Krooninen sairaus

tiivistelmä

Fibroblastin kaltainen strooman solut moduloida syöpäsolut kautta erittyy tekijät ja tarttuvuus, mutta nämä tekijät eivät ole täysin ymmärretty. Täällä olemme tunnistaneet kriittisiä strooman tekijöitä, jotka moduloivat syövän kasvua positiivisesti ja negatiivisesti. Käyttämällä solun yhdessä viljelemisen järjestelmä, olemme huomanneet, että mahalaukun stroomasolut erittää IL-6, kun kasvua ja selviytymistä tekijä mahalaukun syövän soluja. Lisäksi mahasyöpä sekretoivat PGE2 ja TNFa että stimuloi IL-6 eritystä stroomasoluihin. Lisäksi olemme havainneet, että stroomasolut erittyy glyseraldehydi 3-fosfaattidehydrogenaasi (GAPDH). Ekstrasellulaarinen GAPDH, tai sen N-terminaalinen domeeni, vähensivät vatsahapon syöpäsolujen kasvua, toteaminen vahvistetaan muissa soluja. GAPDH sidottu E-kadheriinin ja vaimentua mTOR-p70S6 kinaasireittiä. Nämä tulokset osoittavat, että stroomasolut voivat säännellä syöpäsolun kasvua tasapaino näiden erittyy tekijöistä. Ehdotamme, että negatiivisen säätelyn syövän kasvua käyttämällä GAPDH voisi olla uusi syövän strategiaa.

Citation: Kawada M, Inoue H, Ohba S-i, Yoshida J, Masuda T, Yamasaki M, et al. (2015) stroomassoluihin Positiivisesti ja moduloivat negatiivisesti syöpäsolujen kasvua: Stimulation kautta PGE2-TNFa-IL-6 Pathway ja esto kautta Eritettyä GAPDH-E-kadheriinin vuorovaikutus. PLoS ONE 10 (3): e0119415. doi: 10,1371 /journal.pone.0119415

Academic Editor: Hiroshi Shiku, Mie University Graduate School of Medicine, JAPAN

vastaanotettu: 2. lokakuuta, 2014; Hyväksytty: 13 tammikuu 2015; Julkaistu 18 maaliskuuta 2015

Copyright: © 2015 Kawada et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat MEXT KAKENHI Grant Number 23112522. rahoittaja ei ollut roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Kasvain kudokset koostuvat syöpäsolujen ja ympäröivän strooman. Strooman sisältää erilaisia ​​soluja, jotka on upotettu matriisiin, kuten makrofagien, endoteelisolujen, immuunisolujen, ja fibroblastin kaltaisen strooman solut [1, 2]. Sidekudosmateriaali soluilla Fenotyyppinen joustavuus muuttuvat välillä fibroblastivasteeseen ja myofibroblastic ominaisuudet [3, 4]. Myofibroblasteja ilmentävät vimentiinista ja sileän lihaksen α-aktiini (SM-α-aktiini) [1] on suuri kyky erittää kasvutekijöitä, ECM-proteiineja, ja proteinaaseja [1, 5] ja kutsutaan reaktiivisen stroomasta tai syöpään liittyvän fibroblasteissa (valuuttalisien ) [5, 6]. Koska myofibroblastin sisällön tuumorikudosten korreloi hyvin huonoon ennusteeseen joidenkin syöpien [7], stroomasolut, erityisesti myofibroblasteissa merkittävästi osallisena syövän kehittymiseen. Viimeaikaiset raportit ovat selventäneet roolia strooman solujen ylläpitämiseksi syövän kantasoluja [8], metastaattisen markkinaraon [9, 10], ja chemoresistance [11, 12]. Koska tällainen yhä enemmän todisteita siitä, stroomasolut ovat tulossa houkutteleva kohde syövän strategioita.

stroomasolujen säätelevät kasvua syöpäsolujen positiivisesti ja negatiivisesti kautta erittää tekijöitä ja tarttuvuus [1, 5, 6, 13- 17]. Erilaiset kasvutekijät, kuten hepatosyyttikasvutekijän (HGF) [18], insuliinin kaltainen kasvutekijä-I (IGF-I) [19], ja fibroblastikasvutekijä-7 (FGF-7) [20] erittyvät stroomasoluissa . Toisaalta, syöpäsolut erittävät myös eri tekijöiden muuttamiseksi tai ”kouluttaa” stroomasolut parantaa niiden mikroympäristön. Transformoiva kasvutekijä-β1 (TGF-β1) on yksi tällainen tekijöitä ja stimuloi fibroblastien erilaistumista myofibroblasteja [1, 3]. Opinnäytteet tekijät ja vuorovaikutukset syöpäsolujen ja stroomasolujen eroavat kussakin syövän ja näin ei täysin tunneta [21].

Olemme tutkineet kasvainta stroomasolulinja vuorovaikutuksia käyttämällä yhdessä viljelemisen järjestelmät sekä solujen [22] . Vaikka eturauhasen stromasoluja lisätä kasvua eturauhasen syöpäsolujen kun yhteistyössä ruiskutetaan nude-hiiriin [19], meidän

in vitro

rinnakkaisviljelmätilanteessa menetelmä jäljittelee

in vivo

tuloksiin [22]. Käyttämällä tätä mallia olemme havainneet, että IGF-I eritetään eturauhasen stroomasoluissa ja sillä on kriittinen rooli eturauhassyövän kehittämiseen [19]. Lisäksi käytimme

in vitro

yhdessä viljelemisen järjestelmän seulontamäärityksessä yhdisteiden tunnistamiseksi, jotka aiheuttavat syövän vastaista aktiivisuutta modulaation kautta kasvainta stroomasolujen vuorovaikutus. Tämän seurauksena olemme havainneet, monia yhdisteitä, luonnollisista lähteistä, kuten viljellyistä liemet bakteerien ja sienten [23-26]. Niistä phthoxazolin A ja leucinostatin A havaittu estävän eritystä IGF-I: n eturauhasen stroomasolujen ja tukahduttaa kasvua syöpäsolujen läsnä peruskudoksen soluihin [23, 24]. Toisaalta, NBRI16716A estää niiden kasvun eturauhasen syöpäsolujen ksenograftimallia [26], mutta se ei vaikuta eritystä IGF-I eturauhasen stroomasoluissa. Alustavien kokeiden mukaan NBRI16716A saattaa stimuloida stromasoluja erittämään tunnistamattomat kasvain ehkäisevästä tekijöitä. Siten nämä tulokset viittaavat vahvasti siihen, että voimme valvoa syövän kehitystä modulaatio kasvaimeen stroomasolulinja vuorovaikutuksia.

Tässä tutkimuksessa selvitimme vuorovaikutuksia käyttämällä mahasyövän mallina. Olemme tunnistaneet kriittisiä tekijöitä, jotka moduloivat syöpäsolujen kasvua positiivisesti ja negatiivisesti. Nämä havainnot viittaavat siihen uuden syöpälääkkeen strategioita.

Materiaalit ja menetelmät

Solulinjat ja reagenssit

Ihmisen eturauhassyöpä DU-145-solut, ihmisen paksusuolen syöpä DLD-1-soluissa, ihmisen haimasyövän solulinjoissa MiaPaca2, BxPC-3, Capan-1 ja Panc-1 saatiin American Type Culture Collection (ATCC). Ihmisen eturauhassyöpä PC-3-solut ja ihmisen alkion munuaisen 293-solut saatiin DS Pharma. LNCaP-CR solulinjassa [27] perustettiin laboratoriossamme ihmisen eturauhassyövän LNCaP (DS Pharma). Muita syövän solulinjat kuvataan muualla [28, 29]. Kaikki syöpäsolulinjoja ylläpidettiin Dulbeccon modifioitu Eaglen väliaine (DMEM) (Nissui), jota oli täydennetty 10% naudan sikiön seerumia (FBS, Sigma), 100 yksikköä /ml penisilliini G: tä (Invitrogen), ja 100 ug /ml streptomysiiniä (Invitrogen) on 37 ° C 5% CO

2. Hs738 ihmisen mahalaukun stroomasolut (CRL-7869), CCD-18Co ihmisen koolonin fibroblasteissa (CRL-1459), ja Hs371 maitorauhasen fibroblasteissa (CRL-7256) saatiin ATCC: ltä. NHLF normaalin ihmisen keuhkojen fibroblastit ja kyseistä luottoa ihmisen eturauhasen strooman solut saatiin BioWhittaker. PS ihmisen haiman strooman solut saatiin DS Pharma. Kaikki strooman solut ylläpidettiin DMEM: ssä, jota oli täydennetty 10% FBS: ää, 100 yksikköä /ml penisilliini G, 100 ug /ml streptomysiiniä, ITH (5 ug /ml insuliinia, 5 ug /ml transferriiniä, ja 1,4 uM hydrokortisonia), ja 5 ng /ml perus FGF (PeproTech) 37 ° C: ssa 5% CO

2 kuvatulla [22].

anti-pan-sytokeratiini (sc-8018), anti-STAT3 (sc-8019), anti-GAPDH (sc-47724), anti-PAI-1 (sc-8979), anti-p70S6 kinaasin (sc-230), anti-14-3-3 epsilon (sc-1020), ja anti-fosfo-MAPK (sc-7383) vasta-aineet hankittiin valmistajalta Santa Cruz Biotechnology. Anti-vimentiinista (V2258), anti- SM-α-aktiini (A2547), anti-α-tubuliinin (T9026), anti-fosfo- (tyr705) -STAT3 (SAB4300033), anti-RPL-18A (HPA055259), ja anti-FLAG M2 (F3165) vasta-aineet, kanin lihaksen GAPDH (G2267) ja ihmisen erytrosyyttien GAPDH (G6019) hankittiin Sigmalta. Anti-fosfo-Ser /Thr-kinaasin substraatti (9614 ja 9624), anti-ribosomaalisen proteiinin S6 (RPS6) (2217), anti-fosfo- (Ser235 /236) -RPS6 (2211), anti-fosfo- (Ser240 /244 ) -RPS6 (2215), anti-fosfo- (Ser473) -Akt (9271), anti-fosfo- (Thr389) -p70 S6-kinaasi (9234), anti-fosfo- (Tyr416) ​​-Src perhe (2102), anti- -phospho- (Thr172) -AMPKα (2535), anti-Myc (2278), anti-caveolin-1 (3267), ja anti-β-kateniinin (9562) vasta-aineet ostettiin Cell Signaling Technology. Anti-fosfo-14-3-3-vasta ostettiin Abgent. Anti-fosforia (Tyr705) -STAT3 (612356) vasta-aine hankittiin BD Biosciences. Anti-RPL-18A-vasta ostettiin Abcam. Anti-humaani IL-6-neutraloiva vasta-aine (MAB206), ihmisen rekombinantti-IL-6 (206-IL), ja rekombinantin ihmisen CXCL1 (275-CR /CF) hankittiin R Sigma), kuten on kuvattu [32] tai mittaamalla GFP-fluoresenssin intensiteetti (eksitaatio 485 nm ja emissio 538 nm), jonka solujen lyysiä in 10 mM Tris-HCl, pH 7,4, 150 mM NaCl, 0,9 mM CaCl

2, ja 1% Triton X-100. For co-kulttuuri kokeissa Hs738 solut ensin ympättiin 96-kuoppalevyille 5 x 10

3 solua kuoppaa kohti 0,1 ml: ssa DMEM: 1% D-FBS: ää ja ITH. Testinäytteitä lisättiin kuoppiin ja soluja viljeltiin 2 päivää. Sitten 10 ui mahasyövän solususpensiota (5 x 10

3) seerumivapaassa DMEM lisättiin yksisolukerroksen Hs738 soluja ja soluja viljeltiin vielä 3 päivää. Sillä monokulttuuria mahalaukun syövän solujen määrityksessä yksistään alustassa testinäytteen kanssa ensin inkuboitiin 2 päivää, ja sitten mahalaukun syövän soluja lisättiin edellä kuvatulla tavalla, ja viljeltiin vielä 3 päivää. Kasvu mahalaukun syöpäsolujen määritettiin mittaamalla GFP fluoresenssin intensiteettiä. Suspensiota viljelyn jälkeen solut ympättiin 96-kuoppaiselle suspensioviljelmässä levyn (MS-8096R, Sumilon) vertailun standardin kulttuuri levyn (MS-8096F; Sumilon). Sillä Transwell kokeissa, 0,6 ml Hs738 soluja (5 x 10

4 solua /ml) DMEM: ssä, jota oli täydennetty 1% D-FBS: ää ja ITH ensin lisättiin ulomman kuoppiin Transwell levyjen 0,4 um huokoskoko kalvoja (3470; Corning) ja 0,1 ml: aan määritysväliainetta lisättiin sisemmän kuoppiin. Jälkeen 2 päivää viljelyn, 10 ui mahasyövän solususpensiota (5 x 10

3) seerumittomassa DMEM lisättiin sisemmän kuoppiin ja levyjä viljeltiin vielä 3 päivää.

valmistaminen Hs738 väliaine (CM) B

Hs738-soluja viljeltiin 5 x 10

4 solua /ml DMEM: esitettynä pitoisuutena D-FBS: ää ja ITH varten osoitetun päivää. Viljellyt supernatantit kerättiin sentrifugoimalla. Keskittyä keskipitkällä, Amicon Ultra-15-3K keskipako- suodatin laitteet (Millipore) tai 2-D puhdistus (Amersham Biosciences) käytettiin. Mahasyöpä soluja (3 x 10

5) ympättiin 1 ml: n CM Hs738 solujen tai määrityksessä pelkällä väliaineella 35 mm levyille ja niitä viljellään 1 päivä. Solut pestiin PBS: llä ja solulysaatit valmistettiin Western-blottauksella.

Proteome analyysi CM

tunnistamiseksi fosforyloidun proteiinien mahalaukun syöpäsolujen, MKN-7 solulysaatit sovellettu päälle HiTrap Q FF -kolonniin (GE Healthcare) esiladattu 50 mM Tris-HCI pH 7,3. Proteiinit eluoitiin vaiheittain nousua NaCl pitoisuuksina. Eluoinnin jälkeen, proteaasinestäjiä ja pyrofosfaatti lisättiin eluoidut fraktiot. Eluoidut jakeet erotettiin SDS-PAGE, ja geelit värjättiin Coomassie brilliant blue (CBB) ja vanteet identtinen nauhojen Western blotteja saatu anti-fosfo-Ser /Thr-vasta-aine leikattiin. Leikattu vyöhykkeet hajotettiin trypsiinillä ja hajotettiin peptidit altistettiin sitten LC-MS /MS-analyysi (LTQ-Orbitrap; Thermo Scientific). Tunnistamiseen kasvua estävää proteiinien Hs738 CM, CM (50 ml), konsentroitiin käyttäen Amicon Ultra-15-3K keskipako- suodattimia ja laitettiin Superdex 200 10/300 GL sarake (GE Healthcare) ja geelisuodatus. Proteiinit eluoitiin PBS: lla ja vaikutus fraktioidaan proteiinien kasvu MKN-7-soluissa määritettiin. Fraktiot kasvua estävä aktiivisuus, yhdistettiin ja edelleen erotettiin 2D-geelielektroforeesilla. Täplät kiinnostavia leikattiin, pilkottiin trypsiinillä, ja altistettiin sitten LC-MS /MS tai MALDI-TOF-MS-analyysiä (APRO Life Science Institute).

Cytokine analyysi

Soluja viljeltiin 5 x 10

4 solua /ml DMEM: ssä, jota oli täydennetty 1% D-FBS: ää ja ITH varten 2 päivää. CMS otettiin talteen sentrifugoimalla ja määriä IL-6, IL-6SR, ja CXCL1 määritettiin käyttämällä ihmisen IL-6-ELISA-kittiä (Thermo Scientific), ihmisen IL-6SR Quantikine (R Thermo Scientific) tai Western-blottauksella.

Reaaliaikainen RT-PCR-

Hs738-soluja viljeltiin 2 päivää 5 x 10

4 solua /ml DMEM: ssä, jota oli täydennetty 1% D-FBS: ää ja ITH läsnä MEK: n estäjä I Kokonais-RNA eristettiin käyttämällä RNeasy Minikit ( Qiagen). cDNA: t syntetisoitiin käyttämällä AMV-käänteistranskriptaasia ja satunnaisia ​​alukkeita (Promega) 1 ug: RNA. Reaaliaikainen RT-PCR suoritettiin PCR-laite Dice Real Time System (Takara) käyttäen SYBR Esiseos Ex TaqII (Takara). Alukkeet ostettiin Takara.

eksosomi valmisteen

Eksosomit valmistettiin viljellyistä supernatantista Hs738 soluja, kuten on kuvattu [38].

Tilastollinen analyysi

Kaikki tiedot edustavat vähintään 3 toisistaan ​​riippumattoman kokeen tulokset olivat samanlaiset. Tilastollinen analyysi suoritettiin Studentin

t

-testissä.

Tulokset

Mahalaukun stroomasolujen moduloida kasvun mahalaukun syöpäsolujen

Me perustettiin ihmisen maha- syöpäsolun linjat, jotka ilmaisivat vihreän fluoresoivan proteiinin (GFP) (S1A Fig.). Jossa saman elimen, käytimme ihmisen mahalaukun stroomasolut (Hs738 solut), jotka olivat seos myofibroblasteja (vimentiinista (+) ja SM-α-aktiini (+)) ja fibroblasteissa (vimentiinista (+) ja SM-α-aktiini ( -)) (S1B Fig.) muistuttaneesta stroomasolut [4, 24]. Kaikki 5 mahasyövän solulinjoissa muodostuu kasvaimia, kun injektoidaan ihon alle nude-hiiriin (Fig. 1A), mutta co-injektion Hs738 solujen suppressoi merkitsevästi kasvainten MKN-1, MKN-7-soluissa, ja MKN-28-solut (Fig. 1A ). Sen sijaan, kasvainten kasvu on muodostettu MKN-45 ja MKN-74-solujen lisääntynyt läsnäolo Hs738 soluja (Fig. 1A). Emme havainneet etäpesäkkeitä syöpäsolujen ihonalaisen istuttamisen, mutta kaikki syöpäsolulinjoja esillä etäpesäkkeitä vatsaonteloon injektoituna mahan ortotooppisesti (S2 kuvio.). Koot primäärikasvaimissa alulle syöpäsolulinjoissa injektoidaan yksinään vatsaan ei eronnut merkittävästi. Kuitenkin numerot ja taajuudet metastaasipesäkkeiden taipumus olla suurempi MKN-45 ja MKN-74 soluja (huonosti tai kohtalaisen erilaistuneita soluja) ja pienempi MKN-1, MKN-7 ja MKN-28-solut (hyvin erilaistunut solulinjoja [39]) (S2 kuvassa.). Nämä tulokset osoittivat, että kasvu on hyvin erilaistunut mahasyövän solulinjoissa tukahdutettiin mahan stroomasolujen ja kasvun erilaistumattoman mahasyövän solulinjoja, joilla on korkea metastaattinen kykyjä lisättiin mahalaukun stroomasoluissa. Koska on ehdotettu, on olemassa erilaisia ​​mekanismeja kasvaimeen stroomasolujen vuorovaikutuksia mahalaukun syövän, olemme yrittäneet selventää niitä tässä tutkimuksessa.

(A) Mahasyöpää solua injektoitiin ihon alle tai ilman Hs738 mahalaukun strooman solut naispuolinen nude-hiirissä. Hiiret tapettiin 37, 35, 34, 22, ja 33 päivää injektion jälkeen MKN-1, 7, 28, 45, ja 74 mahan syöpäsoluja, vastaavasti, ja kasvaimet irrotettiin. Arvot ovat keskiarvoja ± S.D. (N = 6). (B) MKN-7 ja MKN-74 mahasyövän soluja viljeltiin yksinään (Mono) tai viljeltiin yhdessä Hs738 solujen suhteissa (mahalaukun syöpä: Hs738) 1: 1 ja 1: 2 mukaisesti esitettynä pitoisuutena D-FBS: ää. Kasvun syöpäsolujen määritettiin mittaus- GFP fluoresenssi-intensiteetti. Arvot ovat keskiarvoja ± S.D. (N = 3). Edustavia mikrovalokuvia 1% D-FBS alle fluoresenssimikroskopiaan. Vihreä; GFP. Mittakaava on 200 mikrometriä.

Tutkia kasvainta stroomasolujen vuorovaikutuksia, ensin kehittäneet

in vitro

yhdessä viljelemisen järjestelmä mahasyövän solulinjojen ja Hs738 soluja kuvatulla ennen [22]. Mitata syöpäsolujen kasvua selektiivisesti yhteistyössä viljelmässä stroomasolujen, käytimme GFP transfektoidaan mahasyövän solulinjoja (S1A kuvio.). GFP fluoresenssivoimakkuudet in liuenneista soluista korreloivat hyvin solujen lukumäärän sekä MTT määritykset (S1C Fig.). Vaikutuksen vähentämiseksi kasvutekijöiden FBS käytimme dialysoitiin FBS (D-FBS). Kun mahasyövän solulinjaa viljeltiin yhdessä Hs738 solujen kasvua MKN-1, MKN-7, ja MKN-28-solujen tukahdutettiin läsnäolo Hs738 soluja (Fig. 1 B ja S3 kuviossa.). Vaikka kasvu MKN-45-soluissa ei muuttunut rinnakkaisviljelemällä, että MKN-74-soluissa lisääntyi rinnakkaisviljelemällä Hs738 solujen varsinkin alemmilla pitoisuuksilla D-FBS (Fig. 1 B ja S3A Fig.). Vaikka suuruus vaikutus riippui pitoisuuksia D-FBS, näitä tuloksia

in vitro

yhdessä viljelemisen kokeet olivat samanlaisia ​​kuin

in vivo

tuloksia (Fig. 1A ja S3 kuvassa. ).

eritetty tekijöistä mahan stroomasolut säätelevät proteiinisynteesin mahasyövän soluissa

Yksi ominaisuuksista syöpäsolujen on ankkurista riippumaton kasvu [40]. Koska mahan syöpäsolut ympättiin yksisolukerroksen Hs738 solujen muutos kasvun yhdessä viljelemisen olisi ollut johtuu kiinnittymisestä riippumattomaan kasvuun. Kun verrataan kasvuun suspensiossa olosuhteissa normaali kiinnittynyt kunnossa, kasvua kaikkien mahasyövän solulinjat yleensä tukahdutetaan väliaikaisesti olosuhteissa (S3B Fig.). Toisaalta, transwell kokeissa kävi ilmi, että kasvu MKN-1, MKN-7, ja MKN-28-solujen määrä väheni yhdessä viljelemisen kanssa Hs738 soluja, kun taas kasvu MKN-74-soluja lisättiin ja että MKN- 45-solut oli muuttumaton (S3C Fig.). Nämä tulokset olivat yhdenmukaisia ​​

in vitro

yhdessä viljelemisen kokeita (Fig. 1 B ja S3A Fig.) Ja ilmoitti, että erittyvä tekijöistä Hs738 soluista sijasta kiinnittymisestä riippumatonta kasvua oli mukana kasvun säätelyssä.

Koska erittyvä tekijät mahdollisesti mukana kasvun säätelyssä, me sitten lisätään väliaine (CM) välillä Hs738 solujen mahalaukun syöpäsoluja ja totesi, että fosforylaatiota Ser /Thr-ryhmään proteiinien, erityisesti ~ 30 kDa proteiinit, oli merkittävästi muuttunut (Fig. 2A). Fosforylaatio ~ 30 kDa: n proteiinien MKN-1, MKN-7, ja MKN-28-soluissa oli merkittävästi vähentynyt CM, mutta että MKN-45 ja MKN-74-soluja ei vaikuttanut (kuvio. 2A ja S4 kuviossa. ). Proteomiikan analyysi ~ 30 kDa: n proteiineja, osoitti, että yksi ehdokkaista oli ribosomaalisen proteiinin S6 (RPS6) (S4b Fig.). siRNA: t vastaan ​​RPS6 vähentynyt fosforylaatio ~ 30 kDa: n proteiineja sekä fosforyloitu RPS6 (S4C kuvio.). Lisäksi immunosaostumat syntyy anti-RPS6-vasta-aineen havaittiin anti-fosfo-Ser /Thr-vasta-aineen sekä anti-fosforyloitu RPS6-vasta-ainetta (S4C kuvio.). Siten ~ 30 kDa: n proteiini oli todellakin RPS6. Oikeastaan ​​Hs738 CM vähensi fosforylaatiota RPS6 in MKN-1, MKN-7, ja MKN-28-soluissa, mutta ei että 14-3-3 proteiinia, toinen ehdokas fosforyloidun proteiinin (Fig. 2B ja S4b Fig.). Lisäksi fosforyloitu RPS6 in MKN-7-soluissa havaittiin vähenevän, kun viljeltiin yhdessä Hs738 solut (Fig. 2C). Fosforylaatiota RPS6 tiedetään hyvin kriittinen rooli sääntelyn proteiinisynteesiä [41]. Siten tuloksemme osoittivat, että Hs738 soluja ainakin vaimentua proteiinisynteesiä ja tukahdutti kasvua MKN-1, MKN-7, ja MKN-28 soluihin erittyy tekijöitä.

(A) Mahalaukun syöpäsoluja viljeltiin (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). (N = 3). hexafluorophosphate.

doi:10.1371/journal.pone.0119415.s026

(PDF)

Acknowledgments

We