB

C-802G polymorfismi, ei A-1215G tai intron2, liittyi kohonnut suusyövän (taulukko 2), ja paikallinen toistumisen määrä (taulukko 3). Myös suullinen syöpäpotilaita kuljettavat GG tai CG polymorfisessa oli alhaisemmat 5 vuoden pysyvyys kuin kuljettavat homologinen CC (kuva 2). Mielenkiintoista, potilaat kuljettaa GG osoitteessa

CRYAB

C-802G kirjattiin saada paljon toistuvia ja toinen ensisijainen hinnat. Tämä voi osoittaa, että

CRYAB

C-802G voisi olla predicator suun kautta syövän etenemisen suuntaan. Mahdollisesti geneettistä polymorfismia vaikuttaa suoraan ero kuviot CRYAB proteiinia, on ekspressiota ja /tai toiminnallisia tasoja, ja epäsuorasti epätasapaino normaaliin toimintaan muiden CRYAB liittyvien geenien ja proteiinien, jotka voivat johtaa siihen, että suun kautta karsinogeneesissä. Samaan aikaan, muuttaminen CRYAB proteiinin ilmentymisen soluväliaineen voi aiheuttaa hienovaraisia ​​muutoksia mikroympäristön lähellä ensisijainen suun kasvain, ja toistumisen, mutta ei etäpesäkkeitä. Tätä voidaan perustella roolia CRYAB tyrosiinikinaasiperheen signalointi, jotka voitaisiin helposti muuttaa syöpäsoluissa. Pelkistetty ilmaus CRYAB on ensin raportoitu liittyvän negatiivisen ennusteen vuonna 2003 [15].

Noin 10% alkuvaiheen pään ja kaulan okasolusyöpä potilaille kehittyy Paikallista uusiutumisen ja 15%: sta 25 % kehittää toinen ensisijainen kasvaimia 5 vuoden kuluessa alkudiagnoosin [16], [17]. Koska diagnostiset ja hoitomenetelmät edelleen kehittää, kykyä ennustaa toisen primäärikasvain /toistumisen alkuvaiheen suun syöpäpotilaille helpottaisi tehostetun valvonnan tai kohdennettuja toimenpiteitä korkean riskin potilailla ja siten vähentää kuolleisuutta ja sairastuvuutta. Tässä tutkimuksessa potilaat kuljettaa

CRYAB

C-802G CG tai GG genotyypin havaittiin korkeampi toistumisen määrä seuraavien viiden vuoden aikana mutta ei korkeampi etäpesäke määrä (taulukko 3).

esiintyminen toisen ensisijaisen kasvaimet voivat johtua hienovaraisia ​​muutoksia ja mikroympäristön, joka on kertynyt saavuttaa kynnyksen kasvaimen potilailla riskialtista genotyypit, kuten GG osoitteessa

CRYAB

C-802G. Toiminnallinen tutkimus tämän SNP ja miten CRYAB proteiini vuorovaikutuksessa proteiinien soluväliaineen suullinen syövän synnyn myös lisätutkimuksia. Tulevaisuudessa kollektiivinen näyttöä suurempia ja eri ikäryhmien käyttämällä tätä SNP voi auttaa suusyövän pysähdyspaikan, lopputulos suunta ennuste, ja tehokkaampi ja integroiva strategiaa.

Ensinnäkin on todettu, että SNP on promoottorialueen

CRYAB,

C-802G, liittyy suusyövän alttius, toistuminen, ja 5-vuoden tautivapaan elinajan, mutta ei etäpesäke. Koska huono paikallinen alueiden ohjaus ja helposti toistuminen ovat tärkeimmät syyt hoidon epäonnistumisten suun syövän hoidossa, tulokset Tämän tutkimuksen voi tarjota enemmän ennakoivaa ohjausta tietoa paitsi ehkäisyyn, mutta niiden hoito, hoito ja seuranta niille potilaille suurempi riski syövän uusiutumiseen ja alemman 5 vuoden pysyvyys.

Materiaalit ja menetelmät

Tutkimuskanta ja näytteiden keräämistä

neljä sataa ja yhdeksänkymmentäkuusi syöpäpotilaiden diagnosoitu suullinen syöpä rekrytoitiin vuoden poliklinikoilla yleisen kirurgian välillä 2005-2008 on China Medical University Hospital, Taichung, Taiwan, Kiina. Kliiniset ominaisuudet potilaiden sisällettävä histologiset tiedot olivat kaikki luokitellaan ja määritellään asiantuntija kirurgit. Kaikki potilaat vapaaehtoisesti osallistuivat valmistunut itsehallinnollinen kyselylomakkeeseen ja toimitti ääreisveren näytteistä. Double määrä ei-syöpä terveillä vapaaehtoisilla verrokkeina valittiin sovittamalla iän, sukupuolen ja jotkut aneet jälkeen alkuperäisen satunnaisotannalla terveystarkastuskyselyä kohortin sairaalaan. Poissulkukriteerit kontrolliryhmän mukana edellisessä maligniteetti, etäpesäkkeitä syöpä muista tai alkuperältään tuntematonta, ja kaikki familiaalinen tai geneettisiä sairauksia. Molemmat ryhmät viimeisteli lyhyen kyselylomakkeen, jossa joitakin nautinnoista ja ne nauhoitettiin. Tutkimuksemme hyväksyi Institutional Review Board of China Medical University Hospital ja kirjallinen-suostumus saatiin kaikilta osapuolilta.

genotyypin määritysten

Perimän DNA suun syöpä ja terveystarkastus koehenkilöiden valmistettu ääreisveren leukosyytit käyttäen QIAamp veri Mini Kit (Blossom, Taipei, Taiwan) ja jatkokäsitellään mukaan aikaisempien tutkimusten [18] – [24]. Lyhyesti, käytettiin seuraavia alukkeita ja

CRYAB

A-1215G (rs2228387): 5′-ACCTGTTGGAGTCTGATCTT-3 ’ja 5′-ATGCACCTCAATCACATCTC-3’; ja

CRYAB

C-802G (rs14133): 5′-TTGACCATCACTGCTCTCTT-3 ’ja 5′-TTGGCAATGTGACACATACC-3’; ja

CRYAB

intronin 2 (rs2070894): 5′-GTCTAGAAGACTAAGTTAGG-3 ’ja 5′-AGAGAAGTCACAACTCAAGT-3’; Seuraavat sykliolosuhteita suoritettiin yksi sykli 94 ° C: ssa 5 min; 35 sykliä, joissa 94 ° C 30 s, 55 ° C: ssa 30 s, ja 72 ° C 30 s; ja lopullinen pidennys 72 ° C: ssa 10 min. PCR-tuotteet tutkittiin pilkkomisen jälkeen

Fau I

,

Fat I

, ja

DPN I

, restriktioentsyymejä A-1215G (leikattu 212 bp Tyyppi osaksi 67 + 145 ep G tyyppi), C-802G (leikattu 363 emäsparin G samantyyppiset 85 + 278 emäsparia C-tyypin), ja intronin 2 (leikattu 363 emäsparin t samantyyppiset 74 + 339 emäsparia C-tyyppi), tässä järjestyksessä.

Tilastolliset analyysit

tutkimuksessamme

o

nly ne haun kaikkien SNP data (tapaus /kontrolli = 496/992) valittiin lopulliseen analysointi. Sen varmistamiseksi, että valvonta käytettiin edustava väestön ja voitaisiin sulkea pois mahdollisuus genotyypityksen virhe, poikkeama genotyypin taajuudet

CRYAB

SNP verrokeilla niiltä odotetaan alle Hardy-Weinberg tasapaino oli arvioitiin käyttämällä hyvyys fit testi. Pearsonin kaksipuolinen Chi-square test tai Fisherin testiä (kun odotettu määrä missään solussa oli alle viisi) käytettiin vertaamaan jakelun

CRYAB

genotyypit tapausten ja kontrollien välillä.

Päätulosmuuttuja oli tautivapaan elinajan. Päätepisteet mukana paikallinen syövän uusiutumisen ja etäpesäke. Seuranta oli saatavilla kaikille potilaille 5 vuoden ajan pisteen. Taudista vapaa elinaika laskettiin hoidon päivämäärä saakka toistuminen, määritettiin sairauden toistuminen samassa paikassa tai havaitsemista etäpesäkkeiden, mukaan lukien uusiutumisen niskaan imusolmukkeisiin. Genotyypit koodattiin olettaen alleeli annosvaikutuskuvaajia (CC villityypin = 0, CG heterotsygoottinen kantavan mutatoitunut alleeli = 1, GG homotsygoottinen kantavan mutatoitunut alleeli = 2). Tautivapaan elinajan käyrät tuottamat Kaplan-Meier menetelmällä ja tarkistaa log-rank-testi. Merkitys asetettiin arvoon

P

0,05.