Krooninen sairaus

tiivistelmä

SRPX2 (sushi toista sisältävän proteiinin, X-linked 2) on viime aikoina tullut monitoiminen proteiini, joka on osallisena kohtaushäiriöitä, angiogeneesi ja soluadheesiota. Täällä analysoimme tämän proteiinin biokemiallisesti. SRPX2 proteiini erittyi kanssa erittäin posttranslationaalinen muutos. Kondroitinaasi ABC hoidon täysin vähensi molekyylimassa puhdistettiin SRPX2 proteiinin sen ennustettu koko, kun taas heparitinaasi, keratanase ja hyaluroinidase ei. Erittyy SRPX2 proteiini havaittiin myös käyttämällä anti-kondroitiinisulfaatti-vasta-ainetta. Nämä tulokset osoittavat, että SRPX2 on uusi kondroitiinisulfaatti proteoglykaanin (CSPG). Lisäksi sitoutumismääritys paljasti, että hepatosyyttikasvutekijää annosriippuvaisesti sitoutuu SRPX2 proteiiniin, ja ligandi-glykosaminoglykaanit vuorovaikutus arveltu olevan todennäköistä proteoglykaanien. Mitä sen molekyyli arkkitehtuuri, SRPX2 on sushi toista moduulia samanlainen neljä muuta CSPGs /lecticans; kuitenkin, molekyyli arkkitehtuuri SRPX2 näyttää olevan aivan erilainen kuin lecticans. Yhdessä huomasimme, että SRPX2 on uusi CSPG, joka on yli-ilmentynyt ruoansulatuskanavan syöpäsoluja. Tutkimuksen tuloksiin sisältyy avain glykobiologiatutkimukseen käsityksen SRPX2 syöpäsoluissa ja osoittavat, että SRPX2 on uusi jäsen syöpään liittyvien proteoglykaanin perhe.

Citation: Tanaka K, Arao T, Tamura D, Aomatsu K, Furuta K, Matsumoto K, et ai. (2012) SRPX2 on uusi kondroitiinisulfaatti Proteoglykaanin Tämä yli-ilmennetään Mahalaukun Cancer. PLoS ONE 7 (1): e27922. doi: 10,1371 /journal.pone.0027922

Editor: Hana Algul, Technische Universität München, Saksa

vastaanotettu: 28 kesäkuu 2011; Hyväksytty: 27 lokakuu 2011; Julkaistu: 05 tammikuu 2012

Copyright: © 2012 Tanaka et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat varoja täydellisen kolmas termi on 10-Year strategia syövän ohjaus, joka on Grant-in-tuki Scientific Research opetus-, kulttuuri-, urheilu-, Science and Technology of Japan (19209018), ja rahasto terveys- ja työ Tieteellinen tutkimus Grants. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

sushi toista proteiinia X-linked 2 (SRPX2) oli ensimmäinen tunnistettu geeni säädellään ylöspäin pro-B-leukemiasoluja ja kuvattiin sushi-repeat proteiini säädellään ylöspäin leukemia (SPRUL, [1] ). Useita vuosia myöhemmin, SRPX2 todettiin olevan vastuussa Rolandin liittyvien kohtausten suullinen ja puheen dyspraksiasta ja kehitysvammaisuus [2]. Tautia aiheuttavia mutaatio (N327S) ja toisen mutaation (Y72S) ja SRPX2 tunnistettiin, ja nämä mutaatiot johtivat voitto-of-N-glykosyloitu muoto mutantti proteiini [2]. Vaikka molekyyli- ja biologiset toiminnot SRPX2 on ollut tuntematon pitkään, tuoreessa tutkimuksessa osoitti selvästi, että SRPX2 sitoutuu urokinaasi plasminogeeniaktivaattorin reseptorin (uPAR) on ligandi /reseptori-vuorovaikutuksen ja että SRPX2 mutaatiot johtivat kasvuun SRPX2 /uPAR sitoutumisaffiniteetti [3]. Verisuonten endoteelisolujen, Srpx2 säätelee endoteelisolujen migraatiota ja putken muodostumiseen, ja vuorovaikutus SRPX2 ja uPAR on mukana myös alkuvaiheessa endoteelisolujen remodeling angiogeneesin aikana [4].

Viime aikoina olemme osoittaneet, että SRPX2 yliekspressoituu mahasyövässä kudosten ja että ilmentyminen oli yhteydessä huono kliininen tulos [5]. SRPX2 parantaa solujen migraation ja adheesion mahalaukun syöpäsoluissa ja mielenkiintoisesti, vakioitu-väliaine saadaan SRPX2 tuottavien solujen lisääntynyt solumigraatiota toimintaa ja soluadheesiota [5]. Olemme edelleen tutki SRPX2 keskittyen biokemiallinen analyysi tässä tutkimuksessa.

Materiaalit ja menetelmät

Soluviljely

HEK293 ylläpidettiin DMEM ja SNU-16 ja MKN7 olivat ylläpidetään RPMI1640-elatusalustassa täydennettynä 10% FBS: ää. HUVEC (ihmisen napalaskimon endoteelisolujen) pidettiin Humedia-EG2 (Kurabo, Tokio, Japani) väliaineessa, jossa 1% FBS: ää lisäten EGF: n ja FGF-2. Soluja pidettiin 5% CO

2-kostutetussa atmosfäärissä 37 ° C: ssa. Nämä solulinjat saatiin Japani Collection of Research Bioresources Collection (Sennan-shi, Osaka).

Western blotting-analyysi

western blotting-analyysi on kuvattu aiemmin [6]. Uskossa, solupelletit hajotettiin RIPA-puskuriin (Tris-HCl: 50 mM, pH 7,4, NP-40: 1%, Na-deoksikolaattia: 0,25%; NaCl: 150 mM, EDTA: 1 mM; fenyylimetyyli-sulfonyylifluoridi: 1 mM, aprotiniinia, leupeptiiniä, pepstatiinia: 1 mg /ml kutakin; Na3VO4: 1 mM, NaF: 1 mM). Solu-uutokset ajettiin elektroforeesissa 7,5% (w /v) polyakryyliamidigeeleillä ja siirrettiin polyvinyli- di-fluoridi kalvo (Nihon Millipore, Tokio, Japani). Kalvo inkuboitiin Tris-puskuroidussa suolaliuoksessa, joka sisälsi 0,5% Tween 20: tä ja 3% BSA: ta ja sen jälkeen saatetaan reagoimaan primaaristen vasta-aineiden ja HRP-konjugoidun sekundaarisen vasta-aineen kanssa 90 min jokaiselle. Visualisointi saavutettiin vahvistettua kemiluminesenssireagenssia detektointireagenssia (Amersham Biosciences, Buckinghamshire, UK). Seuraavia vasta-aineita käytettiin: anti-HA suuri affiniteetti (Roche Applied Science, Mannheim, Saksa), anti-SRPX2 [5] ja anti-kondroitiinisulfaatti (CS-56, Seikagaku Kogyo, Tokio, Japani).

Detection endogeenisen SRPX2 proteiinin

viljelyväliaine dialysoitiin 50 mM ammoniumbikarbonaattia ja lyofilisoitiin. Jäännös liuotettiin 50 mM Tris-HCI (pH 7,4) ja sentrifugoitiin 20000 rpm 30 minuutin ajan. Supernatantti suodatettiin 0,22 um: n suodattimen läpi. Suodos altistettiin proteiinien nopealla nestekromatografialla (FPLC; GE Healthcare UK Ltd. Buckinghamshire, Englanti) erottaminen HiTrap Q HP sarakkeet (5 ml; GE Healthcare). Kolonnit tasapainotettiin 50 mM Tris-HCl (pH 7,4). Sitten näytteet ruiskutettiin sarakkeet, jotka pestiin samalla puskurilla ja eluoitiin virtausnopeudella 4 ml /min käyttäen lineaarista gradienttia, joka koostuu 0-2 M NaCl 50 mM Tris-HCI (pH 7,4) yli 45- min. SRPX2 proteiinia sisältävät fraktiot suoritettiin sitten käyttämällä geelisuodatuskromatografialla (Superdex200 pylväs, 16 mm x 60 mm, GE Healthcare).

Ekspressiorakenteet ja puhdistus SRPX2-HA /His-proteiinin

menetelmä tuottamiseksi ilmentymiskonstrukteja on aiemmin kuvattu [5]. Tyhjä ja SRPX2-HA /His-vektorit transfektoitiin sitten HEK293-soluihin käyttämällä FuGENE6 transfektioreagenssia (Roche Diagnostics, Basel, Sveitsi), ja sitten solut valitaan hygromysiinillä. Vakaa transfektantissa HEK293-solut nimettiin HEK293-Mock ja HEK293-SRPX2-HA /His. Esikäsitelty väliaine HEK293-Mock ja HEK293-SRPX2-HA /His-solut altistettiin FPLC lastaus 3 ml /min 5 ml: HisTrap HP -pylvään (GE Healthcare). Sitoutunut proteiini pestiin 15 ml: lla pesupuskuria (WB: 50 mM Na

2HPO

4, 10 mM Tris-HCI, 20 mM imidatsoli [pH 8,0] ja 600 mM NaCl: a,) ja eluoitiin eluutiopuskurilla (EB: WB + 230 mM imidatsoli). SRPX2-HA /His-proteiinin sisältävät fraktiot sovellettiin FPLC Superdex200-pylvääseen (16 mm x 60 mm, GE Healthcare), joka oli tasapainotettu 0,15 M ammoniumbikarbonaattia. Eluointi suoritettiin käyttämällä samaa puskuria, virtausnopeudella 1 ml /min. SRPX2-HA /His sisältävät fraktiot varmennetaan western blotting ja lyofilisoitiin.

pilkkominen SRPX2 erityisiä GAG hajottavien entsyymien

Puhdistettu SRPX2-HA /His-proteiinia pilkottiin useita erityisiä entsyymit mukaan lukien kondroitinaasi ABC ja kondroitinaasi AC II (0,1 yksikköä 40 mM Tris-HCl, 40 mM natriumasetaattia [pH 8,0], 37 ° C: ssa 2 h), kondroitinaasi B (0,02 yksikköä 20 mM Tris-HCl, 0,25 uM kalsiumia asetaatti [pH 7,5], 37 ° C: ssa 2 h), heparinaasi I ja heparinaasi II (0,05 yksikköä 5 mM kalsiumasetaatti, 50 mM natriumasetaattia [pH 7,0], 37 ° C: ssa h), keratanase (0,1 yksikköä 7,5 uM Tris-HCI [pH 7,4], 37 ° C: ssa 2 h), ja hyaluroinidase (0,02 M asetaattipuskuria, 0,15 M NaCl: a [pH 6,0], 60 ° C: ssa 2 h). Entsyymit ostettiin Seikagaku Kogyo. Sitten näytteet analysoitiin western-blottauksella.

sitoutumismääritykset

IAsys resonanssipiirejä peili biosensorin (Affinity Sensors, Cambridge, UK), jossa on karboksimetyylidekstraani tunnistava kyvetti määrittämiseen käytettiin kineettisyysvakioiden hepatosyyttikasvutekijän (HGF) sitoutumisesta immobilisoituun SRPX2-HA /His. SRPX2-HA /His liuotettiin 10 mM natrium- formaatti (pH 4,0) ja immobilisoitu karboksimetyylidekstraani pinnan kyvetin mukaan valmistajan ohjeiden mukaisesti. Sitovat kokeet suoritettiin PBS: ssä. Muutokset kaikuva kulma seurattiin 1-s välein noin 600 s. Kokeet suoritettiin 25 ° C: ssa sekoittajalla nopeudella 80 rpm. Sitova parametrit laskettiin assosiaation ja dissosiaation vaiheissa sitoutumisreaktioihin käyttäen epälineaarisia sovitus FastFit (Affinity Sensors). Naudan seerumin albumiinia (BSA) käytettiin kontrollina.

Microarray data

kliinistä näytettä pariksi peräsuolen syövät (CRC), microarray-menettelyä ja analyysimenetelmä on kuvattu aiemmin [7] . Tutkimus hyväksyi Institutional Review Board, ja kirjallinen suostumus saatiin kaikki potilaat. Kaikki microarray data on talletettu Center for Information Biology geenin ilmentyminen tietokanta (CIBEX, https://cibex.nig.ac.jp/index.jsp) hakunumerolla # CBX205. Kaikki tiedot on MIAME mukainen ja että raaka data on talletettu on MIAME yhteensopiva tietokanta (CIBEX), jotka ovat yksilöity MGED Society verkkosivuilla https://www.mged.org/Workgroups/MIAME/miame.html.

Potilaat ja näytteet

30 CRC ja 10 pariksi ei-syöpä paksusuolen limakalvon analysoitiin käyttäen reaaliaikaista RT-PCR. RNA uuttomenetelmä ja laaduntarkistus protokolla on kuvattu aiemmin [7]. Tutkimus hyväksyi Institutional Review Board of National Cancer Center Hospital, ja kirjallinen suostumus saatiin kaikista potilaista.

Reaaliaikainen käänteistranskriptio-PCR ja western blot analyysi

käytetyt menetelmät tässä osassa on kuvattu aiemmin [5].

tulokset

yli-ilmentyminen SRPX2 CRC kudoksissa

Arvioimme mRNA ilmaus

SRPX2

kliinisissä näytteitä CRC lisäksi sen homologin

SRPX

(

SRPX1

) käyttäen microarray data.

SRPX2

ilme oli selvästi sääteli (20,5-kertaisesti, p = 0,00014) syövän kudoksissa verrattuna pariksi noncancerous limakalvon näytteitä, kun taas oletetun tuumorisuppressorigeeniä

SRPX

oli alassäädetty ( 0,7 kertainen, p = 0,029) syövän (Fig. 1). Tulos osoittaa, että

SRPX2

yliekspressoituu CRC aikana syövän synnyn ja syövän etenemiseen, toisin kuin

SRPX

. Reaaliaikainen RT-PCR: llä 30 CRC ja 10 pariksi ei-syöpä paksusuolen limakalvon näytteet vahvistivat, että

SRPX2

mRNA oli merkittävästi yli-ilmentyy CRC näytteissä, mutta oli vain ilmaistiin hyvin alhaisella tasolla ei-syöpä paksusuolen limakalvo (kuvio 1 B).

(A) mRNA ilmaus

SRPX2

ja sen homologia

SRPX

15 CRC ja pariksi normaalin paksusuolen limakalvon yksilöitä. Arvot osoittavat normalisoitu signaalin intensiteettiä saatu microarray data. (B) mRNA: n ilmentymisen tasot

SRPX2

määritetään reaaliaikaisen RT-PCR: llä. CRC: kolorektaalisyöpä, Rel mRNA: normalisoidut mRNA ekspressiotasot (

SRPX2 Twitter /

GAPD

× 10

6).

Eritettyä SRPX2 proteiinia epäillään muutettava posttranslationaalisesti

ennustettu molekyylimassa SRPX2 proteiini oli 53 kDa; kuitenkin, western-blottaus osoitti, että moolimassa erittyvän SRPX2 proteiini lisääntyy suuresti, ja sotkee ​​bändejä näennäinen molekyylimassa oli 100-150 kDa SNU-16 ja MKN7 solulinjoissa (Fig. 2A). Seuraavaksi arvioimme ulkoisesti ilmaistaan ​​SRPX2 valkuaista HEK293-Mock ja HEK293-SRPX2-HA /His soluja. Molekyylimassa solunsisäisen SRPX2 proteiini oli samanlainen kuin ennustettu koko, kun taas molekyylimassa erittyvän-SRPX2 proteiini lisääntyy suuresti (100-150 kDa). Sotkee ​​vyöhykkeet havaittiin myös käyttäen sekä anti-HA ja anti-SRPX2-vasta-aineita (Fig. 2B). Ei-sotkee ​​bändejä 120 kDa solulysaatissa ovat endogeenisiä SRPX2. Nämä tulokset viittaavat siihen, että eritetyn SRPX2 proteiini voi läpikäydä translaation jälkeisiä modifikaatioita.

(A) eritetty muoto endogeenisen SRPX2 proteiinia saatiin elatusaineesta (CM) in SNU-16 ja MKN7 soluja. CM alistettiin ioninvaihtokromatografialla ja käytetään western blotting -analyysillä käyttämällä anti-SRPX2 vasta-aine. (B) Western-blottauksella eksogeenisen SRPX2 proteiinin saatu solulysaatista ja CM käyttäen anti-SRPX2 ja anti-HA-vasta-ainetta. Stabiili transfektantti HEK293-solut, käyttöön täyspitkä cDNA-fragmentin, joka koodaa ihmisen SRPX2 HA ja His-tag-vektori tai tyhjän vektorin, käytettiin analyysiä varten. Ei-sotkee ​​bändejä 120 kDa solulysaatissa ovat endogeenisiä SRPX2. Mock: HEK293-Mock soluihin, SRPX2: HEK293-SRPX2-HA /His soluja. IB: immunoblottauksella, lysaatti: solulysaatti, CM: viljelyalusta.

SRPX2 on uudenlainen kondroitiinisulfaatti proteoglykaanin

Perustuu ulkonäkö sotkee ​​bändit erittäin lisääntynyt molekyylimassa , me arveltu, että SRPX2 on proteoglykaani kanssa glykosaminoglykaani (GAG) ketjuja. Niinpä käsittelimme puhdistettua-SRPX2 proteiini saatu viljellyistä keskipitkän HEK293-Mock (tyhjä kontrolli) tai HEK293-SRPX2-HA /His solujen kondroitinaasin ABC heparitinaasi 1, heparitinaasi 2, keratanase, kondroitinaasin Acil, kondroitinaasin B, ja hyaluroinidase . Western blotting osoitti, että moolimassa erittyvän SRPX2 proteiini oli selvästi vähentynyt kondroitinaasi ABC ruoansulatusta, mutta ei heparitinaasi tai keratanase tai hyaluroinidase (Fig. 3A, 3B). Edelleen kondroitinaasin käsittely osoitti, että kondroitinaasi ABC ja kondroitinaasin Acil täysin pilkottu GAG on SRPX2, mutta kondroitinaasi B osittain pilkottu nämä ketjut (Fig. 3B). Pieni hajotettua SRPX2 proteiini havaittiin myös käyttämällä anti-SRPX2 vasta-aineella (Fig. 3C, 3D). Nämä tulokset osoittavat, että SRPX2 sisältää kondroitiinisulfaattia GAG-ketjujen ja on uusi kondroitiinisulfaatti proteoglykaanin (CSPG). Lisäksi, osittainen hajotus kondroitinaasi B viittaa siihen, että dermataanisulfaatti komponentti voidaan sisällyttää kondroitiinisulfaatti GAG ketjuja. Seuraavaksi vahvisti tulokset entsymaattisella digestiolla endogeenistä SRPX2 HUVEC käyttäen western blotting anti-SRPX2 vasta-aineen ja saatiin samanlainen tulos (Fig. 4A). Anti-kondroitiinisulfaatti vasta-aineella (CS-56) myös tunnistanut kondroitiinisulfaatti GAG on SRPX2 (Fig. 4B). Ei-sotkee ​​bändejä 120 kDa solulysaatissa ovat endogeenisiä SRPX2.

(A, B) Puhdistettu SRPX2 proteiini on saatu elatusaine HEK293-Mock tai HEK293-SRPX2-HA /His-soluja hajotettiin kondroitinaasi ABC, heparitinaasi 1, heparitinaasi 2, keratanase, kondroitinaasin Acil, kondroitinaasi B ja hyaluroinidase. Vaikutusta pilkkomalla glykosaminoglykaaniketjujen havaittiin käyttäen western-blottauksella käyttämällä anti-HA (A, B) ja anti-SRPX2 (C, D) -vasta-ainetta. IB: immunoblottauksella, CM: viljelyalusta. Mock: HEK293-Mock soluihin, SRPX2: HEK293-SRPX2-HA /His soluja.

(A) pilkkominen Chondroitinase ABC endogeenisen SRPX2 valkuaista HUVEC (ihmisen napalaskimon endoteelisolujen). SRPX2 proteiini havaittiin käyttäen anti-SRPX2 vasta-aine. (B) Western blotting varten SRPX2 proteiinia käyttäen anti-kondroitiinisulfaatti vasta-aineella (CS-56). Ei-sotkee ​​bändejä 120 kDa solulysaatissa ovat endogeenisiä SRPX2. IB: immunoblottauksella, lysaatti: solulysaatti, CM: viljelyalusta. Mock: HEK293-mock-solut, SRPX2: HEK293-SRPX2-HA /His-soluissa.

HGF sitoutuu SRPX2

On hyvin tunnettua, että useat ligandeja, kuten HGF, hepariinia sitovat EGF: n kaltainen kasvutekijä, fibroblastikasvutekijä 2 ja endoteelikasvutekijä kykenevät sitoutumaan GAG ketjun ja että tällaista vuorovaikutusta pidetään ainutlaatuinen ominaisuus GAG ja proteoglykaanien [8]. Mukaan raportin CSPG endocan ja HGF sitoutuminen [9], tutkimme vuorovaikutusta HGF ja GAG käyttäen IAsys resonanssipiirejä peili bioanturin. HGF annosriippuvaisesti sitoutunut GAG: ien ja SRPX2, kun taas ohjaus BSA ei (Fig. 5A).

K

d

arvo tämän vuorovaikutuksen laskettuna suhde

K

diss /K

perse

, oli 5,6 nM; nämä tiedot olivat samanlaisia ​​kuin aiemmin ilmoitetut tiedot HGF ja endocan [9]. Seuraavaksi tutkimme biologisen toiminnan SRPX2 on HGF. HGF lisääntynyt leviämisen HUVEC, ja lisäksi puhdistetun SRPX2 proteiinin elatusaineeseen huomattavasti HGF-indusoitua proliferaatiota (kuvio 5B). Nämä tulokset viittaavat siihen, että vuorovaikutus HGF kanssa SRPX2 on positiivinen vaikutus angiogeneesiin.

(A) IAsys resonanssipiirejä peili bioanturin käytettiin analyysiin. Naudan seerumin albumiinia (BSA) käytettiin negatiivisena kontrollina. (B) Solujen lisääntyminen HUVEC arvioitiin käyttäen MTT-määritystä. HUVEC-solut stimuloitiin kanssa tai ilman 10 ng /ml HGF: n ja 5 ug /ml puhdistettua SRPX2 proteiinia 72 tunnin ajan. *, SRPX2 (-) vs. (+), p 0,05.

SRPX2 on ainutlaatuinen molekyyli arkkitehtuurit verrattuna muihin sushi toista moduulia sisältävä CSPG

Tiedot julkiset tietokannat (https://smart.embl-heidelberg.de/) ja aiemman raportin [10] osoitti, että SRPX2 on kolme sushi toista moduulia (tunnetaan myös komplementtikontrollin proteiini moduuleja tai lyhyt konsensus toistoja) ja yksi hyaline domain (Fig. 6 ). Mielenkiintoista on, että neljä CSPG (agrrecan, versikaani, neurocan ja brevican; tunnetaan myös nimellä lecticans) on läsnä yksi sushi toista moduulia sisältävä perheen, ja niiden yhteinen molekyylipaino arkkitehtuurit koostua yhdestä immunoglobuliinin kaltaisen domeenin, 2~4 LINK domeenista, joista toinen EGF kaltainen domeeni, yksi C-tyypin lektiini, ja yksi sushi toista moduuli (Fig. 6). Läsnäolo sushi toista moduuli ja luokittelua CSPG ovat samat SRPX2 ja lecticans, mutta muut molekyyli- arkkitehtuurien SRPX2 ovat aivan erilaiset.

Tiedot saatiin julkisesta tietokannasta SMART (http: //smart.embl-heidelberg.de/). SRPX2 on kolme sushi toista moduulia ja yksi hyaline domain. Neljä sushi toista moduulia sisältävä CSPG (agrrecan, versikaani, neurocan ja brevican; tunnetaan myös nimellä lecticans) on myös esitetty. SP: signaalipeptidejä, AA: aminohapot. Sushi: sushi toista modules /CCP /lyhyt konsensus toistoja, Hyaline: hyaline domain, IG: immunoglobuliinin kaltaisia, LINK: hyaluronaani sitova, EGF-l: EGF: n kaltainen (Ca

2 +: aa sitova), Ct-L : C-tyypin lektiinin.

yhdessä nämä havainnot osoittavat, että SRPX2 on uusi CSPG, joka on yli-ilmentynyt ruoansulatuskanavan syöpäsoluja.

keskustelu

laaja käyttää ja rakenteellista monimuotoisuutta sushi toista moduuleista oletettavasti heijastaa monipuolisuus rakenteellinen rakennusteline, joka on mukautettu evoluution sopivat moniin tarkoituksiin, sekä arkkitehtoninen ja toiminnallinen, kuten sovittelu spesifisten proteiini-proteiini ja proteiini-hiilihydraatti vuorovaikutuksia [10] – [12]. Samaan aikaan SRPX2 on yksi hyaline verkkotunnus, joka näyttää olevan osallisena soluadheesiota. Hyaline verkkotunnuksia on tunnistettu useita eukaryoottisia proteiineja ja liittyy usein sushi toista moduulien tai järjestetty useita kopioita [13]. Nämä ominaisuudet molekyyli järjestelmäarkkitehtuureissa SRPX2, perustuu tietoon proteiini-proteiini vuorovaikutusten, saattaa osaltaan ligandi /reseptori vuorovaikutukset SRPX2 ja uPAR, joilla on vaikutuksia häiriöt kielen cortex, kognition, ja angiogeneesi [3], [4] .

Olemme osoittaneet, että SRPX2 on uusi CSPG, viittaa siihen, että SRPX2 voi olla muita ei vielä tunneta biologisia toimintoja, kuten proteoglykaani, mukaan lukien vuorovaikutus erilaisten solunulkoisten signalointimolekyylien kuten kasvutekijöitä, morfogeeneille, entsyymejä ja kemokiinit ja /tai se voi toimia solun ekstrasellulaarisen matriisin rajapinnan moduloida solun signalointia. Conditioned-väliaineessa SRPX2 tuottavien solujen tehosti merkittävästi soluadheesiota eri syöpäsolulinjoissa [5]; tämä tulos voidaan selittää biologisen toiminnan SRPX2 kuin proteoglykaani. Lisäksi, vaikka olemme vain osoittaneet, että HGF voi sitoutua SRPX2, tulokset viittaavat siihen, että muiden tunnettujen GAG-vuorovaikutuksessa ligandien voivat kyetä sitoutumaan GAG ketjun SRPX2. Siksi toiminta ligandia SRPX2 sitoutuminen voi suuresti vaikuttaa toimintaan signalointireitin kriittinen syöpäsolujen, kuten solujen lisääntymisen, apoptoosin, muuttoliike ja selviytyminen [14]. Lisäksi, SRPX2 havaittiin erittyvän, ja se voi toimia soluväliaineen proteiinin samanlainen kuin muut proteoglykaanien; todellakin päällystetään viljelymaljalla kanssa SRPX2 proteiinin tehosti merkittävästi soluadheesiota [5], joka tukee tätä ajatusta.

Verisuonten endoteelisolujen HUVEC merkittävästi nimenomaista SRPX2 samassa määrin kuin voimakkaasti ilmentävän syövän solulinjat [5]. Tuoreessa raportissa osoitettiin, että Srpx2 on uusi sovittelija angiogeneesin ja keskeinen molekyyli mukana invasiivisia muuttoliike angiogeenisten endoteelin kautta rooliaan ligandina verisuonten uPAR [4]. Meidän havainnot tukevat myös osallistumista SRPX2 angiogeneesissä toisesta näkökohta proteoglykaanien. Koska endocan on hyvin tunnettu verisuonten endoteelisolujen erityisiä CSPG [8], SRPX2 voidaan luokitella verisuonten liittyvä CSPG samanlainen endocan.

Yhteenvetona, olemme havainneet, että SRPX2 on uusi kondroitiinisulfaatti proteoglykaani joka on yli-ilmentynyt ruoansulatuskanavan syöpään. Tutkimuksen tuloksiin sisältyy keskeinen glykobiologiatutkimukseen tietoa tämän proteiinin syöpäsoluissa.

Kiitokset

Kiitos Mrs Eiko Honda (Life Science Center, Kinki University School of Medicine) hänen teknistä tukea ja Mr. Kiyotaka Okada (Department of Physiology, Kinki University School of Medicine) teknisistä kysymyksistä.