Krooninen sairaus

tiivistelmä

Jo pitkään on hyväksytty, että immunoglobuliinit (Ig) tuotettiin B lymfoidisolujen vain. Äskettäin Ig on havaittu ilmentyvän eri ihmisen syöpäsoluja ja edistää kasvaimen kasvua. Rekombinaation aktivoiva geeni 1 (RAG1) ja rag2, jotka ovat välttämättömiä entsyymejä aloittamisen muuttuja-diversity-liittymällä segmentin rekombinaatiolla, on myös havaittu ilmentyvän syöpäsoluja. Kuitenkin mekanismi RAG aktivaation näissä syöpäsoluissa ei ole selvitetty. Täällä, tutkimme sääntelymekanismi RAG ilmentymistä ihmisen neljän syöpäsolulinjoissa analysoimalla transkriptiotekijät, jotka aiheuttavat RAG aktivaation B-soluissa. RT-PCR, Western blot ja immunofluoresenssilla, olemme havainneet, että transkriptiotekijöiden E2A, FOXO1 ja FOXP1 ilmennettiin ja paikannettu ytimet näiden syöpäsoluja. Yli-ilmentyminen E2A, FOXO1 tai Foxp1 lisääntynyt RAG ilmentymistä, kun taas RNA-interferenssi E2A, FOXO1 tai FOXP1 laski RAG ilmentymistä syöpäsoluissa. Kromatiinin immuunisaostuskokeissa osoittivat asetylaatio RAG tehostajana (Erag) ja E2A, FOXO1 tai FOXP1 sidottiin Erag in vivo. Nämä tulokset osoittavat, että näissä syöpäsoluissa transkriptiotekijöille E2A, FOXO1 ja FOXP1 säädellä RAG ilmaisua, mikä käynnistää Ig-geeni uudelleenjärjestelyn paljon tapa samanlainen B-lymfosyyteille.

Citation: Chen Z, Xiao Y, Zhang J Li J, Liu Y, Zhao Y, et ai. (2011) transkriptiotekijät E2A, FOXO1 ja FOXP1 Asetus rekombinaatiolait- aktivoimatta geeniekspressiota syöpäsoluissa. PLoS ONE 6 (5): e20475. doi: 10,1371 /journal.pone.0020475

Editor: Sumitra Deb, Virginia Commonwealth University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 21 maaliskuu 2011; Hyväksytty: 26 huhtikuu 2011; Julkaistu: toukokuu 31, 2011

Copyright: © 2011 Chen et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat avustuksia (81001199 on ZC, 81030033, 30971150 JG, 30950110335 KC) National Natural Science Foundation of China, ja myöntää LYM10079 sen ZC päässä Innovative Talents ohjelma Guangdongin Yliopistoja. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

jo pitkään on hyväksytty, että immunoglobuliinit (Ig: t) voidaan ilmaista vain kypsissä B-lymfosyyteissä ja plasman soluja. Kuitenkin viime aikoina useat ryhmät raportoitu, että lg voitaisiin tuottaa myös ei-Imusukuisten soluissa [1], mukaan lukien ihmisen syöpäsoluja [2], [3], pehmytkudoksen kasvainsolut [4], neuronien ja gliasolut Keski- ja ääreishermoston [5], silmän epiteelin ja gangliosolut [6], hiiren kivesten spermatogeenisten soluja ja lisäkivesten epiteelisolujen [7] ja hiiri imettäville maitorauhasen epiteelisolujen [8]. Suurin osa tutkimus on toistaiseksi keskittynyt Ig ilmentymistä syöpäsoluissa. Rekombinaation aktivoiva geeni (RAG) on myös todettu ilmaistu syöpäsoluissa sekä mRNA ja proteiini tasoilla ja oletetaan olevan merkittävä rooli synteesin Igs nämä syöpäsolut [2], [3], [ ,,,0],9]. Kuitenkin sääntelymekanismi RAG ilmentymistä syöpäsoluissa ei ole vielä määritetty.

vaihtelevat alueet Ig-geenit koostuvat yhden muuttujan (V), yksi monimuotoisuutta (D), ja yksi liitos- (J) -geenin segmentti, järjestely, joka johtuu V (D) J rekombinaation [10]. RAG endonukleaasi tarvitaan aloittamisen pilkkominen vaiheen V (D) J rekombinaatio [11]. RAG koostuu kahden vierekkäisen geenejä, RAG1 ja rag2, että synergistisesti aiheuttaa V (D) J rekombinaation [12]. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että hiiret, joista puuttuu joko RAG1 tai rag2 ei aloittaa V (D) J toisiintuminen [13], [14]. RAG1 ja rag2 proteiinit yhdessä todettiin olevan riittäviä pilkkomaan rekombinaatiosubstraatin solun free järjestelmissä [15], [16]. Hiiren B-solujen kehitys RAG ilmaisu tapahtuu kahdessa vaiheessa ja säätelee verkosto transkriptiotekijöiden, kuten E2A, Ikaros, Pax5β, Foxo1, Foxp1, ja NF-KB [17]. Ensimmäinen aalto johtaa uudelleenjärjestely immunoglobuliinin raskaan ketjun pro-B-solujen. Ja toinen aalto RAG ilmaisun johtaa kokoonpanoon immunoglobuliinin kevytketjun pre-B-soluissa.

Lisäksi RAG1 ja rag2 promoottorit, RAG geeni on myös muita säätelyelementtejä, kuten proksimaalisen tehostajana (Ep), distaalinen tehostajana (Ed) ja RAG tehostajana (Erag) [17], [18], [19], [20], [21], [22]. Uskotaan, että edellä mainitut transkriptiotekijät säätelevät RAG-ilmentymisen sitoutumalla niiden vastaavat säätelysekvenssit B-soluissa. Erag on vahvin tehostajana säätö- RAG ilme. Kohdennettu poistetaan Erag hiiren ituradan johti 5-kertaiseksi 10-kertaisesti alentunut RAG ilmaisun ja osittainen lohko pro-B ennalta B siirtyminen [22]. E2A, Ikaros, Foxo1, Foxp1 ja NF-KB olivat kaikki osoitettu aktivoivan RAG ilmentymistä sitoutumalla Erag hiiren B-solujen [22], [23], [24], [25], [26]. Pax5β ilmoitettiin aktivoida rag2 promoottori surkastuneet B-soluissa [27]. Olipa nämä transkriptiotekijät ilmaistaan ​​myös syöpäsolujen ja onko niillä sääntelytehtävistään ilmaus RAG tällaisissa soluissa ansaitsee tutkimuksessa.

Tässä tutkimuksessa, ensin analysoidaan proteiinin ja mRNA ilmaisuja näiden transkription tekijöitä, joiden on havaittu olevan olennainen RAG aktivaation B-soluissa, mukaan lukien E2A (E47 ja E12), FOXO1, FOXP1, Ikaros, NF-KB: n, ja PAX5β, neljä syöpäsolulinjoissa. Sitten tutkittiin lokalisoinnin monien näiden transkriptiotekijöiden (E2A, FOXP1, NF-KB: n ja FOXO1) immunofluoresenssilla (IF). Olemme havainneet, että E2A, FOXO1 ja FOXP1 ilmennettiin syöpäsolujen ja paikallistettu tumiin näihin soluihin. Yli-ilmentyminen näiden kolmen transkriptiotekijöiden huomattavasti RAG ilmentymistä. Toiminnallinen inaktivointi geenien minkä tahansa näistä kolmesta transkriptiotekijöiden RNA interferenssin vähentynyt RAG ilmentymistä. In vivo chromatin immunosaostuksella (ChIP) -määritys osoitti, että histoni H3 Erag asetyloitiin ja että E2A, FOXO1, FOXP1 sidottiin Erag näissä syöpäsoluissa. Nämä tulokset osoittavat, että transkriptiotekijöiden E2A, FOXO1 ja FOXP1 aktivoida ilmentymistä RAG, joka on kriittinen V (D) J rekombinaatio, syövässä.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

Emme käytä mitään ihmisen tai eläimen kudoksista tutkimuksessamme. Joten emme tunne, että etiikka hyväksyntä oli välttämätön.

Soluviljely

Ihmisen keuhkosyöpä A549, eturauhassyöpäsolulinja PC3, rintasyöpä MCF-7, MDA- MB-231 ja Burkittin lymfooman Raji saatiin American Type Culture Collection (ATCC). A549, PC3, MCF-7 ja MDA-MB-231-soluja viljeltiin Dulbeccon modifioidussa Eaglen elatusaineessa (DMEM), jossa oli 10% FBS: ää (Hyclone /Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA). Raji-soluja viljeltiin RPMI 1640: ssä (Invitrogen, Carlsbad, CA), jossa oli 10% FBS: ää 37 ° C: ssa kostutetussa ilmakehässä, jossa oli 5% CO2.

RNA ja RT-PCR-

Yhteensä RNA uutettiin kasvainsoluista Trizol-reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, CA) ja käsiteltiin RNase Free DNaasia (Invitrogen) poistamiseksi genomista DNA: ta. Käänteinen transkriptio RNA suoritettiin käyttäen Superscript ™ III First Strand Synthesis System (Invitrogen, Carlsbad, CA) seuraten valmistajan ohjeita. Sillä negatiivinen kontrolli, käänteistranskriptaasin ei lisätty reaktioseokseen. Tavanomaisia ​​tai sisäkkäistä PCR suoritettiin, ja käytetyt alukkeet Tässä tutkimuksessa on lueteltu taulukossa 1. Ikaros, jossa on useita erilaisia ​​isomuotoja, sisäkkäisiä PCR: ää käytettiin lisäämään herkkyyttä ja paremmin luonnehtia tiettyjä Ikaros isoformit [28]. Kaksi isoformia E2A, E47 ja E12 olivat molemmat monistettiin PCR: llä.

SDS-PAGE ja Western blot

Solulysaatit valmistettiin käyttäen RIPA-puskuria. Noin 40 ug kokonais-solun erotettiin 5%: sta 10% SDS-PAGE-geelissä. Elektroforeesin jälkeen erotetut proteiinit siirrettiin polyvinylideenidifluoridi kalvo. Ensisijainen käytetyt vasta-aineet sisältyvät RAG1 (K-20), rag2 (D-20), GAPDH (0411), E2A (Yae), FOXP1 (D35D10), NF-KB: n p65: n (F-6), ja FOXO1 (H-128 ). FOXP1 vasta-aine saatiin Cell Signaling Technology ja muut vasta-aineet hankittiin Santa Cruz Biotechnology. Sen jälkeen kun inkubaatio sekundaari- vasta-aineilla (vuohen anti-hiiri-IgG-HRP: tä tai vuohen anti-kani-lgG-HRP, Santa Cruz), immunoblot kehitettiin käyttämällä Super ECL Plus Detection Reagent (Applygen Technologies, Peking) ja valotettiin röntgenfilmille mukaan valmistajan protokollaa.

Immunofluoresenssikoe

Soluja kasvatettiin diat 6 kuoppalevyille ja kiinnitettiin 4% paraformaldehydi 15 min huoneenlämmössä. Sitten laseja inkuboitiin 0,5% Triton X-100: ssa 10 minuuttia, ja blokattiin 1 tunnin ajan PBS: ssä, joka sisälsi 4% naudan seerumin albumiinia (BSA). Primaaristen vasta-aineiden mukana E2A (Yae), FOXP1 (D35D10), NF-KB: n p65: n (F-6) ja FOXO1 (H-128). Yksityiskohtaiset tiedot näiden vasta-aineet on esitetty taulukossa 2. isotyyppikontrolleja tehtiin käyttämällä normaalia hiiren tai kanin IgG samana pitoisuutena kuin ensisijainen vasta-aineita. Kun oli inkuboitu 4 ° C: ssa yön yli ja pesu, levyt inkuboitiin sekundäärisen vasta-aineen vuohen anti-hiiri-IgG-FITC: tä (vihreä signaali) tai vuohen anti-kani-IgG-TRITC (punainen signaali) huoneenlämpötilassa 1 tunnin ajan. Lopullisen pesun jälkeen, Levyjä asennettu kiinnitysväliaineet DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA) ja tutkitaan fluoresenssimikroskoopilla (Carl Zeiss).

Plasmidit rakentaminen ja transfektio

ihmisen E47 ja E12 fragmentit kloonattiin pIRES2-EGFP restriktioenstyymi Bglll- ja EcoRI plasmideista MigR1-hE47 ja MigR1-hE12, vastaavasti, mikä oli ystävällinen lahja Dr. Barbara Kee yliopiston Chicago. PcDNAI /NEO-5’HA-Foxp1A plasmidin joka koodasi hiiren Foxp1A proteiini jalomielinen lahjoitus tohtori Philip Tucker yliopiston Texas at Austin [29]. FOXP1 proteiini oli hyvin konservoitunut ihmisen ja hiiren lajeista (yli 90% identiteetit), joka siis plasmidin tutkimukseen. PcDNA3-GFP-FOXO1; AAA-plasmidi saatiin Addgene ja se valmistettiin Dr. William Sellers laboratoriossa, kuten aikaisemmin on kuvattu [30]. Tämä plasmidi sisälsi phosphosite mutaatio FOXO1, joka tämän seurauksena pitäviä tämän ei enää fosforyloitiin Akt ja voi silti paikallistaa tumaan ja aktivoimaan transkription transfektoiduissa soluissa [31]. Ohimenevä transfektio määritykset A549 ja MCF-7-syöpäsoluja tehtiin käyttäen Fugene HD Transfection Reagent (Roche) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti.

RNA-interferenssi

Sirna (siRNA) suunnattu FOXO1 [32], FOXP1, E2A ja epäspesifinen kontrolli siRNA (GenePharma, Shanghai, Kiina) transfektoitiin A549 ja MCF-7 syöpäsolujen käyttäen Lipofectamine 2000 (Invitrogen) mukaan valmistajan ohjeiden. SiRNA-sekvenssit on lueteltu taulukossa 1.

ChIP

Kromatiini silloittumista ja immunosaostus suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [23]. Anti-asetyyli-histoni H3 (06-599, Upstate Biotechnology), E2A (Yae), E47 (N-649), FOXP1 (D35D10) tai FOXO1 (H-128) käytettiin. Sekä E2A (Yae) ja E47 (N-649) vasta käytettiin siru E2A. Normaali kanin IgG (sc-2027, Santa Cruz) tai normaalia hiiren IgG (sc-2025, Santa Cruz) käytettiin negatiivisena kontrollina. Immunosaostettiin DNA-sekvenssit analysoitiin PCR: llä ja alukkeet on lueteltu taulukossa 1.

Tulokset

E2A, FOXO1, FOXP1 ja NF-KB: n ilmaistiin syöpäsolulinjoissa

RT-PCR-tulokset osoittivat, että FOXO1, FOXP1, NF-KB-alayksikön p65 ja molemmat kaksi isoformia E2A (E47 ja E12), ilmennettiin syöpäsoluja A549, PC3, MCF-7 ja MDA-MB-231 (kuvio 1). Kuitenkin, ei Ikaros eikä PAX5β havaittiin näissä syöpäsolulinjoissa, kun taas ne voisivat molemmat olla monistettiin Raji-soluja. Proteiinitasolla, E2A, FOXO1, FOXP1 ja NF-KB-alayksikön p65 olivat kaikki havaittu syöpäsolujen kanssa Western blot analyysissä (kuva 2). Perustuen molekyylipainoon, täyspitkän FOXP1 havaittiin olevan tärkein isoformin FOXP1 ilmaistuna syöpäsoluja. Olemme myös vahvisti ilmaus RAG1 ja rag2 näissä syöpäsolulinjoissa (kuvio 2).

18S käytettiin sisäisenä kontrollina. Raji käytettiin positiivisena kontrollina. DNaasi käsiteltiin RNA lisäämättä käänteistranskriptaasia käytettiin negatiivisena kontrollina.

Raji solun käytettiin positiivisena kontrollina. GAPDH käytettiin sisäisenä kontrollina.

E2A, FOXO1 ja FOXP1 olivat paikallisia ytimiin syöpäsolujen

Tutkia lokalisoinnin E2A, FOXO1, FOXP1 ja NF-KB syöpäsoluissa, IF suoritettiin käyttäen vastaavien vasta-aineiden neljään syöpäsolulinjoissa. Tulokset osoittivat, että E2A ja FOXP1 olivat pääasiassa tumassa, kun taas NF-KB: n on ainoastaan ​​paikallista sytoplasmaan syöpäsolujen (kuvio 3). FOXO1 havaittiin translokoituvat välillä tumaan ja sytoplasmaan, jossa sijainti kulttuurista riippuen ja kasvuolosuhteet. Kun solut yhtenäisiksi, FOXO1 pääasiassa tumassa, kun se oli pääasiassa läsnä solulimassa, kun solut olivat harvassa. Koska transkriptio tekijät on tumassa, jotta säädellä geeniekspressiota, me vain keskittyneet E2A, FOXO1 ja FOXP1 toisessa osassa Tutkimuksemme.

A, normaali hiiri IgG käytettiin sijasta primaarista vasta-ainetta. B, ensisijainen vasta-aine oli hiiren anti-E2A. C, ensisijainen vasta-aine oli hiiren anti-NF-KB: n p65. A-C, sekundaarinen vasta-aine vuohen anti-hiiri-IgG-FITC: llä. D, kaniinin normaalilla IgG sijasta käytettiin primaarisen vasta-aineen. E, ensisijainen vasta-aine oli kanin anti-FOXO1. F, ensisijainen vasta-aine oli kanin anti-FOXP1. D-F, sekundaarinen vasta-aine vuohen anti-kani-IgG-TRITC. Samanlaisia ​​tuloksia saatiin A549-, PC3 ja MDA-MB-231-solulinjoja (tietoja ei esitetty).

yli-ilmentyminen E2A, FOXO1 tai Foxp1 ajan säänneltyjen RAG ilmentymisen

tutkia vaikutusta transkriptiotekijöiden E2A, FOXO1 ja FOXP1 RAG ilmaisun, A549 ja MCF-7-solut transfektoitiin ekspressiovektorin E47, E12, Foxp1A tai FOXO1. Tyhjän vektorin käytettiin negatiivisena kontrollina. Neljäkymmentäkahdeksan tuntia transfektion jälkeen, yhteensä proteiini uutettiin analyysiä varten E2A, FOXP1, FOXO1 ja RAG ilmentymisen Western blot -määritys. Tulokset osoittivat, että transfektio ekspressiovektorin E47, E12, Foxp1A tai FOXO1 kasvoi sekä RAG1 ja rag2 ilmaisuja (kuvio 4). Tämä tiedot osoittavat, että yli-ilmentyminen E2A, FOXO1 tai Foxp1 sääteli ilmentymistä RAG1 ja rag2 MCF-7-soluissa. Samanlaisia ​​tuloksia saatiin käyttämällä A549-solulinjaa (tuloksia ei ole esitetty).

MCF-7-solut transfektoitiin tyhjällä vektorilla tai transkriptiotekijän ekspressiovektoriin pIRES2-EGFP-hE47, pIRES2-EGFP-hE12, pcDNA3- GFP-FOXO1; AAA tai pcDNAI /NEO-5’HA-Foxp1A. 48 tuntia myöhemmin proteiinin kokonaismäärän MCF-7-solut kerättiin ja analysoitiin Western blot. GAPDH on esitetty latauskontrollina. Kokeet toistettiin kolme kertaa samanlaisin tuloksin. Samanlaisia ​​tuloksia saatiin A549-solulinja (tuloksia ei esitetty).

RNA-interferenssi E2A, FOXO1 tai FOXP1 alassäädetty RAG ilmaisu

lisätutkimuksia säätelytoimintaa E2A, FOXO1 ja FOXP1 ilmenemistä RAG, siRNA sekvenssejä E2A, FOXO1 tai FOXP1 transfektoitiin A549 ja MCF-7-soluissa. Epäspesifinen siRNA käytettiin negatiivisena kontrollina. 48 tuntia transfektion jälkeen, yhteensä proteiini uutettiin analysointiin E2A, FOXP1, FOXO1 ja RAG ilmaisun Western blot -määritys. Transfektion siRNA-sekvenssin E2A, FOXP1 tai FOXO1 havaittiin vähentävän ilmauksia sekä RAG1 ja rag2 (kuvio 5), mikä viittaa siihen, että hiljentäminen E2A, FOXO1 tai FOXP1 geenien down-regulation RAG1 ja rag2 ilmaisuja MCF-7-soluissa. Samanlaisia ​​tuloksia saatiin käytettäessä A549-solulinjaa (tuloksia ei ole esitetty).

MCF-7-solut transfektoitiin epäspesifinen kontrolli siRNA tai siRNA sekvenssi E2A, FOXO1 tai FOXP1. 48 tuntia myöhemmin proteiinin kokonaismäärän MCF-7-solut kerättiin ja analysoitiin Western blot. GAPDH on esitetty latauskontrollina. Kokeet toistettiin kolme kertaa samanlaisin tuloksin. Samanlaisia ​​tuloksia saatiin A549-solulinja (tietoja ei esitetty).

E2A, FOXO1 ja FOXP1 sidottu Erag in vivo

hiiren B-solujen transkriptiotekijöiden E2A, Foxo1 ja Foxp1 säädellä RAG ilmaus sitoutumalla Erag, Tehostaja- säätelevät RAG geenin ilmentymistä. Sen tutkimiseksi, ovatko nämä transkriptiotekijät käyttäytyvät samalla syöpäsoluissa, ChIP suoritettiin A549 ja MCF-7-soluissa. Erag alue 1 sisältää kolme sitoutumiskohtia E2A ja toinen sitoutumiskohta FOXO1 tai FOXP1, kun taas Erag alueella 3 ei sisällä sitoutumiskohdan E2A ja toinen sitoutumiskohta FOXO1 tai FOXP1 [25]. ChIP tulokset osoittivat, että histoni H3 molempien Erag alueen 1 ja 3 asetyloitiin, mikä osoittaa, että Erag oli avoimessa tai aktiivisessa tilassa. Lisäksi, transkriptiotekijöiden E2A, FOXO1 ja FOXP1 osoitettiin sitoutua Erag alue 1, mutta ei aluetta 3 (kuvio 6). Sekä solulinjat saatiin samanlaisia ​​tuloksia.

, ristisilloitettu chromatin eristetty MCF-7-solut immunosaostettiin joko isotyypin kontrolli-lgG tai anti-asetyyli-histoni H3 vasta-aine. Siihen liittyvä kromosomi-DNA-fragmentit monistettiin alukkeilla Erag alueen 1 ja 3. B-vasta-aineen immunosaostus oli anti-E2A, FOXO1 tai FOXP1. Kokeet toistettiin kolme kertaa samanlaisin tuloksin. Samanlaisia ​​tuloksia saatiin A549-solulinja (tuloksia ei esitetty).

Keskustelu

Äskettäin useita tutkimusryhmiä raportoitu, että V (D) J rekombinaatio ja RAG ilmaisun tapahtui syöpäsoluja. Kuitenkin mekanismi kontrolloida näitä ilmiöitä epiteelisolujen ei tällä hetkellä tiedetä. Tässä tutkimuksessa analogisesti molekyylimekanismi RAG ilmentymisen B-soluissa, tutkimme sääntelymekanismi RAG ilmentymistä syöpäsoluissa analysoimalla transkriptiotekijöiden E2A, Ikaros, PAX5β, FOXO1, FOXP1 ja NF-KB: n. Samanlainen niiden merkitys aktivointiin RAG ilmentymisen B-soluissa, havaitsimme, että E2A, FOXO1 ja FOXP1 säänneltyjen RAG ilmentymistä syöpäsoluissa sitoutumalla Erag.

E2A kuuluu luokkaan I helix-loop-helix (HLH) proteiineja, joka tunnetaan myös nimellä E proteiineja, koska niiden kyky sitoutua suhteellisen korkealla affiniteetilla palindromista DNA-sekvenssin CANNTG, kutsutaan E box-sivuston [33], [34]. E2A-geeni koodaa kahta E proteiineja, E12 ja E47, joita syntyy vaihtoehtoisten silmukoinnin eksonin koodauksen HLH verkkotunnuksen [35]. E12 ja E47 ovat ensisijaisesti transkription aktivaattoreita, jotka toimivat osittain rekrytoimalla koaktivaattoria proteiini p300 /CBP, joka puolestaan ​​rekrytoi histoni ase- tyylitransferaaseja ja RNA-polymeraasi II promoottori tai parantajia kohdegeenien [36], [37]. E2A uskotaan olevan keskeinen säätelijä B-solujen erilaistumista aktivoimalla ilmaus RAG: n ja muiden B lymfaattisen geenejä [34]. Yli-ilmentyminen E47 on aikaisemmin havaittu aktivoivan RAG1 ilmaisun ja IgH ituradan transkriptio fibroblasteissa [38]. Kohdunulkoinen ilmentymä E2A yhdessä RAG1 ja rag2 edistänyt sekä IgH ja IGL geeni uudelleenjärjestelyihin ei-lymfaattisen alkion munuaisen solulinjassa [39], [40]. Meidän havainto, että sekä RAG ja E2A proteiinit ilmennettiin syöpäsoluissa edistää ymmärrystä mekanismi V (D) J rekombinoinnin neoplastiset solut.

FOXO1 ja FOXP1 kuuluvat perheeseen Forkhead laatikko proteiineja, jotka sisältävät yhteisiä DNA-sitovan domeenin (DBD) kutsutaan forkhead laatikko tai siivekäs helix verkkotunnuksen [41]. FOXO1 voi translokoituvat tumasta sytoplasmaan jälkeen fosforyloituu Akt. Hiiren Foxp1 on neljä vaihtoehtoisesti liitettyjä isoformien, Foxp1A-Foxp1D [29]. Vapauttaminen FOXO1 ja FOXP1 oli osoitettu monissa syövän tyypit [41], [42]. Äskettäin tutkimuksessa osoitettiin Foxo1 ja Foxp1 säännelty RAG ilmentyminen hiiren B-solujen [24], [25]. Tässä olemme osoittaneet, että FOXO1 ja FOXP1 myös sääntelytehtävä RAG ilmentymistä syöpäsoluissa.

Tässä tutkimuksessa keskityttiin valikoituun määrään transkriptiotekijöiden ja totesi, että E2A, FOXO1 ja FOXP1 säänneltyjen RAG ilmaisun syöpäsoluja. Onko olemassa muita transkriptiotekijöitä mukana RAG ilmaisun vielä löytäjäänsä. Lisäksi, onko enemmän yhtäläisyyksiä geenin ilmentymisen välillä B-solujen ja syöpäsolujen voidaan löytää käyttämällä korkean tekniikoiden avulla. Aiemmin on raportoitu, että Ig-ilmentyminen edistää kasvaimen kasvua ja etenemistä [2], [43], [44]. Ottaen huomioon meidän tuloksia säätelytekijöitä aktivoiva RAG ilme, Ig ilmentymistä syöpäsoluissa voisi ohjata kohdistamalla ylävirtaan transkriptiotekijät lopulta estää syövän etenemiseen.

Kiitokset

Kiitämme tohtori Philip Tucker tarjoamisesta pcDNAI /NEO-5’HA-Foxp1A plasmidi, Dr. Barbara Kee varten MigR1-hE47 ja MigR1-hE12 plasmidit, ja Dr. William Sellers varten pcDNA3-GFP-FOXO1; AAA-plasmidin.