Krooninen sairaus

tiivistelmä

MikroRNA (miRNA) ovat tärkeässä rooli syövän synnyssä säätelemällä niiden kohdegeenien. miRNA liittyvät yhden nukleotidin polymorfismien (miR-SNP) voi vaikuttaa miRNA biogeneesiä ja kohde sivustoja ja voi muuttaa microRNA ilme ja toiminnot. Tutkimme 11 miR-SNP, kuten 5 microRNA geenejä, 3 microRNA sitoutumiskohtiin ja 3 microRNA-koneet osat, ja arvioitiin aika uusiutumiseen (TTR) mukaan miR-SNP genotyyppien 175 kirurgisesti resektoitiin ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) potilailla. Merkittäviä eroja TTR havaittiin mukaan

KRT81

rs3660 (mediaani TTR: 20,3 kuukautta varten CC genotyyppi vs. 86,8 kuukautta varten CG tai GG genotyypin; P = 0,003) ja

XPO5

rs11077 ( mediaani TTR 24,7 kuukautta AA genotyyppi vs. 73,1 kuukautta AC tai CC genotyyppejä; P = 0,029). Lisäksi kun potilaat jaettiin mukaan vaiheessa nämä erot säilyivät vaiheen I potilailla (p = 0,002 varten

KRT81

rs3660; P 0,001

XPO5

rs11077). Kun potilaat jaettiin alaryhmiin mukaan histologia, vaikutus

KRT81

rs3660 genotyypin TTR oli merkittävä potilailla, joilla levyepiteelisyövän (P = 0,004), mutta ei niitä, joilla adenokarsinooma. Monimuuttujakalibrointiin analyysit,

KRT81

rs3660 CC-genotyyppi (OR = 1,8; p = 0,023) ja

XPO5

rs11077 AA genotyyppi (OR = 1,77; p = 0,026) nousi riippumattomia muuttujia vaikuttaminen TTR. Immunohistokemiallinen analyysit 80 keuhkojen yksilöt osoittivat, että 95% okasolusyöpää olivat positiivisia KRT81, verrattuna vain 19%: adenokarsinoomat (P 0,0001). Lopuksi miR-SNP: t ovat uusi luokka SNP, joka voi lisätä hyödyllistä ennustetekijöitä tietoa kliininen tulos toistoleikattiin NSCLC potilaiden ja voi olla mahdollinen keskeinen väline valittaessa korkean riskin vaiheen I potilailla. Lisäksi, KRT81 on noussut lupaavaksi immunohistokemiallisella markkerin tunnistamiseksi okasolusyöpä keuhkosyöpä.

Citation: Campayo M, Navarro A, Viñolas N, Tejero R, Muñoz C, Diaz T, et ai. (2011) kaksoisrooli for KRT81 A miR-SNP Associated kanssa uusiutuminen Non-Small-Cell Lung Cancer ja Novel Marker on Squamous keuhkosyöpä. PLoS ONE 6 (7): e22509. doi: 10,1371 /journal.pone.0022509

Editor: Sumitra Deb, Virginia Commonwealth University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 19 huhtikuu 2011; Hyväksytty: 22 Kesäkuu 2011; Julkaistu: 25 heinäkuu 2011

Copyright: © 2011 Campayo et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat avustuksia Hospital Clinic de Barcelona (Premi Fi de Residència Emili Letang) ja Fondo de Investigaciones Sanitarias de la Seguridad Social FIS-PI09 /00547. Tania Diaz on FI mies tukee AGAUR, Katalonian ja Fondo Social Europeo. Kiima Tejero on APIF kaveri yliopiston Barcelona. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Keuhkosyöpä on ensimmäinen syöpäkuolemien syy maailmanlaajuisesti [1]. Noin 85% potilaista on ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) ja vähemmän kuin 30% on diagnosoitu varhaisvaiheen sairauden. Tärkein hoito alkuvaiheen tauti on leikkaus, mutta myös silloin, kun täydellinen kirurginen resektio on mahdollista, 20-75% NSCLC potilaista uusiutumisen [2]. Koska tämä korkea uusiutumisen, biomarkkereiden ennustaa taudin etenemisen riskiä tarvitaan, erityisesti vaiheessa I, jossa adjuvanttihoitoa ei rutiininomaisesti, mutta joilla se voi olla tehokas eräillä potilasalaryhmissä [3].

MikroRNA (miRNA) ovat lyhyitä ei-koodaavat RNA: t, jotka säätelevät transkription jälkeinen geenin ilmentymisen sitoutumalla ensisijaisesti 3’untranslated alue (UTR) niiden kohde-mRNA ja tukahduttaa sen käännöksen. Useat proteiinit ovat aktiivisia biogeneesille miRNA. Lyhyesti, miRNA muunnetaan RNA-polymeraasi II pitkiä ensisijainen selostukset (PRI-miRNA) ja käsitellään tumassa jonka RNaasi III Drosha ennalta miRNA (70-100 nukleotidia); pre-miRNA kuljetetaan sytoplasmaan, jonka XPO5, jossa RNaasi III Dicer muodostaa duplex-molekyyli 21-25 nukleotidin pituisia. Kautta yhdessä monimutkainen RNA aiheuttama hiljentäminen kompleksi (RISC), yksi näistä 2 ketjujen (kypsä miRNA) ohjaa RISC kohde mRNA [4], [5]. miRNA tärkeitä rooleja sääntelyä niin ratkaisevan prosessien kehittäminen, solujen lisääntymistä, erilaistumista ja apoptoosia. Kasvava näyttöä siitä, että miRNA ovat poikkeavasti ilmaistu ihmisen syövissä, mukaan lukien NSCLC [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], ja ne ovat olleet liittyy etiologian ja ennusteen monien kasvainten [14]. Riippuen niiden kohdegeenien, miRNA voivat toimia joko onkogeenien tai tuumorisuppressorigeeneille [15].

Various mekanismit voivat selittää vapauttamisen miRNA havaittu syöpä, mukaan lukien genominen muutokset (poistot, monistuksia, translokaatiot), epigeneettiset muutoksia, mutaatioita /polymorfismien, transkription sääntelyn purkaminen, ja muutokset mirna biogeneesissä koneet [14], [16]. Yhden nukleotidin polymorfismit (SNP: t), jotka voivat vaikuttaa miRNA toimintoja, jotka tunnetaan miR-SNP: itä, löytyy miRNA geenien in miRNA sitoutumiskohtia (3 ’UTR kohdegeenin) tai komponentit miRNA biogeneesiä koneet [17] . miR-SNP: t voivat vaikuttaa miRNA ekspressiotasoja eri tavoin, aiheuttaen tai voitto miRNA toiminto [18]. SNP miRNA geenit voivat vaikuttaa pri-miRNA, pre-miRNA tai kypsä miRNA järjestyksessä ja saattavat moduloida miRNA käsittelyä, muuttaa kypsä miRNA tasoja tai muuttaa miRNA-mRNA vuorovaikutusta [19], [20]; SNP: t vaikuttavat proteiinien ilmentymisen mukana miRNA biogeneesissä voi muuttaa miRNAome solussa [21]; ja lopuksi, SNP miRNA kohdekohtia, jotka ovat useammin ja tarkempia ihmisen perimässä, voivat häiritä tai muuttaa miRNA-välitteinen tukahduttaminen kohdegeenin [22].

Tämä uusi luokka SNP avautuu uuden alueen tutkimusta syövän biologian ja kliinisen onkologian, etenkin tutkimuksessa sairauden etenemisen potilaan ennusteen ja hoidon tehoa. Viime aikoina useat tutkimukset ovat osoittaneet, että SNP miRNA verkoissa voi vaikuttaa sekä riskiä sairastua eri syöpiä [20] ja myös ennustetta monien kasvainten [23], [24], [25], [26].

Tässä tutkimuksessa olemme arvioineet 11 SNP (viisi miRNA geenejä, kolme miRNA sitoutumiskohtia, ja kolme miRNA-jalostus geenien) 175 kirurgisesti toistoleikattiin pienisoluista keuhkosyöpää ja korreloivat havainnoistamme ajan uusiutumiseen (TTR) ja yleinen (OS). Lisäksi jotta voidaan tutkia mahdollisia eroja ilmaisun mukaan histologia, tutkimme Immunovärjäyksen rakenteessa KRT81 77 keuhkosyövän yksilöitä ja kolme normaali keuhko valvontaa.

Materiaalit ja menetelmät

Tutkimuskanta ja etiikka lausunto

Maaliskuun 1996 ja joulukuun 2009 175 NSCLC potilaalle tehtiin täydellinen kirurginen resektio meidän laitokselle. Kaikki potilaat olivat patologisesti vahvistanut vaiheen I-III sairaus. Hyväksyntä tutkimuksessa saatiin Institutional Review Board of sairaalan Clinic, Barcelona, ​​Espanja. Kirjallinen suostumus saatiin kunkin osallistujan mukaisesti Helsingin julistuksen.

valinta miR-SNP

Valitsimme 11 SNP geenien miRNA säätelyreittejä: SNP miRNA geeneissä ; SNP miRNA sitoutumiskohtia; ja SNP miRNA-jalostus geenejä. Kymmenen SNP valittiin mukaan seuraavat vaatimukset: ensinnäkin määrätietoinen alleelin taajuus Euroopan väestön ja saatavuus National Center for Biotechnology Information (NCBI) SNP tietokanta; Toiseksi vähäinen genotyyppi taajuuden Euroopan väestön ≥ 0,05; ja lopuksi, joko tiedossa oleville kanssa ero alttiutta syövän kehitykseen tai differentiaalikaavojen kiinteissä kasvaimissa. Sillä SNP miRNA sitoutumiskohtia, valitsimme kolme SNP poikkeavaan alleelifrekvenssi ihmisen kasvaimissa. Lisäksi yksi SNP – in

MIR194-2

– oli nimenomaan valittiin, koska se oli osoitettu ilmentyä erilailla keuhkosyövän [11]. Taulukossa 1 esitetään yhteenveto perustelut SNP valintaa.

DNA eristys, alukkeita, koettimia ja SNP-analyysi

DNA saatiin parafinoidut kasvainkudoksen käyttäen kaupallista DNeasy kudoksen Kit ( Qiagen, Valencia, CA) seuraten valmistajan protokollaa. Mitata DNA määrä, joka on NanoDrop ND-1000 spektrofotometrillä (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA) käytettiin. Alukkeet ja koettimet olivat kaupallisesti saatavilla (TaqMan SNP-genotyypin määritykset, Applied Biosystems, Foster City, CA). SNP-analyysi suoritettiin alleeliset syrjintää ABI PRISM 7500 Sequence tunnistusjärjestelmä (Applied Biosystems).

immunohistokemia

Immunohistokemia suoritettiin formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotettujen kudosleikkeiden 77 keuhkosyövän ja 3 normaali keuhko ohjausobjektit patologian yksikön klinikka Barcelona tarkistuksen jälkeen rintakehä patologi. Viisi-pm paksun poikittaisleikkeet formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut kudos sarjoittain leikattiin ja kiinnitettiin Dako silanoitua Kalvot (S · 3003; Dako, Glostrup, Tanska). Sillä antigeeni haku, leikkeet manuaalisesti upotettiin Target Retrieval ratkaisu, korkea pH (Dako) ja kuumennetaan vesihauteessa 95-99 ° C: ssa 20 minuutin ajan. Endogeeninen peroksidaasiaktiivisuus pysäytettiin upottamalla Dako Real Peroxidase-Blocking liuokseen 10 min ajan. Kudoksen leikkeitä inkuboitiin ensisijaisen vasta-aineen KRT81 (laimennus 1:50; klooni sc-100929; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Immunoperoksidaasivärjäystä suoritettiin käyttäen Advance järjestelmä /HRP (Dako) ja Liquid DAB + (Dako). Lopuksi leikkeet värjättiin hematoksyliinillä. Kaikki objektilasit sokeasti tekee samat kaksi patologit käyttäen 3-pisteytysjärjestelmä. Pisteytys oli seuraava: 0, 5% tuumorisolujen värjäystä; 1, 5%: sta 50% tuumorisolujen värjäystä; 2, 50% kasvainsolujen värjäytyminen. Uninterpretable tulokset eliminoitiin lähemmän tarkastelun. Kotelot sijoitettiin 1 tai 2 katsottiin positiivisiksi, ja tapaukset sai 0 katsottiin negatiiviseksi. Vain sytoplasminen positiivisuus arvioitiin. Kudosleikkeiden normaalista keuhkojen käytettiin positiivisena kontrollina, kun taas negatiiviset kontrollit saatiin inkuboimalla kohdat ilman primaarista vasta-ainetta.

Tilastollinen

ensisijaisena tavoitteena oli selvittää TTR. Toissijainen tavoite oli OS. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen PAS W tilastot 18 (SPSS Inc., Chicago, IL). TTR laskettiin aika leikkaushoitoa päivämäärän uusiutumisen tai Viimeisimmässä seurannassa. OS laskettiin ajan kirurginen hoito kuolinpäivästä tai Viimeisimmässä seurannassa. Leikkauksen jälkeen potilaat ilman kasvaimen etenemistä seurattiin 3 kuukauden välein 2 vuoden ajan, sitten 6 kuukauden välein, kunnes 5 vuotta tämän leikkauksen, ja sitten vuosittain. Log-rank testi ja Kaplan-Meier tontteja käytettiin arvioimaan yhdistyksen TTR ja käyttöjärjestelmän kanssa kunkin SNP ja kliinisen muuttujia. COX monimuuttujamenetelmin (syötä menetelmää) käytettiin laskettaessa itsenäistä kertoimet suhdeluvut TTR ja käyttöjärjestelmän. Vuonna immunohistokemiallinen analyysit, taajuudet verrattiin että Fisherin testiä. Merkitsevyystasoksi asetettiin ≤0.05.

Tulokset

Potilastiedot

Analyysin mukana 175 potilasta, 154 (88%), joista oli miehiä. Mediaani-ikä oli 65 vuotta (vaihteluväli, 35-85). Kaksikymmentäneljä (13,7%) potilaista oli Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) suorituskyky (PS) 0 ja 149 (85,2%) potilaista oli PS 1. Yhdeksänkymmentä kahdeksan (56%) potilaista oli vaiheen I sairaus. Kahdeksankymmentä (45,7%) potilaista oli adenokarsinooma ja 84 (48%) oli okasolusyöpä. Sata viisikymmentä kahdeksan (90,3%) potilaista oli aktiivinen tai entisiä tupakoitsijoita. Sata ja kolmekymmentä kaksi (75,4%) potilaista koki lobectomy tai bilobectomy. Yhdeksän (5,1%) potilaista oli saanut ennen leikkausta kemoterapiaa tai sädehoitoa varten kokoisen vaiheessa IIIA tauti. Kuusitoista potilasta (9,1%) sai adjuvanttihoitoa (13 vaiheessa II tai III sairaus ja 3 vaiheen I taudin T 4 cm). Keskimääräinen seuranta-aika oli 35 kuukautta (vaihteluväli 2-160). Jälkeen seuranta 160 kuukautta, taudin uusiutumisen oli tapahtunut 75 (42,9%) potilaista (taulukko 2).

TTR, käyttöjärjestelmä ja miR-SNP:

Overall mediaani TTR oli 39,03 kuukautta (95% CI, 3,9-74,1), ja mediaani oli 90,6 kuukautta (95% CI, 47,4-133,7). Vuonna univariate analyysien mukaan lukien vain kliinisiä piirteitä, vaihe liittyi TTR (P = 0,008) ja ikään liittyi OS (P = 0,014). Ei-merkitsevä suuntausta yhdistyksen välillä sukupuolen ja TTR havaittiin myös (P = 0,081). Taulukossa 3 esitetään genotyypin taajuudet kaikille 11 miR-SNP analysoitiin, niin tässä tutkimuksessa ja raportoitu NCBI SNP tietokanta (dbSNP) Euroopan väestöstä. Merkittäviä eroja TTR havaittiin mukaan

KRT81

rs3660 genotyyppi (P = 0,008; Kuva S1). Koska samankaltainen jakelun TTR potilaille kanssa CG ja GG genotyyppiä, nämä kaksi ryhmää yhdistettiin jatkotutkimuksiin. Mediaani TTR 45 potilaalla (25,9%) ja CC-genotyyppi oli 20,3 kuukautta vs. 86,8 kuukautta potilailla, joilla on CG tai GG-genotyyppi (P = 0,003; Kuva 1A). Niistä 98 potilasta, joilla on vaiheen I tauti, mediaani TTR 23,9 kuukautta 25 potilasta (25,5%) kanssa CC genotyyppi vs. 100,2 kuukautta potilailla, joilla on CG tai GG-genotyyppi (P = 0,002; kuvio 1 B). Havaitsimme myös ei-merkitsevä suuntaus ero TTR mukaan

XPO5

rs11077 genotyyppi (P = 0,077; Kuva S2). Koska samankaltainen jakelun TTR potilaille AC ja CC genotyyppejä, nämä kaksi ryhmää yhdistettiin jatkotutkimuksiin. Merkittävästi lyhyempi TTR havaittiin potilailla, joilla

XPO5

rs11077 AA genotyyppi; mediaani TTR oli 24,7 kuukautta potilailla, joilla on AA genotyyppi, vs. 73,1 kuukautta niille, joilla AC tai CC-genotyyppi (P = 0,029; kuvio 2A). Niistä 97 potilasta, joilla on vaiheen I tauti, mediaani TTR oli 24,13 kuukautta 33 potilasta (34%) ja AA genotyyppi mutta ei saavutettu niille, joilla AC tai CC-genotyyppi (P 0,001; kuvio 2B). Mikään muu eroja TTR havaittiin minkä tahansa muiden genotyyppien analysoitiin. Ei merkittäviä eroja TTR havaittiin vaiheen II-III potilailla minkä tahansa SNP analysoitiin.

1A: kaikilla potilailla analysoitiin. IB: potilaat, joilla on vaiheen I tauti.

1A: kaikilla potilailla analysoitiin. IB: potilailla, joilla on vaiheen I tauti.

mediaani ei saavutettu 49 potilailla, joilla on

MIR423

rs6505162 AA genotyyppi, verrattuna 61,6 kuukautta 42 potilailla, joilla on CC genotyyppi ja 90,5 kuukautta niille AC genotyyppi (P = 0,043; Kuva S3). Mikään muu eroja OS havaittiin mukaan jollekin muulle genotyyppien analysoitu.

Monimuuttujatestaus analysoi

Kaikki muuttujat, joiden univariate TTR log-rank P≤0.1 (sukupuoli, vaihe, tyyppisestä kirurgisesta

KRT81

rs3660 genotyypin ja

XPO5

rs11077 genotyyppi) sisällytettiin Cox monimuuttujamenetelmin TTR. Miespuoliseen (riskisuhde [OR], 3,73; 95% CI, 1,4-9,9; p = 0,008), vaiheen I tauti (OR 0,34; 95% CI, +0,18-,65; P = 0,001),

KRT81

rs3660 CC-genotyyppi (OR, 1,8; 95% CI, 1,08-2,99; p = 0,023) ja

XPO5

rs11077 AA genotyyppi (OR, 1,77; 95% CI, 1,07-2,91; p = 0,026) tullut itsenäisiä muuttujia TTR (taulukko 4). Kaikki muuttujat, joiden univariate OS log-rank P≤0.1 (sukupuoli, ikä ja

MIR423

rs6505162 genotyyppi) ja sairauden vaihe sisällytettiin Cox monimuuttujamenetelmin OS. Ikä ≤65 (OR, 0,48; 95% CI, ,25-+0,95; P = 0,036) ja vaiheen I tauti (OR = 0,31, 95% CI 0,14-0,67; p = 0,003) olivat riippumattomia muuttujia OS.

lisäanalyysit KRT81

Koska merkittäviä eroja TTR havaittiin mukaan

KRT81

rs3660 genotyyppi, me tutki vielä vaikutus tämän genotyypin alaryhmiä sairastavien potilaiden adenokarsinooma ja okasolusyöpä. Niistä 83 potilaalla on okasolusyöpä, TTR oli 19,3 kuukautta 24 potilasta joilla oli CC-genotyyppi ja 121 kuukautta 59 potilaalla on CG tai GG-genotyyppi (P = 0,004; Kuva 3A). Sen sijaan, ei havaittu merkittävää eroa mukaisesti

KRT81

rs3660 genotyypin välillä 80 potilasta, joilla adenokarsinooma (P = 0,375; kuvio 3B). Sitten tutkitaan mahdollisuutta samanlaisen ero vaikutus muiden kymmenen genotyyppien mutta ei löytänyt eroja TTR välillä levyepiteelisyöpä ja adenokarsinooma mukaan genotyypin.

V: TTR mukaan

KRT81

rs3660 genotyyppi 83 84 okasolusyöpä potilaita; yksi potilas ei genotyyppi. B: TTR mukaan

KRT81

rs3660 genotyypin 80 adenokarsinoomaa potilailla. C: Okasolusyöpä tapauksessa osoittaa diffuusia sytoplasmista KRT81 värjäytymistä. D: Negatiivinen kontrolli. E: Negatiivinen värjäytymisen KRT81 käytettäessä adenokarsinooma tapauksessa. F: immunohistokemia normaalissa keuhkokudoksessa osassa. KRT81 sytoplasminen positiivisuuden keuhkoputkien epiteelin käytettiin positiivisena kontrollina.

Jotta edelleen tutustua merkitty ennustetekijöitä arvo

KRT81

rs3660 genotyypin okasolusyöpä, analysoimme KRT81 ilmentyminen immunohistokemia 42 okasolusyöpä, 33 adenokarsinooma ja 2 adenosquamous karsinoomanäytteistä ja kolmessa normaalin keuhkokudoksen kudosnäytteitä. Taulukko S1 esittää tulokset kunkin 80 näytettä. Merkittäviä eroja ei havaittu Immunovärjäyksen kuvion mukainen histologinen alatyyppi: 38 40 okasolusyöpää (95%) olivat positiivisia, verrattuna 6 32 adenokarsinoomat (19%) (Fisherin tarkka testi P 0,0001; taulukko 5). Lisäksi 3 6 positiivisen adenokarsinoomista osoitti vain polttoväli positiivisuus (pisteet 1). Herkkyys, spesifisyys, positiivinen ennustearvo, negatiivinen ennustearvo ja tarkkuus olivat 0,95, 0,81, 0,86, 0,93 ja 0,89, tässä järjestyksessä. Kuva 3C-F on esitetty esimerkkejä immunohistokemiallisella arvioinnin okasolusyöpä, adenokarsinooma ja valvontaa.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa, olemme analysoineet 11 miR-SNP sarjassa 175 toistoleikattiin NSCLC potilaiden ja korreloivat tuloksemme TTR: n kanssa ja käyttöjärjestelmän. Huomasimme, että potilailla, joilla on

KRT81

rs3660 CC-genotyyppi oli lyhyempi TTR kuin CG tai GG genotyypin ja että potilaat, joilla

XPO5

rs11077 AA genotyyppi oli lyhyempi TTR kuin ne, joilla AC tai CC-genotyyppi. Nämä tulokset myös pätenyt alaryhmässä potilailla, joilla on vaiheen I tauti. Lisäksi monimuuttuja analyysit osoittivat, että

KRT81

rs3660 CC genotyyppi ja

XPO5

rs11077 AA genotyyppi olivat riippumattomia ennustetekijöitä muuttujia TTR. Yksiulotteista analyysi OS osoitti yhdistyksen välillä selviytymisen ja

MIR423

rs6505162 genotyypin; kuitenkaan tämä ei ollut itsenäinen muuttuja monimuuttujamenetelmin. Lisäksi prognostinen arvo

KRT81

rs3660 genotyyppi lisää merkitty okasolusyöpä, mikä osoittaa, että KRT81 voi olla uusi immunohistokemiallinen markkeri okasolusyöpä keuhkojen.

Useita asennuspalveli- SNP tiedetään vaikuttavan keuhkosyövän alttiuteen ja selviytymistä. SNP edeltävässä miR-196a2 rs11614913 oli ensimmäinen liittyy selviytymisen pienisoluista keuhkosyöpää [23] ja myöhemmin liittyy suurempi riski sairastua keuhkosyöpään Kiinan [27] ja Korean [28] populaatiot. SNP edeltävässä miRNA vierusalueeseen

miR-30c-1

rs928508 on liittynyt hengissä NSCLC, vaikuttaen vaiheessa I ja II tauti [29]. MiRNA kohdepaikan SNP

KRAS

geeni liittyy suurempi riski sairastua NSCLC keskuudessa maltillinen tupakoitsijoita [22]. Äskettäin SNP haplotyypin Mirna biogeneesissä geeni

RNASEN

liittyi lyhyempi hengissä keuhkosyövän [30], ja SNP toisessa biogeneesissä liittyvissä yhdiste,

AGO1

rs636832, liittyi vähentyneestä keuhkosyövän riskiä [31]. Tähän mennessä, kuitenkaan, ei ole suhdetta miR-SNP: iden ja keuhkosyöpä toistuminen leikkauksen jälkeen on raportoitu.

XPO5 on RAN-GTP-riippuvainen proteiini, joka kuljettaa ennalta miRNA tumasta sytoplasmaan. Äskettäin mitään yhteyttä välillä havaittiin

XPO5

rs11077 ja keuhkosyövän riskiä Korean väestöstä [31]. Sen sijaan tässä tutkimuksessa olemme havainneet välistä positiivista tämän SNP ja TTR on Euroopan väestöstä. Spekuloida, että SNP:

XPO5

voisi muuttaa normaalia toimintaa proteiinin suulakepuristaa ennen miRNA tumasta, jolloin ne muuttavat sääntelyä useiden miRNA solussa.

Vaihe II ja III NSCLC potilaat ovat rutiininomaisesti hoidettu adjuvanttihoitoa jälkeen kirurginen resektio, joka on parantunut eloonjääminen useissa satunnaistetuissa kliinisissä tutkimuksissa [3], [32], [33], [34]. On kuitenkin olemassa monia korkean riskin vaiheen I potilaat, jotka voisivat hyötyä tästä hoitoa, ja on ehdotettu, että potilailla, joilla on kasvaimia ≥4 cm voi saada selviytymisen hyötyä adjuvanttihoitoa [35]. Biomarkkerit täsmällisesti vaihe I potilaille, joilla on suuri riski toistumista olisi hyödyllinen väline hallinnassa näillä potilailla. Koska vaikutus toistumisen havaittu geneettisiä variantteja

KRT81

ja

XPO5

säilyi potilaiden alaryhmässä vaiheen I tauti, ehdotamme, että nämä SNP: t ovat ihanteellisia ehdokkaita lisätutkimuksiin jotta individualizing hoitoa näille potilaille.

Mikä tärkeintä, kasvaimen uusiutumisen vaikutti SNP sijaitsee 3’UTR

KRT81

, sitoutumiskohta useita miRNA: miR-17, miR-93, miR-20b, miR-519d, miR-520g, miR-520H, miR-519c-3p, miR-519b-3p, miR-519A ja miR-765. Jotkut näistä miRNA on aiemmin osoitettu olevan muuttaa NSCLC [11], ja läsnäolon SNP vaikuttaa siementen-sekvenssin sitoutumiskohdan näiden miRNA, kuten on esitetty kuviossa S4.The alleelifrekvenssi tämän SNP on erilainen ihmisen syöpiä kuin muulla väestöllä [36].

KRT81

koodaa varten KRT81-proteiinin, joka tunnetaan myös Hb-1, tyyppi hiusten keratiini, joka on fysiologisesti ilmaistaan ​​hiukset akselit. Keratiineja ovat proteiineja, ilmaistuna kaikenlaisia ​​epiteelisolujen [37], joilla on erilaiset ekspressiokuviot eri karsinoomat [38], ja niitä käytetään laajalti diagnostiikkaan markkereita. Ne muodostavat väli- filamentit epiteelisolujen, ylläpitämiseen liittyviä solujen eheyden ja mekaanisten ja ei-mekaaniset stressitekijät [39]. Keratiineista eivät ole vain liittyvät säätelyyn solujen toimintoja, kuten liikkuvuutta ja kasvun lisäksi myös proteiinisynteesiä, apico-pohjapinta polarisaatio ja solunsisäinen signalointi, ja ne on kuvattu ennustetekijöitä merkkiaineiden epiteelin kasvaimissa [40]. Rintakarsinoomista ektooppisesti ilmaista KRT81 [41], ja esillä olevassa tutkimuksessa olemme havainneet KRT81 ilmentyminen keuhkoissa kasvainkudoksessa immunohistokemiallisesti. Tähän mennessä

KRT81

ei ole vahvistettu ennustetyövälineenä merkki, ja nykyinen tutkimus on ensimmäinen, linkittää

KRT81

variantti kasvaimen uusiutumisen.

Lisäksi olemme havainneet, että KRT81 voi hyvinkin olla uusi immunohistokemiallinen markkeri okasolusyöpä. KRT81 osoitti selvästi positiivinen värjäytymistä okasolusyöpää (95% positiivinen), kun taas 81% on adenokarsinoomia olivat negatiivisia. Mielenkiintoista on, että alaryhmä analyysit TTR mukaan histologinen alatyyppi, vaikutus

KRT81

rs3660 genotyypin toistuminen oli huomattavampi potilailla, joilla on okasolusyöpä. Se, että useat uudet kohdennetut aineet ovat activespecifically vuonna adenokarsinooma ja muiden ei pitäisi käyttää sisään levyepiteelikarsinooma koska mahdolliset komplikaatiot korostaa tarvetta luokitella NSCLC kuin squamous tai ei-levyepiteelikarsinooma syöpä. Tässä asetelmassa, KRT81 voisi olla hyödyllinen uusi merkkiaine erotusdiagnoosissa NSCLC; sellaisenaan, se voitaisiin lisätä paneeli immunohistokemiallisella markkereita käytetään nykyisin, kuten TTF1 ja P63 [42], [43].

yhä enemmän näyttöä yhteyksiä miRNA ja syövän tekee analyysin SNP miRNA liittyviä geenejä mahdollisen avaintekniikkaa valitsemiseksi potilaille riski kerrostumista. Huolimatta tiettyjä rajoituksia – myös puuttuminen itsenäisen tai toiminnallinen validointi ja suhteellisen rajallinen määrä SNP – Tämän tutkimuksen on ensimmäinen tarkkailla miR-SNP liittyvä ero malleja kasvaimen uusiutumisen hoidetuista pienisoluista keuhkosyöpää. Tuloksemme osoittavat, että SNP

KRT81

ja

XPO5

voisi olla hyötyä biomarkkereita yksilöllistämiseksi hoidon pienisoluista keuhkosyöpää ja KRT81 voi olla uusi immunohistokemiallinen merkkiaine okasolusyöpä, joka tarjoaa uuden diagnostinen väline, jota käytetään terapeuttisessa päätöksenteossa.

tukeminen Information

Kuva S1.

TTR mukaan

KRT81

rs3660 genotyypin.

doi: 10,1371 /journal.pone.0022509.s001

(TIF) B Kuva S2.

TTR mukaan

XPO5

rs11077 genotyypin.

doi: 10,1371 /journal.pone.0022509.s002

(TIF) B Kuva S3.

OS mukaan

MIR423

rs6505162 genotyypin.

doi: 10,1371 /journal.pone.0022509.s003

(TIF) B Kuva S4.

Ennustettu säilytetty miRNA kohdistaminen KRT81. SNP rs3660, joka sijaitsee 3′-UTR-alueen

KRT81

, vaikuttaa sitoutumisen näiden miRNA.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0022509.s004

(PPTX)

Taulukko S1.

immunovärjäys KRT81 80 tapauksissa analysoitiin.

doi: 10,1371 /journal.pone.0022509.s005

(DOC) B

Kiitokset

Kiitämme Dolors Fuster ( University of Barcelona) teknistä apua ja Renee O’Brate hänen apua kirjallisesti paperi.