Krooninen sairaus

tiivistelmä

Kliiniset havainnot ja hiiri malleja ovat ehdottaneet, että tulehdus voi olla pro-tuumorigeenisiä. Koska kemokiinit ovat kriittisiä leukosyyttiliikenteen, me arveltu, että kemokiinien pelata olennainen rooli tulehdukseen liittyvä syöpiä. Seulonta 37 kemokiinien eturauhassyövän solulinjoissa ja ksenograftit paljasti CXCL16, ligandin reseptoriin CXCR6, kaikkein jatkuvasti ilmaissut kemokiini. Immunohistokemia ja /tai immunofluoresenssilla ja konfokaali kuvantaminen 121 ihmisen eturauhasnäytteissä osoittivat, että CXCL16 ja CXCR6 koekspressoitiin, sekä eturauhasen syöpäsolujen ja vieressä T-soluja. Ekspressiotasot CXCL16 ja CXCR6 syöpäsoluihin korreloi huonon ennustetekijöiden ominaisuuksia kuten korkea-vaiheessa ja korkea-asteen, ja ilmaisun myös korreloi post-inflammatoriset muutokset syövän strooman joka käy ilmi menetys alfa-sileän lihaksen aktiini. Lisäksi CXCL16 tehostettu kasvu CXCR6 ilmentävien syövän ja ensisijainen CD4 T-soluja. Tutkimme ilmentyminen CXCL16 ylimääräiseen 461 näytteet kattavat 12 kasvaintyyppeihin, ja totesi, että CXCL16 ilmennettiin useita ihmisen syövistä liittyy tulehdukseen. Tutkimuksemme on ensimmäinen kuvata ilmaus CXCL16 /CXCR6 molemmilla syöpäsolujen ja viereisten T-soluja ihmisillä, ja osoittamaan korrelaatioita CXCL16 ja CXCR6 vs. huono sekä prognoosi- ominaisuuksia ja reaktiivisia muutoksia syöpä avanne. Yhdessä meidän tiedot viittaavat siihen, että CXCL16 ja CXCR6 voi merkitä syöpiä kertyy tulehduksellinen miljöö ja välittävät pro-tuumorigeenisen vaikutuksia tulehduksen kautta välittömiä vaikutuksia syöpäsolujen kasvua ja indusoimalla muuttoliike ja lisääntymistä kasvaimeen liittyvien valkosoluja.

Citation: Darash-Yahana M, Gillespie JW, Hewitt SM, Chen Y-YK, Maeda S, Stein I, et al. (2009) kemokiinin CXCL16 ja sen reseptorin, CXCR6, koska merkkiaineet ja edistäjät tulehdukseen liittyvä Syövät. PLoS ONE 4 (8): e6695. doi: 10,1371 /journal.pone.0006695

Editor: Derya Unutmaz, New York University School of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 06 huhtikuu 2009; Hyväksytty: 21 heinäkuu 2009; Julkaistu: 19 elokuu 2009

Tämä on avoin-yhteys artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Public Domain ilmoitus, jonka mukaan, kun se on saatettu julkisia, tämä työ saa vapaasti kopioida, levittää, lähetetään, modifioitu, rakennettu, tai muuten käyttää kuka tahansa laillista tarkoitusta.

Rahoitus: Tämä tutkimus tuettiin osittain Intramural tutkimusohjelma National Institute of Health, National Institute of Allergy and Infectious Diseases ja National Cancer Institute. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Viimeaikaiset hiiri malleja ovat tehneet välillä on toiminnallinen yhteys syövän ja tulehdus [1] – [3], joka tarjoaa todisteita kasvaimen edistävää toimintaa valkosoluja alunperin ehdotti Rudolf virchow [4], [5]. Ihmisen eturauhassyöpä on oletettu aiheutuvan precancerous prosesseista liittyy tulehdukseen, kuten proliferatiiviset tulehduksellinen surkastuminen (PIA) [6], joita vaurioita todettu vieressä eturauhassyövän, joita esitetään johtavan eturauhasen epiteelinsisäisen neoplasia (PIN) tai syöpä [ ,,,0],7].

tekijöitä tärkeitä tulehduksen ovat kemokiinit – kemotaktisia sytokiineja, jotka välittävät leukosyyttihoukutteluna [8]. Moninaiset roolit on raportoitu kemokiinien tuumoribiologiassa myös suoria vaikutuksia syöpäsoluihin, kuten on transformaatio, selviytyminen, ja leviämisen, ja epäsuorat vaikutukset, kuten angiogeneesissä ja rekrytoinnissa valkosolujen tuumorikohdat [9] – [11] . Ottaen huomioon viimeaikaiset todisteet mahdollisten pro-tuumorigeenisen aktiivisuus leukosyyttien, me arveltu, että inflammatoriset kemokiinit, joko laskemalla kasvaimen solut tai kasvaimeen liittyvät leukosyyttien, voi, toisin kuin standardin näkökulmasta, edistää pahanlaatuisten etenemisen edistämällä leukosyyttien .

jäljempänä kuvattujen näytön ekspressoimiseksi 37 kemokiinien eturauhassyövän solulinjoissa ja ksenografteissa paljasti korkean tason ilmentymisen CXCL16, epätavallinen kemokiinin, joka esiintyy sekä transmembraani- ja liukoisia muotoja [12], [13], ja joka voi myös toimia puhdistusaineena reseptorin hapettunut lipoproteiinin ja bakteerit [14]. CXCL16 ilmentyminen on osallisena useissa ihmisen tulehdussairauksien mukaan lukien nivelreuma [15], [16], keuhkoparenkyymisairaudet [17], [18], ateroskleroosi [19] – [23], sepelvaltimotauti [24], [25] ja maksavaurion [26] – [30]. CXCL16-reseptori, CXCR6, on raportoitu ilmentyvän Th1-solut [31], kasvaimen tunkeutuvia lymfosyyttejä [32], ja erilaisten leukosyyttien tulehtuneeseen kudokseen sivustoilta [33], [34], ja se voi toimia co-reseptori HIV-1 [32], [35].

Tutkimuksemme osoittaa suora rooleja CXCL16-CXCR6 eturauhassyöpään osoittamalla kolokalisaation CXCL16 ja CXCR6 syöpäsolujen, löytää merkittäviä positiivisia korrelaatioita välillä ilmaus CXCL16 ja CXCR6 vs. vaiheessa ja arvosana eturauhassyövän, ja osoittaa, että CXCL16 voi edistää kasvua eturauhasen syöpä jotka transfek- ilmaista CXCR6.

tutkimuksia suhdetta CXCL16 /CXCR6, tulehdus, ja syöpä osoittavat, että CXCL16 on säädelty ennalta neoplastisia vaurioita tulehdukseen, että ilmaus CXCL16 ja CXCR6 voidaan saada aikaan eturauhasen epiteelin tulehduksellisten sytokiinien, ja että CXCL16 /CXCR6 ovat suurin niissä eturauhassyövän solut ympäröivät reaktiivista eli post-inflammatoriset strooman. Osoitimme myös, että T-solut vieressä syöpäsolut ilmentävät CXCL16 /CXCR6, että CXCL16 tuotetaan edullisesti CD4

+ CXCR6

+ T-soluja, ja että CXCL16 voi parantaa T-solujen proliferaatiota. Lopuksi osoitamme CXCL16 useita ihmisen syövistä liittyy tulehdukseen. Yhdessä meidän tietojen mukaan CXCL16 ja CXCR6 voivat myötävaikuttaa kasvaimen etenemistä suoraan vaikutuksia syöpäsolujen kasvua, ja epäsuorasti, tehostamalla leukosyyttihoukutteluna ja lisääntymistä ja vuorovaikutukset leukosyyttien ja premaligneja /pahanlaatuisia soluja.

Tulokset

Pahanlaatuiset eturauhasen solut ilmentävät CXCL16 ja CXCR6

tutkiakseen roolit kemokiinien eturauhassyövän, me seulotaan eturauhassyövän solulinjoissa ja ksenografteissa ilmentämiseen mRNA: iden 37 kemokiinien, ja totesi, että mRNA CXCL16 oli kaikkein johdonmukaisesti ilmaistuna (kuvio 1A, B). Ilmentyminen solun pinnalla CXCL16 löytyi PC3, DU145 ja 22Rv1 eturauhasen solulinjoissa (kuvio 1C). Immunohistokemiallinen analyysi eturauhasessa osoitti vähän tai ei lainkaan värjäytymistä CXCL16 ja alhainen värjäystä sen reseptorin, CXCR6 normaaleissa ihmisen eturauhasen epiteelin, mutta näkyvä ilmaisu syövän (kuvio 1 D). Lisäksi korrelaatio ekspressiotasot CXCL16 ja CXCR6 todettiin analysoimalla joukko neljänkymmenen tapauksissa eturauhasen syöpä, ja CXCL16 ja CXCR6 voidaan osoittaa olevan kspressoituvat yksittäisiin syöpäsoluihin immunofluoresoivan konfokaalimikroskopialla (kuvio 1 E) .

(A) ilmentymistä mRNA: iden 37 kemokiinien tutkittiin RT-PCR ksenografteissa (CWR22, WISH PC14) ja eturauhassyövän solulinjoissa (PC3, DU145, LNCaP). Systemaattinen ja Epäsystemaattisessa nimet kemokiinien näkyvät. Amplikonit analysoitiin agaroosigeelielektroforeesilla ja silmämääräinen tarkastus värjäyksen jälkeen etidiumbromidilla. Sekvenssit alukkeiden ovat saatavilla pyynnöstä. Ekspressiotasot arvioitiin seuraavasti: ei ilmentymistä (-), low lauseke (- +), kohtalainen ilmentyminen (+), ja korkea ilmentyminen (++). Riippuen kemokiini, että analyysi on tehty yhdestä neljään kertaa. (B) mRNA: n ekspressiota kemokiinien eturauhassyövän solulinjoissa. Ilmentymistä mRNA: iden 14 kemokiinien tutkittiin reaaliaikaisen RT-PCR-neljään eturauhassyövän solulinjoissa (PC3, DU145, LNCaP, 22Rv1). Arvo 2

-ΔCT laskettiin ja sitten normalisoidaan eniten tietyn solulinjan, jolle annettiin arvo 100, missä ACt = CT (kemokiini) -CT (GAPDH). Numerot ovat keskiarvoja kahdesta määrityksestä kokeen yhdestä edustavasta kokeesta ja kaksi suoritettu. (C) virtaussytometrinen analyysi pinnan ekspression CXCL16 eturauhassyövän solulinjoissa. PC3, 22Rv1 ja DU145 soluja inkuboitiin ilman primaarista vasta-ainetta (musta varjostus), vuohen anti-ihmis CCL4 ylimääräisenä ohjaus (vaaleanharmaa viiva), tai vuohen anti-ihmisen CXCL16 (tummanharmaa viiva) ja värjättiin sitten kanin anti -goat IgG-FITC. Tiedot ovat yhdestä edustavasta kokeesta kolme suoritettu. (D) Värjäys CXCL16 ja CXCR6 in prostatektomia yksilöt käyttävät DAB (ruskea) havaitsemista varten on esitetty: normaalissa eturauhasessa ja eturauhasen syöpä. Paneelit edustavat yli 80 eturauhasen syöpiä tutkituista tapauksista. Jokainen paneeli sisältää H 0,05 ja **, p 0,01. (II) Immunofluoresenssi ja konfokaali kuvantaminen läpileikkauksesta syöpäsolujen näyttää anti-CXCL16 (488 tyramide) vihreinä, anti-CXCR6 (594 tyramide) punaisina, ja tumavärjäystä Hoechst 33258 sinisinä. Kaksoisvärjäys keltaisella näyttelyissä yhteistyössä lokalisointi. Paneelit ovat edustavia yli 15 tapausta eturauhassyöpää. Alkuperäiset suurennokset ovat huomattava näistä ja kaikki myöhemmät mikrovalokuvia.

ilmentäminen CXCL16 ja CXCR6 korreloi syöpä vaiheessa ja arvosana

vaihe (I-IV) ja arvosana (Gleason) eturauhassyövän määritetään diagnoosi, ja raportoi toimittaja tapauksia käytetyt taulukot. Korkeampi vaiheessa vastaa suurempaa anatomista laajentaminen syövän, ja Gleason pisteet kuvataan histologisia piirteitä, jotka korreloi kliinisten tutkimusten tulosten. Gleason tulokset 2-4 matala-asteisia, tulokset 5-7 ovat kohtalaisen luokan, ja tulokset 8-10 ovat korkealaatuisia eturauhassyöpä. Analyysi 40-kotelo matriisia tasoilla värjäytymistä CXCL16 ja CXCR6 paljasti, että niiden ilmentymistä syöpäsolut korreloi sekä korkea-vaiheessa ja korkea-asteen eturauhassyövän (kuvio 2A).

(A) Arrays sisältäviä eturauhassyöpä kudosta 40 potilasta värjättiin CXCL16 ja CXCR6. Näytteet pisteytettiin CXCL16 ja CXCR6 ilmentymistä, kuten on kuvattu Materiaalit ja menetelmät. Näytteet ryhmitelty vaiheeseen tai Gleason (X-akselia) määritettynä toimittaja, ja keskiarvot CXCL16 ja CXCR6 ilmaisun laskettiin. Näytteiden määrä (n) kussakin vaiheessa tai Gleason ryhmä näkyy. Virhe palkit osoittavat SEM. Cross-palkit osoittavat vertailut, jotka ovat merkittäviä. *, P 0,05 ja ***, p 0,001. (B) PC3-solut transfektoitiin CXCR6-YFP plasmidi, viljeltiin 48 tuntia ilman kemokiini (kontrolli, ctrl) tai 0,05-5 ug /ml CXCL16 ja numerot CXCR6-YFP

+ (R6YFP

+ ) vs. CXCR6YFP

– (R6YFP

-) solut laskettiin, kuten on kuvattu Materiaalit ja menetelmät. Normalisoitiin kontrolliin, käsittelemätön näyte, jolloin saatiin kertainen ero solujen määrä. Palkit osoittavat keskiarvoja ± SEM yhdistetty kolmen kokeen. **, P 0,01 ja ***, p 0,001 vs. kontrolli arvoihin. (C) jälkeen transfektion CXCR6-YFP plasmidi, PC3-soluja viljeltiin, kuten (B), ilman tai 5 ug /ml CXCL16. Vasen paneeli, gating näkyy erottaa käsittelemättömien ja CXCL16-käsiteltyjen solujen ”matala” (L) tai ”suuren” (H) varten CXCR6-YFP. Prosenttiosuudet solujen korkea portit on esitetty. Yksi edustava koe esitetään kolmesta suoritettu. Oikea paneeli, CXCR6-YFP

+ alhainen (CXCR6 + pieni) ja CXCR6-YFP

+ korkea (CXCR6 + korkea) solujen CXCL16-käsiteltyjen ja vertailuviljelmissä laskettiin 48 tunnin kuluttua, kuten (B). Tiedot yhdistettiin kolmen kokeen. *, P 0,05 ja ***, p 0,001 vs. käsittelemättömät solut. (D) konfokaali kuvantaminen näyttää anti-CXCL16 tai anti-CXCR6 (488 tyramide) vihreinä, anti-Ki67 (594 tyramide) punaisina, ja tumavärjäystä Hoechst 33258 sinisinä. Paneeli edustaa yli 15 tapausta.

proteiinin roolia CXCL16 /CXCR6 lisääntymisessä eturauhassyöpäsolujen

koekspressio CXCL16 ja CXCR6 eturauhassyövän soluissa, ja niiden vastaavuus syövän vaiheessa ja laatu, ehdotti, että ligandi ja reseptori voisi parantaa leviämisen kautta autokriini reitin. Tämän mahdollisuuden tutkimiseksi, transfektoimme PC3-soluja, joilla on CXCR6-YFP plasmidi, joka koodaa CXCR6 C-terminaalinen fuusioproteiini, jossa on parannettu keltainen-vihreä fluoresoiva proteiini (YFP), ja inkuboitiin solut CXCL16. Kuten on esitetty kuviossa 2B, määrä CXCR6-YFP

+ -solujen lisääntynyt, vs. kontrolli CXCR6-YFP

– soluja, funktiona pitoisuuden CXCL16. Olemme myös analysoineet suhdetta ilmentymistaso CXCR6-YFP ja vastaus CXCL16. Olemme havainneet, että kun solut, jotka ilmentävät korkeimmat CXCR6-YFP olivat eniten reagoivat CXCL16, CXCL16 lisäsi proliferaatiota, vaikka näiden solujen, jotka olivat CXCR6-YFP

alhainen (kuvio 2C). Yhdenmukainen näiden in vitro -tiedot, syöpäsolut ilmentävät Ki67, matkapuhelinverkon markkeri lisääntymistä, myös ilmaissut sekä CXCL16 ja CXCR6 (kuvio 2D).

Expression of CXCL16 /CXCR6 liittyy tulehdukseen

immunohistokemiallinen analyysi useita yksilöitä radikaali prostatectomies osoittivat näkyvä ilmaus CXCL16 ja CXCR6 kroonisen eturauhastulehdus ja surkastuminen, joihin liittyy krooninen eturauhastulehdus (PIA), sekä eturauhasen epiteelinsisäisen neoplasia (PIN) ja syöpä, mikä viittaa siihen, että ilmaus CXCL16 ja CXCR6 päälle eturauhasen epiteelisolujen liittyy tulehdusta lisäksi mitään yhteyttä maligniteetti sinänsä (kuvio 3A). Olemme tutkineet tätä suhdetta in vitro käsittelemällä viljelmiä epiteelin (PrEC) ja stroomasolut (kyseistä luottoa) normaalista prostates kanssa tulehduksellisten sytokiinien. TNF-α ja IFN-γ varsinkin samanaikaisesti, aiheuttama CXCL16 mRNA ja CXCL16 erityksen PrEC (mutta ei stroomasolut) (kuvio 3B, C) – ja johti dramaattiseen ylössäätöä in PrEC mRNA for CXCR6 (kuva 3D ).

(A) Värjäys CXCL16 ja CXCR6 in prostatektomia yksilöt käyttävät DAB (ruskea) havaitsemista varten on esitetty: krooninen eturauhastulehdus, PIA ja PIN. Paneelit edustavat yli 80 eturauhassyövän tutkituista tapauksista. Jokainen paneeli sisältää H 0,05 ja **, p 0,01 vs. käsittelemättömät solut. (C) CXCL16 mRNA: n ekspression PrEC kolmesta luovuttajien ja kaksi eturauhassyövän solulinjoissa (DU145 ja PC3) käsiteltiin 5 ng /ml IFN-γ ja 0,5 ug /ml TNF-α yksinään ja yhdistelmänä analysoitiin käyttäen reaaliaikaista RT -PCR. Normalisoitiin asettamalla kontrollinäyte alhaisimman lausekkeen arvo on 1. Kukin pylväs edustaa keskiarvoa ± SEM saatiin rinnakkaisista kuopista, kokeen yhdestä edustavasta kokeesta kolme suoritettu. **, P 0,01 vs. käsittelemättömät solut. (D) CXCR6 mRNA: n ekspression PrEC kolmesta luovuttajien käsiteltiin 5 ng /ml IFN-γ ja 0,5 ug /ml TNF-α yksinään ja yhdistelmänä analysoitiin käyttäen reaaliaikaisen RT-PCR: llä. Arvot normalisoitiin asettamalla näyte alhaisimman ilme yhtä kuin 1. **, p 0,01 vs. käsittelemättömät solut. (E) Kullakin rivillä on leikesarjojen samasta alueilta eturauhasen yksilöiden värjätään DAB (ruskea) varten αSMA, CXCL16, ja CXCR6 lukien H 0,05.

Lisäksi yhdistys CXCL16 /CXCR6 tulehduksellinen infiltraatit eturauhasessa, meidän ensivaikutelman analysoimalla yli 80 tapausta eturauhassyövän oli ilmaus CXCL16 oli korkein syöpäsolut ympäröi reaktiivinen strooman. Stroma kuvataan ”reaktiivinen”, jos se osoittaa nousua myofibroblasteja, fibroblastien sileän lihaksen suhde ja paikalliseen verisuonten tiheys [36]. Tämä tapahtuu seuraavan tulehdusta, ja tunnistaa syövät, nyt suhteellisen huono tulehdussolujen, jotka ovat syntyneet tulehduksellinen mikro-ympäristössä. Olemme vahvistaneet ensivaikutelman värjäämällä sarja osiot CXCL16, CXCR6 ja alfa sileän lihaksen aktiini (α-SMA), markkeri sileän lihaksen soluissa, jotka katoavat reaktiivinen stroomasta. Löysimme yhdistyksen välillä menetys sileitä lihassoluja ja korkea ilmentyminen CXCL16 ja CXCR6 (kuvio 3E), joka vahvistettiin pisteyttämällä näytteet 40-kotelo matriisia α-SMA, CXCL16, ja CXCR6 (kuvio 3F). Nämä tiedot tukivat yhdistyksen välillä ilmaus CXCL16 ja CXCR6 ja todisteet ennen tulehduksen kasvain mikro-ympäristössä. Yhdessä data kuviossa 3 osoittavat vahvan korrelaation ilmaisua CXCL16 /CXCR6 ja tulehdusta kaikissa kehityksessä eturauhassyövän.

proteiinin roolia CXCL16 /CXCR6 sisään vuorovaikutukset syöpäsoluissa ja T-solujen

mahdolliset suorat vaikutukset CXCL16 /CXCR6 eturauhasen syöpäsolujen huolimatta, koska CXCR6 parhaiten kuvailla T-solun kemokiinireseptoriin, tutkimme toimintaa CXCL16 /CXCR6 eturauhasen syövän liittyvä T-solut, jotka saattavat edistää välillisesti muodostuminen ja syövän kasvu. Immunofluoresenssivärjäyksellä paljasti, että sekä CXCL16 ja CXCR6 ilmaistaan ​​CD3

+ viereisiä soluja syöpäsolujen (kuvio 4A). Kohteisiin, olemme huomanneet, että jotkut CD3

+ solut myös värjättiin Ki67 (kuvio 4B), joka osoittaa T-solujen lisääntymistä tuumorikohtaan. Lisäksi, kaksinkertainen värjäys CXCR6 ja Ki67 paljasti, tulehdussolujen, jotka olivat positiivisia sekä (kuvio 4C).

(A, B) konfokaali kuvantaminen osoittaa anti-CXCL16 (A, vasen paneeli) tai anti-CXCR6 (A , oikea paneeli) tai anti-Ki67 (B) vihreänä (488 tyramide), anti-CD3 (594 tyramide) punaisina, ja tumavärjäystä Hoechst 33258 sinisinä. Kaksoisvärjäys keltaisella näyttelyissä yhteistyössä lokalisointi. (A), nuolet syövän ja T-soluja. Paneelit edustavat yli 15 tapausta jokaisesta double-tahra. (C) Värjäys Ki67 ja CXCR6 alueella eturauhastulehdus käyttäen DAB (ruskea, kaksi vasemmalle paneelit) tai immunofluoresenssilla (oikea paneeli) havaitsemista varten. Konfokaaliset kuvantaminen esitetään anti-CXCR6 vihreänä (488 tyramide) ja anti-Ki67 punaisina (594 tyramide), ja tumavärjäystä Hoechst 33258 sinisinä. Paneeli edustaa yli 15 tapausta.

pohdittava CXCL16 ja CXCR6 toimisi autokriinisellä tavalla tehostaa T-soluproliferaatiota analoginen vaikutuksia syöpäsoluihin. Onko vai ei CXCL16 voitaisiin tuottaa CXCR6

+ soluja, joita löytyy vain efektori /muisti osajoukko, me lajitellaan populaatiot ääreisverenkierron CD4

+ T-solujen perustuu ilmaus muistin ja naiiveja markkereita ja CXCR6. Aktivoinnin jälkeen

ex vivo

, olemme huomanneet, että mRNA CXCL16 indusoitiin edullisesti sisällä efektori /muisti osajoukko, ja kyseisessä osajoukko, että solut, jotka ilmentävät CXCR6 (kuvio 5A). Seuraavaksi testasimme potentiaalia toimintaa CXCR6 T-soluissa transfektoimalla Jurkat E6.1 T-solulinja, jossa DNA, joka koodaa CXCR6-YFP tai GFP. CXCR6-YFP

+, mutta ei CXCR6-YFP

– soluja, siirtynyt CXCL16 on G

i /o-proteiini mukaisesti (kuvio 5B), ja osoitti asteittain lisänneet solujen lukumäärän kasvaessa annokset CXCL16, mutta ei ohjaus kemokiini (kuvio 5C). CXCL16 ei ollut vaikutusta transfektoitujen solujen ilmaista GFP ylimääräinen ohjaus (tuloksia ei ole esitetty). CXCL16 /CXCR6 parannettu leviämisen sinänsä, koska emme nähneet vaikutuksia solukuolemaa (kuvio 5D) ja todettu kasvua erityisesti populaatiossa soluja, jotka jakavat (kuvio 5E).

(A) CD4

+ T-solut lajiteltiin infektoitunut (CD45RO-), yhteensä efek- /muistin (CD45RO +), CD45RO

+ CXCR6

– (CXCR6-) ja CD45RO

+ CXCR6

+ (CXCR6 +) osajoukot ja stimuloitiin PMA: lla ja ionomysiinillä 4 tunnin ajan ennen mittausta tasoja CXCL16 mRNA: n reaaliaikainen RT-PCR: llä. Arvot normalisoitiin asettamalla näyte alhaisimman ilme yhtä kuin 1. Tiedot ovat keskiarvoja rinnakkaisista näytteistä yhdestä edustava koe kolmesta suoritettu. (B) Jurkat E6.1 T-solut transfektoitu CXCR6-YFP plasmidia analysoitiin siirtymisen CXCL16. Näytteitä esi-inkuboitiin kahden tunnin ajan 400 ng /ml hinkuyskätoksiinilla kuten on osoitettu. Numerot YFP + ja YFP- vaeltavien solut analysoitiin virtaussytometrialla. Kukin pylväs edustaa keskiarvoa ± SEM on saatu rinnakkaisesta kuopasta, kokeen yhdestä edustavasta kokeesta kolme suoritettu. ***, P 0,001 vs. vastaava vertailuarvo. (C) jälkeen transfektion CXCR6-YFP plasmidi, Jurkat E6.1 T-soluja viljeltiin 48 tunnin ajan ilman kemokiini (kontrolli, ctrl) tai 1 ug /ml CXCL8 ylimääräisenä ohjaus, tai 0,05-5 ug /ml CXCL16 ennen laskemista numerot CXCR6-YFP

+ vs. CXCR6-YFP

– soluja. Palkit osoittavat keskiarvoja ± SEM yhdistetty kolmesta eri kokeesta. *, P 0,05 ja ***, p 0,001. (D) Transfektoidut solut käsiteltiin kuten (C), ja värjättiin anneksiini V: n ja propidiumjodidin (PI) ennen laskemista numerot CXCR6-YFP

+ solujen alaryhmien, kuten edellä. Palkit osoittavat keskiarvoja ± SEM yhdistetty kolmen kokeen. **, P 0,01 ja ***, p 0,001 vs. kontrolli käsittelemättömät solut. (E) jälkeen transfektioiden CXCR6-YFP plasmidi, Jurkat E6.1 T-solut ladattiin 2 uM Far Red DDAO väriaine ja viljeltiin ilman kemokiini (kontrolli, ctrl) tai 0,05-5 ug /ml CXCL16 tai 1 ug /ml CXCL8 . Numerot CXCR6YFP

+ vs. CXCR6YFP

+ DDAO

– (lisääntynyt) ja CXCR6YFP

+ DDAO

+ (ei lisääntynyt) solut määritettiin 48 tuntia käyttäen laskenta helmiä ja virtaussytometria . Palkit osoittavat keskiarvoja ± SEM kolminkertaisista kuopista, kokeen yhdestä edustavasta kokeesta kolme suoritettu. ***, P 0,001 ja *, p 0,05 vs. kontrolli käsittelemättömät solut.

Lisäksi, kun tutkimme vaikutus levyyn sidotun CXCL16 proliferaatioon CD3-aktivoitua ensisijainen CD4 T solut, löysimme merkittävä stimuloiva vaikutus proliferaatioon, joka inhiboitui käsittelemällä pertussistoksiinin tai vasta-aineita CXCR6 tai CXCL16 (kuvio 6A). On huomattava, että koska CXCL16 syntetisoidaan transmembraaninen kemokiini, että vaikka levyyn sidotun CXCL16 oli stimuloivia, liukoinen CXCL16 ei ollut vaikutusta (tuloksia ei ole esitetty).

(A) CD4

+ T-solut puhdistettu lietetään lymfosyyttejä terveistä luovuttajista stimuloitiin 3 päivää levyyn sitoutuneen anti-CD3 (OKT3, 10 ug /ml) kanssa tai ilman sitä 5 ug /ml levyyn sidotun CXCL16 (BL16). Hoidot anti-CD3-aktivoitujen solujen kanssa PTX, anti-CXCR6 (AR6) ja anti-CXCL16 (aL16) ilman BL16 tehtiin kontrolleina. Hiiren IgG: tä (mIgG) ja rotan IgG: tä (Rigg) käytettiin kontrolleina anti-CXCR6 vasta-aine ja anti-CXCL16-vasta-aine, vastaavasti. Bars osoittavat keskiarvo ± keskiarvon kokeen yhdestä edustavasta kokeesta viidestä, käyttäen viittä luovuttajia. Anti-CXCL16 käytettiin yhteensä neljä, ja anti-CXCR6 kahdessa kokeessa. ns, ei merkittävää ja ***, p 0,001. (B) CXCR6 ja CXCL16-mRNA: t mitattiin reaaliaikaisella RT-PCR: CD3-aktivoidun ja ei-aktivoidun CD4

+ T-solujen jälkeen 3 päivää. Normalisoitiin asettamalla ei-aktivoitu näytteen pienin lausekkeen arvo on 1. harkko osoittavat keskiarvoja ± SEM yhdistää rinnakkaisista kuopista seitsemästä eri luovuttajilta. **, P 0,01 ja ***, p 0,001 vs. ei-aktivoitujen solujen. (C) Anti-CD3-aktivoitu tai aktivoimattoman CD4

+ T-solut analysoitiin siirtymisen CXCL16, ilmaistuna prosentteina panos liikkuvien solujen. Kukin pylväs edustaa keskiarvoa ± SEM on saatu rinnakkaisesta kuopasta peräisin yhteensä kolme kokeita. ***, P 0,001 rajat palkit on merkitty väliseen vertailuun aktivoitujen solujen – 0 vs. 50 ng /ml CXCL16 ja 50 ng /ml vs. 500 ng /ml CXCL16.

Huolimatta tiedot vaikutukset CXCL16 aktivoiduissa CD4

+ T-solut, emme voineet havaita värjäytymistä CXCR6 virtaussytometriaa käyttämällä suuri tai lisääntynyt prosenttiosuus näiden solujen aktivoinnin jälkeen. Kuitenkin tukevat toiminnallisten CXCR6 näillä soluilla, löydettiin merkittävä kasvu mRNA: n ilmentymisen ja CXCR6 ja (vähemmän) ja CXCL16 CD3-aktivoitujen solujen (kuvio 6B), ja kasvu muuttoa CD3-aktivoitujen solujen ja CXCL16 (kuvio 6C). Annosvaste Kuviossa 6C on kellon muotoinen kuvio tyypillisiä kemotaksista.

CXCL16 ja /tai CXCR6 laajasti ilmaistu tulehdukseen liittyvä syöpien

Jotta tutkimaan mahdollisuutta entistä yleinen assosiaatio CXCL16 ja tulehdukseen liittyvä syöpä, tutkittiin ekspressiota CXCL16 582 syöpätapausta, joka kattaa 12 kasvaintyypeissä (kuvio 7). Olemme löytäneet bias korkean CXCL16 ilmentyminen syöpiä, jotka liittyvät tulehdukseen: munasarja-, rinta-, eturauhas-, paksusuoli- ja maksan syövät.

(A) * intensiteetti CXCL16 värjäys pisteytettiin, kuten on kuvattu Materiaalit ja menetelmät. Että% tapauksista värjäystä korkea esitetään kullekin syöpätyypin. ** RCC, munuaissolukarsinooma; GBM, glioblastoma multiforme. (B) CXCL16 ilmaisun paneelit useiden ihmisen syövissä immunohistokemialla käyttämällä AEC (punainen) tai DAB (ruskea) havaitsemista varten. Paneelit edustavat numeroita yksilöiden eri syöpiä luetellut (A).

Keskustelu

Syöpä syntyy geneettisten mutaatioiden ja epigeneettiset tapahtumat jakautuvat solut ja muutokset kasvaimen mikroympäristössä, joka sisältää kapillaareja, sileän lihaksen solut, fibroblastit ja tulehdussolujen [4]. Vuonna 1863 saksalainen lääkäri Rudolf Virchow huomattava leukosyyttien neoplastisten kudosten ja arveltu, että syöpä alkaa sivustoja kroonisen tulehduksen [37]. Siitä huolimatta syöpä immunologit ovat yleensä pidetty leukosyytit aineina, joilla on potentiaalia rajoittaa tai eliminoida syöpiä [38]. Samoin roolit välittäjinä leukosyyttihoukutteluna, kemokiinien on tutkittu stimulators syövän immuniteetti ja tulehdus [11], [39], [40].

Krooniset tulehdustiloja ovat kuitenkin olleet osoitettu altistavan useita syöpätyyppejä ja uusiutuva tai krooninen tulehdus on osallisena erilaisissa ihmisen syövissä [5]. Viimeaikaiset hiirimalleissa ovat välillä on toiminnallinen yhteys syövän ja tulehduksen, jotka osoittavat, että deleetio immuunisolujen tai immunoregulatiivisen geenien vähentää syövän etenemistä [1] – [3]. Yhdessä nämä tiedot esitetään mahdollisuus ylimääräisen rooli proinflammatoristen kemokiinien syövän, nimittäin kasvainjouduttimet.

Tutkimme eturauhassyöpä, joka on kuvattu, jotka aiheutuvat tulehduksen. Alustavien näyttö kemokiini ilmaisun ehdotettu rooli CXCL16, ja huomasimme, että molemmat CXCL16 ja CXCR6 olivat koekspressoi syöpäsolujen, että niiden ekspressiotasoja korreloivat keskenään, ja että nämä tasot myös korreloi korkean vaiheessa ja korkea -laadun eturauhassyöpä. Lisäksi, CXCL16 parannettu leviämisen eturauhassyövän ilmentävien solulinjojen CXCR6. Tuloksemme viittaavat siihen, mahdolliset suorat vaikutukset CXCL16 /CXCR6 on syöpäsolujen kasvua ja siten tuumorin kehitykseen.

Toisen näkökohdan meidän tutkimuksessa olemme tutkineet mahdollisia rooleja CXCL16 /CXCR6 puitteissa oletetun panos tulehdus ennalta pahanlaatuinen ja pahanlaatuinen sairaus eturauhasen. Olemme löytäneet korkea lauseke CXCL16 kroonisessa eturauhastulehdus, pre-neoplastisia vaurioita, ja ensisijainen eturauhassyövän ympäröi reaktiivinen, eli post-inflammatoriset strooman. Lisäksi, TNF-α: n ja IFN-γ indusoidun ilmentymisen CXCL16 ja CXCR6 ensisijaiseen eturauhasen epiteelisolujen. Lisäksi löydettiin merkittäviä korrelaatioita reaktiivisten strooman ja korkean tason ilmentymisen CXCL16 ja CXCR6 syöpäsoluissa. Nämä tulokset viittaavat siihen, säätely ylöspäin CXCL16 /CXCR6 eturauhasen epiteelin liittyy vahvasti sekä nykyisen ja edellisen tulehdus eturauhasen strooman.

Kolmannessa osassa Tutkimuksessamme selvitimme mahdollisia rooleja CXCL16 ja CXCR6 päälle kasvaimeen liittyvät lymfosyyttien. Olemme havainneet, että CXCL16 ja CXCR6 ilmentyvät T-soluissa vieressä eturauhasen syöpäsoluja. Olemme osoittaneet, että CXCL16 voidaan indusoida tapahtuu ensisijaisesti CXCR6

+ CD4

+ primaaristen T-solujen, ja että Jurkat T-solut transfektoitiin ilmaista CXCR6 sekä aktivoitu, ensisijainen CD4

+ T-solut lisääntyivät läsnäollessa CXCL16. Nämä tiedot viittaavat siihen saattaa joko autokriinisiä ja parakriinisiä vaikutuksia CXCL16 on infiltroivia T-soluja sekä pre-pahanlaatuisten ja /tai pahanlaatuisten eturauhasen soluissa.

Lopuksi tutkia yhdistetään yleisemmin välillä CXCL16 ja inflammation- liittyvien syöpien, tutkimme ilmaus tästä kemokiinin yksilöiden useista eri ihmisen syövissä. Löysimme korkeat ekspressiotasot CXCL16 syövissä munasarja-, rinta-, eturauhas-, paksusuoli- ja maksa – kaikki syövät kuvattu, jotka aiheutuvat tulehduksen.

CXCL16 on aiemmin kuvattu ihmisen gliooma, paksusuolen ja rintojen syöpä, ja CXCR6 ilmoitettiin nenänielun syöpää ja melanoomaa [41] – [46]. Useita muita papereita ovat viime aikoina ilmestynyt tutkimalla CXCL16 ja /tai CXCR6 syövässä [45] – [50]. Useat näistä raporteista keskittyi CXCR6 eturauhassyövässä, ja kuten meidän osoittivat korkeaa ilmentymistä CXCR6 eturauhassyöpäsoluissa [47] – [49]. Yksi paperi, myös kuten meillä, osoitti positiivinen korrelaatio CXCR6 tasojen ja Gleason tulokset, raportoitu CXCL16 ilmaisu eturauhassyövissä, ja osoittivat lisääntynyttä erittymistä CXCL16 eturauhasen solulinjojen jälkeen käsittelemällä TNF-α [47]. Toinen paperi osoitti vaikutuksia hyökkäystä eturauhasen linjat liukoiseen CXCL16 [48]. Kolmas paperi osoitti vaikutuksia CXCR6 kasvuun eturauhassyöpäsolulinjoissa hiirissä [49]. Kaiken kaikkiaan meidän havainnot viittaa pro-tuumorigeenisia roolit CXCL16 ja CXCR6 eturauhassyövässä ovat yhdenmukaisia ​​julkaistut raportit.