Krooninen sairaus

tiivistelmä

Apo2 ligandin (Apo2L) /tuumorinekroositekijä liittyvää apoptoosia indusoiva ligandi (TRAIL) on lupaava syövän terapeuttista ainetta. Rekombinantti ihmisen Apo2L /TRAIL on ollut kliinisissä tutkimuksissa, kun taas erilaisia ​​pahanlaatuisia kasvaimia resistenssin Apo2L /TRAIL. Me ja muut ovat osoittaneet, että useat syöpälääkkeiden ja flavonoideja vastustusta Apo2L /TRAIL säätelemällä kuoleman reseptori 5 (DR5) in pahanlaatuisten syöpäsolujen. Kuitenkin mekanismeja, joilla nämä yhdisteet indusoivat DR5 ilmaisua ei vielä tunneta. Tässä osoitamme, että ravinnon flavonoidi apigeniiniä sitoo ja estää adeniini nukleotidin translokaasin-2 (ANT2), jolloin lisälaite Apo2L /TRAIL aiheuttaman apoptoosin DR5. Apigenin ja genisteiini, jotka ovat merkittäviä flavonoidit, parannettu Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin syöpäsoluissa. Apigenin aiheuttama DR5 ilme, mutta genisteiinin ei. Käyttämällä menetelmää tunnistaa kohdistu suoraa flavonoideja, vertasimme sitovia proteiineja apigeniini kanssa genisteiinin. Huomasimme, että ANT2 oli tavoite apigeniiniä, mutta ei genisteiini. Samoin apigeniiniä, knockdovvn ANT2 tehostetun Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin säätelemällä DR5-ilmentymisen transkription jälkeisellä tasolla. Lisäksi hiljentäminen ANT2 vaimenee tehostaminen Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin by apigeniiniä. Nämä tulokset viittaavat siihen, että apigeniini ylössäätelee DR5 ja parantaa Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin sitomalla ja estämällä ANT2. Ehdotamme, että ANT2 estäjät saattavat edistää Apo2L /TRAIL terapia.

Citation: Oishi M, Iizumi Y, Taniguchi T, Goi W, Miki T, Sakai T (2013) Apigenin herkistää syöpäsolujen Apo2L /TRAIL by kohdistaminen Adenine nukleotidi- translokaasin-2. PLoS ONE 8 (2): e55922. doi: 10,1371 /journal.pone.0055922

Editor: Joseph Alan Bauer, Bauer Research Foundation, Yhdysvallat

vastaanotettu: 09 lokakuu 2012; Hyväksytty: 03 tammikuu 2013; Julkaistu: 19 helmikuu 2013

Copyright: © 2013 Oishi ym. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Grant-in-Aid nuorten tutkijoiden (Start-up, 21890223) ja (A, 20533178) Japanista Society for Promotion of Science (JSPS). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Eturauhassyöpä on toiseksi yleisimmin diagnosoitu syöpä ja kuudenneksi yleisin syy miesten syöpään liittyvän kuoleman maailmassa [1]. Vaikka androgeenireseptorin peruuttaminen hoito on tehokas hoidettaessa edennyt eturauhassyöpä, useimmat potilaat resistenttejä tämä terapia [2]. Kerrottiin, että dosetakselia ja prednisoni oli tehokas hormoni tulenkestävät eturauhassyöpä [3]. Kuitenkin tulos tämä hoito ei vieläkään riitä [4]. Näin ollen uusia strategioita tarvitaan hoitoon hormoni tulenkestävät eturauhassyöpä.

Apo2-ligandin (Apo2L) /tuumorinekroositekijä-sukuinen apoptoosia indusoiva ligandi (TRAIL) on sytokiini, joka kuuluu tuumorinekroositekijä perhe. Apo2L /TRAIL sitoutuu kuoleman reseptori 4 (DR4) ja kuolema reseptorin 5 (DR5), ja indusoi apoptoosia eri pahanlaatuisia kasvaimia, mutta ei normaaleissa soluissa [5], [6]. Viime aikoina useat rekombinantti ihmisen Apo2L /TRAIL ja agonistinen anti-DR5-vasta-aineita kehitettiin ja kliinisen vaiheen I /II tutkimusta on tehty potilailla, joilla on monenlaisia ​​pahanlaatuisia kasvaimia [7]. Kuitenkin useita kasvaimia resistenttejä Apo2L /TRAIL ja poistaa tämä vastus on olennaista kemoterapiaa käyttämällä Apo2L /TRAIL-reitin [8]. Me ja muut ovat seulotaan ruokavalion yhdisteiden herkistävät syöpäsolujen Apo2L /TRAIL ja tunnistettu useita polyfenoleja DR5 indusoijat [9] – [14]. Kuitenkin mekanismit, joilla nämä polyfenolit upregulate DR5 ei tunneta.

Adenine nukleotidin translocases (muurahaiset) ovat tärkeitä kuljettajat sisemmässä mitokondrion kalvon ja osansa välistä vaihtoa ADP ja ATP [15]. Muurahaisia ​​on neljä isoformia ihmisillä ja kunkin isoformin on erilainen kudosjakauma. ANT2 on yli-ilmentynyt useissa pahanlaatuisten syöpäsolujen ja on anti-apoptoottinen ominaisuudet [16], [17]. Esimerkiksi pudotus ja ANT2 on osoitettu lisäävän apoptoosia lonidamiini, kohdistuvaa antituumoriainetta mitokondrioiden [17], ja indusoida apoptoosia ihmisen rintasyövän solujen tuumorin kasvun estäminen

in vivo

[18]. Lisäksi knockdovvn ANT2 herkistää rintasyövän solujen Apo2L /TRAIL: n kautta DR5 [19]. Näin ollen, ANT2 pidetään lupaavana syöpälääkkeiden [20], [21].

selventämiseksi tarkat mekanismit, joiden kautta flavonoids indusoi DR5-ilmentymisen, käytimme magneettiset FG helmiä, joka paljasti hiljattain tavoite talidomidin ja mekanismi talidomidin teratogeenisuudesta [22], [23]. Tunnistimme ANT2 sitovana proteiinia ravinnon flavonoidi apigeniiniä joka voimistunut DR5. Kuten hoidossa apigeniiniä, knockdovvn ANT2 tehostetun Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin säätelemällä DR5. Lisäksi knockdovvn ANT2 vaimenee tehostaminen Apo2L /TRAIL-välitteisen apoptoosin apigeniiniä. Tässä tutkimuksessa, ensin osoittaa, että ANT2 on tavoite apigeniiniä joka ylössäätelee DR5 ja herkistää pahanlaatuisten solujen Apo2L /TRAIL.

Materiaalit ja menetelmät

Cell Culture

Ihmisen eturauhassyöpäsolulinja DU145 saatiin solulinja NCI-60 National Cancer Institute (MD, USA) Developmental Therapeutics Program (NCI DTP). Ihmisen eturauhassyöpä LNCaP saatiin American Type Culture Collection. Olemme varmistaneet, että nämä eturauhassyövän solulinjoissa ovat negatiivisia mykoplasman käyttäen MycoAlert ™ Mycoplasma Detection Kit (Lonza, Rockland, ME, USA). DU145-soluja pidettiin RPMI 1640-väliaineessa, jota oli täydennetty 10% naudan sikiön seerumia, 2 mmol /L glutamiinia, 50 yksikköä /ml penisilliiniä, ja 100 ug /ml streptomysiiniä, 37 ° C: ssa, 5% CO

2. LNCaP-soluja viljeltiin DMEM-väliaineessa, jota täydensi 10% naudan sikiön seerumia, 4 mmol /L glutamiinia, 50 yksikköä /ml penisilliiniä, ja 100 ug /ml streptomysiiniä, 37 ° C: ssa, 5% CO

2.

Reagenssit

Apigenin (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka, Japani) ja genistein (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, USA) hankittiin ja liuotettiin DMSO. Ihmisen rekombinantti Apo2L /TRAIL hankittiin Pepro Tech (Lontoo, UK).

RNAi

Seuraavat siRNA: t (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) käytettiin: siANT2 # 1, 5 ’ -AGAACAUUGGACCAUGCACCCUUGA-3 ’; siANT2 # 2, 5’-UGUAUUGCUUAUCUGCAGUGAUCUG-3 ’, ja Stealth RNAi negatiivisen kontrollin korkea GC. Vain tunne säikeitä näkyvät. DU145 tai LNCaP-solut transfektoitiin siRNA: illa, käyttämällä Lipofectamine RNAiMAX (Invitrogen).

Detection of Apoptosis

DU145 tai LNCaP-soluja käsiteltiin eri pitoisuuksilla kunkin flavonoidi ssa 24 tunnin ajan tai transfektoitu siRNA. Ihmisen rekombinantti Apo2L /TRAIL (50 ng /ml) lisättiin sitten soluihin. 24 tunnin kuluttua solut kerättiin ja suspendoitiin PBS: ään, joka sisälsi 0,1% Triton X-100, 50 ug /ml propidiumjodidia ja 100 ug /ml RNaasi A: ta (Sigma, St. Louis, MO, USA). Prosenttiosuus hypodiploid DNA (sub-G1) kvantitoitiin FACSCalibur (Becton, Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA). Aineisto analysoitiin käyttäen Cell Quest -ohjelmistoa (Becton, Dickinson and Company).

Western Blot analyysi

DU145 tai LNCaP-soluja käsiteltiin erilaisilla pitoisuuksilla kunkin flavonoidien tai transfektoitu siRNA. Solut lyysattiin RIPA-puskurilla (50 mmol /L Tris-HCI [pH 8,0], 150 mmol /l NaCI: a, 1% NP-40, 0,5% deoksikoolihappoa, 0,1% SDS: ää, 1 mmol /l DTT: tä, 0,5 mmol /L PMSF) 4 ° C: ssa 30 minuutin ajan ja sentrifugoitiin sitten. Supernatantit kerättiin ja erotettiin 10,0% SDS-PAGE: lla ja siirrettiin sitten Immobilon-P -kalvoille (Millipore, Bedford, MA, USA) käyttäen märkämenetelmällä. Membraanit liotettiin 5% maitoa TBS: ssä 4 ° C: ssa yön yli ja inkuboitiin primaarisilla vasta-aineilla huoneenlämpötilassa 60 min. Ensisijainen vasta-aineet olivat kanin polyklonaalista anti-DR5-vasta-ainetta (ProSci, Poway, CA, USA) 1:500 laimennus 5% maitoa TBS: ssä ja hiiren monoklonaalinen anti-β-aktiini-vasta-aine (Sigma) 1:2,000 laimennoksena 5 % maitoa TBS. Membraanit inkuboitiin sitten sekundaarisia vasta-aineita on konjugoitu piparjuuriperoksidaasiin on 1:2,000 laimennus TBS-Tween 20: ssa 60 minuuttia huoneen lämpötilassa. Proteiinivyöhykkeet näkyviksi BioMax XAR Film (Carestream Health, Inc., Rochester, NY, USA) käyttäen Chemi-Lumi One L (Nacalai Tesque, Kioto, Japani).

Quantitative Reaaliaikainen RT-PCR-analyysi

DU145 tai LNCaP-soluja käsiteltiin eri pitoisuuksilla kunkin flavonoidien tai transfektoitu siRNA. Kokonais-RNA uutettiin soluista, joissa Sepasol-RNA I Super (Nacalai Tesque). Täydentävä DNA syntetisoitiin kokonais-RNA käyttäen High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems, Melbourne, Australia). Täydentävä DNA monistettiin käyttämällä Taqman varten ANT2, DR5, ja GAPDH (Applied Biosystems), ja ABI 7300 Reaaliaikainen PCR System (Applied Biosystems).

valmistaminen Flavonoidi-kiinteiden Helmet

Magneettinen FG helmiä epoksi linkkerillä ostettiin Tamagawa Seiki (Nagano, Japani). Kiinnitys apigeniini ja genisteiiniä helmien päälle suoritettiin, kuten on kuvattu (Iizumi et al., Julkaisematon data). Lyhyesti, helmet sekoitettiin apigeniini DMF: ssä, joka sisälsi kaliumkarbonaattia 37 ° C: ssa 24 tunnin ajan, kuten genisteiiniksi 60 ° C: ssa 24 tunnin ajan, pestiin kahdesti DMF: llä ja sitten kahdesti deionisoidulla vedellä. Saatu Helmet varastoitiin 4 ° C: ssa.

puhdistus ja tunnistaminen flavonoidi-sitovia proteiineja

Flavonoidi-kiinteä helmiä tai tyhjää helmeä inkuboitiin DU145 kokosoluekstraktien 4 ° C: ssa 4 hr. Sitova proteiinit eluoitiin Laemmli väriaine, altistettiin SDS-PAGE: llä, ja havaitaan hopeavärjäyksellä. Sitova proteiinit altistettiin sitten geelissä pilkkomalla käyttäen Sequencing Grade Modified Trypsin (Promega, Madison, WI, USA). Peptidi fragmentit analysoitiin AUTOFLEX II massaspektrometrillä (Burker Daltonics, Billerica, MA, USA).

Tulokset

Apigenin Parantaa Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin kautta DR5 Postin -transcriptional taso

yleisimpiä flavonoideja, apigeniini tiedetään lisäävän Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin kautta DR5, kun taas genisteiini täydentää Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin ilman DR5 [9], [24 ], [25]. Esillä olevassa tutkimuksessa näiden yhdistelmä flavonoideja ja 50 ng /ml Apo2L /TRAIL merkittävästi indusoi apoptoosia, kun taas kukin flavonoidi yksinään ei ihmisen eturauhassyövän DU145-solut (Fig. 1A, S1 ja S2). Apigeniini indusoi DR5-proteiinin ilmentymistä, mutta genisteiinin ei (Fig. 1 B), kun taas apigeniini ei upregulate DR5 mRNA: ta (Fig. 1 C ja S3). Nämä tulokset viittaavat siihen, että apigeniini parantaa Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin, jonka transkription jälkeen säätelemällä DR5.

A, DU145-soluja käsiteltiin eri pitoisuuksilla kunkin flavonoidi 24 tunnin ajan, minkä jälkeen seuraa käsittely tai ilman 50 ng /ml Apo2L /TRAIL. 24 tunnin kuluttua, sub-G1 populaatio soluista mitattiin virtaussytometrialla. B, DU145-soluja käsiteltiin osoitetuilla pitoisuuksilla kunkin flavonoidi 24 tuntia ja kerättiin. Lysaatit analysoitiin Western-blottauksella anti-DR5-vasta-ainetta. β-aktiini käytettiin latauskontrollina. C, DR5 mRNA kvantifioitiin reaaliaikaisella RT-PCR ja normalisoidaan GAPDH. Pylväät, keskiarvo; baareja, SD (n = 3). **

P

0,01 suhteessa kontrolliin.

ANT2 identifioidaan sitovan proteiinin Apigenin, mutta ei Genistein

Valaistaan ​​mekanismi, jonka apigeniiniä indusoi DR5 ilme, selvitimme sitoutuvien proteiinien apigeniiniä, mutta ei genistein käyttäen FG helmiä epoksilla linkkeri. Apigenin ja genisteiini oli kiinnitetty Näiden helmien (Fig. 2A). Sitojaproteiinia apigeniini ja genisteiinin aineet puhdistettiin DU145 kokosoluekstraktien ja tunnistettiin MALDI-TOF-MS-analyysiä. Adeniini nukleotidin translokaasi-2 (ANT2) tunnistettiin sitovan proteiinin apigeniini, mutta ei genisteiini. Toisaalta, ribosomaalinen proteiini S9 (RPS9) tunnistettiin sitovan proteiinin näistä flavonoideja (Fig. 2B). Nämä tulokset osoittavat, että ANT2 on sitova proteiini apigeniiniä joka indusoi DR5 ilme.

, kiinnitys apigeniini ja genisteiinin päälle magneettiset FG helmiä. B, Apigenin- ja genisteiini sitovat proteiinit puhdistettiin koko solu-uutteista DU145-solujen kunkin flavonoidi-kiinteä tai ei (-) FG helmet ja analysoitiin hopeavärjäyksellä. Sitova proteiinit tunnistettiin massaspektrometrillä.

knockdovvn ANT2 Vahvistaa Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin kautta DR5 on Post-transkription taso

On raportoitu, että knockdovvn ANT2 parantaa Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin kautta DR5 ihmisen rintasyöpäsoluissa [19]. Siksi me tutkimme, knockdovvn ANT2 tehostetun Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin ihmisen eturauhassyövän DU145 soluja. ANT2 siRNA voimakkaasti tukahdutettu ilmentymistä ANT2 mRNA (Fig. 3A ja S4). Kuten on esitetty kuviossa. 3B ja S5, ANT2 siRNA ilmeisesti lisäsi Apo2L /TRAIL-välitteisen apoptoosin. Me seuraavaksi tutkittava, onko ANT2 Knockdown aiheuttama DR5 ilme. DR5 indusoitiin ANT2 siRNA: t on DU145-soluissa (kuvio. 3C), kun taas DR5 mRNA: n ei indusoi (Fig. 3d ja S6). Yhdessä nämä havainnot viittaavat siihen, että pudotus on ANT2 sekä apigeniini, parantaa Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin, jonka transkription jälkeen säätelemällä DR5.

DU145-solut transfektoitiin kaksi eri ANT2 siRNA: ita (siANT2 # 1 ja # 2) tai ei-suunnattu siRNA (siCtrl) ja inkuboitiin 48 tunnin ajan. A, ANT2 mRNA kvantifioitiin reaaliaikaisella RT-PCR ja normalisoidaan GAPDH. B, Soluja käsiteltiin kanssa tai ilman 50 ng /ml Apo2L /TRAIL. 24 tunnin kuluttua, sub-G1 populaatio soluista mitattiin virtaussytometrialla. C, Protein tasot DR5 ja β-aktiini analysoitiin Western-blottauksella. D, mRNA tasot DR5 mitattiin reaaliaikaisella RT-PCR ja normalisoidaan GAPDH. Pylväät, keskiarvo; baareja, SD (n = 3). *

P

0,05, **

P

0,01 suhteessa kontrolliin.

knockdovvn ANT2 vaimentaa Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin voimistaa Apigenin

Valaistaan ​​roolin ANT2 voidaan vahvistaa Apo2L /TRAIL herkkyyttä apigeniiniä, me tutki knockdovvn ANT2 vaikuttanut Parantamistoimien kuten aiemmin esiintynyt muiden kohdeproteiinien [26], [27]. Apigenin (20 mikromol /l) parannettu 50 ng /ml Apo2L /TRAIL-välitteisen apoptoosin DU145 soluissa käyttöön ohjaus siRNA, mutta ei DU145 soluissa käyttöön ANT2 siRNA (Fig. 4A ja S7). Hiljentäminen ANT2 alensi parantamista DR5-ilmentymisen 20 mikromol /l apigeniiniä (Fig. 4B). Nämä tulokset osoittavat, että ANT2 inhibitio edellyttää apigeniini parantaa DR5 ilmentymisen ja Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin.

DU145-solut transfektoitiin siANT2 # 1 tai siCtrl. 48 h jälkeen, soluja inkuboitiin 20 umol /l apigeniini 24 tunnin ajan. A, Soluja käsiteltiin kanssa tai ilman 50 ng /ml Apo2L /TRAIL. 24 tunnin kuluttua, sub-G1 populaatio soluista mitattiin virtaussytometrialla. Ero Saharan G1 väestön kanssa ja ilman Apo2L /TRAIL määriteltiin Apo2L /TRAIL aktiivisuutta. Apo2L /TRAIL aktiivisuus näytteissä ilman apigeniini normalisoitiin 1 B, Protein tasot DR5 ja β-aktiini analysoitiin Western-blottauksella. Pylväät, keskiarvo; baareja, SD (n = 3). **

P

0,01 suhteessa kontrolliin.

vieressä tutkittiin miten ANT2 toisessa syöpäsolulinja, hormoniriippuvaisen ihmisen eturauhassyövän LNCaP. ANT2 mRNA tehokkaasti vaiennetaan ANT2 siRNA (Fig. 5A ja S8), ja knockdovvn ANT2 myös indusoi DR5 ilmaisu (kuvio. 5B) ja parannettu 50 ng /ml Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin (Fig. 5C ja S9). Lisäksi, pudotus ja ANT2 heikennetty parantamiseksi Apo2L /TRAIL herkkyys ja DR5-ilmentymisen 20 umol /l apigeniini (Fig. 5D, E, ja S10).

LNCaP-solut transfektoitiin siANT2 tai siCtrl ja olivat inkuboitiin 48 tunnin ajan. A, ANT2 mRNA kvantifioitiin reaaliaikaisella RT-PCR ja normalisoidaan GAPDH. B, Protein tasot DR5 ja β-aktiini analysoitiin Western-blottauksella. C, Soluja inkuboitiin kanssa tai ilman 50 ng /ml Apo2L /TRAIL. 24 tunnin kuluttua, sub-G1 populaatio soluista mitattiin virtaussytometrialla. D, Soluja inkuboitiin 20 umol /l apigeniini 24 tunnin ajan, minkä jälkeen seuraa käsittely tai ilman 50 ng /ml Apo2L /TRAIL. Apo2L /TRAIL aktiivisuus näytteissä ilman apigeniini normalisoitiin 1 E, Soluja inkuboitiin 20 umol /l apigeniini 24 tunnin ajan. Proteiini tasot DR5 ja β-aktiini analysoitiin Western-blottauksella. Pylväät, keskiarvo; baareja, SD (n = 3). *

P

0,05, **

P

0,01 suhteessa kontrolliin.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa olemme tunnistettu ANT2 sitovana proteiinia apigeniiniä joka voimistunut DR5 käyttäen magneettisia FG helmiä (Fig. 2). Knockdovvn ANT2 tehostetun Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin säätelemällä DR5 (Fig. 3), samanlainen hoito apigeniiniä (Fig. 1). Lisäksi knockdovvn ANT2 heikennetty parantamiseksi DR5 ilmaisun ja Apo2L /TRAIL: n indusoiman apoptoosin, jonka apigeniini (Fig. 4 ja 5). Nämä tulokset viittaavat siihen, että apigeniini sitoo ja estää ANT2, joka indusoi DR5 ilmentyminen ja voimistaa Apo2L /TRAIL herkkyys (Fig. 6). Esillä oleva tutkimus osoittaa myös, että apigeniini transkription jälkeen indusoi DR5 estämällä ANT2 (Fig. 1 B ja C). Oletamme, että useat aineet, joita on raportoitu upregulate DR5 transkriptiotasolla [10] – [13], saattaa myös aiheuttaa DR5-ilmentymisen transkription jälkeisellä tasolla estämällä ANT2.

Apigenin sitoo ja inhiboi ANT2. Esto ANT2 täydentää Apo2L /TRAIL herkkyys kautta DR5.

On raportoitu, että knockdovvn ANT2 nostaa ROS tasoilla [17] ja aktivoi JNK ja p53 [19], joka on yhdenmukainen apigeniiniä myös lisää ROS tasoilla [25], [28] ja aktivoi JNK [29] ja p53 [30]. Lisäksi esillä oleva tutkimus osoitti, että apigeniini sidottu ANT2 ja voimistunut DR5 samanlainen pudotus ja ANT2. Nämä tulokset viittaavat vahvasti siihen, että apigeniini toiminnallisesti estää ANT2.

useita polyfenoleja, kuten apigeniini, on raportoitu parantaa Apo2L /TRAIL herkkyys kautta eri reittejä [25], [31]. Kuitenkin yksityiskohtainen mekanismeista, joiden avulla kukin polyfenolien kasvattaa Apo2L /TRAIL herkkyys ole tiedossa. Meidän menetelmä tunnistaa kohteet polyfenolien voivat olla käyttökelpoisia selvittämiseksi näitä mekanismeja.

selvitetty mekanismi, jolla apigeniini voimistunut DR5 vertaamalla sitovia proteiineja apigeniini, että voimistunut DR5 ja genisteiiniä, joka ei (Fig. 2) . Strategia, joka vertaa suora sitoutuminen proteiineihin useiden erilaisten aineiden on hyödyllistä. Esimerkiksi se on selvitetty, että ligandeja VDAC proteiinien indusoivat selektiivisesti ei-apoptoottista solukuolemaa tuumorisoluissa mutaatioita että onkogeenien

HRAS

,

KRAS

tai

BRAF

vertaamalla sitovat proteiinit erastin A6 ja erastin B2, joka on erastin analoginen, jolta puuttuu sen aktiivisuus [32]. Vertailu sitovia proteiineja eri aineita voidaan paljastaa proteiineja, jotka aiheuttavat pääasiassa tai haitallisia vaikutuksia näiden aineiden. Lisäksi farmakologinen valvonta näiden sitovia proteiineja saattaa kehittyä nykyistä kemoterapiaa.

Toistaiseksi useat agonistista anti-DR5-vasta-aineiden ja ihmisen rekombinanttia Apo2L /TRAIL on kehitetty ja alle kliinisissä kokeissa, kun taas jotkut syövät ovat osoittaneet kestävyys nämä aineet [7]. Esillä olevassa tutkimuksessa, knockdovvn ANT2 herkistynyt syöpäsolujen Apo2L /TRAIL säätelemällä DR5. Tämä tutkimus viittaa myös siihen, että apigeniiniä voi olla ANT2 estäjä. Vastaavasti apigeniiniä ja uudet ANT2 estäjät voivat voimistaa näiden aineiden poistamalla vastustuskyky Apo2L /TRAIL.

tukeminen Information

Kuva S1.

histogrammit kuvion 1A, että apigeniini.

doi: 10,1371 /journal.pone.0055922.s001

(TIF) B Kuva S2.

histogrammit kuvion 1A genisteiiniksi.

doi: 10,1371 /journal.pone.0055922.s002

(TIF) B Kuva S3.

monistuskäyriä kuvion 1C.

doi: 10,1371 /journal.pone.0055922.s003

(TIF) B Kuva S4.

monistuskäyriä kuvion 3A.

doi: 10,1371 /journal.pone.0055922.s004

(TIF) B Kuva S5.

histogrammit kuvion 3B.

doi: 10,1371 /journal.pone.0055922.s005

(TIF) B Kuva S6.

monistuskäyriä kuvion 3D.

doi: 10,1371 /journal.pone.0055922.s006

(TIF) B Kuva S7.

histogrammit kuviossa 4A.

doi: 10,1371 /journal.pone.0055922.s007

(TIF) B Kuva S8.

monistuskäyriä kuvion 5A.

doi: 10,1371 /journal.pone.0055922.s008

(TIF) B Kuva S9.

histogrammit kuvion 5C.

doi: 10,1371 /journal.pone.0055922.s009

(TIF) B Kuva S10.

histogrammit kuvion 5D.

doi: 10,1371 /journal.pone.0055922.s010

(TIF) B

Kiitokset

Olemme kiitollisia M. Horinaka ja Y. Sowa varten hyödyllinen keskustelu.