Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Useat aiemmat tutkimukset ovat tunnistaneet vahvan yhteyden T-solujen tunkeutuminen ja kliinistä tulosta munasarjasyöpä. Rooli B-solujen on edelleen kiistanalainen, mutta.

Methods

Neljäkymmentäyhdeksän parafinoidut omental yksilöitä peräisin potilaista, joilla on korkea laatu epiteelin munasarjasyöpä arvioitiin. Immunohistokemiallista analyysit suoritettiin ilmentymisen karakterisointiin CD19

+ B-soluja ja pSTAT3 niin korkea ( 50% positiivisesti värjäämällä solut [PSCs]) tai matala (alle 50% PSCs). Kaplan-Meier menetelmä log-rank-testi määrittämiseen käytettiin yhdistyksen välillä ennusteeseen viittaavia parametreja ja yleistä (OS). Monen variate Coxin suhteellisen vaarat regressioanalyysi lukien luonne debulking (ensisijainen

vs

toissijainen), histologia, kasvaimen, saatuaan ennen kemoterapiaa, B-infiltraatiota ja pSTAT3 ilmentyminen suoritettiin.

tulokset

mediaani oli 160,6 kuukautta niillä potilailla, joilla on alhainen B-solujen ilmentymisen

vs

47,3 kuukautta niillä, joilla on korkea B-solujen ilmentymisen (P = 0,0015). Samoin mediaani parani niillä potilailla, joilla on alhainen pSTAT3 ilme (160,6

vs

47,9 kuukautta, P = 0,02). Monimuuttuja malli ennustaa selviytymisen, vain aste B-infiltraatiota ja kliinisessä vaiheessa oli säilytetty. pSTAT3 ilmaus ei anna lopullista mallia, mahdollisesti johtua korkea positiivinen korrelaatio B-solujen infiltraatio (r = 0,82, P 0,0001).

Johtopäätökset

Lisääntynyt B-solujen tunkeutuminen ja pSTAT3 ilmentyminen omental kudoksessa liittyy huonompi selviytymisen.

Citation: Yang C, Lee H, Jove V Deng J, Zhang W, Liu X, et al. (2013) Prognostic merkitys B-solujen ja pSTAT3 in munasarjasyöpäpotilaalle. PLoS ONE 8 (1): e54029. doi: 10,1371 /journal.pone.0054029

Editor: Goli samimi, Kinghorn Cancer Centre, Garvan Institute of Medical Research, Australia

vastaanotettu: 01 lokakuu 2012; Hyväksytty: 7. joulukuuta 2012 Julkaistu: 10 tammikuu 2013

Copyright: © 2013 Yang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Dr. Pal pyrkimykset tukevat National Institutes of Health K12 2K12CA001727-16A1. Dr. Yu pyrkimykset tukevat NIH U54 CA163117, NIH R01 CA122976-01, NIH P50 CA107399 ja Markel Fund. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

amassing kirjallisuutta tukee roolia immuunisolujen munasarjasyövän lisääntymistä. Vuonna 2003, Zhang

et al

raportoitu uraauurtava tutkimus, jossa kudoksessa 186 potilasta arvioitiin varten aste CD3

+ kasvainta infiltroituneen T-soluja. [1] Jos tällaisia ​​soluja havaittiin itsenäisesti ennakoida myöhässä toistuminen ja pitkäaikainen selviytymistä, jossa on suuri suuruusluokkaa vaikutus. Useat muut tutkimukset ovat tuottaneet saman päätelmän, tiivistää hiljattain meta-analyysi Hwang

et al.

[2] Kun kumulatiivinen kokemus 1815 potilaista yli 10 tutkimuksissa osoitettiin, että puute kasvain- tunkeutuvia lymfosyyttejä (TIL) oli yhteydessä heikompaan eloonjäämisen (riskisuhde [HR] 2,24; 95% CI 1,71-2,91). Näissä tutkimuksissa TIL karakterisoitiin ilmentyminen CD3 ja /tai CD8. [1], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11] havaittu korrelaatioita T-solujen tunkeutuminen ja kliinisten tulosten on biologisesti uskottava yksi – erityisesti, CD8

+ T-solut voivat aiheuttaa suora sytolyyttinen antituumorivaikutus.

ymmärtämään paremmin T-solubiologian, on käynyt selväksi, että tietyt osajoukot T- solut voivat itse asiassa olla procancer vaikutus. Erityisesti Barnett

et al

ovat arvioineet laajuutta säätelijä-T-solujen (Treg) tunkeutuminen sarjassa 232 ensisijainen vakavien munasarjasyöpä yksilöitä. [12] Tässä sarjassa, laajuus Treg tunkeutumisen liittyi suurempi syöpään asteen ja pitkälle vietyyn kliiniseen vaiheeseen. Vahvistavia näitä tietoja, ääreisverenkierron arviointien munasarjasyöpäpotilaalle ehdottaa ja kasvava määrä verenkierrossa Tregs mukana taudin etenemistä. [13]

rooli B-solujen munasarjasyövän on haastavampaa havaita. [14] alussa tutkimuksissa käyttäen hiiren malleja B-solujen puute, ehdotettiin, että B-solut voivat itse asiassa estää antituumorivaikutusta tuumoreihin tunkeutuvia T-soluja. [15], [16] Mahdollisena mekanismi, B-solujen on osoitettu inhiboivan esikäsittely CD4

+ T-solujen CD8

+ T-soluja. [17] Huolimatta Näiden havaintojen kliinistä näyttöä viittaa yhteyden CD20

+ kasvainta infiltroivia B-soluja ja tulos on myönteinen asettamisessa munasarjasyöpä. Erityisesti Milne

et al

tutkittavan kudoksen mikrosiru (TMA), joita saadaan 199 potilailla, joilla on korkea-asteen serous epiteelin munasarjasyöpä (EOC). [18] Tässä raportissa läsnäolo intraepiteliaalisten CD20 + solujen liittyi parannuksen tautikohtaisia ​​eloonjäämisen (DSS). On kuitenkin tärkeää huomata, että tämä raportti oli täydennetty muilla paradoksaalinen havaintoja – esimerkiksi läsnäolo FoxP3

+ säätelijä-T-solujen (Tregs) on myös liittynyt suotuisa DSS. Tämä havainto on ristiriidassa voittopuolisesti näyttöä siitä, että Tregs voi olla pro-syövän vaikutusta.

On selvää, että suhde B-solujen ja potilaan kliinisen optio lisäarviointia. Nykyisessä käsikirjoitus, me arvioida, missä määrin B-solujen tunkeutuminen omental kudokseen johdettu munasarjasyöpäpotilaalle, ja yrittää korreloida laajuus tunkeutuminen kanssa kokonaiselinaika (OS). Olemme aiemmin osoittaneet, että fosforyloitu signaalinmuuntajana ja aktivaattori transkriptiosta 3 (pSTAT3) on keskeisessä asemassa syöpään liittyvien tulehduksen ja syövän etenemistä kautta rekrytointi myeloidisoluissa ja Tregs. [19], [20] Viime aikoina olemme osoittaneet, on kriittinen rooli STAT3 edistämisessä B-soluvälitteinen kasvaimen angiogeneesiä hiiren malleissa (julkaisematon data). Tätä varten olemme edelleen tutkineet yhdistyksen välillä pSTAT3 ja B-solujen tunkeutuminen.

Methods

Ethics lausunto

Kliiniset ja patologisten tietojen arvioitu tässä tutkimuksessa olivat anonymisoidaan, ja tutkimus kliinisistä näytteistä hyväksyttiin City of Hope IRB (COH IRB 10072).

tutkimus Väestö

City of Hope Biospecimen Repository (COHBR) taloa kudosta johdettu kaikki kirurgiset toimenpiteet esiintyi laitoksen. Kautta IRB-hyväksytty protokolla, saimme parafinoidut osat omental kudosta potilailta, joilla oli diagnosoitu korkealaatuisesta EOC (eli luokka 2 tai 3) ja oli ensisijaisen tai toissijaisen debulking suoritetaan laitoksen. Näytteet olivat peräisin rajaamisvai- menettelyt suoritetaan tammi 2000 ja joulukuussa 2009, ja riittävä näyte oli oltava käytettävissä tuottaa yhteensä 12 unstained diat (4 mikrometriä paksuus). Potilaille, jotka saavat ensisijaisen debulking, käytä tai käyttämättömyyden etukäteen (ts neoadjuvant) kemoterapia ominaista. Potilaille, jotka saavat toissijainen debulking, käyttö ennen kemoterapiaryhmissä adjuvanttihoitoa sulatettu jälkeen ensisijainen debulking. Survival leimasi alkaen, kun diagnoosi munasarjasyövän (tärkeintä, ei siitä lähtien, kun ensisijainen tai toissijainen debulking leikkausta).

Tissue Analyysit

Parafiini kudoksen diat poistui-paraffinized ksyleenissä, uudelleen sammutettua kautta lajitellut alkoholit, ja sittemmin autoklavoidaan Antigeeni paljasten Solution (Vector Laboratories). IF värjäys, kudosleikkeiden inkuboitiin ensisijaisen vasta-aineen laimennus 1:50. Objektilaseja inkuboitiin sitten fluorofori-konjugoidun sekundaarisen vasta-aineen. Kuvat otettiin konfokaalimikroskopiaa käyttämällä CLSM 510 Meta -konfokaalimikroskoopilla (Zeiss). IHC värjäys, kudosleikkeet käsiteltiin 1% H

2O

2 metanolissa 10 min ajan huoneenlämpötilassa, ja sitten inkuboitiin yksi tunti PBS: ssä, joka sisälsi 10% vuohen seerumia (Sigma). Leikkeitä inkuboitiin yön yli 4 ° C: ssa primaarisen vasta-aineen. Inkubaation jälkeen biotinyloidun sekundaarisen vasta-aineita, ABC /DAB-ilmaisuun perustuvaa menetelmää suoritettiin valmistajan ohjeiden mukaisesti (Vector Laboratories). Kudosleikkeet myöhemmin vastavärjättiin hematoksyliinillä 30 sekunnin ajan. Ilmentymisen taso primaarisen vasta-aineen kasvaimen kudoksissa visualisoidaan Nikon ECLIPSE TE2000-U mikroskooppi (4 x tavoite suurennus) ja kuvattiin käyttäen SPOT-ohjelmisto. Ensisijainen käytetyt vasta-aineet ovat anti-pY705-STAT3 (Cell Signaling) ja anti-CD19, merkkiaine ihmisen B-solujen (ABD Serotec). Kaikissa tapauksissa kymmenen mikroskooppikentäs- kanssa vähintään 1000 solua laskettiin kutakin dia pisteytys. Pisteytys tulos IHC-värjätty kudosleikkeet vielä varmistettava IF värjäys peräkkäisen osassa.

Tilastollinen analyysi

Puolikvantitatiivista mittakaavassa käytettiin laajuuden arvioimiseksi CD19 ja pSTAT3 värjäystä. Erityisesti nämä yksilöt 50% solujen positiivista värjäytymistä (tai enemmän) on ”korkea”, ja nämä yksilöt vähemmän katsottiin ”matala”. Nämä tulokset olivat määrittämä itsenäisesti kaksi tutkijaa (C. Y. ja H. L.), ja poikkeava tulokset olivat sitten sovitellaan saamiseksi yhtenäinen tehtävän. Kaplan-Meier menetelmää käytettiin vertaamaan eloonjäämisen kohortteja määritelty (1) ensisijainen tai toissijainen debulking, (2) B-solujen värjäytymisen (korkea

vs

alhainen), (3) pSTAT3 värjäytymistä (high

vs

alhainen), ja näiden yhdistelmiä parametrit. Monen variate Coxin suhteellisen vaarat regressioanalyysi suoritettiin tutkimaan, onko B-solujen tai pSTAT3 värjäys tarjoaa lisää ennusteita pelastusveneiden pidemmälle luonne debulking (ensisijainen

vs

toissijainen), histologia (vakavien, mucinous tai endomet-

vs

kirkas-solu tai erilaistumaton), kasvaimen (2

vs

3), tai ennen kemoterapiaa (kyllä ​​

vs

ei). Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen R ohjelmistoa (saatavilla https://www.r-project.org/).

Tulokset

Potilastiedot

Vuodesta COHBR, yhteensä 110 patologisen yksilöitä saatiin mistä rajaamisvai- leikkauksia mistä munasarjasyöpä tunnistettiin. Näistä yhteensä 29 yksilöitä edustettuina histologialtaan ole merkitystä nykyisen tutkimuksen (eli matala pahanlaatuistumisriskin kasvaimia, carcinosarcomas tai sukusolujen kasvaimet). Lopuista 81 tapausta, 17 yksilöt edusti luokan 1 kasvaimia, ja 15 yksilöitä ei ollut riittäviä omental kudosta ehdotetun analyysejä, tuotti yhteensä 49 yksilöiden nykyisen tutkimuksen. Mediaani-ikä potilaiden edusti nykyisen kohortti oli 61 vuotta (vaihteluväli 41-87), ja suurin osa potilaista oli tunnusomaista, että vakavien, endometroid tai mucinous histologian (47 49, tai 96%). Kahdeksantoista potilasta (37%) oli asteen 2 sairaus, kun taas 31 potilasta (63%) oli 3. asteen tauti. Valtaosa yksilöt johdetut debulking leikkauksia (30 49, tai 61%), ja loput toissijainen debulking. Useimmat potilaat, joille oli tehty ensisijainen debulking ollut saanut ennen systeemistä hoitoa (3%), kun taas suurin osa potilaista, joille oli tehty toissijainen debulking olivat saaneet kemoterapiaa (89%). Taulukossa 1 on esitetty kliiniset ja patologisten ominaisuuksien jakaa laajuus B-solun ilmaisun. Mitään merkittäviä eroja ei nähty keskuudessa ryhmiä lukuun ottamatta laajuuden pSTAT3 värjäys – erityisesti, voittopuolisesti potilailla, joilla on korkea B-solujen värjäytymisen myös osoittaneet korkeita pSTAT3 värjäys, kun taas ne, joilla on alhainen B-solujen värjäytymisen osoitti matalan pSTAT3 värjäytymistä (P 0,0001). Esimerkkejä pienen ja suuren B-solujen infiltraatio ja pSTAT3 ilmentyminen on esitetty kuviossa 1A. Lisäksi B-solujen ja pSTAT3-positiivisten solujen havaittiin samalla alueella potilaan omental kudoksen (kuvio 1 B).

(A) Immunofluoresoivat värjäyksessä, mitä seurasi konfokaalimikroskopialla näkyy esimerkkejä edustavien näytteiden potilaalta, jolla on alhainen B-solujen tunkeutuminen ja pieni pSTAT3 ilmaisun (ylhäällä vasemmalla ja oikealla), ja erillinen potilaan korkean B-infiltraatiota ja korkea pSTAT3 ilmaisun (alhaalla vasemmalla ja oikealla); mittakaavan baareja, 20 um. (B) IHC kuvat osoittavat B-solujen ja pSTAT3-positiivisten solujen samalla alueella omental kudosten; mittakaavan baareja, 200 um.

B-solu /pSTAT3 Expression ja kliinistä hyötyä: Univariate Analysis

Koska sekapopulaatioon Tutkituista potilaista nykyisessä tutkimuksessa (ts potilailla, joille tehdään ensisijainen ja toissijainen debulking menettelyt), OS oli pääasiallinen päätepiste tutkittu. Mediaani oli 160,6 kuukautta niillä potilailla, joilla on alhainen B-solujen ilmentymisen verrattuna 47,3 kuukautta, joilla on merkittävä B-solujen ilmentymisen (P = 0,0015; kuvio 2A). Samoin mediaani parani niillä potilailla, joilla on alhainen pSTAT3 ilme verrattuna korkea pSTAT3 lauseke (160,6

vs

47,9 kuukautta, P = 0,02; kuva 2B). Vaikka oli parantunut mediaani niillä potilailla, joilla on vaiheen I /II tauti

vs

vaiheen III /IV sairaus (P = 0,001), luonne rajaamisvai- leikkaus (ensisijainen

vs

toissijainen; P = 0,56) ja kasvaimen (eli 2

vs

3; P = 0,16) ei näyttänyt olevan vaikutusta kliiniseen lopputulokseen (taulukko 2).

Kaplan-Meier käyrä havainnollistaa kesto hengissä munasarjasyöpäpotilaalle perustuen (A) aste B-solujen infiltraatio (P = 0,0015), (B) aste pSTAT3 ilmaisun (P = 0,02), (C) histologinen luokka järjestelmä ja (D) rajaamisvai- tila .

monimuuttujamenetelmin

Käyttämällä monimuuttuja Coxin suhteellisen vaarat regressioanalyysi sisältää alkuperäisen kliinisen vaiheen (I-II

vs

III-IV), luonto of debulking (ensisijainen

vs

toissijainen), histologia (vakavien, mucinous tai endomet-

vs

kirkas-solu tai erilaistumaton), kasvaimen (2

vs

3), ennen kemoterapiaa (kyllä ​​

vs

ei), B-solujen ilmentymisen (korkea

vs

alhainen) ja pSTAT3 lauseke (korkea

vs

alhainen), vain aste B- infiltraatiota (riskisuhde, HR, 2,03, 95% CI +0,75-5,50) ja vaihe (HR 5,16, 95% CI 1,36-19,60) jäivät monimuuttujakalibrointiin mallissa. Koska tämä havainto, selvitimme korrelaatio vaiheessa ja B-solujen tunkeutuminen ja löysi vaatimaton korrelaatio (r = 0,38, P 0,001). pSTAT3 ei anna lopullista mallia, joka voi mahdollisesti olla, koska sen korkea positiivinen korrelaatio B-solujen ilmentymisen (r = 0,82, P 0,0001) (taulukko 2).

Keskustelu

useat ainutlaatuiset havainnot selvitä nykyisestä tutkimuksen. Suurempi laajuus B-solujen tunkeutuminen omental kudoksessa näyttää korreloivan huonompi selviytymistä. B-solujen tunkeutuminen liittyy vahvasti pSTAT3 ilmentymistä omental kudoksessa, ja itse asiassa kasvoi pSTAT3 ilmentymistä omental kudos liittyy myös huonompi selviytymistä. On Monimuuttuja-analyysissä, B-solujen tunkeutuminen tuli lopullinen monimuuttuja malli yhdessä kliinisessä vaiheessa, ja vahvan yhteyden välillä todettiin pSTAT3 ilmaisun ja B-solujen tunkeutuminen.

Kuten jo todettiin, vaikutus T-solujen tunkeutuminen on suhteellisen hyvin dokumentoitu asettaminen munasarjasyöpä, nyt koottu meta-analyyttinen aineisto. [2] Nämä kiinnekohta tutkimukset ovat halveksittu pyrkimyksiä käyttää adoptiovanhemmat siirto T-solujen, sekä yksin ja yhdessä sytotoksisen hoidon. [21], [22], [23] tehokkuus vaikuttaa T-solun osajoukot, kuten procancer vaikutuksia Tregs, on myös havaittavissa. Rooli B-solujen käyttöä enemmän kiistanalainen – vaikka perinteisesti ajateltu olevan antagonistinen vaikutus sytotoksisia T-soluvasteita, edellä mainittu aineisto alkaen Milne

et al

viittaa siihen, että kasvaimen infiltroivia B-solut voivat olla positiivinen ennustetekijöiden merkki. On kuitenkin tärkeää huomata, että tutkimuksemme hyödyntää selvä B-solujen markkeri (CD19), ja myös arvioida entistä heterogeeninen ryhmä potilaita (potilailla, jotka saivat toissijainen debulking ja aiempi systeeminen hoito). Nähden jälkimmäisen, löysimme merkittävää eroa tulos perustuu näihin kliiniset piirteet, ja yllättäen, jakelu biomarkkerit eivät muuttuneet näissä alaryhmissä. Tutkimuksemme arvioitiin myös yksittäisten osa johdettu parafinoidut yksilöt; toisin kuin muissa tutkimuksissa arvioidaan TMA, tämä lähestymistapa antoi arvioimiseksi useita kenttiä (10 per näyte) antaa tarkemman biomarkkereiden arviointi.

tiiviin B-solujen ja pSTAT3 tässä tutkimuksessa tukee prekliinisten olemme aiemmin raportoitu rajata roolia pSTAT3 immuunisolujen rekrytointi. [24] Meidän prekliinisten myös, että kumoamisen STAT3 toiminta voi olla antituumorivaikutusta vastaa meidän kliininen havainto, että suurempi pSTAT3 voi liittyä huonompi kliiniseen tulokseen. [25], [26] Yhdessä, jos nämä kliiniset havainnot vahvistetaan suuremmissa sarjassa, tämä voi olla peruste jatkaa terapeuttista tutkimuksissa STAT3 antagonistien kohdistaa B-solujen munasarjasyöpä. Yhtenä esimerkkinä, olemme kehittäneet CpG-konjugoidun siRNA suunnattu STAT3 valkosoluissa ja B-solut. [26] Vaikka toimittamista siRNA-pohjainen hoitoja on ollut valtava haaste, munasarjasyöpä voi olla ihanteellinen sairaus kokonaisuus lähestyä näillä aineilla. Intraperitoneaalinen kemoterapia on vakiintunut eloonjäämishyötyä faasin III tutkimuksissa, ja vatsaonteloon toimitus RNA terapeuttisten voi kiertää tietty vakaus ja liukoisuutta kysymyksiä. [27] Sen lisäksi, että suoraan antagonisoimaan STAT3, lähestymistapa suunnattu ylävirran osia, kuten JAK2 voitaisiin harkita. Useat JAK2 estäjät on kehitetty hoitoon myeloproliferatiivinen sairaus otetaan poikkeavuuksia tätä proteiinia; on osoitettu, että yksi näistä pienistä molekyyleistä, AZD1480, on kasvainta torjuvaa vaikutusta MDAH2774 munasarjasyövän solulinja. [28], [29].

Useat rajoitukset olisi tunnustettava. Ensiksi meidän otoskoko oli suhteellisen pieni verrattuna muihin julkaistuista raporteista. [1], [30] Toiseksi, emme arvioida T-solupopulaatioiden (ts CD8

+ T-solujen ja FOXP3

+ säätelijä-T-solut) vahvistaa aiemmin raportoitu havaintoja. [30] Kolmanneksi, on edelleen epäselvää, mikä vaikutus tietyllä tavalla muuttujien (eli ennen kemoterapiaa) on voinut olla havaitun B-solu- tai pSTAT3 jakelu – tämä takaa lisätutkimuksia suuremmassa sarjassa. Lopuksi, meidän tutkimus yksinomaan keskittyy kudospohjaisia ​​markkereita. Vaikka tavanomaiset seerumimarkkereiden kuten CA-125 ovat pudonneet pois puolesta äskettäisen mahdollisille arvioinnit, on olemassa lukuisia uusia seerumin perustuvissa määrityksissä on näköpiirissä. [31] Esimerkiksi autovasta profilointi tutkimuksissa on todettu allekirjoitukset eroavat munasarjasyöpä potilaiden ja terveiden verrokkien. [32] On utelias näkemään, onko yhdistelmä biomarkkerit olemme ehdottaneet tässä muiden kanssa voi tuottaa parempia henkilökohtaisia ​​prognostisia työkaluja. Näistä rajoituksista huolimatta meidän data lisää hyvin rajallinen määrä kirjallisuutta liittyvien vaikutusten B-solujen tunkeutuminen hoitotulokseen pitkälle munasarjasyövän, ja tarjoaa järkeenkäypää mekanismia näin tapahtuisi (eli B-solujen rekrytointi kautta STAT3 riippuvaisten reittejä). On selvää, suurempia ponnistuksia tarvitaan vahvistamaan havaintojen tässä. Kanssa varjosta verrattuna perinteisiin biomarkkerit kuten CA-125, immuuni markkereita pitää valtava lupaus munasarjasyöpä. [33] Koska orastavaa putki JAK /STAT-reitin inhibiittorit, meidän data yhdistää pSTAT3 ilmaisun ja B-solujen tunkeutuminen kliiniseen lopputulokseen voi lopulta tukea uusia terapeuttisia avenue tähän tautiin.