Krooninen sairaus

tiivistelmä

E-kadheriinin usein menetetty epiteelin-mesenkymaalitransitioon ja etenemistä epiteelin kasvaimien syntyyn. Löysimme markkeri epiteelin-mesenkymaalitransitioon, CD44, säädellään ylöspäin vasteena menettänyt E-kadheriinin ruokatorven solulinjoissa ja syöpä. Menetys E-kadheriinin ilmentymisen korreloi voimistunutta ilmentymistä CD44 standardin isoformin. Käyttämällä organotyyppisen rekonstruoida mallia, osoitamme lisääntynyt CD44 ilmentymistä alueilla soluinvaasiota liittyy MMP-9 eturintamassa. Lisäksi Aktiviini à lisää soluinvaasiota läpi CD44 ylösajon jälkeen E-kadheriinin menetys. Yhdessä meidän tulokset tarjoavat toiminnallista näyttöä CD44 säätelyyn ylöspäin ruokatorven syöpään hyökkäystä.

Citation: Le Bras GF, Allison GL, Richards NF, Ansari SS, Washington MK, Andl CD (2011) CD44 säätelyyn ylöspäin E- kadheriinin-Negative Ruokatorven Syövät Results in Cell Invasion. PLoS ONE 6 (11): e27063. doi: 10,1371 /journal.pone.0027063

Editor: Adam I. Marcus, Emory University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 29 heinäkuu 2011; Hyväksytty: 10 lokakuu 2011; Julkaistu: 01 marraskuu 2011

Copyright: © 2011 Le Bras et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: CDA sen vastaanottajalle Research Scholar Award American Gastroenterologinen Association (AGA) /Foundation for Digestive Health and Nutrition (FDHN) ja tukee National Institutes of Health (DK075379). Haluamme kiittää Immunohistologia Core ja Translational Core Vanderbilt University leikkaamista varten ja IHC värjäykset, ja muut Core tilat tuetaan Digestive Disease Research Center (P30-DK058404) ja Vanderbilt Ingram Cancer Center Support apurahan (P30-CA068485). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

CD44, tai Indian veriryhmä, on läpäisevä glykoproteiini ja reseptori hyaluronihappoa (HA), joka on merkittävä osa soluväliaineen [1]. CD44: lla on tärkeä rooli kudoksen eheyden ja on mukana useita toimintoja, jotka liittyvät syövän etenemisessä, kuten solumigraation [2], resistenssin apoptoosia [3] ja esittelyä kasvutekijöiden ja proteaasit [4], [5]. Lisäksi, CD44 on tunnistettu spesifinen merkki syövän kantasoluja [6], [7] ja kasvainsolujen käynnissä epiteelin-mesenkymaalitransitioon (EMT) kaltainen prosessi, [8]. Eri isoformit on muunnettu, koska vaihtoehtoisen silmukoinnin eksonien 6-15 [9]. Standardi muoto CD44 (CD44s) ajatellaan ilmentyvän, kun taas jotkut variantti muotoja, CD44v, on liittynyt etäpesäkkeitä [10].

Merkittävä askel EMT on menetys E-kadheriinin. E-kadheriinin on keskeinen osa vyöliitos ja välittää soluadheesiota vuorovaikutuksessa sytoplasmisen proteiinien p-kateniinin [11] ja p120 [12]. Vyöliitos on kytketty aktiinitukirankaan läpi sytoplasman linkkereitä, kuten α-kateniinin [13]. E-kadheriinin voidaan kopiointia tukahdutettu kautta Snail1, Snail2, Twist, Zeb1 ja Zeb2, jota voidaan säädellä TGFli [14]. Stimulointi rintasyövän solujen TGFli tuloksiin yhteistyössä lokalisointi matriisin metalloproteinaasi MT1-MMP ja CD44 on solukalvon ja indusoi CD44 pilkkominen johti korkeaan liukoisen CD44 [15]. Toisaalta, vuorovaikutus hyaluronaanin ja CD44 moduloi TGFp-reseptorin kaupan, joka voi säädellä TGF signalointi [16].

aikana EMT, epiteelisolut ilmentävät merkkiaineita, kuten CD44, joiden tiedetään ilmentyvän syövän kantasoluja [ ,,,0],8]. Aktiviini A: lla on osoitettu olevan keskeinen säätelijä stemness [17]. Aktiviini A, jäsen TGFp superperheen, on myös kuvattu vaikuttavan kehitykseen, hematopoieesin ja kasvaimen kehittymisen [18] – [24]. Siksi halusimme selvittää aktiviini indusoi EMT ruokatorven soluissa ja siten yhdistää induktio solun invaasion aktiviini A ja CD44 ilme.

Olemme aiemmin osoittaneet koordinoitua menetys E-kadheriinin ja TGFp-reseptorin II (TGFpRII) ruokatorven syöpä [25]. Muut raportit ovat osoittaneet, että on tärkeää CD44 ruokatorven levyepiteelikarsinooma syöpä on osoitettu suurempaa ilmaus CD44v6 [26], [27], mutta sen vaikutus syövän leviämisen edelleen kiistanalainen. Siksi tavoitteena oli tutkia CD44 ilmaisun ruokatorven levyepiteelillä

in vivo

ja

in vitro

. Tässä tutkimuksessa osoitamme, että CD44 säätelyä liittyy E-kadheriinin tappio ensisijainen ruokatorven kasvainkudoksissa ja syöpäsolulinjoissa. Toiminnallisesti, me osoitamme, että aktiviini signaloinninohjausyksikkö puuttuessa E-kadheriinin voi ylössäätää CD44. Lisäksi CD44 ankkurit MMP-9 leviämisrintamassa kääntää lisääntynyt solujen invaasiota. Nämä tulokset ovat tärkeitä myös uusi rooli aktiviinin A induktioon EMT kautta säätelyä CD44.

Methods

Soluviljely

Ensisijainen ruokatorven epiteelisolujen (keratinosyyttien) ihmisen normaalista ruokatorven määritettiin kuten aiemmin on kuvattu [25]. Lyhyesti, supernatantit sisältävät pFB-neo retrovirus, joka koodaa joko koko pituudeltaan E-kadheriinin tai dominoiva negatiivinen mutantti E-kadheriinin, joista puuttuu sytoplasminen häntä (nimetty EY) käytettiin transfektioon hTERT kuolemattomiksi, mutta ei-transformoitu, ruokatorven epiteelisolut [28]. Tyhjä pFBneo käytettiin kontrollina. Lisäksi määräävä-negatiivisia mutantti TGFpRII (lahja Dr. H. Moses, Vanderbilt University, Nashville, TN), subkloonattiin pBabe puro, tuotettiin ECdnT soluihin ja tyhjät pBabe Puro kontrollina. Täyspitkä E-kadheriinin in pFBneo käytettiin myös palauttaa E-kadheriinin ilmentymisen TE-8 ja FLO-1-soluissa. Sikiön ruokatorven fibroblasteja kasvatettiin DMEM: ssä, jossa oli 10% naudan sikiön seerumia (FBS, Hyclone, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA), 100 yksikköä /ml penisilliiniä ja 100 ug /ml streptomysiiniä (Gibco, Invitrogen, Carlsbad, CA). Ruokatorven levyepiteelikarsinoomasolu linjat, TE-solut olivat ystävällinen lahja tohtoreilta. Rustgi ja Nakagawa (University of Pennsylvania, Philadelphia, PA). Ruokatorven adenokarsinooma solulinjat OE33, FLO-1 ja SK-GT-4 [29] – [31] ja pään ja kaulan alueen syöpä solulinjoja JHU-012 ja JHU-013 kehitettiin ensisijaisen pään ja kaulan okasolusyöpä Liiketoimintaryhmän pään ja kaulan Cancer Research at Johns Hopkins University.

E-kadheriinin esto, soluja ympättiin tiheydellä 2x 10

5 solua per kuoppa 6- kuoppaisella levyllä. 24 tunnin kuluttua alusta vaihdettiin seerumittomaan DMEM ja solut transfektoitiin lopullinen konsentraatio 10 nM siRNA käyttäen kalsiumfosfaattitransfektiota (400 ui RNAasi-vapaata vettä sekoitettiin 50 ui 2,5 M CaCl

2, 50 ui 2 uM siRNA 500 ui HBSP2x (280 mM NaCl, 1,5 mM NA

2PO

42H

2O, 12 mM glukoosi, 10 mM KCL, 50 mM HEPES pH7.05 500 ml RNaasi- vapaa vesi)). siRNA saatiin Qiagen (Qiagen, Valencia, CA), Hs-CDH1_12 (SI1) ja Hs_CDH1_13 (SI2) käytettiin vastaan ​​E-kadheriinin ja AllStars negatiivinen, ei-hiljentäminen siRNA koettimia käytettiin ohjaus (ctrl). Sillä stimulaatio, 20 ng /ml aktiviini A (R Scientific Corp., Westbury, NY), joka sisältää 80 ruokatorven levyepiteelikarsinooma syöpä formaliinilla parafiiniin upotetut (FFPE) kudoksiin 40 potilasta ja 4 normaalit kontrollit käytettiin immunhistochemical värjäystä. Yhdessä tietoja voitaisiin kerätä 166 squamous kasvainnäytteet, 2 tapauksissa etenemistä normaalista, kohdunkaulan

in situ

ja ESCC, ja lisäksi normaali kudos valvontaa.

Sata-ja- kolmekymmentä kolme ruokatorven adenokarsinooma (EAC) FFPE näytteet analysoitiin sen jälkeen, kun immunohistokemiallisella värjäyksellä. Nämä näytteet saatiin arkistoista osastojen patologian Vanderbilt University (Nashville, TN, USA), Otto-von-Guericke University (Magdeburgin, Saksa) ja päässä CHTN [33]. Histopatologisia diagnoosi Barrettin ruokatorvi, dysplasia ja ruokatorven adenokarsinooma varmistettiin perusteella H anti-CD44-kloonin 2C5 (R CD44 F10-44-2 ja α-tubuliinin (Abcam, Cambridge, MA) käytettiin immunohistokemia FFPE ja Western Blot, vastaavasti; E-kadheriinin hankittiin BD Bioscience (Franklin Lakes, NJ), β-aktiini ja αSMA klooni 1A4 molemmat hankittiin Sigmalta (Saint Louis, MO), anti-MMP-9 Calbiochem (EMD Chemicals, Rockland, MA); S100A4 on Thermo Fisher Scientific (Fremont, CA) ja vimentiinista klooni V9 Santa Cruz Biotechnology Inc. (Santa Cruz, CA).

immunohistokemia ja Immunofluoresenssikoe

Immunohistokemia suoritettiin VECTA Elite kit (Vector Laboratories, Burlingame, CA) noudattaen valmistajan protokollaa käyttämällä reagensseja. Primaarista vasta-ainetta inkuboitiin yön yli 4 ° C: ssa ja sekundäärinen vasta-aine 30 minuutin ajan 37 ° C: ssa. Sitten signaali kehitettiin käyttämällä DAB substraattipakkausta peroksidaasin. Sillä immunof- värjäys, biotinyloitu sekundaarinen vasta-aine havaittiin käyttäen Texas-Red-streptavidiini tai FITC-etiketti sekundaarista vasta-ainetta. Stained leikkeet kiinnitettiin DAPI sisältävien kiinnitysväliaine.

Zymografia ja in situ zymografian

kasvatusaine organotyyppisiä kasvatettuna seerumittomissa olosuhteissa 48 tuntia erotettiin 10% akryyliamidigeelille jotka sisältävät gelatiinia 4 ° C: ssa. Geelit värjättiin Coomassie-sinisellä R250: ssa 2 tuntia ja ylimäärä värjäytymistä poistettiin poistetaan väri puskurilla (10% etikkahappoa 20% metanolia). Kuvat otettiin käyttäen Gel Doc ™ XR (Bio Rad, Hercules, CA).

in situ zymografian, DQ-liivate fluoreseiini konjugaatti (Molecular Probes, Invitrogen, Carlsbad, CA) suspendoitiin uudelleen 1 ml: aan deionisoitua vettä pitoisuutena 1 mg /ml. 100 ug /ml DQ-Gelatiinia on käytetty päällekkäin 5 mikronin paksuinen jääleikkeiden organotyyppisten viljelmien 18 tunnin ajan 37 ° C: ssa. Fluoreseiini signaali osiin kuvioitiin käyttämällä fluoresenssimikroskooppia (Zeiss, Thornwood, NY).

Western blotting

Western blotit suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [35]. Kokeet toistettiin ainakin kahdesti.

Tulokset

Ensisijainen ihmisen ruokatorven kasvainten osoittavat käänteistä ilmentyminen E-kadheriinin ja CD44

määrittämiseksi roolin CD44 ruokatorven soluinvaasiota ja EMT, teimme immunohistokemiallisella värjäyksellä E-kadheriinin ja CD44 on kudossiruina 166 okasolusyöpä (SCC) ja 131 adenokarsinoomat. Kahden ruokatorven SCC potilaita, edustavien näytteiden etenemistä normaalista sinoomaan

in situ

(CIS) ja myöhemmin ESCC (Fig. 1A-1C), havaitsimme asteittaisen lisääntymisen CD44 ilmaisua. Kaiken kaikkiaan E-kadheriinin oli yleensä rajattu vain harvaan tai puuttuu CD44 ilmentymisen normaalissa epiteelissä (kuvio. 1D, E) ja 20 166: sta kasvaimia. Ruokatorven SCC, havaitsimme säätelyä CD44 puuttuessa E-kadheriinin 54%: n kasvain (90 166: sta kasvaimet). Yhdessä 110 166: sta (66%, p 0,02) meidän kliinisissä näytteissä näkyy käänteistä suhdetta E-kadheriinin ja CD44. Ruokatorven adenokarsinooma näytteet osoittivat käänteinen korrelaatio E-kadheriinin ja CD44 ilmaisun 63 ulos 131 näytettä (48%), jossa 41 näytettä, joilla on perusteellinen E-kadheriinin, mutta ei CD44 ilme. Kaksikymmentäkaksi näytettä oli lisääntynyt CD44 ilmaisun ja ovat negatiivisia E-kadheriinin. Yhdessä olemme osoittaneet tilastollisesti merkitsevä (p 0,05) käänteinen korrelaatio ilmentämiseen E-kadheriinin ja CD44. Kuvia edustaja immunohistokemiallinen värjäykset kasvainkudosnäytteet osoittaa yhdistyksen E-kadheriinin ja CD44 on esitetty kuvassa. 1 F-I.

IHC anti-CD44-vasta-aine osoittaa lisääntynyt CD44 ilmaisu etenemisen aikana normaalista (A) karsinooma

in situ,

CIS (B), ja kasvaimen (C). Vasta-ainetta E-kadheriinin ja CD44 osoittavat ilmentymistä E-kadheriinin (D) ja ilman CD44 (E) normaalissa epiteelissä. EAC kudoksiin säilytetään E-kadheriinin ilmentymisen (F, katkoviiva musta viiva) signaalin CD44 on alhainen (G). (H) Loss E-kadheriinin liittyy voimakas signaali CD44 (I). Mittakaava on 50 mikronia.

E-kadheriinin-negatiivinen ruokatorven syöpä solulinjoja osoittavat lisääntynyt CD44 ilmaisu

tutkimiseksi käänteinen korrelaatio E-kadheriinin kanssa CD44 ruokatorven syöpä solulinjoissa kartoitettiin ruokatorven okasolusyöpä solulinjoja (TE-1, -7, -8, -11 ja -12), pään ja kaulan levy- syöpäsolulinjoista (JHU-012, JHU-013), samoin kuin adenokarsinooma solulinjoja (FLO-1, OE33 ja SK-GT-4) Western Blot E-kadheriinin ja CD44 ilmaisun sekä TGFpRII ja vimentiinista. Vaikka standardin muodossa CD44 (CD44s) ilmaistaan ​​mesenkyymisolujen, jotkut variantti muotoja, CD44v, ilmentyvät epiteelisoluissa [36]. Olemme havainneet, että solut säilytetään E-kadheriinin ilmentymisen oli alhaisempi standardi (85 kDa: n puutteen vuoksi eksonin 6-15) ja variantti (150 kDa) ja CD44. Menetys E-kadheriinin korreloi lisääntyneen ilmentymisen CD44s ja ilmentymisen lisääntyminen EMT-markkerin vimentiinista (Fig. 2A). Sen määrittämiseksi, palauttaminen E-kadheriinin voi vaikuttaa ilmaus CD44s ja CD44v, transfektoimme TE-8 ja FLO-1 solulinjat, sekä ilmaista alhainen E-kadheriinin, jossa täyspitkä E-kadheriinin. Kun palauttaminen E-kadheriinin ilmentymisen, yleinen taso CD44-ilmentyminen väheni, mutta variantti (epiteelin) muoto (125 kDa) kasvoi (Fig. 2B).

(A) Western blot analyysi ruokatorven squamous sinoomasolulinjoja (TE-1 -7, -8, -11, ja -12), ruokatorven adenokarsinooma solulinjoja (FLO-1, OE33, SK-GT-4) ja pään ja kaulan alueen syöpä solulinjoja (JHU-012, JHU-013) osoittavat, että ilmentyminen E-kadheriinin ja TGFpRII liittyy alhainen CD44, kun taas tappio E-kadheriinin ja TGFpRII korreloi säätely ylöspäin CD44 ja EMT merkki vimentiinista. (B) palauttaminen E-kadheriinin, Ecad, ilmaisun retroviruksen transfektiolla TE-8 ja FLO-1-soluissa verrattuna vektorisäätö (neo) osoittaa kokonaismäärän vähentymiseen CD44 ilmentyminen yhdessä kytkin lisääntynyt CD44v yli CD44s (CD44v: CD44variant, CD44s: CD44 standardi).

CD44 ilmentyminen ylössäädellään ruokatorven epiteelisoluissa olevien EMT

aiemmin perustettu mallin analysoida vaikutuksia E-kadheriinin tappiota ruokatorven keratinosyyttien retroviruksen ilmentyminen dominanttinegatiivivaikutus E-kadheriinin (EY) tai dominanttinegatiivivaikutus E-kadheriinin yhdistettynä dominanttinegatiivivaikutus TGFpRII (ECdnT) [25]. Suoritimme immunohistokemiallinen värjäykset vasta-aineilla E-kadheriinin ja CD44 ja markkereita EMT valaista roolia CD44 ruokatorven EMT ja solujen invaasiota. EY ja ECdnT solut ovat voimistunut CD44 ilmaisun, ja positiivisen CD44-signaalin pitkälti paikantuu alueille epiteelisolujen invaasion taustalla matriisiin (Fig. 3). Sekä EY ja ECdnT solut ovat kohonneeseen S100A4, vimentiinistä ja αSMA osoittaa, että nämä solut ovat parhaillaan EMT organotyyppisessä kulttuureissa (Fig. 3d-F).

immunohistokemia of parafiinileikkeillä anti-E-kadheriinin vasta-ainetta ( A), anti-TGFpRII (B) ja anti-CD44 (C) esittää CD44-positiivisten solujen EY ECdnT solut valtaavat taustalla oleviin kollageeni /matrigeelin matriisi (nuolet), jotka ovat negatiivisia E-kadheriinin ja TGFpRII. Immunohistokemiallinen värjäys EMT markkereita S100A4 (D), vimentiinistä (E) ja αSMA (F) osoittaa kasvoi positiivisen signaalin tunkeutuvat soluihin. Mittakaava on 50 mikronia.

CD44 lokalisoituu MMP-9 kärjessä invasiivisen alueilla ja on voimistuvan aktiviini

analysoimiseksi mekanismi, jonka CD44 sovittelee soluinvaasiota olemme keskittyneet aktivointi matriisimetalloproteinaaseja, näkyvä proteaasit sulattamaan soluväliaineen. Visualisoida MMP toimintaa alueilla hyökkäyksen käytimme in situ zymografia. Fluoreseiini-positiiviset alueet havaitsemiseen MMP toiminta rajoittui etureuna EY: n ja ECdnT solujen ja invaasion taustalla matriisiin (Fig. 4A). Vakioitu väliaine organotypic kulttuureista osoittivat asteittainen nostaminen MMP-9 eritystä ja MMP-2 ja MMP-9 aktiivisuuden invasiivisia soluissa (Kuva. 4B). MMP-9 on kuvattu sitomiskumppanin CD44 [37], [38]. Käyttäen kaksinkertainen immunof- värjäystä vasta-aineen CD44 ja MMP-9 me havainnollistaa niiden kolokalisaation solun pinnalla etureunassa invasiivisen alueilla (Fig. 4C). Osoittamaan lisääntynyt invasiivista potentiaalia vasteena aktiviini A: TGFp perheenjäsen, eritystä, joka on lisääntynyt invasiivisissa organotyyppisissä viljelmissä (tuloksia ei ole esitetty), me stimuloi ECdnT soluihin ja ruokatorven syöpä solulinja TE-11 ja osoittavat parannettu solu invaasio

in vitro

(Fig. 4D).

(A)

in situ

zymografian, alat MMP toiminta on korostettu positiivinen fluoreseiini signaalin jääleikkeillä ECAD, EY ja ECdnT organotypic kulttuureissa. (B) Zymografia käyttäen organotyyppisessä viljelmässä väliaine kerätään Ecad, EY ja ECdnT solujen havainnollistaa lisääntynyt erittyminen MMP-2 ja MMP-9. (C) Double immunofluoresenssivärjäyksen of Ecad, EY ja ECdnT osoittaa MMP-9 (punainen) rinnakkaispaikantumisen kanssa CD44 (vihreä) in invasiivisia soluissa. Mittakaava on 50 mikronia. (D) Stimulaatio aktiviini indusoi tehostettua hyökkäystä ECdnT ja TE-11 solujen invaasio määrityksissä. Vertailu ryhmien välillä tehtiin Man ja Whitneyn ei-parametrinen testi, * p 0,05, ** p 0,001. (E) Western Blot solulysaattien TE-11 transfektoitu AllStars negatiivinen kuin hiljentäminen siRNA soluja (ctrl), ja TE-11-solut transfektoitu siRNA vastaan ​​E-kadheriinin (SI1, SI2) osoittaa säätelyä CD44 stimulaation jälkeen Activin A.

aktiviini A laittanut myös kuvattu säätelemään stemness [17], ja me arveltu, että CD44 kantasoluja merkki voisi olla asetuksen nojalla aktiviinin A. tunnistaa mahdollinen signalointireitin vastuussa ylössäätelyyn CD44, olemme analysoineet ruokatorven syöpä-solulinjasta, TE-11 sen jälkeen, kun pudotus E-kadheriinin käyttäen siRNA. Me kannustanut TE-11-solut transfektoitu siRNA vastaan ​​E-kadheriinin solujen aktiviini A ja analysoitiin ilmentymistä CD44. Aktiiviinimolekyylien Hoito lisääntynyt CD44 variantti ilmentymistä TE-11 ilman E-kadheriinin (Fig. 4E).

Yhteenvetona nämä tulokset osoittavat säätelyyn CD44 ilmentymisen E-kadheriinin kautta aktiviini A ja tarjota toiminnallinen näyttöä syy rooli induktioon soluinvaasiota.

keskustelu

Näytämme vähitellen menettää E-kadheriinin liittyy etenevä kasvua CD44

in vitro

ja

in vivo

. Koska E-kadheriinin, aktiviini A voi aiheuttaa CD44 ilme. Aktiviini A osoitettiin olevan keskeinen säädin stemness [17] ja muiden jäsenten tavoin TGFp-superperheen, on myös raportoitu vaikuttavan kehityksen ja tuumorigeneesin [20], [22] – [24]. Yliekspressio Aktiviinin A on ollut kuvattu ruokatorven okasolusyöpä ja liittyy huonoon ennusteeseen. Aktiviiniproteiinien edistää kasvainsolujen aggressiivisuus lisääntynyt MMP-7 ja N-kadheriinin [22] – [24]. Tässä osoitamme, että aktiviini A voi ylössäätää CD44, joka puolestaan ​​ankkuroi MMP-9 etureunan ja indusoi solujen invaasiota. Yhdistyksen E-kadheriinin, CD44 ja MMP kanssa EMT viittaa merkittävä rooli aktiviini A EMT.

Huomasimme, että E-kadheriinin menetys liittyy muutos CD44 isoformin ilmaisua. Vaikka aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että vaihtoehtoisen silmukoinnin ja CD44 voidaan ohjata ras signalointi ekspression edistämiseksi varianttimuotoja [39], Warzecha et ai. on äskettäin tunnistettu epiteelin liitos tekijät (ESRP1 ja ESRP2) edistää ilmentymistä CD44v säilyttää epiteelin fenotyypin [40]. Nämä seikat ovat hävinneitä EMT [41] – [43]. Voidaan ajatella, ilmaus standardi CD44 riippuu menetys ESRP1 ja 2 ruokatorven syöpä. ESRP1 ja 2 ilmaus on edelleen tunnustettu olevan osallisena EMT liittyvien silmukoinnin ohjelmia rintasyövän [44]. Mielenkiintoista, vaimentaminen ESPR1 /2 epiteelisoluissa indusoi ilmaus mesenkymaalisten kadheriinin, N-kadheriinin, ilman muutoksia E-kadheriinin ilmentymisen. Sitä vastoin ilmaus ESPR1 voi kääntää Twist aiheuttama EMT in nisäepiteelisoluissa. Lisäksi, transkriptiotekijä Twist2 edistää laajentamiseen varren kaltainen solupopulaatioiden kautta downregulation E-kadheriinin ja lisääntyneen ilmentymisen kantasolujen markkereita, kuten CD44 [45].

Yhdessä olemassa useita mekanismeja jolla CD44 isoformit, kaikki jakavat saman sytoplasmadomeenia, voi aiheuttaa EMT, joissa on usein kyseessä vuorovaikutuksesta solunulkoisen alueen mikroympäristö. CD44 voi toimia yhteistyössä reseptorin c-Met on bona fide reseptorin hyaluronihappoa, jotka voivat edistää EMT [9]. E-kadheriinin säätelee negatiivisesti vuorovaikutus CD44 kanssa hyaluronihappoa johtaa tukahduttaminen kasvaimen invaasion ja solujen haarautuvia morfogeneesiin [46]. Osoitamme tässä, että menetys E-kadheriinin ilmentymisen korreloi CD44s muodon ja induktio invasiivisen fenotyypin.

Olemme aiemmin osoittaneet, että hyökkäys ruokatorven keratinosyyttien puuttuu toiminnallinen E-kadheriinin ja TGFpRII välitti katepsiini B [35]. Katepsiini B voidaan aktivoida happamassa ympäristössä aloitettiin vuorovaikutus CD44 Na + -H + lämmönvaihdin [37]. Vaikka lisääntynyt katepsiini B aktiivisuus johtaa TGFli aktivointi [35], MMP-9 voi myös aktivoida TGF [47], joka yhdistää tiedot esitetään tässä meidän edellisessä tutkimuksessa. Parakriininen TGF signalointi aktivoi fibroblasteja, ja indusoi myös kapillaarin muodostumisen [48]. Nämä havainnot korostavat epiteelin mesenkyymisoluyhteisviljelmissä ylikuulumisen kasvainten synnyssä.

Yhteenvetona osoitamme, että CD44 säätelyä liittyy menetys E-kadheriinin ruokatorven syöpä ja että CD44 edistää MMP-9 välittämä kasvaimen invaasio .

Kiitokset

Haluamme myös kiittää jäseniä Beauchamp laboratorion, Drs. Deane ja Beauchamp, ja Dr. Anil K. Rustgi ja Vanderbilt osasto Biostatistics varten hyödyllisiä keskusteluja.