Krooninen sairaus

tiivistelmä

somatostatiinireseptoripositiivisten alatyypin 2 (SSTR2) on yleisimmin ilmaistu SSTR alatyypin normaaleissa ihmisen kudoksissa. SSTR2 ilmentymistä säädellään eri tavalla eri kasvaintyypeissä ja terapeuttinen somatostatiinianalogit sitoutumisen SSTR2 ovat kliinisessä käytössä. Eturauhassyövissä erittäin ristiriitaisia ​​tuloksia kannalta SSTR2 ilmaisun ja sen seuraukset on julkaistu viime vuosina. Tutkimuksen tavoitteena oli selvittää esiintyvyyttä ja kliinistä merkitystä SSTR2 ilmaisun eturauhassyövässä. Siksi määrällinen immunohistokemia (IHC) käyttäen kudos- mikrosirulla, joka sisältää näytteitä 3261 eturauhassyövän potilailla, joilla on laaja kliininen ja molekyylitason syövän ominaisuuksista ja onkologian seurantatiedot tehtiin. IHC tietoja verrattiin julkisesti saatavilla Gene Expression Omnibus aineistoja ihmisen eturauhassyövän geenin ilmentymisen taulukot. Vaikka kalvomainen SSTR2 värjäytyminen aina nähtävissä normaalissa eturauhasessa epiteelin, SSTR2 värjäytymistä ei ollut yli puolet (56,1%) ja 2195 tulkittavia eturauhassyöpänäytteissä. Noin 13% kaikista analysoitiin eturauhasen syöpiä osoitti kohtuullisesta voimakkaaseen soluliman ja kalvomainen SSTR2 värjäystä. Värjäytymisvoimakkuuksia olivat käänteisesti verrannollisia korkea Gleason asteen, kehittyneet pT luokka, korkea kasvainsoluproliferaation (p 0,0001 kutakin), korkea preoperatiivinen PSA-pitoisuudet, (p = 0,0011) ja positiivisen kirurgiset marginaalit (p = 0,006).

In silico

analyysi vahvisti, alempi SSTR2 geenin ilmentymisen eturauhassyövissä vs. normaali viereinen kudos (p = 0,0424), eturauhassyövän etäpesäkkeiden vs. primaarisyöpien (p = 0,0011) ja toistuvia vs. ei-toistuvia eturauhassyöpiä ( p = 0,0438). PSA-elinaika laskivat vähitellen kanssa SSTR2 värjäyksen intensiteetti (p 0,0001). SSTR2-negatiivinen syövät olivat todennäköisemmin kehittää etäpesäkkeitä ajan (p 0,05). Lopuksi useimmat eturauhasen syöpiä ovat todellakin SSTR2-negatiivinen ja menetys SSTR2 voimakkaasti ennustaa epäsuotuisa kasvaimen fenotyypin ja huonon ennusteen. Näin ollen, SSTR2 ilmaus vaikuttaa tärkeä tekijä eturauhassyövän ja uudelleen käyttöön reseptorin SSTR2-negatiivinen eturauhasen syöpä saattavat sisältää lupaava kohde uusien geenihoitolähestymistavat.

Citation: Hennigs JK, Mueller J, Adam M, Spin JM, Riedel E, Graefen M, et al. (2014) menetys somatostatiinireseptoripositiivisten alatyyppi 2 Eturauhassyöpä on linkitetty Aggressiivinen Cancer Fenotyyppikuvaus, korkea kasvainsoluproliferaation ja Ennakoi varhainen Metastaattinen ja biokemialliset Relapse. PLoS ONE 9 (7): e100469. doi: 10,1371 /journal.pone.0100469

Editor: Alessandro Weisz, University of Salerno, tiedekunnan lääketieteen ja kirurgian, Italia

vastaanotettu: 24 helmikuu 2014; Hyväksytty: 26 toukokuu 2014; Julkaistu: 10. heinäkuuta 2014

Copyright: © 2014 Hennigs et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ rahoittivat University Medical Center Hamburg-Eppendorf. JKH sai tutkimuksen apurahan alkaen ”Hubertus Wald Tumorzentrum /University Cancer Center Hamburg” tämän työn aikana. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Länsi miehillä eturauhassyöpä on yleisimmin diagnosoitu pahanlaatuinen kasvain toisen korkein syöpään johtuvan kuoleman [1]. Eturauhasen syöpiä on huomattavasti muuttuvien kurssien taudin hitaasta paikallisen kasvun aggressiivinen ja invasiivisen metastaattisen leviämisen. Siksi perusteellinen molekulaarinen eri eturauhassyövän alatyyppejä on välttämätöntä syrjiä aggressiivisia ja ei-aggressiivinen syöpä fenotyyppejä.

somatostatiini (SST) on syklinen neuroendokriini hormoni, joka eristettiin alun perin lampaan hypotalamuksen kuin

in vitro

estäjä kasvuhormonin toiminnan (GH, [2]). SST tuotetaan neuroendokriinisoluissa koko kehossa ja siksi laajalti ilmaistaan. Tämä käsittää keskus- ja ääreishermoston ja erilaisia ​​solujen ruoansulatuskanavan, urogenitaalinen ja lisääntymis- kirjoitusten [3].

SST esiintyy kahdessa biologisesti aktiivisia isoformia (SST-14 ja SST-28), jotka sitoutuvat 5 erillistä kalvon pinnan reseptorit (SSTR1-5) muuttuvan sidosaffmiteetti [4]. Aktivoitaessa SST-14 /-28 kaikki SSTRs estävät sukupolven syklo-AMP siten vähentää mitogeeniaktivoidut (MAP) kinaasi-välitteisen soluproliferaation laajan valikoiman solutyyppejä [3]. Laajimmin ilmaistuna SSTR-alatyypin normaaleissa kudoksissa [3] on SSTR2.

Erilaisia ​​synteettisiä SSTR-agonistit ovat käytettävissä, jonka anti-proliferatiivinen oktapeptidi oktreotidi on suosituin edustaja, joka on nyt rutiininomaisesti käytetään havaitsemiseen ja hoitoon neuroendokriinisten kasvainten [5]. Lisäksi, jonka agonisti profilointi oktreotidi todettiin voimakkain sitomiskumppanin SSTR alatyypin 2 (SSTR2, [4]).

Käyttäen leimattua oktreotidi sitoutumismääritykset, in situ -hybridisaatio, immunohistokemia ja RNA-sitoutumismääritykset SSTR2 ilmaisu on osoitettu olevan myös ilmaista eri malignien ja ei-pahanlaatuiset kasvaimet, kuten aivolisäkkeen adenooma, meningeoma, neuroblastooma, non-Hodgkin-lymfooman, neuroendokriinisten karsinoidituumorit, rinta- kasvaimia, munuaisten, haiman ja pienisoluiset keuhkosyövät [3]. Näissä syövissä SSTR2 aktivoituminen johtaa esto kasvainsoluproliferaation, enimmäkseen välittyvät kasvu pidätyksiä [3].

eturauhassyöpä on useita ristiriitaisia ​​raportteja roolista ja ilmaus SSTR2 (tiivistelmää nähdä [ ,,,0],6]): Hansson et al., esimerkiksi, ehdottaa säätely ylöspäin SSTR2 ilmentymisen eturauhassyövissä [7], Morichetti ja työtovereiden löysi kasvoi SSTR2 immunovärjääminen 80% satunnaisista eturauhasen syöpiä [8]. Muut ryhmät löydetty heikentynyt tai puuttuu SSTR2 ilmentymisen eturauhassyövissä [9], [10].

Näiden ristiriitaisia ​​raportteja, analysoimme SSTR2 ilme immunohistokemiallisesti suuri (3261 kasvaimia) eturauhassyöpäkudoksen microarray (TMA) ja julkisesti saatavilla Gene Expression Omnibus (GEO) aineistot ihmisen eturauhassyövän geenin ilmentyminen taulukot, jotta kattavasti selvittämään esiintyvyyttä ja kliinistä merkitystä SSTR2 ilmentymisen eturauhasen syöpiä.

Materiaalit ja menetelmät

Tissue mikrosirujen rakentamiseen

eturauhassyövän ennustetta kudos microarray (TMA) koostui syöpä näytettä 3261 potilasta jaettu yli 7 parafiinilohkoihin. Näytteenotto- ja rakenteet on kuvattu yksityiskohtaisesti aikaisemmin [11]. Lyhyesti, yksilöt radikaali prostatectomies suoritetaan vuosina 1992 ja 2005 Department of Urology, University Medical Center Hamburg-Eppendorf oli parafiiniin ja jälkeenpäin sovitettu kliinis-patologinen data. TNM luokittelu (American sekakomitean Cancer, 2002, 6

painos) käytettiin tuumorin luokitus jotta voidaan määritellä ensisijaisen kasvaimen koon ja paikalliset invasiivisuus (pT), alueellinen imusolmuke koettu (PN) ja kaukainen leviäminen /etäpesäkkeitä (pM). Arvostelu syövät suoritettiin käyttäen Modified Gleason Score [12], ja arvioimalla syövän leikkauskäsine marginaalit [13]. Kaikilla potilailla, joille tehdään eturauhasen, eturauhasen antigeenin (PSA, [14]) pitoisuudet mitattiin ajankohtana diagnoosin ja leikkauksen jälkeisen seurannan neljännesvuosittain ensimmäisenä vuonna sen jälkeen kahdesti vuodessa mittaukset toisen ja vuotuinen mittaukset kolmannen vuoden jälkeen leikkauksen jälkeen. Toistuminen määriteltiin leikkauksen jälkeisen PSA 0,2 ng /ml. Aika toistumisen määriteltiin ensimmäisen PSA-arvo suurempi tai yhtä suuri kuin 0,2 ng /ml. Potilaat ilman merkkejä kasvaimen uusiutumisen sensuroitiin vihdoin seurannassa. Ei potilaan kohortin vastaanotetun neo-adjuvanttia tai adjuvanttihoito. TMA rakentaminen, edustaja kudossylintereitä, joiden halkaisija on 600 pm lävistettiin kasvaimen vyöhykkeitä parafinoidut luovuttajakudostä lohko ja siirretään vastaaviin koordinaatteihin vastaanottajan parafiiniblokkiin puoli-automatisoidun prosessin avulla tarkkuusinstrumentteja. Neljän mikrometriä paksu osa kunkin microarray lohkon siirrettiin liima dioja immunohistokemiaa analyysejä.

käyttö kudosten ja kliinisten tietojen hyväksyi eettinen komitea Hamburg Chamber of Physicians ja paikallisen lain mukaisesti (Hamburgisches Krankenhausgesetz, HmbKHG) ja Helsingin julistuksen. Suostumuksella HmbKG, 12 §, 1-3 ja §12a, 1-5 erityinen suostumus tarvinnut eikä sillä ollut saatu tässä tutkimuksessa. Kaikki potilastietoja /tiedot olivat anonymisoituja ja de-tunnistettu ennen analyysejä.

immunohistokemia (IHC) B

juuri leikattu TMA leikkeet värjättiin yhdessä kokeessa yhtenä päivänä. TMA leikkeet de-paraffinized jälkeen lämpöä aiheuttama antigeenin haku autoklaavissa asetaattipuskuria, pH 6,0 5 minuutin ajan. Ensisijainen polyklonaalista kanin anti-SSTR2-vasta-aine (HPA007264, Atlas Antibodies, Tukholma, Ruotsi) käytettiin lopullisena laimennoksena 1:150. SSTR2 ilmentyminen visualisoitiin hyödyntäen Kuvitella System (DAKO, Glostrup, Tanska).

kalvomainen ja sytoplasmaattinen värjäytyminen arvioitiin erikseen kunkin täplän. Värjäytymisintensiteettiä (negatiivinen = 0, heikko = 1+, väli = 2+, voimakas = 3 +) ja osa positiivisia kasvainsoluja (in%) rekisteröitiin kunkin kudoksen päällä. Lopullinen pistemäärä oli rakennettu näitä kahta muuttujaa kuten aikaisemmin on kuvattu [15], [16]. Lyhyesti, negatiiviset tulokset oli värjäytymisen intensiteetti 0, heikko tulokset oli värjäytymisen intensiteetti 1+ ≤70% syöpäsolujen tai värjäytymisen intensiteetti 2+ ≤30% tuumorisolujen; kohtalainen tulokset oli värjäytymisen intensiteetti 1+ 70% tuumorisolujen, värjäytymisintensiteettiä 2+ 30% ja ≤70% kasvainsolujen tai värjäytymisen intensiteetti 3+ ≤30% tuumorisolujen ja vahva tulokset oli värjäytymisen intensiteetti 2+ 70% syöpäsolujen tai värjäytymisen intensiteetti 3+ 30% syöpäsoluja. Ki67 IHC data generoidaan samalla TMA oli saatavilla aiemman tutkimuksen [17].

In silico cDNA mikrosiruanalyysi

Gene Expression Omnibus (GEO) haku (www.ncbi.nlm. nih.gov/gds) suoritettiin ihmisen geenijärjestelyillä aineistoja tietoa SSTR2 ilmaisua käyttäen merkkijono ”eturauhassyöpä somatostatiinireseptoripositiivisten 2 homo sapiens”. Muita vaatimuksia ovat: ekspressiotietojen samassa aineisto vertailua varten (1) terveet eturauhasen ja eturauhassyövän, (2) ensisijainen eturauhasen syöpiä ja metastaattinen eturauhas- syöpien, tai (3) kertaluonteiset ja toistuvia eturauhasen syöpiä. Lisäksi sopivia aineistoja tuli sisältää vähintään n = 22 ryhmää kohden Saavuttaakseen tyypin I virheen todennäköisyys 0,05 päästä tilastollisen tehon 0,9 ja ero ryhmien yhden keskihajonnan ei-pariksi näyte asetusta.

Out of yhteensä 158 aineistojen tunnistetaan ilme tietoa SSTR2 ihmisen eturauhasen syövissä vain 2 aineistoja täytti kaikki kriteerit edellä, nimittäin GDS2545 [18], [19] ja GDS4109 [20].

GDS2545 sisältää ilmaisun tietoja 65 ensisijaisen eturauhasen syöpiä, 63 normaalissa kudoksessa vieressä eturauhassyövän ja 25 eturauhassyöpäetäpesäkkeet hybridisoitunut Affymetrix Human Genome U95 Versio 2 Array platform (GPL8300). GDS4109 sisältää ilmaisun tietoja 39 toistuvia ja 49 ei-toistuvat ensisijainen eturauhasen syöpien hybridisoidaan Affymetrix Human Genome U133A Array alustan (GPL96).

normalisoitu geenin ilmentymistä arvot SSTR2 (GDS2545 + GDS4109) sekä SSTR3, 4 ja 5 (GDS2545 vain) uutettiin ja analysoitiin käyttämällä GEO Dataset Browser data-analyysi online-työkaluja. Tietoa ei ollut saatavilla SSTR1 alkaen GDS2545.

Tilastollinen

Tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen JMP 5.0.1 ohjelmistoa (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA) suorittamalla Pearsonin Khin neliö testi virhematriiseja. Analyysi varianssit (ANOVA) käytettiin testaamaan yhdistys Ki67 merkintöjä indeksi (LI) ja SSTR2 värjäys, Kolmogorov-Smirnov testi määrittämiseksi normaalijakaumaa ja myöhemmät parittomia t-testiä tai Mann-Whitney-U-testiä laskelmat tehtiin

in silico

cDNA ilmaisun analyysi käyttäen PRISM 6 (Graphpad Software, Inc., La Jolla, CA, USA). Survival käyrät laskettiin Kaplan-Meier-analyysi ja verrattiin log rank testi. Monimuuttuja-analyysissä käytetyt Coxin regressiomallin tunnistaa riippumattomuuden kliinisten parametrien ja SSTR2 immunohistokemia ennustaa PSA-uusiutuminen, syöpään erityisiä selviytymisen ja alkamisajankohta etäpesäkkeitä jälkeen eturauhasen.

Tulokset

lähtötilanteen ominaisuudet eturauhassyöpäpotilaalla

TMA rakennettiin syöpään kudoksista jälkeen radikaali prostatectomies alkaen 3261 potilasta hoidettiin osastolla urologian, University Medical Center Hamburg-Eppendorf vuosien 1992 ja 2005 seurantatiedot biokemiallisia syöpä uusiutumisen olivat käytettävissä 2385 potilasta (73,1%), jonka keskimääräinen tarkkailujakson aikana 34,7 kuukautta (vaihteluväli: 1-143 kuukautta, katso taulukko 1 lähtötilanteesta). TMA ytimet 2363 potilasta sisältyvät eturauhasen syöpäsolujen (72,5%). Ytimet mukana tässä tutkimuksessa. Ryhmään tulkittavissa tapauksissa tilastollisiin analyyseihin muodostettiin 2195 täplät (67,3%) ja immunohistokemiallinen tietoa SSTR2 ilme.

Menetys SSTR2 ilmaisun eturauhassyövässä on vahvasti sidoksissa biologisesti aggressiivinen syövät

SSTR2 ilmaisun määritettynä IHC oli poissa 1231 (56,1%) tulkittavissa eturauhassyöpänäytteissä. Heikko SSTR2 värjäytyminen havaittiin 680 näistä kasvaimista (31,0%). Kohtalainen ja vahva värjäytyminen tapahtui 187 (8,5%) ja 97 eturauhasen syöpiä (4,4%), vastaavasti. Värjäytymistyyppi oli pääosin sekä kalvo ja sytoplasman läpi positiivinen TMA paikkoja. Vertailun, normaalissa eturauhasessa kudos oli aina positiivinen reseptorin värjäytymistä (kuvio 1A-D).

Mikrovalokuvat kudoksen microarray ytimien esittää normaalissa eturauhasessa ja eturauhassyöpäkudoksille: SSTR2-positiivinen normaaliepiteelissä (A), SSTR2-negatiivinen (B) ja SSTR2-positiivisia eturauhassyöpäkudoksen (C) sekä SSTR2-negatiivinen syöpäsolujen vieressä voimakkaasti SSTR2-positiivisia normaalin epiteelisolujen (D).

ennakoimattomia analyysi kasvaimen fenotyypin ja kliinisen ominaisuudet paljasti merkittäviä, käänteinen yhteenliittymät SSTR2 värjäyksen intensiteetin de-erilaistuminen kasvaimet (kuten korkea Gleason grade, p 0,0001), kehittynyt kasvain vaiheessa eturauhasen syöpiä (kuten kehittyneet pT luokkaan p 0,0001 ja syöpää positiivinen kirurgiset marginaalit, p = 0,006) sekä korkean ennen leikkausta PSA-arvot (p = 0,0011). Tilastollinen yksityiskohtia korrelaation kliinis-patologisten tekijöiden SSTR2 IHC intensiteetit ja taajuudet annetaan taulukossa 2.

Sama vahva käänteinen korrelaatio SSTR2 värjäytymisen intensiteetti havaittiin kasvainsoluproliferaation määritettynä Ki67 LI. Ki67 LI kautta vähenee SSTR2 IHC intensiteetti syöpäsolujen 2,8 ± 0,4 (voimakas SSTR2 IHC) yli 3,8 ± 0,4 (väli SSTR2 IHC) ja 5,0 ± 0,2 (heikko SSTR2 IHC) oli 5,9 ± 0,2 SSTR2-negatiivinen eturauhasen syöpiä ( aritmeettinen keskiarvo ± keskivirhe keskiarvon, p 0,0001, kuva 2).

Ki67 merkintöjä indeksi osoittaa vahvaa käänteinen korrelaatio SSTR2 värjäytymisvoimakkuuksia (p 0,0001, ANOVA, Dunnin monivertailu jälkikäteen testi, Rasia ja viikset käyrä mediaani, 25

th ja 75

persentiili, ** = p 0,01 vs. negatiivinen SSTR2 IHC, *** = p 0,001 vs. negatiivinen SSTR2 IHC).

Voit testata, jos muutokset SSTR2 ilmaisun havaitsee IHC voitiin vahvistaa sen transkription tasolla, suoritimme

in silico

ilmentymisen analyysi käyttämällä kahta julkisesti saatavilla GEO aineistoja ihmisen eturauhassyövän geenin ilmentymisen paneelit (GDS2545 ja GDS4109).

Käyttämällä GDS2545 aineisto, vertasimme ilmaus SSTR alatyyppeihin 2, 3, 4 ja 5 normaalissa eturauhasessa kudoksen fyysisesti viereisten ensisijainen eturauhassyövän parittoman tavalla. Vaikka ilmaus SSTR3 (keskiarvo normalisoitu lauseke arvo ± SD: 59,7 ± 30,1 [normaali] vs. 76,2 ± 89,1 [syöpä], p 0,05) ja SSTR5 (226,3 ± 47,1 [normaali] vs. 236,1 ± 50,6 [syöpä], p 0,05). Lämpökarttana suhteellisen SSTR2 geenien ilmentyminen eturauhassyövässä kudoksessa (kasvain) ja ympäröivän viereisen normaalissa eturauhasessa (norm. Adj.) Per yksittäisen potilaan (sarake) on esitetty (C). SSTR2 ilme on myös pienempi eturauhassyöpäetäpesäkkeet vs. primaarikasvaimen (D, p = 0,0011, n = 25) ja toistuvia verrattuna kertaluonteisia eturauhasen syöpiä (E, p = 0,0438, n = 39 vs. 40 potilasta). Standardoitu ilmaisu arvot poimittiin tunnistettu GEO aineistot GDS2545 [18], [19] ja GDS4109 [20] ja verrattiin, kuten on kuvattu menetelmät-osassa (Data annetaan keskiarvo ± SEM, * = p 0,05 vs. vastaava ohjaus, * * = p 0,01 vs. vastaava valvonta).

Tämä koski myös verrattaessa SSTR2 ilmentyminen eturauhassyövässä vastaaviin normaalin viereiseen kudokseen samasta potilaasta käyttämällä pariksi analyysiä (112,5 ± 67,9 [ ,,,0],normaali] vs. 89,8 ± 66,9 [syöpä], p = 0,0486, n = 58 potilasta, kuvio 3B). Kaikkiaan eturauhasen syöpiä 36 potilasta (62,1%) osoitti pienempi SSTR2 ilmaus kuin niiden vastaavat normaalia vieruskudos (kuvio 3C). Eturauhassyöpäetäpesäkkeet oli vielä alhaisempi SSTR2 ilmaisu arvoja kuin ensisijainen eturauhasen syöpiä (109,5 ± 67,4 [esivaaleissa] vs. 55,4 ± 23,9 [etäpesäkkeitä], p = 0,0011, kuvio 3D). Lisäksi käyttämällä GDS4109 aineisto, toistuvia eturauhassyöpää osoitti alempi SSTR2 ilmaisu verrattuna ei-toistuvien syöpiä (386,5 ± 140,5 [kertaluonteinen] vs. 340,2 ± 137,0 [toistuvia], p = 0,0438, kuvio 3E).

menetys SSTR2 eturauhassyövissä ennustaa metastasoitunut ja biokemiallisten syövän uusiutumisen

Kaplan-Meier-analyysi, kaikilla testatuilla kliiniset ja patologiset ominaisuudet olivat vahvasti sidoksissa PSA uusiutuminen, eturauhassyöpäspesifisten selviytymisen ja alkamisajankohta metastaattisen sairaus. Tämä haki Gleason pisteet, pT vaiheessa pN Stage, ennen leikkausta PSA tasot ja kirurgiset marginaali tila (kaikki p 0,0001, taulukko 3 ja kuva 4A-C).

Kaplan-Meier käyriä pT vaiheessa riippuvuus PSA-toistumisen elinaika (A), etäpesäke-elinaika (B) ja syöpää erityisiä eloonjäämisen (C, kaikki p 0,0001, log-rank-testi) in radikaalisti prostatectomized eturauhassyöpäpotilaille.

Lukuun ottamatta eturauhassyövän-erityisiä eloonjäämisen (p = 0,5942, ei kuvassa) SSTR2 värjäytyminen korreloi käänteisesti biokemiallisten uusiutuminen ja etäpesäkkeiden elinaika: Vastaavasti PSA elinaika (p = 0,0009, kuvio 5A) ja etäpesäkkeiden vapaa eloonjääminen (p = 0,0452, kuvio 5B) vähitellen laski vahva SSTR2 värjäystä miedolla ja heikko negatiivinen.

PSA toistumisen elinaika laskee vähitellen voimakkaista värjäytymistä syövän paikkoja yli kohtalainen ja heikkoja SSTR2-negatiivinen eturauhasen syöpiä (A, p = 0,0009, Kaplan-Meier analyysi Log-Rank-testi). Prostatectomized potilaalla on SSTR2-negatiivinen eturauhasen syöpiä on myös heikentynyt etäpesäke-elinaika (B, p = 0,0452, Kaplan-Meier analyysi Log-Rank-testi).

monimuuttuja analyysit testattu kaikki parametrit ( Gleason pisteet, pT vaiheessa pN Stage, kirurginen marginaali tila ja ennen leikkausta PSA-arvot, kaikki p 0,001), mutta ei SSTR2 värjäyksen intensiteettiä (p = 0,6938) on tunnistettu itsenäisiksi riskitekijöitä biokemiallisia uusiutumisen. Vastaavia tuloksia havaittiin etäpesäkkeitä vapaan elinajan (SSTR2 värjäys, p = 0,8443).

Keskustelu

immunohistokemiallisesti havaittavissa soluliman ja membranous SSTR2 proteiinia nähtiin 44% meidän 2195 tulkittavia eturauhassyöpänäytteissä . Aiemmat tutkimukset oli analysoinut pienempi potilasaineistoihin (14-45 tapausta) ja todettu erittäin vaihtelevia tuloksia myös alempia [9], [10] ja korkeammat [7], [8] määrä ”SSTR2-positiivinen” eturauhasen syöpiä verrattuna tietomme . RT-PCR, Halmos, et al. vain löytyy kolme SSTR2-positiivisten eturauhasen syöpiä pois 22 näytteiden [9]. Cariaga-Martinez et al. raportoi heikentynyt tai poissa SSTR2 ilmentymistä 40 ulos 45 prostatasyövistä käyttäen immunohistokemia [10]. Hansson et ai. ehdottivat säätely ylöspäin SSTR2 ilmentymisen 12 ulos 14 eturauhassyöpänäytteissä perustuu RNA in situ -hybridisaatio [7]. Morichetti et ai. raportoi äskettäin heikko tai keskitason sytoplasmista SSTR2 IHC värjäytymistä n. 80% prostatasyövistä radikaali prostatectomies [8].

vertailu normaalissa ja syöpä- eturauhasen epiteelin esillä olevassa tutkimuksessa IHC osoitti, että SSTR2 ei ole yli-ilmennetään, mutta sen sijaan yleensä vaimentua eturauhassyövissä. Meidän IHC -aineisto varmistettiin kahden riippumattoman cDNA microrarray aineistot arvioitiin SSTR2 geenin ilmentymisen. Lisäksi meidän havainnot tukevat myös varhain tiedot tutkimuksista, joissa

in vitro

reseptorin autoradiografia vertailla SSTR2 ilmaisun välillä normaalin ja neoplastisia eturauhasen epiteelin [21]. Tuloksemme osoittavat, että SSTR2 downregulation on vahvasti sidoksissa epäedullinen kasvaimen fenotyypin, varhainen PSA uusiutuminen ja alkamisen etäpesäkkeitä. Tämä havainto on sopusoinnussa myös aiemman tutkimuksen, jossa IHC positiivisuuden 100% 12 tapauksissa Gleason luokka 1 tai 2, mutta vain 20% 20 Gleason 4 tai 5 syöpiä [10].

vahvan yhteyden korkea Ki67 LI ja vaimentua SSTR2 proteiini tutkimuksessamme merkitsee, että SSTR2 downregulation kiinnostavuus epäedullisia biologisia vaikutuksia, kun eturauhasen epiteelisolujen läpi vähentynyt soluproliferaatiota ohjaus. Useat tutkimukset ovat todellakin ehdottaneet roolia SSTR2 säätelyssä kasvainsoluproliferaation eri kasvaimia, koska kasvaimet alentunut SSTR2 proteiinin tasot paljasti kasvanutta solujen [22] – [29]. Esimerkiksi, Qui et ai. löytyi huomattavasti korkeampi Ki67 LI kolorektaalisyövässä solujen poissa SSTR2 [25]. Yli-ilmentyminen SSTR2 MCF-7-rintasyöpäsolut, jotka luonnollisesti ilmentävät alhaisia ​​SSTR2, lisäsi apoptoosia ja solusyklin pysähtymisen [29]. C6 gliooma solujen proliferaatio estyi aktivaation SSTR2 mitattuna [

3H] -tymidiinin määrityksiä [28], [30]. Lisäksi, infektio haiman ja ei-pienisoluinen keuhkosyöpä solujen SSTR2 ilmentävät adenovirusvektoreiden vähentynyt merkittävästi kasvaimen kasvua ja lisääntymistä nopeudella [27].

mekanismi, jonka SSTR2 pystyy antamaan sen anti-proliferatiiviset vaikutukset , on viime aikoina tutkittu. Zou et al. löydetty voimakas estävä vaikutus SSTR2 on solusyklin edellä mainitussa haimasyövän soluja [27]. Niiden eläinmallissa haiman adenokarsinooma, SSTR2 yli-ilmentyminen johti vahva lisäävä säätely sykliini-riippuvaisen kinaasin estäjä p16, joka sitten inhiboi kasvaimen solusyklin etenemisen G1: stä S-vaiheeseen. Tuoreet tiedot viittaavat siihen, että metylaatio saattaa olla merkityksellinen, jolla valvotaan SSTR2 ilmentymistä syöpä. Torrisani et ai. raportoitu säätelyyn ihmisen SSTR2 ilmaisun eri (syöpä) solulinjojen epigeneettisellä muutokset [31]. Niiden tiedot osoittivat, että DNA: n metylaation ja histoni asetylaatio voi säädellä aktiivisuutta SSTR2 promoottorin ja osoittivat, että promoottorin aktiivisuus korreloi suoraan SSTR2 ekspressio rintasyövän, haimasyövän, maksasyövän, melanooma ja retinoblastooma solulinjoja käänteisellä tavalla. Lisäksi hoito näiden solujen kanssa demetyloivan aineita ja acetylase estäjät pelastettiin SSTR2 mRNA: n ilmentymisen [31].

pinta kalvoreseptorin, SSTR2 on sopiva terapeuttinen kohde. Koska somatostatiini n lyhyen puoliintumisajan rajoittaa sen terapeuttinen käyttö, synteettisiä analogeja on kehitetty 1980-luvulta lähtien [32]. Oktreotidi on parhaiten tunnettu analoginen, ja se sitoutuu SSTR2 suuremmalla affiniteetilla ja paljon suurempi terapeuttinen teho kuin somatostatiini [32]. Useat muut terapeuttiset ligandit SSTR2 hetkellä saatavilla tai kliinisiä testejä, kuten pitkävaikutteisia formulaatioita (lancreotide, vapreotidi, seglitide ja pasireotide /SOM230) [33], ja kimeerisiä molekyylejä yhdessä sytostaattien (esim AN-238, joka on doksorubisiini /somatostatiini konjugaatti, [34]).

oktreotidin ja sen johdannaisia ​​on käytetty rutiininomaisesti havaitsemiseen ja hoitoon neuroendokriinisten kasvainten vuosia [35]. C6 gliooma, aktivointi SSTR2 eri somatostatiinianalogit johti voimakas inhibitio

in vivo

syöpäsolujen lisääntymistä, kasvaimeen neoangiogeneesin ja Ki-67 ilmentyminen [30].

Lisäksi kokeellinen hoito sytotoksisen somatostatiinianalogin AN-238 esti voimakkaasti kasvainten lisääntymistä monenlaisia ​​SSTR2 positiivisen syövän malleja kuten Non-Hodgkin-lymfooman [34], pahanlaatuinen melanooma [36], feokromosytooma [37], kohdun limakalvon [38], munasarja- [39 ], paksusuoli [40] ja mahakarsinoomat [41] sekä pieniä ja ei-pienisoluinen keuhkosyöpä [42], [43].

yhteensopivuutta tietomme, ihmisen haiman adenokarsinooman menettää SSTR2 ilme [ ,,,0],44]. Uudelleen käyttöön SSTR2 vuonna haimasyöpä geeninsiirron avulla voimakkaasti esti kasvainsoluproliferaation ja tuumorigeenisyystesti [24], [45]. Vuonna SSTR2-negatiivinen haiman ja ei-pienisoluinen keuhkosyöpä syöpä malleja Zou ja kollegoiden uudelleen ilmentäminen SSTR2 syöpäsoluissa johti merkittävästi heikentynyt kasvaimen kasvua, joka pahensi annoksesta riippuvaisella tavalla soveltamalla Oktreotidin ja sen derivaatta vapreotidin (RC-160, [27]).

Lopuksi osoitamme, että menetys SSTR2 liittyi metastaattisen etenemisen eturauhasen syöpiä. Potilaat, joilla SSTR2-negatiivinen eturauhasen syöpiä oli heikentynyt etäpesäke-elinaika, ja etäpesäkkeitä eturauhasen syöpiä kuvasti alhaisempi SSTR2 mRNA kuin ensisijainen eturauhasen syöpiä. Samanlaisia ​​havaintoja on kuvattu kolorektaalisyövissä [46] ja seminonas [47]. Lisäksi geenin siirtäminen SSTR2 esti metastasointiin kahdessa eri haimakarsinooma- mallit [48], [49].

Miten SSTR2 voisi säädellä kasvain leviää on vähemmän selvä, mutta julkaisi tiedot viittaavat mekanismi edistää solu-solu kiinnikkeistä. Haimasyövän Src-homologia-alueen 2 domeenin sisältävä tyrosiinifosfataasin 1 (SHP-1) pystyy de-fosforyloida epiteelisolujen adheesiomolekyyli E-kadheriinin, mikä vakauttaa välinen epiteelisolujen liittymissä on SSTR2 riippuvalla tavalla [48] , [50]. SHP-1 on myös osoitettu vaimentua biologisesti aggressiivinen eturauhassyövissä [10]. Tämä mekanismi tukee myös työ Lahlou et al. osoittaa, että SSTR2 helpotti palauttaminen toiminnallisten aukkoliitokset haiman adenokarsinoomasolua kautta lisäävä säätely konneksiinit Cx26 ja Cx43 [51].

Mitä mielenkiintoisinta, eturauhasen syöpäsolujen SSTR2 pystyy myös estää toista ominaisuus syövän etäpesäkkeiden , solujen vaeltamiseen [52]. Mekanistisesti, tämä näyttää välittyvän aktivoimalla ligandista riippuvaisella Y-27632-herkkä Rho-GTPaasia reitti [52]. Tiedot normaali, terve, ensisijainen keratinosyytit tukevat tätä mekanismia ja ehdottaa taustalla SSTR2- (muun muassa) estoa Rac1 toimintaa [53].

Johtopäätökset

Olemme voineet täsmentää, että tappio of SSTR2 on vahvasti sidoksissa aggressiivinen kasvain fenotyyppi ja ennustaa huonon ennusteen eturauhasen syöpiä. Useimmat eturauhassyövät ovat SSTR2 negatiivisia ja SSTR2 ilmentyminen näyttää olevan tärkeä tekijä eturauhassyövän. Vaikka soveltuvuus SSTR2 tavoitteeksi geeniterapiaa varten on arvioitava, menetys SSTR2 liittyy vahvasti invasiivisuus, varhainen PSA uusiutuminen, ja metastaattinen leviäminen eturauhassyövässä. Tuloksemme viittaavat siihen, että mekaanisesti nämä vaikutukset välittyvät lisääntynyt syövän soluproliferaatiota solujen alassäädetty SSTR2.

Kiitokset

Kirjoittajat kiittää Christina Koop tekniseen tukeen.