Krooninen sairaus

tiivistelmä

raportoitu (

PLoS One

6 (12 ): e28670, 2011), että aktivointi c-Met: signalointia RANKL yli-ilmentyvä luun metastaattinen LNCaP solu- ja ksenograftimalleissa lisääntyneen ilmentymisen RANK, RANKL, c-Met, ja fosforyloitu c-Met: n, ja välittämän alavirran signalointia. Olemme vahvisti merkitys RANK-välitteistä signalointia verkkoon kastraatio tentistä kliinisestä ihmisen eturauhassyöpä (PC) kudoksiin. Tässä raportissa käytimme monispektriset kvanttipiste merkintöjä tekniikka merkitä kuusi RANK ja c-Met yhtenevät signalointireitin välittäjien samanaikaisesti formaliiniin parafiiniin upotetut (FFPE) kudosnäytteet, määrällisesti intensiteetti kunkin ilmaisun sub-solutasolla, ja tutkittiin niiden mahdollinen hyödyllisyys ennustajina elossaololuku valkoihoisilla-amerikkalainen, Afrikkalainen Amerikan ja kiinalaiset miehet. Huomasimme, että RANKL ja neuropi–1 (NRP-1) ilmentymisen ennustaa selviytymisen valkoihoisia-amerikkalaiset PC. Gleason ≥8 yhdistettynä ydin- p-c-Met ilmentymisen ennustaa selviytymisen Afrikkalainen Amerikan PC potilaille. Neuropi–1, p-NF-KB p65 ja VEGF ennustavat, että eloonjäämisaste kiinalaiset miehet PC. Nämä tulokset yhdessä tukevat interracial eroja solun signalointi verkostoja, jotka voivat ennustaa selviytymisen PC potilailla.

Citation: Hu P, Chung LWK, Berel D, Frierson HF, Yang H, Liu C, et ai. (2013) Convergent RANK- ja c-Met-välitteistä signalointia komponentit Ennakoi Survival of Potilaat, joilla Eturauhassyöpä: an Interracial Vertaileva tutkimus. PLoS ONE 8 (9): e73081. doi: 10,1371 /journal.pone.0073081

Editor: Natasha Kyprianou, University of Kentucky College of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 3. heinäkuuta 2013. Hyväksytty: 16 heinäkuu 2013; Julkaistu: 16 syyskuu 2013

Copyright: © 2013 Hu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tuettiin osittain NIH2 P01CA 98912, NIH1 R01 CA122602 ja PCF Challenge Award ja RYP Endaumentin Cancer Research puheenjohtajaa LWKC. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

toteuduttua eturauhasen antigeenin (PSA) seulonta, eturauhassyöpä (PC) diagnoosi tuli paljon yleisempää. Koska yksi jokaisesta 8-10 miesten diagnosoitu PC kuolee tähän sairauteen, on tärkeää kehittää tehokkaita ennustavia valita ne, jotka on käsiteltävä ja välttää turhia käsittely [1], [2]. Kuluneen vuosikymmenen aikana monet ennakoivaa biomarkkerit joko liittyvä kudosten tai biologisia nesteitä, on käytetty erottamaan veltto aggressiivisia muotoja PC. Näitä markkereita on luokiteltu laajasti tuumorisuppressorien, onkogeenien, transkriptiotekijät, ja sääntelyviranomaisten solun aineenvaihdunnan, ja fenotyypit kuten solujen lisääntymistä, apoptoosin, invaasio, muuttoliike ja etäpesäkkeiden [2], [3]. Yhdistimme soluviljelymalleissa kanssa linjaa suhde,

eli

, joka on sama geneettinen tausta, mutta eroavat aggressiivisuus, jossa eläinmalleissa, jotka näyttävät vaihtelua niiden luontaisen invasiivisuus ja metastaattisen potentiaalia kehittää asiaa soluviestitykseen väyliä muistuttaa läheisesti fenotyypit ja käyttäytymistä kliinisten ihmisen PC. Teimme vertailevan tutkimuksen kliinisten PC kudoksia, joiden tiedetään liittyvän elossaololuku testata hypoteesia, jonka ilmentymistä tietyissä solun signalointi verkkoon biomarkkereita löytyi eläinmalleissa ajo PC soluja kehittää tappava luun ja pehmytkudoksen etäpesäkkeitä voidaan käyttää biomarkkereina ennustamaan etenemistä ja eloonjäämistä PC potilaista. Etsimään parempaa ymmärrystä mahdollisista interracial erojen soluviestitykseen verkkojen testasimme olettamusta, että eri RANK- ja c-Met-välitteisen alavirran soluviestitykseen komponentit voivat ennustaa selviytymisen eturauhassyövän potilailla, joilla on eri rotuja.

Olemme aiemmin raportoitu, että tappava PC eteneminen luun ja pehmytkudoksen etäpesäkkeitä määräytyy osteomimetic ominaisuus PC-solujen [4], [5]. Huomasimme, että liukoisen tekijät, kuten β2-mikroglobuliini (β2-M) ja reseptorin aktivaattori NF-KB-ligandin (RANKL) voi ajaa PC ja muut ihmisen syöpäsoluja tehdään epiteelisolujen-to-mesenkymaalitransitioon (EMT) ja antaa aggressiivinen fenotyypit mukaan lukien paikallinen invaasio ja etäispesäkkeitä [6] – [12]. Niistä solu signalointipolkujen olemme tutkineet aktivointi RANKL-RANK signalointi oli erityisen kiinnostava, koska tämä signalointireitille aktivoitiin sekä eläinmalleissa ja kliinisissä PC näytteet [8], [12], ja kohdistaminen RANKL anti-RANKL-vasta , denosumab, on ollut erittäin tehokkaasti estää lyyttinen luuston vaurioita liittyy miesten hoidettiin androgeenien puute hoidon [13]. RANKL-RANK signalointi myös havaittiin olevan osallisena laajentamiseen kantasolujen kapealla kehittämisen aikana hormoni-herkkä elin [14], [15]. Havaitsimme sekä LNCaP ja ARCaP solu- ja eläinmalleissa että ”noidankehä” RANKL-RANK signalointi vastaa tuottamaan kyvyn näiden solujen kasvua ja etäpesäkkeitä luuhun ja pehmytkudoksiin hiirillä, indusoimalla EMT, paikallisten invaasio ja etäispesäkkeitä [5], [8], [12]. Geneettisesti inaktivoiva RANK tai c-Met-reseptori, olemme täysin kumosi kyky näiden syöpäsolujen etäpesäkkeitä luuhun ja pehmytkudoksiin [16]. Huomasimme, että läpi RANKL-RANK signalointi useita transkriptiotekijöiden ja kohde- geenejä säädellään koordinoidusti, jolloin muutos perustavanlaatuista soluprosesseihin syöpäsoluja. Erityisesti olemme huomanneet, että RANKL-RANK signalointi edistää ilmentymistä RANKL, RANK ja c-Met: lisäämällä ilmentymistä transkriptiotekijöiden c-Myc /Max [16]. Konsertti aktivointi RANKL-RANK signalointia, myös havaitsimme lisääntyneen ilmentymisen VEGF vasteena kohonnut HIF-1α transkriptiotekijöiden [6]. VEGF on tärkeä pro-angiogeeninen tekijä, joka indusoi ja endoteelisolujen migraation kuluessa kasvaimen verisuoniston [17]. Poikkeava ekspressio VEGF ja sen reseptorit liittyy huonoon ennusteeseen ilmenee lisääntynyt kasvaimen verisuonitus, chemoresistance, paikallinen tuumori-invaasio ja etäispesäkkeitä [18]. Kohonnut HIF-1α sitoutuu hypoksia-vaste-elementtien (hRes) ja aktivoi VEGF-promoottori [19]. Neuropiliini-1 (NRP-1), VEGF-co-reseptori, tunnistettiin alun perin reseptori semaforiini 3, joka välittää hermosolujen ohjausta ja aksonaalisen kasvun [20], joka sitoutuu spesifisesti VEGF165 mutta ei VEGF121 solun pinnalla endoteelisolujen ja kasvaimen soluihin [20], [21]. NRP-1 ei ole tyypillinen kinaasidomeenin ja ensisijaisesti toimii yhteistyössä reseptori muodostaa ligandi-erityisiä komplekseja. Poikkeava ylössäätely NRP-1 on havaittu korkea Gleason luokan ja metastaattisen PC ja muut kiinteät kasvaimet [22], [23]. Meidän lab raportoitu, että VEGF säännelty antiapoptoottisena Mcl-1-geenin avulla NRP1 riippuvaista fosforylaatiota c-Met: in PC-soluissa ja laajentanut toiminta tämän proteiinin solun signalointi verkkoon [6].

rotujen ja etnisten erot PC on laajalti raportoitu [24], [25]. Vaikka Vähäiset julkaistut tiedot viittaavat mahdolliset erot valikoiva geeniekspression aggressiivisten vs. indolent PC, kuvaavat tiedot interracial vertailuja geenien ilmentymisen välillä eturauhasen rauhasten Afrikkalainen-amerikkalaiset ja valkoihoinen-amerikkalaiset ovat harvassa. Kwabi-Addo ja työtovereiden [26] raportoitu eroja promoottorin metylaation geenien kuten GSTPi, AR, RAR beeta2, SPARC, TIMP-3, ja NKX2-5 jossa korkeampi metylaatio havaittiin Afrikkalainen-amerikkalaiset kuin valkoihoisilla amerikkalaiset. Käyttämällä immunohistokemiallinen värjäys lähestymistapa profiloida PC yksilöitä saatu valkoihoinen-amerikkalaiset, Afrikkalainen-amerikkalaiset, kiinalaiset ja japanilaiset, löysimme merkittäviä eroja näiden interracial ryhmien osalta niiden värjäys profiileja tuumorisuppressorien, angiogeeninen ja neuroendokrii- tekijät [27], [ ,,,0],28]. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme keskittää huomiomme vertaamalla RANKL-RANK signalointi ja sen loppupään efektoreja keskuudessa valkoihoinen-amerikkalaiset, Afrikkalainen-amerikkalaiset ja kiinalaiset koska tämän merkitystä signalointireitin vuonna annetaan PC luu- ja pehmytkudoksen etäpesäkkeitä [5], [6], [8], [12]. Olemme analysoineet geeni-ilmentymisen on yhden solun tasolla kliinisistä näytteistä saatu näistä rotujenväliseen ryhmistä käyttäen vakiintunutta multipleksoidun quantum dot merkintöjä (mQDL) tekniikka peräkkäin tarran kunkin kuuden signaloinnin välituotteita, tallentaa useita kuvia, unmix ja määrällisesti signaalit sub-solutasolla ja alistaa datan sarjan logistinen tilastollisia analyysejä määrittää niiden ennustusyksikölle merkityksen joko yksin tai yhdessä kliinisen Gleason tulokset. Tämän tutkimuksen tulokset osoittivat, että eri alavirtaan efektorien RANKL-RANK signalointireitistä voi ennustaa PC eloonjäämiseen vuonna interracial ryhmissä PC.

Materiaalit ja menetelmät

Tissue yksilöitä

Tämä tutkimus ei liittynyt ihmisen osallistujia. Kaikki kudosnäytteet tässä tutkimuksessa käytetyt oli arkistoitu formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotettuja (FFPE) eturauhassyöpäkudoksille. Käyttö yksilöiden tutkimus laitoksen hyväksymät tarkastelu hallituksen Cedars-Sinai Medical Center (IRB # Pro21228). Kaikkiaan 54 kirurgisesti poistettu FFPE ensisijainen eturauhassyövän näytteet saatiin potilailta peräisin patologian osaston, University of Virginia, Charlottesville, Virginia, ja Department of Pathology, Jilin University, Changchun, Kiina, jossa on dokumentoitu syöpään aiheutti kuoleman tai selviytymisen tietoja. Niistä 54 yksilöitä, 20 kukin olivat Caucasian- ja African- amerikkalaiset ja 14 kiinalaiset miehet. Potilaiden määrä, tapahtumia, ja keskimääräinen (vaihteluväli) eloonjäämisen kuukautta ovat: valkoihoinen-amerikkalaiset-20, 16, ja 74,6 (vaihteluväli 1-190); African- amerikkalaiset-20, 18, ja 46,3 (vaihteluväli 2-181); Kiinan-14, 13 31,9 (vaihteluväli 1-107). Leikkausmenettelyt josta kudosnäytteet saatiin olivat: valkoihoinen-amerikkalaiset: 15 tapausta höyläysleikkaus eturauhasen (TURP), 4 tapausta eturauhasen (HE) ja 1 tapauksesta neulabiopsian (NBX); Afrikkalainen-amerikkalaiset: 18 tapausta TURP ja 2 tapausta RP; Chinese: 1 asian TURP, 6 tapausta suprapubic eturauhasen ja 7 tapauksia neulabiopsian. Pyrittiin varmistamaan johdonmukaisuus Gleason luokittelu; histopatologisten mallia yksilöitä Yhdysvaltojen ja Kiinasta tekee patologit tohtori LS Zhao ja Dr. Hua Yang Jilinin yliopistosta aikana vierailuja UTMDACC Houston, TX ja University of Virginia, vastaavasti, ja vahvistanut Dr. Henry F. Frierson, joka on urogenitaalinen patologi päässä University of Virginia.

Immunoassay reagenssit

ensisijainen vasta-aineita (Ab: t) ja niiden lähteet olivat: hiiren monoklonaalinen Abs vastaan ​​HIF-1α (NB100-105) ja RANKL (12A668) alkaen Novus Biologicals (St. Charles, MO); kanin polyklonaalinen Abs p-NFKB p65 tai p-p65 (Ser 536), VEGF (A-20), ja neuropi–1 tai NRP-1 (H286) Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, CA); ja kanin polyklonaalista Ab p-c-Met (pYpYpY1230 /1234/1235) Invitrogen (Carlsbad, CA). Toissijainen Abs tutkimuksessa käytetyt valmistettiin biotinyloituja Abs hiiren, kanin ja vuohen IgG Vector Laboratories Inc. (Burlingame, CA). Fosfaattipuskuroitu suolaliuos (PBS) ja streptavidiini-konjugoitua kvanttipistei- (QD) at 565-, 585-, 605-, 625, 655- ja 705 nm aallonpituuksilla kuin 1 uM kantaliuos olivat Invitrogen.

Multipleksattu QD merkinnät (mQDL) B

Olemme kehittäneet mQDL protokollan streptavidiinipäällystetyille QDS konjugoitu biotinyloidun sekundaarisen Ab [6]. Kokeellinen merkinnät protokolla mukana konjugoimiseksi ensisijainen Ab biotinyloitu sekundaarinen Ab, joka puolestaan ​​reagoi streptavidiini-konjugoitua QD tiettynä aallonpituudella. Nämä merkinnät menettely toistettiin useita ensisijaisen Abs vastaan ​​eri biomarkkereiden antigeenejä optimoinnin jälkeen. QD-leimattuja kuvia tutkittiin ja jää alle Nuance monispektriset kameran ja solujen segmentointi ja kvantifiointi suoritettiin ilmoittaa ohjelmisto (Perkin Elmer, Waltham, MA). Spektrikuviin QD kuvan kuutio oli edelleen unmixed sen eri kuvien selvä huippu QD aallonpituuksilla. Poistamisen jälkeen autofluoresenssi, yksittäiset QD-leimattujen proteiinien voidaan havaita.

immunoreaktion sekvenssit ja laimennokset ensisijaisen Ab ja sen liittäminen streptavidiini-konjugoitua QD olivat: 1) anti-HIF-1α Ab (1: 40) ja streptavidiini-QD565 (1:100); 2) anti-p-NFKB p65 Ab (1:100) ja streptavidiini-QD585 (1:100); 3) anti-VEGF Ab (01:40) ja streptavidiini-QD605 (1:100); 4) anti-neuropi–1 Ab (1:200) ja streptavidiini-QD625 (1:100); 5) anti-p-c-Met Ab (1:120) ja streptavidiini-QD655 (1:100); 6) anti RANKL Ab (1:100) ja streptavidiini-QD705 (1:100). Kaikki ensisijainen Abs inkuboitiin 4

° C, yön yli ja streptavidiini-QD: n reagoida 37 ° C: ssa, 1 tunti. Kun 4 huuhtelua PBS-Triton (0,4%), näytteet värjättiin DAPI ja asennettu. Negatiivisia kontrolli, ensisijainen Abs korvattiin isotype- ja lajien yhteensopivat ohjaus Abs ja levitetään välittömästi viereiseen kudosleikkeiden 5 paria kudosnäytteiden tutkituissa tapauksissa. mQDL suoritettiin rinnakkain kudoksen dia merkitty testaus ensisijainen Abs. Keskimääräinen solu-pohjainen intensiteettiä negatiivisten kontrollien vähennettiin testi Ab merkintöjä.

Kuva syömällä ja biologisten merkkiaineiden ilmentymisen intensiteetti kvantifiointiin

Multipleksoidut spectral imaging analysoi myös kuvan hankinnan ja dekonvoluutio käyttäen Nuance 3.0 ohjelmisto ja signaali kvantifiointi käyttäen ilmoittaa 1.3 ohjelmistoa suoritettiin kuten kuvattu edellisessä raportissa [6].

Data kuvaus ja tilastolliset analyysit

Tiedon nimi.

Päätulosmuuttuja määritellään kuten kokonaiselossaolo. Mitattavat suureet olivat Gleason, rotu (valkoihoinen-amerikkalaiset, Afrikkalainen-amerikkalaiset ja kiinalaiset), ja solu-pohjainen biomarkkereiden ilmentymisen intensiteetti sytoplasmassa, C; tuma, N; ja solulimassa plus tumassa, C + N HIF-1α, p-p65, VEGF, NRP-1, p-c-Met ja RANKL. Biomarkkereiden mittaukset kullekin potilaalle laskettiin keskiarvo 4-5 otettuja kuvia kustakin kasvainkudoksen sivustoja dia. Keskimäärin 27 kuvaa /kudos slide otettiin (useita 4-114 kuvat), jotka hajoavat: valkoihoinen-amerikkalaiset, 5-114 kuvia; Afrikkalainen-amerikkalaiset, 5-57 kuvaa; Kiinalainen, 4-46 kuvia. Näytteen kokonaismäärä koko tutkimuksessa on 54 potilasta (valkoihoinen-amerikkalainen, N = 20; Afrikkalainen Amerikan, N = 20; kiinalainen, N = 14). Keskimääräisten solumääristä analysoitu minimistä maksimiin ja keskihajonta (SD) ovat: valkoihoinen-amerikkalaiset, 17207 (1,363-50,488, SD = 14702); Afrikkalainen-amerikkalaiset, 12541 (2,062-24,612; SD = 6899); Chinese, 3290 (794-14,770, SD = 3531).

Tilastollinen analyysi.

Kaplan ja Meier menetelmää käytettiin arvioimaan eloonjäämiseen ja logrank testi verrata ryhmiä. Monimuuttujalähettimet verrannollinen vaarat regressiolla käyttämällä eteenpäin muuttujaa valintaa käytettiin arvioida, mitkä biomarkkerit ovat ennustavia kokonaiselinaika läsnäollessa kovariantteja. Suhteellinen vaarat oletus arvioitiin graafisesti ja analyyttisesti, ja martingale jäännösten käytettiin varmistamaan, että mallit ovat asianmukaisia. Kriittinen merkitsevyystaso asetettiin 5%.

Tulokset

Gleason box-kaaviot rodun joukossa 3 tutkittu potilasryhmien osoitti ryhmittyneet korkea Gleason tulokset valkoihoisilla amerikkalaiset, Afrikkalainen-amerikkalaiset ja kiinalaiset PC potilailla (kuvio 1). Kuvio 2 esittää merkittävää eroa kokonaiselossaoloaikaa rotu lukien kaikissa tapauksissa (N = 54, tapahtumien lukumäärä = 47) Log-rank-testiä (

p

= 0,0249). Lisäksi oli merkittävä ero biomarkkereiden ”keskiarvo ja keskihajonta yhdistetyn näytteen ja kunkin rodun (taulukko 1), jossa kiinalaiset eroavat sekä valkoihoinen-amerikkalaiset ja Afrikkalainen-amerikkalaiset. Tunnistaa mahdolliset ennakoivia biomarkkereita, eloonjäämisaste potilaiden PC, me analysoitiin kaikki tiedot itsenäisesti jokaisessa kilpailussa. Jatkuva analyyseissä univariate verrannollinen vaaran regressiomalleja kanssa Gleason pisteet ja biomarkkereita valkoihoinen-amerikkalainen potilasta (taulukko 2) osoittivat, että RANKL ja NRP-1 ilmentymisen sytoplasmassa (C) plus nucleus (N) on korreloi merkitsevästi eloonjäämisaste potilaiden kanssa PC,

p

-arvo = 0,0053 ja 0,0029, vastaavasti. Merkitseviä havaittiin myös, kun ilmaisun C tai N analysoitiin erikseen. Samanlaisia ​​analyysit osoittivat, että NRP-1 C, N ja C + N; p-p65 C, C + N; ja VEGF C merkittävästi korreloi eloonjäämisaste kiinalaisten potilaiden PC (taulukko 3). Kuvio 3 esittää NRP-1, p-p65 ja VEGF-proteiinin ilmentymisen kuvia mQDL kudosten saatu kiinalaisen potilas selvisi 66 kuukauden ajan (ylälevyissä) vs potilas selvisi 2 kuukautta (alhaalla paneelit). Sen sijaan, lukuun ottamatta Gleason (

p

= 0,027), yksikään 6 biomarkkerit saavutettu merkittävää yhteyttä elinaika Afrikkalainen Amerikan potilaista analysoitiin samalla menetelmällä (taulukko 4). Correlograms (kuvat 4, 5, 6) osoitti pareittaiset korrelaatiot biomarkkereita keskenään, ja biomarkkerit kanssa Gleason tulokset keskuudessa valkoihoinen-amerikkalaiset, Afrikkalainen-amerikkalaiset ja kiinalaiset potilaista. Päälävistäjän näyttää kovariaattina nimiin kutakin pareittain vertailua. Keskuksessa on vaaka- ja pystysuuntainen vuorovaikutus kunkin kovariaattina on Pearsonin korrelaatiokerrointa ja oikeassa yläkulmassa on siihen liittyvä p-arvo. Tulokset osoittivat, että oli merkittäviä korrelaatioita useimmat biomarkkereiden parien (lihavoituna) riippumatta rodun, mutta vain HIF-1α korreloi Gleason pisteet Kaukasian-amerikkalainen potilailla,

p

-arvo = 0,002. Kuvassa 7 on esitetty vielä diskretoidaan visualisointeja vaikutuksen luokiteltu biomarkkereiden eloonjäämiseen Kaukasian potilaiden analysoituna Kaplan ja Meier menetelmä ja log-rank testi verrata biomarkkereiden proteiinin ilmentymistä sytoplasmassa plus tumassa luokiteltu kahteen ryhmään, korkea ja matala, käyttämällä mediaani kuin cutoff pisteen. RANKL ja NRP-1 korreloi merkittävästi kokonaiselinaika, jossa

p

-arvo = 0,025 ja 0,005, tässä järjestyksessä. Kuvassa 8 on esitetty sekoittamattomia mQDL kuvia NRP-1 ja RANKL ilmaisun edustavien kudoksiin valkoihoinen-amerikkalainen potilasta, jotka elivät 163 kuukautta (top paneelit)

vs.

Potilas selvisi vain 2 kk (alapaneeli) . Samanlaisia ​​analyysejä suoritettiin Afrikkalainen Amerikan ja Kiinan potilaat eivät osoittaneet korrelaatiota RANKL ja NRP-1 biomarkkerit ja potilaiden eloonjäämiseen (data ei sisälly). Sillä Afrikkalainen-amerikkalaiset, vaikka vain Gleason tulokset olivat merkittäviä yksiulotteista mallissa (taulukko 4), ydin- pc-Met tuli merkittävä ennustaja yhdistettynä Gleason (taulukko 5) in monimuuttujaisen suhteellinen vaara regressiomallia (

p

= 0,025 ja

p

= 0,044, tässä järjestyksessä). Kuvio 9 esittää sekoittamattomia mQDL kuvia p-c-Met-proteiinin ilmentymistä Afrikkalainen Amerikan potilasta, jotka selvisivät 85 kk (ylälevyissä) vs Afrikkalainen Amerikan potilasta, jotka selvisivät 12 kuukautta (alhaalla paneelit). Visualisoida vaikutus näiden kahden muuttujan eloonjäämiseen, Gleason luokiteltiin kahteen ryhmään: ≥8 ja 8 ja ydinvoiman pc-Met luokiteltiin kahteen ryhmään, korkea ja matala, käyttämällä mediaani kuin cutoff pisteen ( Kuva 10,

p

= 0,0349). Tutkimaan edelleen systemaattisesti, onko yhdistäminen Gleason ja biomarkkereiden saattaa parantaa ennustamista kokonaiselinaika, kaikki biomarkkerit, jotka olivat merkittäviä ennustajia yleisen selviytymisen Yksiulotteisissa malleja taulukoissa 2, 3, 4 luokiteltiin kahteen ryhmään, korkea ja matala käyttämällä mediaani kuin cutoff pisteen. Gleason luokiteltiin kahteen ryhmään: ≥8 ja 8 ja kaksi dikotominen muuttujaa yhdistettiin tuottaa neljään ryhmään: Gleason ≥8 ja biologisten merkkiaineiden korkea, Gleason ≥8 ja biologisten merkkiaineiden Low, Gleason 8 ja biologisten merkkiaineiden korkea, ja Gleason 8 ja biologisten merkkiaineiden Low. Kolme osoitinmuuttujia luotiin käyttäen ryhmä Gleason 8 ja biologisten merkkiaineiden Low ohjearvon, ja monimuuttuja suhteellinen vaarat regressiolla käyttämällä eteenpäin muuttujaa valintaa käytettiin valita paras malli ennustaa kokonaiselinaikaa. Tulokset näistä monimuuttujaisen mallien on esitetty taulukossa 6. Vaikka ei ollut luokiteltu Gleason /biomarkkereiden ryhmä ennustava kokonaiselinaika Kaukasian-amerikkalaiset ja kiinalaiset, ja Afrikkalainen-amerikkalaiset tulosten kanssa luokitellaan ryhmiin yhtyi monimuuttuja jatkuvan ennustajan malli ja analyysin yksityiskohdat on esitetty taulukossa 7. lopullinen malli on esitetty taulukossa 8 ja esitetty kuviossa 11, jossa vain ”Gleason ≥8 /biomarkkereiden High” on merkittävä ennustaja yleisen selviytymisen Afrikkalainen amerikkalainen potilailla, joilla on eturauhasen syöpä (

p

= 0,0117).

tärkein lävistäjä on kovariaatin nimi. Tällä vaaka- ja pystysuunnassa leikkauspisteessä kunkin kovariaattina, Pearsonin korrelaatiokerrointa (keskus, musta), ja siihen liittyvä p-arvo (oikeassa yläkulmassa, punaisella) esitetään.

päälävistäjän on kovariaatin nimi. Tällä vaaka- ja pystysuunnassa leikkauspisteessä kunkin kovariaattina, Pearsonin korrelaatiokerrointa (keskus, musta), ja siihen liittyvä p-arvo (oikeassa yläkulmassa, punaisella) esitetään.

päälävistäjän on kovariaatin nimi. Tällä vaaka- ja pystysuunnassa leikkauspisteessä kunkin kovariaattina, Pearsonin korrelaatiokerrointa (keskus, musta), ja siihen liittyvä p-arvo (oikeassa yläkulmassa, punaisella) esitetään.

Log-rank testi p-arvo on esitetty. X-akseli on selviytyminen kertaa kuukausiin. Y-akseli on osuus elossa.

Log-rank testi p-arvo on esitetty. ”Biomarkkereiden korkea” tarkoittaa biomarkkereiden arvot yli mediaani (jatkuva) biomarkkereiden. ”Biomarkkereiden Low” tarkoittaa biomarkkereiden arvoissa alle tai yhtä suuri kuin mediaani (jatkuva) biomarkkereiden.

Log-rank-testiä

p

-arvo on esitetty. ”Biomarkkereiden korkea” tarkoittaa biomarkkereiden arvot yli mediaani (jatkuva) biomarkkereiden. ”Biomarkkereiden Low” tarkoittaa biomarkkereiden arvoissa alle tai yhtä suuri kuin mediaani (jatkuva) biomarkkereiden.

keskustelu

Lisääntyvä todistusaineisto viittaa siihen, että parannettu eturauhassyövän ennuste käyttäen biomarkkereita differentiaalisesti ilmaistut kudosten, solujen ja kehon nesteiden potilailla, joilla on joko veltto tai aggressiivinen sairaus voisi vähentää terveydenhuollon kustannuksia ja potilaan ahdistusta ja kärsimystä, ja parantaa yleisen tehokkuuden hoitosuunnitelman. Vaikka histopatologia ja immunohistokemia ovat toimittaneet ”kulta standardit” PC diagnoosi solutasolla, määrälliset ja ennustetekijöiden näkökohtia näistä tekniikoista ei ole kriittisesti arvioitu. Tässä tiedonannossa, käytimme multipleksoitu kvantti-dot merkintöjä perustuva kvantitatiivinen histopatologia lähestymistapa yksittäisen solun tasolla raportoinut aiemmin ryhmämme [6] arvioida ilmentymisen solun signalointireitin komponenttien myötävirtaan RANK- ja c-Met-välitteisen signalointiverkolla kliinisissä PC kerätyt näytteet interracial ryhmistä, jotka koostuvat valkoihoinen-amerikkalaiset, Afrikkalainen-amerikkalaiset ja kiinalaiset potilaat, ja arvioida, jos nämä signalointireitin komponenttien voi ennustaa selviytymisen PC potilaista. Aktivointi RANK- ja c-Met-välitteisen signaloinnin kasvain- ja isännästä peräisin RANKL on osoitettu ajaa syövän luun ja pehmytkudoksen etäpesäkkeitä ihmisen eturauhas-, rinta-, keuhko-, munuais- ja maksasyövät. Aktivoinnin näistä signalointipolkujen, olemme huomanneet lisääntyneen ekspression HIF-1α, VEGF, NRP-1, RANKL, c-Met, ja fosforyloitu c-Met soluissa, jotka siirrettävä vastustuskykyä kastraatio ja kehittämiseen metastaattisen fenotyypin ihmisessä PC ksenograftimallia [6]. Löydettiin seuraavat interracial erot aktivointi RANK- ja c-Met-välitteisen alavirran solun signaloinnin verkkojen PC-soluissa. 1) RANKL ja NRP-1 ilmentymisen ennustaa selviytymisen valkoihoinen-amerikkalaiset PC (Kuva 7). 2) Afrikkalainen-amerikkalaiset, yhdistettynä Gleason ≥8 ja ydin- p-c-Met ilmaisu ennustaa selviytymisen (kuviot 10 11). 3) NRP-1, p-NF-KB p65 ja VEGF ennustavat yleistä hengissä kiinalaiset miehet PC (taulukko 3). 4) eroista huolimatta ennustaminen eloonjäämisaste PC potilaiden eri signalointireitin komponenttien, kaikki roturyhmiä jakavat yhteisen alavirran signalointia komponentteja seuraavia aktivoinnin RANK- ja c-Met-välitteistä signalointia. Tämä käy ilmi erittäin merkittävä pareittain korrelaatiota näiden joukossa signalointi komponenttien piirretty jonka korrelogrammi (kuvat 4, 5, 6) pareittaiset korrelaatiot kaikissa kolmessa roturyhmissä. Vaikka tällä hetkellä ei ole tieteellistä selitystä, miksi eri signalointi komponenttien ennustaa hengissä kolme erillistä roturyhmissä PC potilaita, me spekuloida, että säätelyelementit mukaan lukien määrälliset näkökohdat reseptorien, ligandien, ja vuorovaikutus efektorimolekyyleille, valvoa yleistä RANK – ja c-Met-välitteisen loppupään signalointi voisi olla erilainen eri interracial ryhmissä. Nämä tulokset kuitenkin yhdessä tukevat interracial eroja RANK- ja c-Met-välitteisen solun signaloinnin verkkoon, joka säätelee eloonjäämistä PC potilailla.

Esillä oleva tutkimus on ensimmäinen, joka käyttää solupohjaisia ​​multispektrikuvaussensoreita kvanttipiste merkinnät rationaalisen reittiin liittyvät biomarkkerit yhdistettynä yksityiskohtaisia ​​tilastotietoja ja testata ennustusyksikölle kyky eloonjäämisaste potilaiden eturauhassyövän. Vähentää mahdollisia muuttujia käyttöön kudosnäyte käsittely päätimme käyttää yksilöitä samassa sairaalassa jokaiselle rotuun ryhmä. Vaikka rajoitettu määrä potilasnäytteiden käytettävissä tutkimuksessa vastikään perustettu multipleksoidun kvanttipiste merkintöjä ja kvantifiointi tekniikkaa osoittivat ennakoivan hyödyllisyyttä RANK- ja c-Met-välitteisten yhtenevät signalointireitteihin ennustamiseksi eloonjäämisaste potilaiden PC. Tuloksemme osoittivat, että joukossa interracial ryhmien erilaista biomarkkerit voidaan käyttää ennustavia hengissä. Meidän havainnot tukevat edelleen hyvin dokumentoitu epidemiologinen välisiä eroja valkoihoinen-amerikkalainen, Afrikkalainen Amerikan ja Kiinan potilaalla on PC. Tulemme laajentaa otoskoko Retrospektiivisessä Validointitutkimuksessa ja edetä tulevaisuudentutkimuksista taudin etenemisen ja potilaan eloonjäämisen työllistää verenkierrossa olevia kasvainsoluja (CTC) potilailta, joille suoritetaan hoitoja vahvistamaan havaintomme ja löytää muita uusia biomarkkereita eturauhassyövän diagnoosia ja ennuste avustamaan kliinistä päätöksentekoa.

Kiitokset

Kiitämme Gary Mawyer muokkausta.