Krooninen sairaus

tiivistelmä

Mismatch korjaus (MMR) on keskeinen rooli pitää genomin vakaa. MMR toimintahäiriö voi johtaa syövän synnyn kappaleena geenimutaation kertymistä. HMSH2 ja hMLH1 kaksi avaintekijät MMR. Korkea tai matala ilmentymisen niitä usein merkitä tilan MMR toiminto. Mutaatiot (EGFR, KRAS jne) ovat yleisiä ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC). Ei kuitenkaan ole selvää, mikä rooli MMR pelaa NSCLC geenimutaatioita. Ilmaisu MMR proteiinien hMSH2 ja hMLH1, ja useiden merkkiaineiden PCNA ja Ki67 mitattiin immunohistokemia 181 NSCLCs. EGFR ja KRAS mutaatiot tunnistettiin korkean resoluution sulamisanalyysikokeita. Vahvempi hMLH1 ilmaus korreloi korkeamman taajuuden EGFR mutaatioita eksonissa 19 ja 21 (p 0,0005). Yli-ilmentyminen hMLH1 ja adenokarsinooma alatyyppi olivat molemmat riippumattomia tekijöitä, jotka liittyvät EGFR mutaatioita NSCLCs (p = 0,013 ja p 0,0005). Ilmentyminen hMLH1, hMSH2 ja PCNA lisääntynyt, kun taas Ki67 ilmentyminen väheni merkittävästi (p = 0,030) in NSCLCs EGFR mutaatioita. Yliekspressio hMLH1 voisi olla uusi molekyyli merkki ennustaa vastetta EGFR-TKI: in NSCLCs. Lisäksi EGFR mutaatioita saattaa olla varhainen tapahtuma NSCLC, jotka tapahtuvat ennen MMR toimintahäiriö.

Citation: Li M, Zhang Q, Liu L, Lu W Wei H, Li RW, et al. (2013) Expression of virhepariutumista korjaava geeni hMLH1 paranee ei-pienisoluinen keuhkosyöpä EGFR mutaatioita. PLoS ONE 8 (10): e78500. doi: 10,1371 /journal.pone.0078500

Editor: John Souglakos, University General Hospital Heraklionin ja laboratorio kasvain solubiologian, School of Medicine, University of Kreeta, Kreikka

vastaanotettu: heinäkuu 9, 2013; Hyväksytty 13 syyskuuta 2013 Julkaistu: 24 lokakuu 2013

Copyright: © 2013 Li et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat National Nature Science rahastot Kiinassa (Fund nro 81071805; URL: https://isisn.nsfc.gov.cn/egrantweb/), ja Dalian Merricon geenidiagnoosiin Technology Co, Ltd rahoittajat ollut mitään roolia in tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Tätä työtä tuki National Nature Science rahastot Kiinassa (Fund nro 81071805) ja Dalian Merricon Gene diagnoosi Technology Co., Ltd. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamista ja materiaaleja.

Johdanto

Keuhkosyöpä on yleisin ja tappava pahanlaatuinen kasvain maailmanlaajuinen, ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) on yleisin muoto. Karsinogeneesi NSCLC on monivaiheinen prosessi, johon muutoksia useiden geenien, mukaan lukien onkogeenin aktivaation ja tuumorisuppressorigeenin inaktivointi [1]. Viimeaikainen uusien aineiden tarkat molekyylikohteista, erityisesti epidermaalisen kasvutekijän reseptori tyrosiinikinaasin estäjät (EGFR-TKI), on lisääntynyt tieteellinen kiinnostus erityisesti geenimutaatioita ja vastustaa eräitä vakiintuneiden paradigmoja hoitointerventio NSCLC [2]. EGFR signaalinvälitysreitin on yksi tärkeimmistä polkuja, jotka osallistuvat sovittelun ja solujen jakautumisen [3]. Solut lisääntyvät rampantly pahanlaatuista transformaatiota [4,5]. Noin 30-50% NSCLCs on mutaatioita keskeisten geenien, kuten EGFR, KRAS, BRAF, PI3K ja AKT. Kaksi yleisimmin mutatoitunut onkogeenin EGFR ja KRAS [6,7]. Näitä geenimutaatioita usein liittyvät NSCLC potilaan vaste molekyylitason kohdennettuja lääkkeitä. Esimerkiksi kasvainten EGFR mutaatioita eksonissa 19 tai 21 ovat usein herkkiä EGFR TKI. Sitä vastoin potilailla, joilla KRAS kasvaimia ei hyötyä adjuvanttihoitoa ja eivät reagoi EGFR: n estäjien [8-10]. Mielenkiintoista, puolet NSCLCs kanssa mutaatio EGFR eksonissa 19 tai eksonissa 21 toissijaisia ​​mutaatioita EGFR eksonissa 20 ja tulevat vastustuskykyisiksi TKI hoidon jälkeen yhden vuoden [11,12]. Tämä osoittaa, että keskeiset geenit EGFR reitin ovat epästabiileja NSCLC. Paitsi että korkeampi mutaatio taajuus NSCLC, mutta myös joitakin geenejä, kuten EGFR helposti toissijaisia ​​mutaatioita. Ei kuitenkaan ole selvää, jos geenimutaatioita NSCLC liittyvät poikkeavuudet DNA: n korjautumismekanismi.

Mismatch korjaus (MMR) on tärkeä laji DNA korjaukseen Niillä on keskeinen rooli ylläpitää genomissa vakauden [13 ]. HMSH2 ja hMLH1 geenejä, jotka ovat keskeisiä komponentteja MMR järjestelmän, tunnistaa ja valmisteverojen yhden emäsyhteensopimattomuuksia ja lisäys /poisto silmukoita, jotka tapahtuvat aikana DNA: n replikaation tai DNA-vaurioita [14]. MMR toimintahäiriö johtaa usein genomin epästabiilisuuden, mukaan lukien mikrosatelliitti epävakaus (MSI) ja kertymistä geenimutaatioita, joiden uskotaan liittyvän syövän synnyn eri pahanlaatuisia kasvaimia [15,16]. Säätelyhäiriön hMLH1 tai hMSH2 ilme, yleensä tappiota Heterotsygotian (LOH) DNA- MMR loci, mutaatiolla tai promoottori metylaatio, on tärkein syy MMR toimintahäiriö [17,18]. Menetys hMLH1 tai hMSH2 ilmentyminen liittyy hypermutaatiota fenotyyppi, mukaan lukien KRAS, BRAF, APC, P53, ja TGF-β mutaatiot peräsuolen syöpä [19-22]. Ei ole kuitenkaan selvää, että MMR vaikuttaa geenimutaatioita NSCLC. Jotta tutkia korrelaatio MMR ja NSCLC mutaatiot, havaitsimme EGFR ja KRAS mutaatioiden ja mitataan hMLH1, hMSH2, PCNA ja Ki67 ilmaisun NSCLC kasvaimissa.

Materiaalit ja menetelmät

2.1: Etiikka Statement

tutkimus hyväksyttiin eettisen komitean toisen sairaalan Dalian Medical University. Kaikki näytteet tutkimuksessa olivat kudoksesta kirurgisesti poistaa vaikuttamatta diagnosointiin ja hoitoon. Ne kerättiin kirjallisen tietoisen suostumuksen potilaista tai perheiden ennen leikkausta. Aineisto analysoitiin anonyymisti. Kaikki menettelyt olivat mukaisesti Helsingin julistuksen.

2.2: Potilaat ja kasvain näytteet

yhteensä 181 kasvain näytteet kerättiin NSCLC potilaiden, joille tehtiin kirurginen menettelyjä sidoksissa sairaaloissa Dalian Medical University vuodesta 2007 vuoteen 2009. näistä oli 112 adenokarsinoomat, 58 okasolukarsinoomia, 4 adeno- okasolukarsinoomia, 5 isoa solukarsinoomat ja 2 sarcomatoid karsinoomat. Kaksi sertifioitu patologeja itsenäisesti diagnosoitu ja luokitellaan kaikki potilaat mukaan WHO: n luokituksen (2004). Niistä 181 potilaasta 109 oli miehiä ja 72 oli naisia, joiden keski ± SD-ikä 62,0 ± 9,3 vuotta (36-80 vuotta). Kukaan potilaista ei saanut radio- tai kemoterapian ennen niiden toimintaa. Potilaiden tiedot ja histopatologisia ominaisuuksia kasvaimia Kohortin on esitetty taulukossa 1. Kunkin kasvaimen näyte jaettiin kahteen osaan. Yksi annos pakastettiin nopeasti leikkaamista varten ja DNA: n eristämiseksi, toinen osa oli formaliinilla kiinnitetyt ja parafinoidut immunohistokemiaa.

muuttujat

nro

hMSH positiivinen (%) B hMLH1 positiivinen (%)

PCNA positiivinen (%) B Ki67 positiivinen (%)

EGFR eksonin 19 Mutaatio (% )

EGFR eksonin 21 mutaatio (%)

KRAS eksonin 2 mutaatio (%) B Age ≤607959.568.488.657.012.725.35.1 6010254.973.588.265.713.721.65.9Gender Female7254.279.290.355.620.8a37 .5c0.0b Male10958.766.187.266.18.313.89.2Pathology Adc11256.377.7a

* 90.256.321.4c32.1c5.4 SCC5856.962.187.970.70.05.26.9Smoking Non-smoking11556.578.3b

* 88,760. 017.4a30.4c3.5 Smoking6657.659.187.965.26.110.69.1Tumor päällä Vasen lung8555.376.588.257.617.618.88.2 Oikea lung9658.366.788.565.69.427.13.1LN etäpesäke No8661.672.188.465.112.819.88.1 Yes9552.670.588. 458.913.726.33.2Stage I II11161.374.891.061.316.223.45.4 III IV7050.065.784.362.98.622.95.7Table 1. Korrelaatio kliinis parametrien immunohistokemiallinen ilmaisun ja geenimutaatioita NSCLC.

Adc: adenokarsinooma; SCC: okasolusyöpä; LN: imusolmuke.

p 0,05,

ep 0,01,

cp 0,0005 (Pearson chi-square test).

* Kun tupakointi historia kontrolloitiin, hMLH1 ilmaisu ei ole merkittävästi eroa Adc ja SCC, p = 0,267; kun patologinen luokittelu kontrolloitiin, se on erilainen välillä tupakoimattomien kuin tupakoimattomilla, p = 0,009 (CMH-testi). CSV Lataa CSV

2,3: n immunohistokemiallinen analyysi

monoklonaalisia vasta-aineita ihmisen hMSH2 (1: 250, klooni FE11, Invitrogen, Life technologies, USA), hMLH1: n (01:50, klooni 14, Invitrogen, Life technologies , USA), PCNA (1: 400, klooni PC10, Thermo tieteellinen, USA) ja Ki67 (1: 100, klooni K-2, Invitrogen, Life technologies, USA) käytettiin ensisijaisena vasta-aineita. Biotiini-streptavidiini-peroksidaasia värjäyksen 3, 3′-diaminobentsidiinillä-tetrahydrochloride (DAB) tunnistus käytettiin. Immunohistokemia suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [23]. Kasvainsolujen värjäytyminen tumassa pidettiin positiivisina. Jokainen dia luokiteltiin sokeasti mukaan prosenttiosuus positiivisia kasvainsoluja (0-5%, 5-10%, 10-25%, 25-50%, 50-100%) ja värjäyksen voimakkuuden (none, heikko, kohtalainen ja vahva) kaksi riippumatonta patologia [24-28]. Useimmissa liukuu ilmaisu intensiteetti ilmentämiseen liittyvän taajuuden. Immunoreaktiivisuus hMSH2, hMLH1: n, PCNA ja Ki67 arvioitiin negatiiviseksi (-), positiivisia kasvainsoluja vähemmän kuin 25%; positiivinen (+), 25-50% positiivisia kasvainsoluja; ja vahva positiivinen (++), ≥ 50% positiivisia kasvainsoluja.

2.4 DNA: n uutto ja geenin mutaation havaitseminen

Kasvaimen rikastettu alueet valittiin ja leikattiin värjättyä jääleikkeille merkitty kaksi patologia. Genominen DNA uutettiin näillä alueilla ja puhdistettiin valmistajan protokollan (Tiangen, Peking, Kiina) [29,30]. KRAS eksonin 2 ja EGFR eksonin 19 ja 21 kunkin yksilön monistettiin kolmena kappaleena 10 ul reaktiotilavuudessa, jossa on 15 ui mineraaliöljyä overlay kuhunkin kuoppaan 96-kuoppaisen PCR-levyn sijoitukset Mastercycler (Eppendorf, saksa). Alukkeet olivat 5′-AGGCCTGCTGAAAATGACT-3 ’ja 5′-AATGGTCCTGCACCAGTAA-3′ (KRAS eksoni 2); 5’-TGGATCCCAGAAGGTGAGAA -3 ’ja 5′-AGCAGAAACTCACATCGAGGA -3′ (EGFR eksoni 19); 5’-CGCAGCATGTCAAGATCA -3 ’ja 5′-CCTCCTTACTTTGCCTCC -3’ (EGFR eksoni 21). Reaktio-olosuhteet olivat, kuten aiemmin on raportoitu [29,30]. Mutaatiot tunnistettiin korkean resoluution sulamisanalyysikokeita on LightScanner

® 96 (Biofire Diagnostics, USA). Sulamiskäyrät hankittiin 60 ° C: sta 95 ° C: ssa, ja analysoitiin käyttäen LightScanner ohjelmistoa (versio 2.0) mukaan valmistajan ohjeiden [29,30].

2.5: Tilastollinen analyysi

Pearson chi-neliö testi ja Fisherin testiä käytettiin vertaamaan eron proteiinin ilmentymisen välillä kliinis parametrit. Spearmanin korrelaatio analyysiä käytettiin testaamaan korrelaatio proteiinin ilmentymisen. Cochran ja Mantel-Haenszel (CMH) testiä käytettiin vertaamaan ero hMLH1 ilmaisun välillä tupakoinnista ja välillä kasvaimen luokituksia, muiden muuttuvien hallinnassa. Logistinen regressio käytettiin analysoimaan liittyvien tekijöiden EGFR mutaatioita. Kaikki analyysit suoritettiin SPSS 13.0 merkitsevyystasolla p 0,05.

Tulokset

3.1: n ilmentyminen hMSH2, hMLH1, PCNA ja Ki67 vuonna NSCLCs ja kliinis parametrit

Kaikki proteiinien, hMSH2, hMLH1: n, PCNA ja Ki67, ilmennettiin ytimet kasvainsolujen (kuvio 1). HMSH2, hMLH1, PCNA ja Ki67 ilmaistiin 59,6%, 71,3%, 88,4% ja 61,9%: n kasvaimia vastaavasti. Proteiinin ilmentyminen välillä kliinis ryhmien on esitetty taulukossa 1. Oli korkeampi taajuus hMLH1 ilmaisun tupakoimattomilla verrattuna tupakoitsijoiden (p = 0,006). Samoin korkeamman taajuuden ilmaisun havaittiin adenokarsinooma verrattuna okasolusyöpä (p = 0,031). Mutta ei ollut merkittävää eroa hMLH1 ilmaisun välillä adenokarsinooma ja okasolusyöpä kun tekijä tupakoinnin historia kontrolloitiin (p = 0,267), kun taas havaittu merkittävää eroa, kun patologinen luokittelu kontrolloitiin (p = 0,009). Tämä viittaa siihen, että hMLH1 ilmentyminen on pääasiassa vaikuttaa tupakoinnin historia, ei patologisia luokitusta.

immunohistokemiallinen profilointi hMLH1 proteiinin positiivinen lauseke (A), hMSH2 proteiinin positiivinen lauseke (B), PCNA proteiinin positiivinen lauseke (C) ja Ki67 proteiinin positiivinen ilme (D). (X 200).

3.2: Korrelaatio keskuudessa hMSH2, hMLH1, PCNA ja Ki67 ilmaisun

Oli 81 tapauksia hMSH2 ja hMLH1 koekspressoimalla, 22 tapauksissa vain hMSH2 ilme , 48 tapauksessa vain hMLH1 ilme ja 30 tapauksessa ilman positiivinen ilmaus joko hMSH2 tai hMLH1. HMSH2 ilmentyminen merkittävästi korreloi hMLH1 lauseke (p = 0,038; r = 0,155). Ilmentyminen hMLH1 oli vahvempi tapauksissa PCNA ilme (p = 0,005), mutta ei niillä, joilla Ki67 ilme (p = 0,495). Oli suuntaus hMLH1 ilmaisun kasvaa PCNA ilme (p = 0,056). Expression of hMSH2 ei korreloi ilmaus joko PCNA tai Ki67 (p = 0,802; p = 0,099) (taulukko 2).

hMSH2

PCNA

Ki67

–

+

++

–

+

++

–

+

++

hMLH1-31418a122120b9286+216356401626315++2643633429243012hMSH2-9393034368+374752++94931284813Table 2. Korrelaatio hMLH1, hMSH2 ja PCNA ja Ki67 ilmaisuja.

p 0,05 (Spearmanin korrelaatio analyysi), spearmanin järjestyskorrelaatiokerroin (r) on 0,155.

kp = 0,056 (Spearmanin korrelaatio analyysi ), p = 0,005 (Pearson chi-neliö testi). CSV Lataa CSV

3.3: KRAS ja EGFR mutaatioita NSCLCs

ulos 181 potilasta, joilla NSCLCs oli 10 tapausta (5,5%) ja KRAS mutaatio ja 66 tapausta (36,5%) ja EGFR-mutaatio (24 tapausta eksonissa 19 ja 42 tapausta eksonissa 21) (kuva 2). KRAS mutaatiot olivat yleisempiä miehillä kuin naisilla (p = 0,008). oli mitään merkittävää korrelaatiota KRAS mutaatioiden kanssa muihin kliinis-(taulukko 1). taajuus EGFR mutaatioita joko eksonissa 19 tai eksonin 21, oli suurempi naisilla kuin miehillä (p = 0,015; p 0,0005), vuonna adenokarsinooma kuin okasolusyöpä (p 0,0005; p 0,0005), ja ei-tupakoitsijat kuin tupakoitsijoilla (p = 0,031; p = 0,002). ei ollut mitään merkittävää korrelaatiota EGFR mutaatioita potilaan ikä, imusolmuke etäpesäke, kasvain sivusto tai kliinisessä vaiheessa (taulukko 1).

Eri sulamis- käyriä mutaatio tyyppi (punainen viiva) suhteessa villin tyypin (harmaa viiva) on KRAS eksonin 2 (a), EGFR eksonin 19 (b) ja EGFR eksonin 21 (c). Jokainen näyte analysoitiin kolmena kappaleena. Tiedot piirrettiin suoraan (A) tai villityypin valittiin vaakasuora pohja viiva (B).

3,4: Korrelaatio KRAS ja EGFR mutaatioita kanssa ilmaus hMSH2, hMLH1, PCNA ja Ki67 NSCLC

ei ollut merkitsevää eroa taajuus Ki67 tai PCNA ilmaisun välillä NSCLCs ja ilman EGFR eksonissa 19 tai eksonissa 21 (p 0,05, taulukko 3). Mutta Ki67 ilmentyminen oli harvemmin NSCLCs EGFR mutaatioita (molemmat eksonissa 19 ja 21) kuin ne, ilman mutaatioita (51,5%: sta 67,8%, p = 0,030), mutta PCNA ei ollut (85,2%: sta 93,9%, p = 0.078).

n

hMSH2 (%) B hMLH1 (%)

PCNA (%) B Ki67 (%) B KRASM1060.080.080.040.0W17156 .770.888.963.2EGFR eksonin 19M2470.891.7a95.845.8W15754.868.287.364.3EGFR eksonin 21M4252.488.1b92.954.8W13958.366.287.164.0Table 3. Korrelaatio hMSH2, hMLH1, PCNA ja Ki67 ilmaisutapoja KRAS ja EGFR mutaatioita.

M: mutaatio, W: villityypin.

p 0,05,

b p 0,01 (Pearson chi-neliö testi tai Fisherin tarkka testi). CSV Lataa CSV

taajuus hMLH1 ilmaisun oli korkeampi NSCLCs kanssa EGFR eksonin 19 mutaatio kuin näissä ilman mutaatiota (91,7%: sta 68,2%, p = 0,018) ja NSCLCs kanssa EGFR eksonin 21 mutaatio kuin niissä ilman mutaatio (88,1%: sta 66,2%, p = 0,006). Kuten hMLH1 ilme nousee (-, + symboliin ++), taajuus EGFR mutaatioita (eksoni 19 ja 21) olivat 13,2%, 38,7% ja 53,0% vastaavasti (p 0,0005). Samanlaisia ​​korrelaatioita ei löydetty kanssa hMSH2 ilmentymistä (taulukko 3). Adenokarsinooma alatyyppi ja hMLH1 yli-ilmentyminen oli kaksi riippumatonta tekijöistä, jotka liittyvät EGFR mutaatioita (p 0,0005 ja p = 0,013), mutta sukupuoli ja tupakointi historia ei (p = 0.070 ja p = 0,538).

Keskustelu

Molecular kohdentamista huumeiden alkaa olla yhä merkittävämpi rooli kasvaimen hoidossa. Parantaakseen kliiniset tulokset potilailla, joilla on NSCLC, kohdennettuja hoitoja käytetään yhä kanssa rohkaisevia tuloksia, erityisesti potilailla, joilla on erityisiä molekyyli- piirteitä [31]. EGFR ja KRAS mutaatiot ovat kaksi tunnettua markkereita, jotka osoittavat herkkyyttä ja resistenssiä EGFR-TKI NSCLC potilaiden. Mutaation tyypistä vaihtelee etnisten ryhmien. Esimerkiksi taajuus EGFR mutaatioita on suurempi Itäaasialaiset NSCLC kuin valkoihoisilla. Toisin kuin EGFR mutaatioita, KRAS mutaatioita esiintyy 20-30% valkoihoisten, kun taas vähemmän kuin 10% Itäaasialaiset [29,30,32-36]. Kuitenkin monet NSCLC potilaat eivät ole EGFR tai KRAS mutaatioita. Joten niiden vaste EGFR-TKI ei tällä hetkellä voida ennustaa. Sen vuoksi on välttämätöntä löytää uusia molekyylimarkkereiden ennustaa vaste pienisoluista keuhkosyöpää näille lääkkeille.

parhaan tietomme raportoimme täällä ensimmäistä kertaa, että hMLH1 ilmentyminen liittyy EGFR mutaatioita sekä eksonin 19 ja eksonin 21, mutta hMSH2 ilmaisu ei ole. Yleensä naiset ja savuton potilailla, joilla adenokarsinooma on suhteellisen suuri todennäköisyys EGFR mutaatioita. Mutta keuhkojen adenokarsinooma on yleisempää naisilla ja tupakoimattomilla, ja useimmat naiset Itä-Aasiassa on tupakoimattomia. Siksi kliinis ominaisuudet eivät ennusta EGFR mutaatioita hyvin. Löysimme hMLH1 ilmaisun ja adenokarsinooma olivat riippumattomia liittyvät tekijät EGFR mutaatioita. Lisäksi vahvempi hMLH1 ilmaisu, korkeampi EGFR-mutaatio taajuus. Sukupuoli ja tupakointi historia ei itsenäisesti korreloida EGFR mutaatio taajuus. Olisi mielenkiintoista tutkia arvoa hMLH1 yli-ilmentymisen merkkiaineena ennustaa vastetta NSCLC potilaiden EGFR-TKI.

Aiemmissa tutkimuksissa Xinarianos et al. kertoi, että alempi hMLH1 ilmentyminen oli yleisempää runsaasti tupakoivat [27]. HMSH2 ja hMLH1 ilmaisun olivat erilaiset adenokarsinooman verrattuna okasolusyöpää [27]. Vageli et ai. arvioidaan mRNA taso hMSH2 ja hMLH1 29 ensisijaisen NSCLCs ja löysi taajuus hMLH1 mRNA: n ilmentyminen oli korkeampi tupakoimattomilla kuin tupakoitsijoilla. Tutkimuksessa todettiin myös, että oli eroja ekspressiokuviota hMLH1 ja hMSH2 välillä adenokarsinooma ja okasolusyöpä [37,38]. Wang et ai. havaitsi, että oli enemmän hMLH1 ja hMSH2 ilmaisun NSCLC näytteitä naisilla kuin niillä, miehillä [39]. Löysimme hMLH1 ilme oli suurempi potilailla, joilla ei tupakointitavoista. Mutta se ei ollut eroa adenokarsinooma ja okasolusyöpä ja sukupuolten välillä, kun tarkistetaan kertoimella tupakoinnin historiaa. Se ehdottaa, että tupakointi voi olla päätekijä hMLH1 ilmaisua. Saletta et ai. ja Vogelsang et al. itsenäisesti todettu, että altistuminen tupakansavulle inaktivoi MMR toiminto indusoimalla kromosomi epävakaus ja polymorfismia hMLH1 geenin [40,41].

Sekä PCNA ja Ki67 voidaan käyttää osoittamaan tilan solujen lisääntymisen. PCNA stimuloituu prosessissa MMR välttämättömänä osana [21], kun taas Ki67 ei. Tässä tutkimuksessa havaitsimme tapauksissa EGFR mutaatioita on korkeampi taajuus sekä hMLH1 ja PCNA ilme, mutta suuntaus kohti alhaisempia Ki67 ilme. Tämä viittaa siihen, että EGFR-mutaatio saattaa stimuloida ja käynnistämään DNA korjaus lisäämällä hMLH1 ja PCNA ilmaisua, ja sitten pidentää solusyklin. Siksi EGFR mutaatioita NSCLCs aktivoisi MMR toiminto, sen sijaan, että tulos perimän epävakaisuuden aiheuttaman MMR toimintahäiriö. EGFR mutaatioita saattaa olla varhainen tapahtuma karsinogeneesi NSCLC ennen MMR toimintahäiriö.

Lisäksi, Kouso et ai. osoittivat riippumattomuus hMSH2 ja hMLH1 ilmaisutapoja eri rooleissa NSCLC [28]. Paitsi rooli prosessissa MMR keskeisenä komponenttina, hMLH1 proteiini myös vuorovaikutuksessa muiden DNA: n korjaukseen ja apoptoosin molekyylejä kuten PCNA, BRCA1, P53 ja ATM [42-45]. Siksi hMLH1 voidaan myös säädellä muut tekijät. An et al. ja Shih et al. kertoi, että erityinen polymorfismia hMLH1 liittyvät alttiuteen ja ennusteen keuhkosyöpää ja esiintyi useammin keuhkojen okasolusyöpä kuin adenokarsinooma [46,47]. Kaikki nämä tekijät voivat johtaa epätasapainoon hMSH2 ja hMLH1 ilme. Lisäksi hMSH2 ja hMLH1 ilmaisu voi vaihdella paitsi eri histologisia alkuperää, mutta myös eri etnisten ryhmien [32-36].

Yhteenvetona EGFR mutaatioita eksonissa 19 ja 21 korreloivat MMR toimintahäiriön NSCLC. Yliekspressio hMLH1 voisi olla uusi merkkiaine potilaan herkkyyttä EGFR-TKI. Aiemmin MMR toimintahäiriöitä on oletettu aiheuttavan EGFR mutaatioita. Kuitenkin EGFR mutaatiot voivat myös lisätä hMLH1 yli-ilmentymä kompensoivaa mekanismia. Syy-seuraus-suhdetta ei ole vahvistettu joko tavalla. Lisätutkimuksia olisi annettava lisää tietoa, joka tapahtuu aikaisemmin. Muussa tapauksessa mahdollisuus käyttää hMLH1 indikaattorina TKI vastauksista voi osoittautua hyödylliseksi.

Kiitokset

Kirjoittajat kiittää professori Shichang Yue hänen avustaan ​​potilasrekrytointi.