Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Gut johdettuja lipidejä tekijät ovat olleet sekaantunut systeeminen vammoja ja tulehdus, mutta tarkat reitit mukana ei tunneta. Lisäksi ruokavalion rasvan saanti ja liikalihavuus ovat riippumattomia riskitekijöitä kehittämiseen peräsuolen syöpä. Täällä tutkimme vakavuus kokeellisen koliitti ja kehittäminen ulcerosa liittyvän syövän (CAC) hiirillä indusoituvaa lohko kylomikroniin eritystä ja rasvaa imeytymishäiriö, seuraavat suoli-specific poistamista mikrosomaalisten triglyseridien siirtävän proteiinin (

MTTP-IKO

).

Menetelmät /Principal havainnot

MTTP-IKO

hiirillä esiintyi enemmän vakavia vammoja kanssa ~90% kuolleisuuden dekstraaninatriumsulfaatti (DSS) aiheuttama koliitti, verrattuna 20% kontrolleissa. Suolen läpäisevyys lisääntyi

MTTP-IKO

hiirillä verrokkeihin verrattuna, sekä lähtötilanteessa ja DSS annon, yhdessä lisääntynyt verenkierrossa TNFa. DSS hoito lisäsi paksusuolen mRNA IL-1β ja IL-17A sekä inflammasome ilmaus molemmissa genotyypit, mutta runsaasti TNFa valikoidusti lisääntynyt DSS käsitelty

MTTP-IKO

hiirillä. Oli 2-kertainen nousu paksusuolen tuumoritaakka

MTTP-IKO

hiirissä azoxymethane /DSS hoito, joka liittyy lisääntynyt paksusuolen tulehdus sekä muutokset sytokiiniekspressiota. Tutkia kanavat, joita muutokset rasvahappo runsaasti saattavat vuorovaikutuksessa sytokiinisignaloinnin säännellä paksusuolen epiteelin kasvua, käytimme ensisijainen hiiren myofibroblasteja osoittamaan, että palmitaatti indusoima amfireguliini ja epiregulin ja täydennetty kasvu näissä molemmissa kasvun välittäjäaineiden kun lisätään IL-1βor TNFa.

Johtopäätökset

Nämä tutkimukset osoittavat, että

MTTP-IKO

hiiret huolimatta imevää käytännössä mitään rasvaa, näyttelytila ​​täydennetty rasvahappo riippuvainen signalointi, joka puolestaan pahentaa paksusuolen vammoja ja lisää kasvainten muodostumiseen.

Citation: Xie Y, Matsumoto H, Nalbantoglu I, Kerr TA, Luo J, Rubin DC, et al. (2013) Suolisto-Specific MTTP poistaminen Kasvattaa vakavuus Experimental Koliitti ja johtaa suurempaan tuumoritaakka malli Colitis Associated Cancer. PLoS ONE 8 (6): e67819. doi: 10,1371 /journal.pone.0067819

Editor: Josep Bassaganya-Riera, Virginia Tech, Yhdysvallat

vastaanotettu: 14 maaliskuu 2013; Hyväksytty: 22 toukokuu 2013; Julkaistu: 21 kesäkuu 2013

Copyright: © 2013 Xie et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat rahoitusta National Institutes of Health (HL- 38180, DK-56260 ja Washington University Digestive Disease Research Core Centerin DK-52574, erityisesti hiiren ja morfologia ydintä) ja NOD. DR tukivat avustuksia DK-46122 ja DK-61216. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

jatkuva liikalihavuuden ja siihen liittyvien komorbiditeetteja on lisännyt kiinnostusta ymmärtämisessä reittejä ja välittäjiä mukana, varsinkin tulehdus ja syöpään. Ylipaino ja siihen liittyvät metaboliset komplikaatiot on osoitettu olevan rooli useissa syöpiä, kuten peräsuolen syöpä (CRC) ja näin ollen ruokavalion muutos ja painonhallintaan nähdään keskeinen muunneltavissa riskitekijöitä [1]. Kuitenkin hienomekanismin ja kanavat, joita lihavuus vaikuttaa CRC riski edelleen puutteellisesti ja kuuluu todennäköisesti muutoksiin systeemisen tulehduksen ja sytokiinisignaloinnin, insuliiniresistenssi sekä paikallisia ja systeemisiä vaikutuksia muuntuneen ravinteiden ottoa kuten rasvahapot, kolesteroli ja sappihapot [2]. Koska sen merkitys energianlähteenä, ravinnon rasvan saanti on ollut tavoite interventioon strategian vaikutusten lieventämiseksi liikalihavuuden ja tulehdusta CRC riski [3].

Lisäksi rooli lihavuuden ja rasvan saanti moduloinnissa tulehdusta ja CRC riski, että on syntymässä tietojen mukaan ohutsuolen tärkeä rooli välittäjänä tulehdusreaktiota systeemisen sepsiksen [4], [5]. Tässä skenaariossa on ehdotettu, että ohutsuolen erittää lipidi johdettuja tuotteita luminaaliselle ruoansulatusta, jotka sitten kuljetetaan suoliliepeen imutiehyissä, jossa ne aiheuttavat elimen vajaatoiminta on kaukaisiin kohtiin [6], [7]. Muu työ on vahvistanut tätä gut-imusolmukkeiden hypoteesi osoittamalla, että ligaatio suoliliepeen kanavan (poistaen näin toimituksen kylomikronien suolistosta verenkiertoon) kumoaa systeemisiä vaikutuksia shokki, havaintoja, jotka osoittavat, kuinka tärkeää on lipidivälittäjäaineita johtuvien suolen patogeneesissä systeemisen tulehduksen [8], [9]. Muu työ on sekaantunut lipoproteiinit kuin kuljetusvälineisiin kasvutekijöiden ja morfogeeneille, mukaan lukien nisäkkäiden Wnt3, mikä viittaa perusteellisempi roolia lipidikuljetukseen säätelyssä epiteelin muodostumista ja kasvua [10].

Tässä tutkimuksessa olemme tutki rooli suolen kylomikroniin eritystä, jotta voidaan ymmärtää rooli suolen lipidikuljetukseen patogeneesissä paksusuolen tulehduksen ja koliitti osakkuusyritys syöpä (CAC). Olemme viime aikoina osoittaneet, että hiirten ehdollinen suoli-erityisiä poisto mikrosomaalisten triglyseridien siirtävän proteiinin (

MTTP-IKO

) kehittää lähes täydellinen lohko imeytymistä suolistosta [11] ja näytteille selviytymisen etu altistettiin

Pseudomonas aeruginosa

, yleisin syy gram-negatiivisten keuhkokuume [12]. Nämä toteamukset esiin mahdollisuuden, että esto suolen kylomikroniin eritystä voi myös lieventämään kemikaalin aiheuttaman kokeellisen koliitin ja puolestaan ​​kumoaa peräsuolen syövän kehitystä seuraavat azoxymethane /dekstraaninatriumsulfaatti (AOM /DSS) haaste [13]. Tutkimuksemme kuitenkin osoittanut, että

MTTP-IKO

hiirille kehittyi huonompi paksusuolen vammoja ja lisääntynyt kasvaintaakkaa. Lisäksi olemme havainneet, että muuntunut rasvahappo signalointi voi olla keskeinen rooli edistettäessä nämä fenotyypit.

Materiaalit ja menetelmät

Eläimet

MTTP

flox /flox villin- Cre-ER

T2 (

MTTP-IKO

) hiiriä (yhdessä pesuetove- tarkastukset) käytettiin näissä tutkimuksissa, on taustalla ~75% C57BL /6 ja -25% 129 /SvJ. Cre-rekombinaasi ilmentyminen villus epiteelisolujen indusoitiin viisi päivittäistä vatsaontelonsisäisiä 1 mg tamoksifeenin (Sigma), kuten aiemmin on kuvattu [11]. Kokeet suoritettiin hiirillä kuluttaa säännöllisesti vähärasvainen jyrsijämuonaa. Kokeellinen paksusuolentulehdus aiheutettiin antamalla 2,5% dekstraaninatriumsulfaatti (DSS) (MW 40,000-50,000, Cat # 9011-18-1, Affymetrix, Inc., Cleveland, Ohio.), Että ilmoitettu kertaa kuvassa legendoja ja punnittiin päivittäin . CAC indusoitiin injektoimalla 8 viikkoa vanhat hiiret 10 mg /kg kehon paino azoxymethane (AOM, Sigma), minkä jälkeen kolme sykliä (5 päivää) ja DSS alkaen 5

th (2%), 26

th (2,5%) ja 46

th (2,5%) päivänä AOM injektion, vähäisiä muutoksia protokollan käyttämät muut [14]. Hiiret lopetettiin 9 viikkoa sen jälkeen, kun AOM injektion ja kudoksia kerätään analyysiä varten. Kaikki eläinkokeet hyväksyttiin Animal Studies valiokuntien Washington University School of Medicine (# 20100146) ja tehtiin tiukka mukaisesti National Institutes of Health suuntaviivoja koe-eläinten käytön.

Histomorphological analyysit

näytteitä ohutsuolen ja paksusuolen kiinnitettiin ja sulautettujen leikkaamista varten ja hematoksyliinillä ja eosiinilla (H 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Lisääntynyt vakavuus DSS koliitin MTTP-IKO hiiret

annettiin 2,5% DSS juomavedessä 12 päivää, jotta voidaan arvioida vaikutus eloonjäämiseen genotyypin. Meidän havainnot paljastivat, että

MTTP-IKO

hiirillä nopeutetun kuolemasta ja lyhensi eloonjäämisen (1/10) verrattuna kontrollihiiriin (9/11) Kuva 1A. Täydennetty vahinko fenotyypin

MTTP-IKO

hiiriä liittyi enemmän laihtuminen lyhyemmässä (7 päivää) kokeissa (kuvio 1 C) ja paluun viivästymiseen perustilan painosta (kuvio 1 B), sekä vähensi paksusuolen pituus ( Kuvio 1D, E). Myös vakavampia histologinen vahinkoa osoituksena lisääntynyt lamina proprialle tulehdusta ja krypta drop-out in laskeva paksusuoli on

MTTP-IKO

hiirillä sekä 5 päivää (kuvio 2A, B, E) ja 7 vuorokauden (Kuva 2C, D, E) ja vähentää solujen lisääntymistä, kuten ilmenee vähentynyt BrdU (kuvio 2 F).

. Vähentynyt selviytyminen

MTTP-IKO

(n = 10) verrattuna samasta poikueesta valvonnan (n = 12). 8-10 viikkoa hiirille syötettiin 2,5% DSS juomavedessä 12 päivää ja seuraa enintään 25 päivää. ** P 0,01. B. Paino elpyminen käyrä yhden jakson jälkeen DSS. Hiiret (n = 4 hiirtä ryhmää kohti) syötettiin 2,5% DSS 7 päivää ja punnitaan välein 1-3 päivää 25 päivän kuluessa 1

st päivänä DSS hoitoa. * P 0,05. C. Laihtuminen jälkeen 7 päivää DSS hoidon, n = 10-12 hiirtä genotyyppi. Tiedot esitetään keskiarvona% ± SEM alkuperäisestä painosta. * P 0,05, ** p 0,01 D. Kuvat ovat brutto ulkonäkö paksusuolen kontrollista ja

MTTP IKO

hiiret 7 päivän kuluttua DSS hoitoa. E. Colon pituus 0, 5 ja 7 päivää 2,5% DSS. Tiedot ovat keskiarvo ± SE 4-9 hiirtä per ryhmä. * P 0,05.

. ja B. edustaja histologisia kuvia vertailukelpoisten alueiden distaalisen paksusuolen kontrollista (A.) ja

MTTP-IKO

hiiret (B) 5 päivän kuluttua DSS hoidon. Kentät A ja B esittävät lisääntynyt limakalvon vauriota in

MTTP-IKO

hiiret ominaista lisääntynyt lamina propria tulehdus ulottuu submukoosassa menettäminen kryptissa. C. ja D. edustaja histologinen kuvia vertailukelpoisten alueiden laskeva paksusuoli kontrollista (C.) ja

MTTP-IKO

hiiret (D.) 7 päivän kuluttua DSS hoitoa. Paneelit C ja D osoittavat kasvua lamina propria tulehdus, polttoväli cryptitis ominaista neutrofiiliseen tunkeutuminen ja polttoväli krypta drop-out in

MTTP-IKO

hiirillä. Palkit osoittavat 100 pm. E. kvantitatiivinen arvio histologisia vaurioita (n = 5-7 hiirtä ryhmää kohti). F. BrdU positiiviset imukerässoluista sisään peräsuolen limakalvolla. Tiedot olivat keskiarvoa ± SEM n = 5-6 hiirtä ryhmää kohti. * P 0,05.

DSS hallinto ei indusoi makroskooppinen ohutsuolen vahinkoa MTTP-IKO hiiriä ja ei liity paksusuolen lipidien kertymistä

Aiemmat tutkimukset osoittivat, että esto kylomikroniin eritys suolesta

MTTP-IKO

hiirissä johtaa massiivinen lipidien turpoamista kanssa villus vääristymistä [11], nostaa mahdollisuus, että korkea kuolleisuus kohdanneet seuraavat DSS annon saattaisivat brutto vaurioita ohutsuolessa näiden hiirten. Kuitenkin tämä ei pidä paikkaansa. Kuten kuviosta 3 nähdään AD, havaitsimme odotettu lipidien kertymistä ohutsuolen nukkapeitteen

MTTP-IKO

hiirillä mutta ei ollut brutto- tai histologiset haavauma missä tahansa alueen ohutsuolen seuraavat 7 päivää DSS hoitoon. Lisäksi, koska MTTP ilmaistaan ​​paksusuolessa hiirillä (joskin alhainen [18], [19]), tutkimme mahdollisuutta, että paksusuolen lipidien kertyminen voi edistää fenotyyppi havaittu

MTTP-IKO

hiiret . Tämä taas ei ollut. Kuten kuviossa 3E-H, kun taas me havainneet runsas lipidien pisara kertymistä ohutsuolessa

MTTP-IKO

hiiriä (kuten aiemmin mainittiin [11]) oli vain harvoissa, hajallaan osmium värjäys lipidipisaroita nähty paksusuolen

MTTP-IKO

hiirillä ja ei ollut kertymistä triglyseridien, kolesteroli tai vapaiden rasvahappojen sisällä paksusuolen limakalvolla kuin havaittavissa entsymaattisella määrityksellä (kuvio 3I).

AD. Edustavia H 0,05. B. ja C. mRNA: n geenien ilmentymistä, jotka liittyvät ER stressiä ja Epiteeliesteen functioin ohutsuolessa ja paksusuolessa. mRNA-ekspressio mitattiin QPCR ja ilmaistiin kertainen muutos verrattuna ei-DSS käsiteltyihin kontrollihiiriin jälkeen normalisoidaan sisäisen valvonnan GAPDH. Tiedot esitetään keskiarvona ± SEM 4-5 hiirtä per ryhmä. D. vaikutus TUDCA eloonjäämiseen osuuden valvonta ja

MTTP-IKO

hiiriä DSS. 8-10 viikkoa vanhoja hiiriä käsiteltiin TUDCA tai suolaliuosta intraperitoneaalisesti aikana samanaikaisen annon DSS (2,5%) juomavedessä 12 päivää. n = 5-9 kussakin ryhmässä. * P 0,05.

Lisäksi tutkittiin parametrit avatulla proteiinivaste (UPR) ja integroitu stressin vastaus reittejä ohutsuolessa ja paksusuolen sekä genotyyppien ja vaikutus DSS altistumista. Nämä toteamukset havaittu olevan perustason ilmentymistä Grp78 ja Chop ohutsuolessa on

MTTP-IKO

hiirillä (kuva 4B), kuten aikaisemmin on mainittu [22]. Kuitenkin, DSS hoito ei saatu lisää entisestään tahansa näistä stressin markkereita, vaan yleensä vähentää ilmentymistä Grp78 ja Chop ohutsuolessa on

MTTP-IKO

hiirissä (kuvio 4B). Sitä vastoin ei ollut lähtötilanteessa muutoksia UPR-mRNA paksusuolessa

MTTP-IKO

hiiriä, mutta DSS hoito johti runsastuminen XBP-1s molemmissa genotyypeissä (kuvio 4C). Nämä havainnot viittaavat siihen, että ei ole lähtötilanteessa UPR vasteen paksusuolessa

MTTP-IKO

hiirillä. Sen mahdollisuuden tutkimiseksi, että adaptiivisen ER stressin vastaus saattaisi vaikuttaa vahingon fenotyyppi havaittu

MTTP-IKO

hiiriä, käsittelimme hiiriä kemiallinen chaperoniproteiiniin tauroursodeoksikoolihappoa (TUDCA) sillä aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että tämä strategia vaimentaa UPR in metabolisen stressin olosuhteissa hiirissä [22], [23]. Nämä havainnot osoittavat, että TUDCA hoito epäonnistui pelastamaan vakava fenotyyppi DSS käsitelty

MTTP-IKO

hiiriä ja jos jotain johti kiihtyi kuoleman näissä eläimissä (kuvio 4D). Nämä havainnot yhdessä johtavat meidät päättelemään, että ominaisuudet ER stressiä ja UPR totesi ohutsuolessa

MTTP-IKO

hiiret ovat luonteeltaan joustavia ja että kumoamisesta tämä vastaus johtaa huonompaan vammoja.

Tehostettu paksusuolen tulehduksen MTTP-IKO hiirissä vasteena DSS vamman

Havaitsimme odotetun ilmentymisen lisääntyminen useiden sytokiinien mRNA: iden paksusuolessa DSS käsiteltyjen hiirten, mukaan lukien IL-1β, IL-17A ja NLRP3, vertailukelpoisia induktio molemmissa genotyypeissä (kuvio 5A). Kuitenkin havaitsimme suuremman kasvun TNFa ilmentymisen paksusuolen DSS käsiteltiin

MTTP-IKO

hiirillä verrokkeihin verrattuna (kuvio 5A). Tutkimme myös seerumin LPS, IL-1β ja TNFa, jotka on aikaisemmin yhdistetty suolen vahinkoa käsitellyillä hiirillä DSS [14], [24]. Nämä toteamukset paljasti, että seerumin TNFa-tasot olivat johdonmukaisesti koholla

MTTP-IKO

hiiret, sekä lähtötilanteessa ja seuraavan DSS hoitoa, kun taas veren LPS ja IL-1β olivat vaihtelevampia (kuva 5B-D).

. mRNA: n geenien ilmentymistä, jotka liittyvät tulehdukseen laskevassa koolonissa ohjaus ja

MTTP-IKO

hiirillä ennen ja jälkeen 7 päivää DSS hoitoon. mRNA mitattiin QPCR ja ilmaistaan ​​kertainen muutoksia verrattuna ei-DSS-käsiteltyihin kontrollihiiriin jälkeen normalisoitiin GAPDH. Tiedot esitetään keskiarvona ± SEM 5-9 hiirtä per ryhmä. * P 0,05. B.-D. Seerumin sytokiinien ohjaus ja

MTTP-IKO

hiirillä. Verta kerättiin kontrollista ja

MTTP-IKO

hiirillä ennen tai 7 päivää sen jälkeen, kun DSS hoidon. Seerumin LPS (B), IL1B (C) ja TNFa: n (D) mitattiin, kuten on kuvattu menetelmät. Tiedot ovat keskiarvo ± SEM 8-10 hiirtä per ryhmä. * P 0,05.

Colonic vammoja ja tulehdus liittyy lisääntynyt alttius sertin MTTP-IKO hiiret

Huomattava määrä tiedot osoittavat, että tulehdus on merkittävä tekijä kasvaimen ja työ ehdottaa kausaalinen linkki välittyvät reittejä, joihin liittyy tulehduksellinen sytokiinisignaloinnin [25], [26]. Koska rasituksilta

MTTP-IKO

hiiret ilmentämään vaikea muoto vastauksena DSS välittämää vahinkoa, kysyimme, onko tämä lisääntynyt paksusuolen tulehdus liittyi muuttuneeseen paksusuolen kasvaintaakkaa annon azoxymethane seuraa kolme sykliä DSS (kuvio 6A). Tutkimuksen havaintojen suurempi kasvainten lukumäärää (kuvio 6B) ja yleisen kasvaintaakkaa (kuvio 6C, D) (varmistettiin patologinen tutkimus patologi sokeita genotyypin) in

MTTP-IKO

hiiriä yhdessä lisääntynyt solujen lisääntymisen kuin osoituksena BrdU (kuvio 6E, F).

. Ylempi paneeli: Kaaviokuva AOM /DSS protokolla (yksityiskohtaisemmin menetelmät). Hiiret tapettiin 12 päivää viimeisen syklin jälkeen DSS. n = 13-15 hiiret kussakin ryhmässä. Alempi paneeli: Prosentuaalinen painon muutos aikana AOM-DSS hoitoa. B. Edustavia paksusuolen kuvia. C. lukumäärä Kolorektaalituumorien hiirtä kohti aiheuttama AOM-DSS hoitoa. D. tuumoritaakka AOM-DSS käsitelty ohjaus ja

MTTP-IKO

hiirillä. Tiedot paneelit D. ilmoitetaan keskiarvoina ± SEM kasvaimen alueella normalisoitu koko paksusuolen alueella, n = 9-10 hiiret kussakin ryhmässä. E. ja F. Lisääntynyt polyyppi lisääntymistä BrdU värjäystä. (E) on edustava kuva, ylempi paneeli on ohjaus polyyppi, alapaneeli on peräisin

MTTP-IKO

polyyppi. (F) on pylväsdiagrammi keskiarvo ± SEM (n = 5-6 hiirtä ryhmää kohti). * P 0,05.

tulehduksellinen signaaleja yhdistettynä muuttuneisiin rasvahapon signalointi ajaa kasvua välittäjänä eritystä MTTP-IKO hiiret

Jotta ymmärtää syvällisemmin mekanismeista proliferatiivisen fenotyyppi havaittu paksusuolen

MTTP-IKO

hiirissä vasteena AOM /DSS, me tutkittiin jälleen ilmentymiskuviot IL-1β ja TNFa. Havaitsimme lisääntynyt mRNA runsaasti IL-1β in

MTTP-IKO

hiirissä (kuvio 7A) ja suuntaus lisääntynyt IL-1β-proteiinin ilmentyminen (kuvio 7B). Ilmaisu TNFa: n mRNA: n oli verrattavissa genotyypin mutta havaittiin merkittävä kasvu TNFa-proteiinin tasot paksusuolen kudoksessa

MTTP-IKO

hiiret (kuvio 7B). Nämä havainnot jälleen tukevat hypoteesia, että muuttuneen tulehdusreaktio todennäköisesti osaltaan lisännyt kasvaintaakkaa havaittavissa

MTTP-IKO

hiirillä.

. Muuttunut mRNA: n ilmentymisen liittyvien geenien tulehdusta ja kasvua. Geenien ilmentyminen in AOM /DSS-käsitellyn laskeva paksusuoli mitattiin QPCR ja ilmaistiin kertainen muutos verrattuna kontrolliin hiirillä normalisoinnin GAPDH. Tiedot ovat keskiarvo ± SEM (n = 4 kussakin ryhmässä). * P 0,05. B. proteiinipitoisuus IL1B ja TNFa homogenaateissa laskevien paksusuolen AOM /DSS-käsitellyn ohjaus ja

MTTP-IKO

hiirillä mitattiin ELISA. Tiedot ovat keskiarvo ± SEM (n = 4 kussakin ryhmässä). * P 0,05. C. Western blot-analyysi amfireguliini (Areg), (1:1000 laimentaminen ensisijaisen vasta-aineen Thermo Fisher Scientific, Cat # RB-258); Akt (1:1000 ensisijaisen vasta-aineen Cell Signaling, Cat # 9272); p-Akt (1:1000 ensisijaisen vasta-aineen Cell Signaling, Cat # 9271) homogenaateissa valmistettujen näytteiden (menetelmät) kudoksista edellä todettiin B. D. Western blot kvantitoitiin Kodakin kuva-aseman 440 ja Carestream MI SE -ohjelmisto. Pylväsgrafiikka heijastaa keskiarvo ± SEM suhteellisen ilmaisun vertailuryhmän normalisoinnin jälkeen GAPDH. E. Ulosteen lipidilajien in chow syötetty ohjaus ja

MTTP-IK

O hiirillä. Yhteensä ulosteen lipidejä uutettiin ja kolesteroli (Chol), triglyseridit (TG), fosfolipidit (PL), ja vapaiden rasvahappojen (FFA) kvantifioitiin entsymaattisesti. Lipid sisältö esitetään ug /g ulosteita ja FFA sisältö esitetään myös umol /g ulostetta (upotus). Tiedot ovat keskiarvo ± SEM (n = 4-5 ryhmää kohden) ** p 0,01. F. mRNA runsaasti Areg ja ereg perusterveydenhuollossa suoliston myofibroblasteja jälkeen ilmoitetun stimulaation. Myofibroblasteja stimuloitiin ilmoitetuilla tekijät 12 tuntia. Gene (mRNA) ekspressio mitattiin QPCR ja ilmaistaan ​​kertainen muutos kontrollisoluihin verrattuna normalisoinnin jälkeen GAPDH. Kokeet suoritettiin kahdesti kolminkertaisina kunkin kokeen. Tiedot esitetään keskiarvona ± SEM. Ero arvojen ryhmällä on eri kirjain osoittamaan tilastollista merkitsevyyttä (p 0,05 tai suurempi). G. Western blot-analyysi Areg proteiinin ilmentymisen suolen limakalvolla hashomogenaattien ohjaus ja

MTTP-IKO

hiiret Länsi ruokavalio 2 viikkoa.

tutkia mekanismeja olla tässä vastaus, me sitoutui tarkastelu mahdollisten välittäjäaineiden tämän pro-proliferatiivinen fenotyyppi. Transcript profilointi ei paljastanut mitään merkittäviä muutoksia mRNA ilmentyminen useiden ehdokas välittäjäaineiden (kuvio 7A), mutta siellä oli suuntaus lisääntyneeseen amfireguliini proteiinin ilmentymistä ja lisätä fosfo-Akt runsauden (kuvio 7C, D). Nämä havainnot ehdottivat meille, että eritystä välittäjäaineiden suoliston myofibroblasteja voisi olla rooli kasvun modulaatio kautta paracrine reittejä. Tämän tueksi mahdollisuus on työ, joka esittää roolia strooman myofibroblastin tuotantoon amfireguliini ja epiregulin edistämisessä paksusuolen kasvaimen kasvua asettaminen tulehtunut ihmisen paksusuolen [27]. Lähestymistapamme ohjasivat aiemmat havainnot osoittavat, että ohutsuolen epiteelisolut

MTTP-IKO

hiiret tehdään lipotoxic vammaan lyhyellä aikavälillä rasvaisen ruokinta [22]. Perustuen näihin huomautuksiin, me epäillään, että kestävää kasvua edistävät vaikutukset suoliston

MTTP

poisto oli mahdollisesti välittämiä myofibroblasteja.

Jotta tutkia tätä mahdollisuutta tarkemmin, käännyimme ensisijainen hiiren suoliston myofibroblasteja tutkiakseen amfireguliini ja epiregulin sääntelyä. Ensin todettiin, että ulosteen lipidisisällöstä nostettiin seurauksena rasvan imeytymishäiriö in

MTTP-IKO

hiiriä, kuten aiemmin dokumentoitu [11]. Erityisesti olemme havaittu olevan ulosteen vapaan rasvahapon (FFA) runsaus sekä lisääntynyt pitoisuus kolesterolia ja fosfolipidiä

MTTP-IKO

hiirillä (kuva 7E). Olemme määrittäneet, että ulosteen FFA pitoisuus ohjaus hiirillä (-60 umol /g) oli samankaltainen kuin äskettäin [28]. Olemme keskittäneet huomiomme runsas tyydyttyneiden rasvahappojen, valitsemalla palmitiinihappo kuin alkuperäinen tavoite, johon tutkimaan säätää sekä amfireguliini ja epiregulin [29]. Meidän havainnot osoittavat silmiinpistävää säätelyä amfireguliini ja epiregulin mRNA ensisijainen hiiren suoliston myofibroblasteja 200 uM palmitaatti (Kuva 7E). Lisäksi tunnetut induktio amfireguliini ja epiregulin TNFa ja IL-1β [30] oli edelleen parantaa sisällyttämällä palmitaatin (Kuva 7E). Nämä havainnot viittaavat siihen, että rasvahapot osansa muuttamiseksi kasvua vasteita yhdessä muiden tunnettujen välittäjäaineiden. Tämän mukaisesti ehdotuksen osoitimme kasvanut ohutsuolen ilmentymistä amfireguliini ilmaisun

MTTP-IKO

hiiret altistumisen jälkeen rasvaisen Länsi ruokavalio (Kuva 7F, G). Yhdessä nämä havainnot viittaavat vahvasti siihen, että lisääntynyt paksusuolen rasvahappoa saatavuus, tuotetaan puutteellinen ohutsuolen kylomikroniin kokoonpano ja sen seurauksena lohko normaalissa lipidien imeytymistä, pahentaa tulehdus- ja muut mukautuva polkuja, jotka lisäävät suolen lisääntymistä.

Keskustelu