Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

kasvutekijän reseptorin (EGFR) aktivointi on rooli peräsuolen syöpä (CRC) syövän synnyn, ja anti-EGFR lääkkeitä käytetään hoidettaessa levinnyttä CRC. Yksi EGFR-ligandien on kasvaimeen liittyvä trypsinogeenin inhibiittori TATI, jota kutsutaan myös seriiniproteaasi-inhibiittori Kazal type1 (SPINK 1), jota osoittivat äskettäin olevan riippumaton prognostinen markkeri CRC.

Methods

Tutkimme ennusteen arvioinnissa immunohistokemiallisen ilmentymisen EGFR ja samanaikainen ilmentyminen EGFR ja TATI /SPINK1 sarjassa 619 peräsuolen syöpäpotilailla.

tulokset

Näistä näytteistä 92% oli positiivisia EGFR. EGFR + /TATI + nähtiin 62,8%, EGFR + /TATI- vuonna 29,5%, EGFR- /TATI + 4,9%, ja EGFR- /TATI- 2,7%: lla potilaista. EGFR korreloi WHO luokka (p = 0,040). Vuonna univariate analyysi, EGFR korreloi suotuisa säilymiseen (p = 0,006). EGFR + /TATI + potilailla havaittiin parempi selviytyminen kuin teki ne, joilla muiden yhdistelmien (p 0,001). Vuonna Monimuuttuja-analyysissä, EGFR + /TATI + oli itsenäinen ennustetekijä suotuisan ennusteen (p 0,001).

Johtopäätös

Samanaikainen positiivisuutta EGFR ja TATI /SPINK1 ennustaa myönteisen ennusteen CRC.

Citation: Koskensalo S, Louhimo J, Hagström J, Lundin M, Stenman UH, Haglund C (2013) samanaikainen Kasvain ilmentäminen EGFR ja TATI /SPINK1 Associates Better ennustetta peräsuolen syövän. PLoS ONE 8 (10): e76906. doi: 10,1371 /journal.pone.0076906

Editor: Ichiro Aoki, Yokohama City University School of Medicine, Japani

vastaanotettu: toukokuu 31, 2013; Hyväksytty: 29. 2013. Julkaistu: 25 lokakuu 2013

Copyright: © 2013 Koskensalo et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Finska Läkaresällskapet, Medicinska Understösföreningen Liv och Hälsa ja Sigrid Juseliuksen säätiö. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on maailman kolmanneksi yleisin maligniteetti [1], [2]. Suomessa, ilmaantuvuus on 30/100 000 /vuosi [3]. Tärkein ennustetekijä CRC on kasvain vaiheessa.

prognoosi potilaiden paikallisten CRC on hyvä, 5-vuoden pysyvyys oli 80-90%, ja imusolmukkeisiin kasvaimia se on 60-70%, kun taas kasvaimista etäispesäkkeitä se on alle 10%) [4] – [6]. Potilaat, joilla on vaiheen III-IV (Dukes C ja D) tauti saavat yleensä adjuvanttihoitoa. Vaiheessa II (Dukes B) tauti, kemoterapia ei käytetä rutiininomaisesti vaikka jotkut näistä potilaista ilmeisesti hyötyisivät adjuvanttihoito. Tunnistamaan potilaita suuri riski vaatii ylimääräistä ennustavia tekijöitä kuten biomarkkereita.

kasvutekijän reseptorin (EGFR), tavoite edenneen kolorektaalisyövän, kuuluu läpäisevä glykoproteiini ErbB -tyrosiinikinaasireseptorin perhe. Ligandi-reseptori-vuorovaikutus ja dimerisaatiota reseptorin johtaa tyrosiinin autofosforylaatiota ja aktivoi intrasellulaarisen signaalireitin, joka edistää solun jakautumista ja muutto apoptoosin inhibitio, ja angiogeneesi [7]. Monoklonaalisia vasta-aineita setuksimabin ja panitumumabipitoisuus sitoutuvat EGFR ja poistaa aktivointi tyrosiinikinaasiaktiivisuuden ja loppupään signalointireitteihin.

Mutaatiot molekyylitason reitit aktivoidaan EGFR voi edistää syövän synnyn. CRC, yleisimmät mutaatiot koskevat KRAS-geeni esiintyy noin 40%: CRC tapauksista [8], [9]. Mutaatiot poistaa guanosiinitrifosfataasi (GTPaasi) aktiivisuutta, mikä johtaa kertyminen aktivoitua KRAS. Nämä KRAS mutaatiot johtavat vasteen puuttumisen EGFR hoito [10], [11].

Yhdessä EGF, amfireguliini, transformoiva kasvutekijä (TGF) α, epiregulin, beetaselluliinilla, hepariinia sitovat EGF, ja epigen aktivoida EGFR [12]. Äskettäin haiman adenokarsinoomat, seriiniproteaasi-inhibiittori Kazal type1 (SPINK 1), jota kutsutaan myös haiman secretory trypsiini-inhibiittori (PstI) ja kasvaimeen liittyviä trypsinogeeni estäjä (TATI), on osoitettu aktivoivan EGFR [13]. TATI /SPINK1 ilmaistaan ​​yhdessä EGFR haiman adenokarsinooman. EGF: n ja TATI /SPINK1 jakaa noin 50% aminohappohomologia [14], ja sitoutumisaffiniteetti TATI /SPINK1 EGFR on noin puolet, että EGF: n [13].

Olemme äskettäin osoittaneet, että kudos ilmaus TATI /SPINK1 on osoitus myönteisen ennusteen peräsuolen syöpäpotilailla [15]. Esillä olevassa tutkimuksessa arvioitiin suhdetta EGFR ja TATI ilmaisun ja sen mahdollista ennusteen arvioinnissa kolorektaalisyövässä.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat

Kliiniset tietoja oli saatavissa 643 peräkkäisen potilailla, jotka leikattiin histologisesti vahvistettu peräsuolen syöpä osastolla kirurgian Meilahden sairaala, HYKS, vuosien 1982 ja 1998 Complete kliiniset tiedot ja arkistointia kudosnäytteet olivat käytettävissä 623 tapausta, 333 heistä mies. Mediaani-ikä oli 65,9 vuotta (vaihteluväli 22,7-90,3), ja mediaani seuranta-aika 4,81 vuotta (vaihteluväli 0-25,8). Survival ja Kuolemansyytietoja vasta maaliskuussa 2011, ja saatu Väestörekisterikeskus Suomen ja Tilastokeskus Suomi. Diagnoosi ja lavastus suoritettiin mukaisesti muunnetun Dukes luokitus [16]. Tutkimus on hyväksynyt paikallisen eettisen komitean ja noudattaa Helsingin julistuksen (Dnro HUS 226 /E6 /06) ja kansallisen valvontaviranomaisen Sosiaali- ja terveysalan. Kliinis potilaiden ominaisuuksiin on kuvattu taulukossa 1.

kudosnäytteitä ja valmistelu TMA lohkojen

Formaliinifiksoidusta ja parafinoidut kirurginen kudosnäytteitä kerättiin arkistoista Department Patologian, Helsingin yliopisto. Histopatologisesti edustavat alueet kasvaimen näytteet määriteltiin ja merkitty H tilastollista analyysia potilaat jaettiin kahteen ryhmään: TATI- (pisteet 0) ja TATI + (tulokset 1-3).

Tilastollinen

analysoidaan erikseen EGFR värjäystä yksin ja yhdessä TATI /SPINK1 värjäytymistä (EGFR +/-, TATI +/- tai EGFR-TATI +/-). Yhdistyksen välinen immunoexpression ja kliinis muuttujia arvioitiin, että χ

2 testiä tai Fisherin testiä tapauksessa pieni odotettu taajuuksia. Survival analysoitiin Kaplan-Meier-menetelmällä. Tilastollisesti merkitsevä kovariantteja sisään yhden muuttujan analyysiin, analysoitiin monimuuttuja selviytyminen analyysin Coxin suhteellisten riskien mallia. A s 0,05 pidettiin merkittävänä. Tilastolliset analyysit tehtiin IBM SPSS Statistics 20,0 ohjelmistoja.

Tulokset

immuunivärjäytyminen EGFR

luotettava arviointi Immunovärjäyksen oli mahdollista 520 623 näytettä. 69 (13,3%), sytoplasman EGFR immunopositivity pisteytettiin korkea (3), 172 (33,1%) kuin kohtalainen (2), ja 236 (45,4%) kuin heikko (1), kun taas 43 (8,3%) osoitti no EGFR immunopositivity (Fig. 1). Arvioimme vain sytoplasminen värjäys, koska jos sytoplasmaan on positiivinen, kalvo värjäytyminen ei sovellu luotettavan arvioinnin.

EGFR immunoreaktiivisuus liittyy kasvaimen; positiivisuus havaittiin useammin korkeasti ja kohtuullisesti erilaistunut kuin eriytymättömissä kasvaimet (p = 0,040). EGFR osoittanut mitään yhdessä Dukes ”vaiheessa, mutta positiivisuus oli usein läsnä paikallisissa (Dukes A-B) kuin metastasized kasvaimet (Dukes C-D) (94,4% vs. 88,8%, p = 0,021) (taulukko 1 ).

Samanaikainen immuunivärjäykseen EGFR ja TATI /SPINK1

Evaluation of immuunivärjäykseen sekä EGFR ja TATI /SPINK1 oli mahdollista 511 623 näytettä. Yhdistelmä EGFR + /TATI + oli läsnä 321 (62,8%), EGFR + /TATI- 151 (29,5%), EGFR-TATI + 25 (4,9%), ja EGFR- /TATI- 14 (2,7%) potilaalla.

EGFR + /TATI + korreloi histologia esiintyy useammin adenokarsinooman kuin muissa histologisia kasvaintyypeissä (p = 0,005), ja vaihtelivat WHO luokka, joka useimmiten esiintyy erittäin ja kohtalaisesti eriytetty kasvaimet (p 0,001) ( taulukko 2).

Prognostic arvon EGFR

univariate analyysi, EGFR immunoexpression (p = 0,006), potilaan iän (p = 0,009), WHO luokka (p 0,001) ja Dukes ”vaihe (p 0,001), joka liittyy ennusteeseen. Viiden vuoden eloonjääminen oli 59,9% vuonna EGFR + potilaista ja 40,5% vuonna EGFR- potilaista (taulukko 3).

monimuuttuja eloonjääminen analyysi, EGFR (p = 0,023), potilaiden ikä (p 0,001 ), Dukes ”vaihe (p 0,001), kasvaimen sijainti (p = 0,001), ja WHO luokka (p = 0,033) olivat riippumattomia ennustetekijöitä (taulukko 4).

Prognostic rooli yhdistelmän EGFR ja TATI /SPINK1

samanaikainen ilmentyminen EGFR ja TATI /SPINK1 korreloi ennusteeseen, 5-vuoden pysyvyys oli 65,0% vuonna EGFR + /TATI + potilasta, 47,7% vuonna EGFR + /TATI-, 43,2% vuonna EGFR- /TATI +, ja 42,4%: in EGFR- /TATI- potilailla (p 0,001) (taulukko 4, kuvio 2). Korkea ikä (p = 0,009), kehittynyt Dukes ’vaiheessa (p 0,001), ja kehittyneet WHO luokka (p 0,001) korreloi huonoon ennusteeseen (taulukko 5).

monimuuttuja selviytyminen analyysi, EGFR /TATI lauseke (p 0,001), ikä (p 0,001), Dukes ”vaihe (p 0,001), ja sijainti (p = 0,003) olivat riippumattomia ennustetekijöitä (taulukko 6).

keskustelu

Olemme hiljattain osoitti, että TATI on itsenäinen ennustetekijä peräsuolen syövän, korkea kudosekspressiotutkimuksen olla mukana suotuisa ennuste. Tässä osoitamme, että samanaikainen immunoexpression EGFR ja TATI on riippumaton ennustetekijä suotuisia hengissä peräsuolen syöpä, ja se on vahvempi ennustetekijä kuin EGFR tai TATI /SPINK1 yksin.

yhteensopivuutta aikaisempien havaintojen me Havaittu EGFR yli-ilmentyminen kolorektaalisyövässä näytteissä, [17], [18]. EGFR immunoexpression korreloivat merkitsevästi kasvaimen, joka usein positiivisia korkea ja kohtalaisen eriytetty kasvaimet, kuten on raportoitu aiemmin [19]. Kääntäen, EGFR on myös osoitettu korreloivan huonon eriyttäminen [18]. Kuten muissakin tutkimuksissa, löysimme korrelaatio histologia [20], [21] välillä ei ole voitu EGFR immunoexpression ja Dukes ”vaiheessa. Tämä on yhdenmukaiset tutkimuksesta Giralt [20], kun taas Spano ym. raportoitu vahvempi EGFR yli-ilmentymisen T3 kuin T4 Kolorektaalituumorien [17]. Deng et ai. totesi 94 peräsuolen syöpäpotilailla, yhdistyksen välillä korkea ilmaisun ja korkea kasvain vaiheessa [22].

Tässä osoitamme, että EGFR immunoexpression on riippumaton markkeri suotuisan ennusteen peräsuolen syöpäpotilailla. Tuloksemme eroavat muiden; EGFR ei korreloinut eloonjäämisen tutkimus 249 [19] ja 132 CRC potilaille [17] tai 87 Dukes C CRC potilailla, [6]. Kuitenkin joissakin tutkimuksissa erityisesti paksusuolen syövän, EGFR korreloi huonoon ennusteeseen. Tutkimuksessa 149 potilasta, EGFR oli riippumaton markkeri haitallisia ennuste, mutta EGFR havaittiin vain 35,6% näytteistä, mikä on vähemmän kuin yleensä on raportoitu [23]. Resnick, et ai. osoitti myös yhdistyksen välillä vahva EGFR ja huonon ennusteen paksusuolensyöpä [24]. Vuonna ala-analyysissä myös vain paksusuolensyöpä, meidän tutkimus osoitti yhdistyksen välillä EGFR ja parantunut selviytymistä, mutta ero ei ollut merkittävä (tuloksia ei ole esitetty).

alaryhmäanalyysi peräsuolen syöpä, löysimme huomattavasti parempi eloonjäämisprosentti (p = 0,001), potilailla, joilla on EGFR positiivisuus (tuloksia ei ole esitetty). 87 peräsuolen syöpä potilailla, jotka olivat saaneet ennen leikkausta sädehoitoa, Giralt ym raportoitu EGFR esikäsittelyssä biopsies- mutta ei kirurgisen samples- yhdistää haitallisia ennusteeseen [20]. Eräässä tutkimuksessa Fernebro et al. on 269 peräsuolen syöpäpotilaita, ei yhdistys havaittiin etäpesäkkeitä elinaika [25]. Tutkimuksessa, 40 peräsuolen syöpäpotilailla, Yasuda et al. löydetty vähentämällä EGFR tasoilla jälkeen sädehoitoa, mutta EGFR ei ennustetyövälineenä merkki [26]. Sädehoito voi sekä vähentää ja lisätä EGFR [27], [20]. Emme analysoida EGFR esikäsittelyssä koepaloja, mutta eroa EGFR välille syntyi peräsuolen saavilla syöpäpotilailla tai eivät saa ennen leikkausta sädehoitoa (tuloksia ei ole esitetty).

EGFR kohdistetut hoidot on käytetty metastasized paksusuolen ja peräsuolen syöpiä, mutta arvo EGFR immunoexpression ennustaa tehokkuutta adjuvanttihoitoa on kiistanalainen. Mielenkiintoista, EGFR-antagonisti setuksimabi on osoittautunut tehokkaaksi jopa vastoin EGFR-syöpäkasvain [28]. Yksi selitys tälle voi olla se, että anti-EGFR- hoidon kohdistettu etäpesäkkeitä kasvaimia, ja korrelaatio EGFR immunoexpression vuonna primaarikasvaimen ja metastaattinen vaurio on epäselvä ja vaihtelee tutkimuksissa [19], [29], [22]. Lisäksi, EGFR-positiivisia kasvaimia eivät aina vastaa setuksimabihoidon [30]. Lisäksi kasvaimista KRAS mutaatioita on havaittu vastaavan huonosti EGFR hoito [10], [11], ja analyysi KRAS mutaatiostatuksesta riippumatta suositellaan kaikille metastaattisen CRC [31]. KRAS mutaatiot kodonissa 12 korreloi haitallisten ennusteeseen [31], [32]. BRAF on toinen vaihe EGFR- välittämän reitin. Mutatoidut BRAF korreloi haitallisten ennusteeseen [33], mutta potilailla, joilla oli BRAF-mutaatio voi hyötyä EGFR-kohdistettujen hoitojen [31]. Uutta menetelmää, joka näyttää olevan parempi analyysi KRAS mutaatioita valita potilaiden anti-EGFR-hoito on yhdistetty analyysi KRAS mutaatioiden ja EGFR-geenin kopioluvun [34].

PIK3CA (fosfatidyyli-4, 5-bisfosfonaattien 3-kinaasi, katalyyttinen alayksikkö alfa polypeptidigeenituotetta) reitti on toinen alavirtaan reitin EGFR signalointi. Mutaatioita PIK3CA geeni voidaan edistää pahanlaatuisiksi [35]. Aspiriinin käyttö estää PIK3CA koulutusjakson, ja korreloi paremmin ennusteeseen potilailla, joilla mutatoitunut geeni [36]. Valitettavasti tiedot aspiriinin käyttö ei saatavilla meidän potilasasiakirjoihin.

Ozaki et al. osoittivat, että EGFR ja TATI /SPINK1 ovat yhteistyössä ilmaistaan ​​haimasyövän ja että SPINK1 stimuloi haiman syöpäsoluja kautta EGFR aktivaation [13]. Täällä osoittavat, että noin kaksi kolmesta kolorektaalisyöpää näytettä EGFR ja TATI /SPINK1 ovat koekspressoi-. Olemme osoittaneet aiemmin, että korkea TATI /SPINK1 kudosekspressiotutkimuksen korreloi paremmin ennusteeseen CRC; täällä osoitamme, että samanaikainen ilmentyminen EGFR ja TATI /SPINK1 on vielä parempi merkkiaine parantaa selviytymistä. On tunnettua, että on olemassa positiivinen ja negatiivinen palaute silmukoita sisällä EGFR-välitteisten reittien riippuen solutyypistä, ja yksi syy parempaan ennusteeseen peräsuolen syöpä voi olla, että sitoutuminen TATI johtaa inhibitioon kaskadeja johtaa pahanlaatuisiin. Lisäksi, TATI sitoutuminen EGFR voi inhiboida vahvempi aktivoivan ligandien.

Näin ollen on todennäköistä, että TATI /SPINK1 ja vuorovaikutus TATI /SPINK1 ja EGFR pelata erilaisia ​​rooleja CRC kuin haiman cancer.Interestingly, ilmaus TATI /SPINK1 syöpäkudoksen liittyy myös hyvän ennusteen mahasyövässä [37] ja menetys TATI /SPINK1 ilmaisu korreloi aggressiivinen tauti virtsarakon syöpä [38]. Tämä osoittaa, että TATI /SPINK1 kohdistaa eri toimintoja eri sairauksista. TATI /SPINK1 ei ole vain aktivaattori EGFR, vaan myös tehokas trypsiinin inhibiittori, ja trypsiini ilmaistaan ​​useita kasvaimia [38]. Näin ollen ei ole yllättävää, jos se aiheuttaa myös eri toimintoja eri kasvaimissa. Toistaiseksi EGFR immunohistokemia ei ole väline ennustamiseksi joista potilaat, jotka todennäköisesti hyötyvät EGFR kohdistettuja lisähoito. Olisi mielenkiintoista tutkia, onko lisääminen TATI /SPINK1 kudoksen analyysi plus KRAS-mutaation analyysi ja EGFR geenikopiomäärä arviointi voisi entisestään parantaa lupaavia tuloksia Ålgars et al. [34].

Yhteenvetona parhaan tietomme mukaan osoitamme ensimmäistä kertaa, että samanaikainen immunoexpression EGFR ja TATI /SPINK1 on itsenäinen ennustetekijöitä merkkiaine suotuisan ennusteen peräsuolen syöpäpotilailla. Yhdistelmä on vahvempi ennustetyövälineenä kuin joko TATI /SPINK1 tai EGFR yksin. Lisätutkimukset ovat tarpeen ymmärtää paremmin yhdistyksen välillä TATI /SPINK1 ja EGFR kolorektaalisyövässä ja arvioimiseen mahdollisesta käytöstä tämän markkeriyhdistelmä ennustaa hoitovastetta.

Kiitokset

Kiitos Päivi Peltokangas Tuire Koski, ja Elina Aspiala erinomaisen teknistä tukea.