Krooninen sairaus

tiivistelmä

Johdanto

prognoosi potilaalla on käytettävissä kurkunpään syöpä on erittäin vaihteleva ja siksi voimakas prognostisia biomarkkereiden ovat perusteltuja. Insuliinin kaltaisen kasvutekijän reseptori (IGFR) signalointireitin on keskeisessä asemassa kurkunpään syövän synnyn ja etenemisen.

Potilaat ja menetelmät

tunnistettu kaikille potilaille, joilla oli paikallinen TNM I-III kurkunpään syöpä hallitaan mahdollisesti parantava leikkaus vuosina 1985 ja 2008. immunohistokemiallinen (IHC) ilmentymistä IGF1 R-alfa, IGF1 R-beeta ja IGF2R arvioitiin käyttämällä immunoreaktiiviset pisteet (IRS) ja mRNA tasot tärkeitä efektorien IGFR reitin arvioitiin, kuten IGF1 R, IGF sitova proteiini 3 (IGFBP3), vaimennin sytokiinien signalointi 2 (SOCS2) ja jäsenet MAP-kinaasi (MAP2K1, MAPK9) ja fosfatidyyli-inositoli-3-kinaasi (PIK3CA, PIK3R1) perheet. Cox-regressio malleja sovellettiin arvioitaessa ennustearvo biomarkkereita on tautivapaan elinajan (DFS) ja kokonaiseloonjääminen (OS).

Tulokset

Niistä 289 sopivaa potilasta, 95,2% oli nykyinen tai ex tupakoitsijoita, 75,4% oli alkoholin väärinkäyttäjät, 15,6%: lla oli paikallisiin imusolmukkeisiin tauti ja 32,2% oli saanut leikkauksen jälkeinen säteilytys. Jälkeen seuranta-ajan mediaani 74,5 kuukautta, mediaani DFS oli 94,5 kuukautta ja mediaani oli 106,3 kuukautta. Käyttämällä mediaani IRS kuin ennalta määriteltyjä cut-off, potilaat, joiden kasvaimet olivat kasvaneet IGF1 R-alfa solulimassa tai kalvo ilmaisu kokenut hieman lyhyempi DFS ja huomattavasti lyhyempi OS verrattuna, joiden kasvaimet olivat alhaiset IGF1 R-alfa ilmentymisen (91.1 vs +106,2kuukausi, p = 0,0538 ja 100,3 vs 118,6 kuukausi, p = 0,0157, vastaavasti). Lisääntynyt mRNA tasot MAPK9 liittyivät pitkäaikaiseen DFS (p = 0,0655) ja OS (p = 0,0344). Monimuuttuja-analyysi, IGF1 R-yli-ilmentyminen liittyi 46,6%: n nousu todennäköisyys uusiutumisen (p = 0,0374). Itsenäinen ennustavat huono OS mukana imusolmukkeisiin sairaus (riskisuhde = 2,569, p 0,0001), subglottic /transglottic lokalisointi (HR = 1,756, p = 0,0438) ja IGF1 R-alfa-proteiinin yli-ilmentymisen (HR = 1.475, p = 0,0504).

Johtopäätös

IGF1 R-alfa-proteiinin yli-ilmentyminen voi toimia itsenäisesti ennusta uusiutumisen ja eloonjäämisen toimintakuntoisia kurkunpään syöpä. Prospective arviointi IGF1 R-alfa ennustetekijöiden apuohjelma on perusteltua.

Citation: Mountzios G, Kostopoulos I, Kotoula V, Sfakianaki I Fountzilas E, Markou K, et al. (2013) Insuliini kasvutekijä 1 -reseptorin (IGF1 R) Expression and Survival toimintakuntoisia Squamous-Cell Kurkunpään syöpä. PLoS ONE 8 (1): e54048. doi: 10,1371 /journal.pone.0054048

Editor: Rodrigo Alexandre Panepucci, Hemocentro de Ribeirão Preto, HC-FMRP-USP, Brasilia

vastaanotettu: 30 heinäkuu 2012; Hyväksytty: 05 joulukuu 2012; Julkaistu: 24 tammikuu 2013

Copyright: © 2013 Mountzios et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ oli osittain rahoittama Helleenien Cooperative Oncology Group (HE R_5G tutkimus avustusta). Rahoittaja ei ollut roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Kurkunpään syöpä edustaa yleisin muoto squamous-cell carcinoma pään ja kaulan (SCCHN) induktiohoitoon populaatioissa korkea tupakoinnin. Kattaa noin 160000 uutta tapausta vuodessa ja 2,5% kaikista kasvaimista miehillä, kurkunpään syöpä on edelleen merkittävä sairauksien maailmanlaajuisesti [1]. Huolimatta viimeaikaisista edistysaskeleet monitieteinen hallintaan alkuvaiheessa sairauden, kuten kirurgisen katoamiseen tai kurkunpään-säilyttäminen protokollien toteuttamiseksi kemosädehoito, huomattava osa potilaista paikallisluonteisia tai paikallisesti edennyt sairaus lopulta taudin uusiutumiseen ja kuolevat [2]. Jopa potilailla, jotka käyvät läpi mutilating prosessin koko laryngektomian, ennuste on erittäin vaihteleva ja unpredictible, tekee tarvetta tunnistaa voimakas ennustetekijöitä markkereita lääketieteellinen prioriteetti. Tarkka ja toistettavissa arviointi ennusteen potilailla, joilla on varhainen kurkunpään syöpä mahdollistaisi aggressiivinen hoito joilla on suuri riski uusiutumisen ja poistaisi mahdollisesti vaarallisten ylihoito ryhmässä, jossa on oletettu suotuisaan lopputulokseen.

insuliini ja insuliinin kaltaisen kasvutekijän reseptorin (IGFR) – välittämä molekyyli polkuja äskettäin tullut tärkeä efektoreina neoplastisten muutoksen eri pahanlaatuisia kasvaimia on aerodigestive suolikanavan, myös ei pienisoluinen keuhkosyöpä [3], [4], kilpirauhassyöpä [5], [6 ], ruokatorven syöpä [7] ja SCCHN [8]. IGFR reaktiotie käsittää kaksi ligandia (IGF1 ja IGF2), niiden sitovia proteiineja (yleisin on IGFBP-3) ja kahden reseptorin (IGF1 R ja IGF2R), [2]. Toisin kuin insuliini, joka toimii tyypillinen hormoni, IGF1 ja IGF2 riittävät käyttöoikeudet sekä kiertävän hormonit kanssa autokriinisen ominaisuudet ja kudosten kasvutekijät; IGF1 R on kyky signaalitransduktion solunsisäisen tyrosiinikinaasi liittyy RAS /RAF /mitogeeni aktivoitu proteiinikinaasi (MAPK) ja fosfatidyyli-inositoli-3-kinaasi (PI3K) -Akt reittejä [9]. Esiastepolypeptidi pilkkominen johtaa siihen, että läsnä on kaksi IGF1 R isoformien: isoformi alfa (IGF1 R-alfa), joka ilmentyy edullisesti moniin syöpiin ja pystyy sitoutumaan insuliini, IGF1 ja IGF2 ja isoformi-beeta (IGF1 R-beta), joka sitoutuu yksinomaan insuliinin [10]. IGF2R, toisaalta, sitoutuu vain IGF2, on rakenteellisesti erillisiä, mikä tarkoittaa, että siitä puuttuu solunsisäinen tyrosiinikinaasialueeseen, ja on siten poistanut kyvystä transdusoivan mitogeenisesta signaaleja, jotka toimivat pääasiassa ”puskurina” for IGF2 bioaktiivisuus [ ,,,0],10]. Vaimennin on sytokiinisignaloinnin (SOCS) perheen proteiinit ovat estäjiä signalointipolkujen kautta negatiivinen kierre, jossa lähinnä esto Janus-kinaasiaktiivisuuden [11], [12]. Tuoreet tiedot kuitenkin viittaavat siihen, että SOCS proteiineja ja erityisesti SOCS2 voi myös moduloida IGF1 R-välitteisen signaloinnin [13], [14]. Tärkeää on, prekliinisiä ja translaation tutkimukset osoittavat, että komponenttien IGFR-välitteisen reitin ovat sekaantuneet SCCHN riskiä [15], angiogeneesi [16], farmakogenetiikka [17], [18], kemosensitiivisyys [19], immunoterapia [20] ja säteilyn vastaus [21].

hiljattain uraauurtavan alalla [22] monigeenisiin ennustaja uusiutumisen alussa kurkunpään syövän kehitettiin ja validoitu. Tässä tutkimuksessa paneeli koodaavien geenien jäsenille IGFR reitin muodostunut voimakas ennustetyövälineenä pystyy erottamaan joilla on huono ja suotuisa ennuste (p 0,0001 koulutuksessa asettaa ja p = 0,0001 ensimmäisessä validointi asetettu) [22 ]. Nämä tulokset syntyy hypoteesia, että proteiinin ilmentymisen ja mRNA-tasoja tärkeimmistä efektorien IGFR reitti voi liittyä kliinistä tulosta potilailla, joiden kurkunpään syövän ja voivat siten toimia ennakoivaa biologisia merkkiaineita uusiutumisen ja eloonjäämisen tässä asetelmassa. Tämän hypoteesin testaamiseksi, me takautuvasti tutkitaan kasvainten geeni transkription tärkeitä elementtejä IGFR reitin ja arvioimme proteiinin ilmentymistä saman molekyylien syöpäsolujen potilailla, joilla on kirurgisesti resekoituun kurkunpään syöpä.

Potilastiedot ja menetelmät

Patient kohortti

tutkimus tehtiin takautuvasti kohortin potilaista, joilla oli paikallinen vaiheen I-III kurkunpään syöpä (TNM kuudes luokitus, saatavilla osoitteessa: https://www.uicc.org/node/7735) onnistui touko 1985 kesäkuussa 2008 ENT Department of ”AHEPA” Hospital Thessalonikissa Kreikassa, mahdollisesti parantava resektio tai ilman ulkoista nisädesäteilytys. Tämä tutkimus hyväksyi bioetiikkaa komitean Thessalonikin Aristoteles-yliopiston, School of Medicine. Luopuminen suostumus saatiin tämän valiokunnan kaikille potilaille mukana tutkimuksessa ennen vuotta 2003. Kaikki potilaat mukaan tutkimukseen vuoden 2003 jälkeen, jos niiden tietoisen kirjallisen suostumuksensa, jotka koskevat biologista materiaalia tulevia tutkimuksia. Tutkimuksessa noudatettiin REMARK suosituksia tuumorimarkkeri ennustetekijöiden -tutkimukset biologisen materiaalin (saatavilla https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2361579).

Potilaat kliinisesti arvioitiin säännöllisesti kuukausittain käynnit ensimmäisen vuoden leikkauksen jälkeen ja joka toinen kuukausi sen jälkeen ja lavastettu keuhkojen röntgenkuvauksessa, kohdunkaulan, rinta ja ylävatsan lasketut tomographic skannaa kuuden kuukauden välein ensimmäisen kahden vuoden ajan leikkauksen ja sen jälkeen vuosittain tai aikaisemmin, jos se on kliinisesti aiheellista. Muita diagnostisia tai pysähdyspaikan menettelyt kohdistetaan käyttöaiheilla tai oire hälytys. Hoitovaikutus arviointi suoritettiin RECIST kriteerit kiinteitä kasvaimia (www.eortc.be/recist/documents/RECISTGuidelines.pdf).

Histologinen arviointi

Kokenut patologi tarkistetaan hematoksyliinillä-eosiinilla (H 50% tuumorisolujen 64,2% tapauksissa ja 30-50% on jäljellä olevat. Vuokaavio Tutkimuksen mukaan lukien vastaava näytemäärät on esitetty kuviossa 1 (REMARK kaavio).

RNA ja RT-qPCR menetelmää

yhteensä 230 kasvaimen sisältävän parafiiniblokit olivat käytettävissä molekyyli- tutkimukset (kuvio 1). Macrodissection tehtiin tapauksissa 50% tuumorisolujen lisäämiseksi kasvainsolujen sisältöä molekyyli näytteissä. Kun deparaffinization ja yön yli kudoksen fragmentti lyysi proteinaasi K: lla 56 ° C: ssa, RNA uutettiin TRIzol® LS Reagent ja käänteistranskriptio satunnaisia ​​alukkeita (cat. No 48190-011) ja SuperScript® III käänteistranskriptaasia (kaikki reagenssit yhtiöltä Invitrogen /Life Technologies, Paisley, UK) mukaan valmistajan ohjeiden. Kun UV-mittaukset, 0,5-3 ug kokonais-RNA: ta käänteistranskriptio cDNA: t normalisoitiin 25 ng templaatti /ul, ja pidettiin -20 ° C: ssa käyttöön asti. Suhteellinen mRNA ilmentyminen arvioitiin kanssa qPCR ja hydrolyysikoettimesta käyttämällä premade yhdessä putkessa TaqMan® Gene Expression Analyysit (Applied Biosystems /Life Technologies) käytettäessä ABI7900HT järjestelmän oletus olosuhteet seuraavat tavoitteet (suluissa: määrityksessä tunnus, Genbank viite; amplikoni sijainti , koko): IGF1 R (Hs00609566_m1, NM_000875.3, eksonit 10-11, 64 bp), IGFBP3 (Hs00426289_m1; NM_000598.4, NM_001013398.1, eksonit 4-5, 84 bp), MAP2K1 (Hs00983247_g1; NM_002755.3; eksonit 10-11, 68 bp), MAPK9 (Hs00177102_m1; NM_001135044.1, NM_002752.4, NM_139068.2, NM_139069.2, NM_139070.2, eksonit 2-3, 102 bp), PIK3CA (Hs00180679_m1; M_006218.2; eksonit 6-7, 104 bp), PIK3R1 (Hs00933163_m1; NM_001242466.1, NM_181504.3, NM_181523.2, NM_181524.1, eksonit 8-9, 9-10, 15-16, 82 bp), ja, SOCS2 ( Hs00919620_m1, NM_003877.3, eksonit 2-3, 91 bp). Näytteet testattiin 10 ui reaktiot (50 ng templaatti /reaktio) kanssa TaqMan® Universal PCR Master Mix ja ajettiin toistot 384-kuoppalevyillä. Kaupallisesti saatavilla viite RNA (TaqMan® Ohjaus Yhteensä RNA, kissa. No 4307281, Applied Biosystems /Life Technologies) käytettiin positiivisena kontrollina kussakin aikavälillä. Koska endogeeninen kontrolli ja normalisoimiseksi Cq (määrällisesti sykli, joka on synonyymi CT [syklin raja]) arvojen määritys kohdistaminen GUSB mRNA (beetaglukuronidaasi [# 4333767F]) käytettiin. GUSB oli parempana sovelletaan yleensä endogeenisten valvontaa, koska (a) ei pseudogeenien ei ole raportoitu tämän geenin, ja (b) se on tunnistettu yksi parhaita säilynyt mRNA tavoitteita FFPE kudoksissa [23]. Suhteellinen kvantitointi (RQ) arvioitiin lineaarisen tilassa (40 – DCT) [24], jolloin DCT = (ka CT kohde) – (avg CT GUSB). PCR vakautta arvioitiin joukossa ajoa viite RNA (inter-run deltaRQs: IGF1 R 0.78; IGFBP3 0,72, MAP2K1 0,39, MAPK9 0,92, PIK3CA 0,62, PIK3R1 0,59; SOCS2 0,92). Hylkäämisperusteet näytteen RQ analyysi oli GUSB CT suurempiin 36 kullekin päällekkäisiä; ja, deltaRQ suurempiin 0,85 per päällekkäisiä paria. Kun edellä mainitut kriteerit, informatiivinen tuloksia saatiin 191 (83%) ulos 230 FFPE RNA-näytteet. Kuitenkin määrä informatiivinen näytteiden vaihteli 175 (75%) ja IGF1 R 138 (59%) ja SOCS2 johtaen vain 118 (51%) informatiivinen näytteet kaikki tavoitteet. Siten klusterointi RQ arvojen arvioimiseksi vastaavan geeniekspressioprofiilien ei voitu arvioida.

TMA rakentaminen, immunohistokemia ja pisteytysjärjestelmä

TMA rakentaminen suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [25] . Lyhyesti, serial 3 mm paksu osat muodostavat alkuperäisen lohkot tai TMA lohkojen asennettu tartunta mikroskooppiobjektilaseille, leikattiin laboratorion Molecular Oncology Kreikan Foundation of Cancer Research, Thessalonikin Aristoteles-yliopiston School of Medicine. Immuunihistokemialliset (IHC) leimaus suoritettiin käyttäen Bond Max ™ (Leica Microsystems, Wezlar, Saksa) ja i6000 (Biogenex, San Ramon, CA) autostainers. Leikkeet värjättiin anti-IGF1 R-alfa (klooni 24-31, Lab Vision, Fremont, CA, 1:50 laimennos 1 h), anti- IGF1 R-beeta (C-20, sc-713, polyklonaalista vasta-ainetta, peptidiä vastaan ​​nousseen kartoitus on C-päähän IGF-IA-molekyylin, Santa Cruz, Santa Cruz, CA, on 1:250 laimennus 1 h) ja IGF-2R (C-15, sc-14410, vuohen polyklonaalinen vasta-aine, Santa Cruz, on 1:250 laimennus 1 h). Antigeeni-vasta-aine-kompleksin visualisoitiin käyttäen diaminobentsidiiniä (DAB) kromogeenina. Objektilasit vastavärjättiin Mayerin hematoksyliinillä, pestä makeassa vedessä, kuivattu ja kiinnitetty. Kuten ulkoisen valvonnan, käytimme ytimet (12 yhteensä kullekin TMA) eri epäneoplastisis- ja neoplastisia kudoksia, kuten placenda, kohdun limakalvo, munuaiset, nielurisojen, rintarauhasen, imusolmuke, eturauhassyöpä ja squamous-cell carcinoma pään ja kaula. Kuten sisäisen valvonnan, käytimme viereisen epiteelissä limakalvon rauhaset ja normaali, hyperplastisten ja dysplasia lieriöepiteeliin.

arvioimiseksi IGF1 R-alfa, IGF-1 R-beeta ja IGF2R käytimme semikvantitatiivinen perustuva lähestymistapa värjäytymisen intensiteetti (SI) ja positiivisten solujen prosenttiosuuden (PP), luoda immunoreaktiivinen pisteet (IRS) seuraavasti: IRS = SIxPP, kullekin näytteelle, kuten aiemmin on kuvattu [26], [27]. Intensiteetti pisteytettiin seuraavasti: 0 = ei värjäystä, 1 = heikosti positiivinen, 2 = kohtalaisen positiivisia, ja 3 = voimakkaasti positiivinen. Pisteytystä värjäyssarjaan perustui prosenttiosuus positiivisia kasvainsoluja: 0 = 0-5%, 1 = 6-25%, 2 = 26-50%, 3 = 51-100%). IRS pisteet siis vaihtelivat 0 9. lokalisointi värjäytymisen jokaiselle proteiini osoitti myös joko soluliman tai soluliman /kalvo tai kalvo.

Kaikki ristiriitainen tapausta ratkaistu yksimielisyys kokouksissa. Jotta vältettäisiin väärät positiiviset löydökset johtuvat useista cut-off laskelmia, käytimme mediaani IRS kuin ennalta määritelty raja-kullekin markkeri, kuten aiemmin ehdottanut [25]. Kasvaimen näyte pidettiin ”high-ilmaisu” jos IRS oli yli tai yhtä suuri kuin mediaani ja ”matalan ilmaisulla” muulla tavalla.

Statistical Considerations

Mitä IHC ilmaus IGF1 R ja IGF2R mediaani IRS oli ennalta määritelty ehdokas cut-off arvioimiseksi ennustetekijöiden roolin IGFR on tautivapaan elinajan (DFS) ja kokonaiseloonjääminen (OS). Mitä biomarkkerit jonka ilmentyminen mitattiin mRNA tasolla niiden jakelua tutkittiin luonnon cut-off. Mikäli asiakas ei tunnistamisen luonnollisen cut-off, ensimmäinen, toinen ja kolmas kvartiileihin tutkittiin avulla yhden muuttujan Coxin regressioanalyysi mahdollisimman kynnysarvot. Jos raja-osoittivat ennustetekijöiden merkitys sitä käytettiin dichotomize näytteet otetaan matala ja korkea ilmentäviä kasvaimia. Muita ehdokas cut-off tutkittiin käyttämällä vastaanottimen toimivien ominaiskäyrät (ROC) käyttäen 3-vuoden DFS havaittu nopeus kuin binary tulos on varmennettu bootstrap analyysiin. Siinä tapauksessa, että mitään raja-tunnistettiin mediaani oli käytetty. Vuonna Monimuuttuja-analyysissä merkitsevyys määritettiin tasolla 15% ja Yksiulotteisissa 5% (kaksipuolinen).

DFS mitattiin diagnoosia tehtäessä vasta todennettujen taudin etenemiseen, kuoleman tai viime yhteyttä ja käyttöjärjestelmä diagnoosi kunnes kuolema mistä tahansa syystä tai viimeisimmän yhteystiedot. Time-to-tapahtuman jakaumat arvioitiin käyttämällä Kaplan-Meier käyrät. Yhdistykset välillä biomarkkereita ja perus potilaan ja kasvainten ominaisuuksiin tutkittiin käyttämällä Fisherin testiä kategorisen muuttujien ja Mann-Whitney tai Kruskall-Wallisin testi tarvittaessa jatkuvien muuttujien. Jatkuvassa mRNA ilmaisu korrelaatiot laskettiin käyttämällä Pearsonin korrelaatio testi. Tilastollinen analyysi noudattaneet raportoinnin suositusten tuumorimarkkeri ennustetekijöiden tutkimuksissa [28].

Tulokset

kliinis ominaisuudet ja lopputulos

Kaksisataa ja kahdeksankymmentäyhdeksän potilaita, enimmäkseen miehiä (95,8%), nykyinen tai entinen tupakoitsijoita (95,2%) ja alkoholin väärinkäyttäjät (75,4%), ja iän mediaani oli 63 vuotta diagnoosin, otettiin mukaan tässä analyysissä. Kuten taulukosta 1, diagnostinen jatkokäsittely johti diagnoosi okasolusyöpä kurkunpään pääasiassa supraglottiset (46,7%) tai kurkunpään (43,3% tapauksista), enimmäkseen vaiheeseen T3-4 (77,8% tapauksista) ja useammin solmun -negatiivinen kliinisillä /röntgentutkimukseen (84,1%). Aloitushoitoon koostui kirurginen resektio kasvain avulla koko laryngektomian (84,1%) tai useampi konservatiivinen menettelyjä (15,9%). Kauladissektio suoritettiin 29,1% tapauksista, kun taas leikkauksen jälkeinen ulkoinen palkki sädehoitoa annettiin 32,2%.

mediaani seuranta-aika 74,5 kuukautta, 135 (46,7%) potilaista oli uusiutunut ja 117 (40,5%) oli kuollut. Mediaani ja 5 vuoden DFS oli 94,5 kuukautta (95% CI: +80,9-108kuukausi) ja 60,8%: lla, kun taas mediaani ja 5 vuoden OS oli 106,3 kuukautta (95% CI: +89,3-+123,3kuukausi) ja 66,1% vastaavasti. Kuten odotettua, mediaani oli huomattavasti lyhyempi potilailla, joilla imusolmukkeiden positiivinen sairaus verrattuna niihin, joilla imusolmukkeiden negatiivinen (28,7 vs. 106,5 kuukautta, p 0,001), ja potilaat yli 63 vuotta diagnoosin verrattuna nuorempiin ne (87,3 vs 139,1 kuukausi, p = 0,006), ja potilaille, joiden kasvaimet oli subglottic tai transglottic paikkaan verrattuna niihin, joiden kasvaimet sijaitsivat supraglottically (82,8 vs 117,5 kuukausi, p = 0,01). Kuin potilailla, jotka olivat alun perin tehty yhteensä laryngektomian, potilasta, joille oli tehty enemmän konservatiivinen leikkaus kokenut tilastollisesti merkitsevästi lyhyempi mediaani DFS (55,9 vs. 106,2 kuukautta, p = 0,011), mutta ei OS (124,8 vs. 106,3 kuukautta, p = 0,671), mikä todennäköisesti johtuu vaikutuksesta pelastaa laryngektomian.

IHC ilmentäminen IGFR ja korrelaatio tulokseen

tulokset IHC värjäys saatiin 285 (98,6%) kasvaimen näytteen kaikkien kolmen merkkiaineita (IGF1 R-alfa , IGF1 R-beeta ja IGF2R). Rakenteessa immunovärjäyty- varten IGF1 R-alfa oli pääasiassa sytoplasmista ja /tai kalvo ja oli kohtalaista tai voimakasta (IRS≥3) in 56,1%: ssa tapauksista (kuvio 2A). Päinvastoin, IGF1 R-beeta-immunovärjäys oli eniten sytoplasminen (kuvio 2B). ja oli poissa (IRS = 0) in 81,7%: ssa tapauksista, huolimatta positiivisten sisäisen valvonnan (makrofagit ja strooman). IGF2R Immunovärjäyksen oli pääasiassa sytoplasmista ja oli kohtalaista tai voimakasta (IRS≥2) in 53,6%: ssa tapauksista, (kuvio 2C). Huomattavaa on, että merkittävä koekspressoimalla välillä havaittiin IGF1 R-alfa sytoplasminen ja IGF1 R-alfa kalvomainen immunovärjäys (r = 0,28, p 0,0001), mutta ei välillä IGF1 R-alfa ja IGF1 R-beeta (r = -0,02, p = 0,779) , eikä välissä IGF1 r-alfa ja IGF2R (r = 0,09, p = 0,133). Nämä havainnot kehotti meitä tutkimaan edelleen IGF1 R-alfa sytoplasman /kalvomainen IHC ilmentymisen suhteen kliinis muuttujia.

. IGF1 R-alfa vahva kalvo- värjäystä 100% syöpäsolujen (IRS = 9); B. IGF1 R-beta vahva sytoplasmista värjäytymistä 80% syöpäsolujen (IRS = 9); C. IGF2R vahva sytoplasminen ja kalvo- värjäytymistä 80% syöpäsolujen (IRS = 9). Kaikki kuvat: suurennus X 40.

Kuten esitetty taulukossa 2, korkea ilmentyminen IGF1 R-alfa (IRS≥3) oli merkitsevästi yhteydessä piirteitä edenneen taudin, kuten TNM vaiheen III tai IV diagnoosin (p = 0,011) ja yhteensä laryngektomian kuin alkuperäinen kirurgisen (p = 0,018). Päinvastoin, IGF1 R-beeta ja IGF2R IHC ekspressiota ei liittynyt minkä tahansa kliinis muuttujien tutkittu (tuloksia ei ole esitetty). Vuonna yhden muuttujan analyysiin, potilaat, joiden kasvaimet yli-ilmentyy solulimassa /kalvo IGF1 R-alfa kokenut hieman lyhyempi mediaani DFS verrattuna niihin, joiden kasvaimet eivät (91.1 vs +106,2kuukausi, p = 0,0538), ja tilastollisesti merkitsevästi lyhyempi mediaani (100.3 vs +118,6kuukausi, p = 0,0157), (kuvio 3). Mikään muu IHC markkereita osoitti mitään yhteyttä selviytymisen tuloksia, eivätkä yhdistelmä IGF1 R-alfa IHC ilmaisun muiden merkki tuotto lisätietoja potilaiden hoitotuloksiin.

mRNA ilmaisun ja korrelaatio jossa tulos

saatavuus kasvaimen näytteiden arvioimiseksi mRNA ilmaisun jokaiselle yhden biomarkkereita annetaan kuviossa 1. sen arvioimiseksi mRNA ilmentymisen IGFR reittiin liittyviä geenejä ja seuloa niiden jakelua varten luonnollinen leikata -offs, frekvenssihistogrammien RQ-arvot kullekin biomarkkereiden piirrettiin ja vastaava boxplots rakennettiin (kuva S1). Vastaanotin operaattori (ROC) analyysi käyttäen 3-vuoden DFS indikaattorina ja neljännekseen analysointi jakaumien tunnistettu cut-off mediaani IGF1 R, IGFBP3, MAP2K1, MAPK9, PI3KR1 ja SOCS2 ja 61

st persentiiliä PIK3CA. Kun markkereita yhdistys arvioitiin jatkuvassa muodossa, IGF1 R-mRNA merkitsevästi yhteydessä mRNA ilmaus IGFBP3 (r = 0,22, p = 0,0032), MAP2K1 (r = 0,50, p 0,0001), MAPK9 (r = 0,51, p 0,0001), PIK3R1 (r = 0,37, p 0,0001) ja SOCS2 (r = 0,27, p = 0,0014), osoittaen, että IGF1 r mRNA koekspressoituu kaikkien muiden tärkeiden efektorien IGF rakenteisen. Alavirran molekyylit kaksi signalointikaskadien laukaisee IGFR aktivointi (MAPK9 kanssa MAP2K1 ja PIK3CA kanssa PIK3R1) olivat myös merkitsevästi korreloivat toistensa suhteen mRNA ilmaisun. Lopuksi, IGFBP3 mRNA: n ekspressio korreloi MAPK9, PIK3CA ja SOCS2 mRNA: n ilmentymisen (taulukko S1).

Mikään biomarkkereiden: n mRNA: n ilmentymisen, arvioitu portaattomasti, liittyi jokin kliinis muuttujien tutkittu (tietoja ei ole esitetty). Vuonna yhden muuttujan analyysiin, ja käyttäen tunnistettu raja-arvot, potilaat, joiden kasvaimet olivat korkealla MAPK9 mRNA ilmaisu kokenut marginaalisesti pidempi mediaani DFS (91,8 vs. 81,0 kuukautta, p = 0,0665) ja tilastollisesti merkitsevästi pidempi mediaani (117,5 vs. 87,3 kuukautta, p = 0,0344 ), verrattuna potilaisiin, joiden kasvaimet olivat alhaiset MAPK9 mRNA-tasoja. Samoin potilailla, joiden kasvaimet olivat korkeat PIK3CA mRNA: n ilmentymisen kokenut enää -albeit ei significantly- mediaani DFS (106,2 vs. 80,5 kuukautta, p = 0,0723) ja mediaani (141,8 vs. 94,5 kuukautta, p = 0,0726), kuin potilailla, joiden kasvaimet olivat alhainen PIK3CA mRNA tasolla (taulukko S2).

Korrelaatio IGF1 R IHC ilmaisun kanssa mRNA

Havaitsimme ei-merkitsevä suuntaus koekspressoimalla IGF1 R-alfa kalvomainen tai sytoplasminen värjäys ja IGF1 R -alfa mRNA-tasot, kun arvioidaan muun Spearmanin korrelaatio koe (r = 0,14, p = 0,0621), (kuva S2). Kuitenkaan ollut mitään korrelaatiota IGF1 R-alfa IHC ilmentymisen mRNA tasoilla jollekin muulle biomarkkerit arvioitiin (tuloksia ei ole esitetty).

Monimuuttuja-analyysi

Monimuuttuja-analyysissä, riippumaton ennustavat DFS olivat tyyppinen leikkaus (laryngektomian vs konservatiivinen leikkaus), imusolmukkeesta tila (positiivinen vs negatiivinen), sukupuoli (mies vs nainen), ikä diagnoosin (yli tai alle mediaani 63 vuotta), kasvaimen sijainti (subglottic /transglottic vs supraglottiset /kurkunpään) ja IGF1 R-alfa soluliman tai kalvo IHC lauseke (korkea vs matala), (kuvio 4A). Voimakkaat ennustavat DSF olivat miessukupuoli, joka liittyi yli neljä-kertainen riski uusiutumisen (HR = 4.459, 95% CI 1,079-+18,436, p = 0,039) ja läsnäolo soluttautuneet (positiivinen) imusolmukkeita , joka liittyi enemmän kuin kaksi-kertainen saman riskin (HR = 2,313, 95% luottamusväli 1,477-3,622, p = 0,0002). Tärkeää on, potilaat, joiden kasvaimet yli-ilmentynyt IGF1 R-alfa oli 46,6% lisäys riskiä uusiutumisen, puhdistetaan kaikista edellä mainituista ennustavaa tekijää (HR = 1,466, 95% CI: 1,022-2,102, p = 0,0374).

lopullinen malli OS sisällyttänyt saman kliinis muuttujat sekä T-vaiheen (T3 /T4 vs T1 /T2). Tehokkain haitalliset ennustavat tekijät OS olivat soluttautuneet imusolmukkeiden (HR = 2,569, 95% CI: 1,610-4,100, p 0,0001), ikä yli 63 vuotta (HR = 1,785, 95% CI: 1,211-2,630, p = 0,0034) ja subglottic /transglottic sijainti (HR = 1,756, 95% CI: 1,016-3,036, p = 0,0438). Kuten kuviossa 4B, lisääntynyt soluliman tai kalvo IGF1 R-alfa-proteiinin ilmentyminen, liittyi absoluuttinen 47,5% lisäys kuolemanriski puhdistetaan kaikista muista kliinis parametrit ja tämä tulos oli marginaalisesti merkitsevä (HR = 1.475, 95% CI : 1,000-2,178, p = 0,0504). Erityisesti sisällyttäminen IGF1 R IHC ilmaisun monimuuttujakalibrointiin mallissa mahdollisti kerrostuneisuus potilaiden kolmeen ryhmään erottuva ennusteen lukumäärästä riippuen epäsuotuisten ennustetekijät (1-2, 3 ja 4 tai enemmän kielteisiä tekijöitä suotuisan, väli- ja epäsuotuisa ennuste vastaavasti ryhmä). Esimerkiksi mediaani oli 70,7 kuukautta (95% CI: +35,4-+100,3kuukautta) potilaille kielteiset ennusteen ryhmässä ja 106,3 kuukautta (95% CI: 84,8-+130,4kuukautta) välituotteiden ennuste ryhmään, kun taas se ei saavutettu suotuisa ennuste ryhmä (kuva 5).

keskustelu

Tässä tutkimuksessa, ainoa tietomme tutkia ennustetekijöiden roolia IGF1 R alussa kurkunpään syöpä, olemme osoittaneet että lisääntynyt IGF1 R-alfa soluliman ja /tai kalvo- ilmaisua, kuten arvioitiin immunohistokemiallisesti ja määrällisesti IRS-järjestelmä, on itsenäinen haitallinen ennustetekijä uusiutumisen ja eloonjäämisen potilailla, joilla on varhainen (kirurgisesti resektoitiin) squamous-cell carcinoma kurkunpään. IGF1 R-alfa ilmentymisen säilyttänyt merkittävän ennustetekijä sekä DFS ja OS jopa korjausten jälkeen hyvin määritellyt kliinis muuttujia, kuten kohdunkaulan imusolmuke osallistumista, ikä ja kasvaimen sijainnista. Nämä tulokset ovat yhdenmukaisia ​​äskettäin julkaistussa tärkeitä todisteita geenien paneelit [22] merkitystä korostavat, että IGFR välittämää molekyyli väylän kurkunpään syövän synnyn ja etenemisen; Huomattavaa on, että nykyinen hoitomuotoja varhaisessa kurkunpään syöpä ovat poistettu kirurgisella kanssa tai ilman adjuvanttia sädehoidon, kuten käytetty meidän kohortin tekee näin tuloksemme ajoissa ja kliinisesti merkittävä. Lisäksi toteutettavuus ja toistettavuus IRS arvioinnin riippumaton patologian laboratorioissa tehdä IGF1 R-alfa-proteiinin ilmentymisen houkutteleva biomarkkereiden tavanomaisesta kliinisessä käytännössä joka voi toimia päätös välineenä enemmän aggressiivinen hoito alussa kurkunpään syöpä.

IGFR välittämä rakenteisen on jatkuvasti ollut mukana neoplastisen transformaation ja etenemisen useissa ihmisen maligniteettien, mukaan lukien aerodigestive sairauksien ja on siten pitkään herättänyt huomiota sekä mahdollisena ennustetekijöiden biomarkkereiden [9], [10] ja mahdollisena kohdistaa terapeuttista intervention [11], [12]. Tiedot koskevat IGFR ennusteen arvioinnissa NSCLC ovat melko ristiriitaisia ​​[3], [4], [29], vaikka tuore tutkimus [5] osoittaa, että IGF1 R-proteiinin ilmentyminen on suurempi squamous-cell histologialtaan ja päätteli, että IGF1 R-proteiinin ja geenin ilmentyminen oli ei liittynyt selviytymistä, kun taas

IGF1 R

geenikopiomäärä kanna ennusteen arvioinnissa. Vuonna kurkunpään syöpä, vähäisyys tietoja ei salli turvallisen johtopäätöksiä: IGF1 R ja IGFBP3 seerumissa ei katsottu merkittäviksi ennustavia kliinistä tulosta ainoa suuri kohortti 540 potilaalla on SCCHN, mukaan lukien 440 potilasta kurkunpään syöpä, Tähän mennessä julkaistut [9]; Tämä tutkimus on kuitenkin arvioitava yksinomaan seerumin IGF1 R ja IGFBP3 eikä kasvainten mRNA-tasot tai IHC ilmaisua, kuten meidän kohortin. Mielenkiintoista, IGFBP3 on raportoitu toimia vaimennin verisuonten endoteelin kasvutekijän (VEGF) in SCCHN angiogeneesissä [16] ja vaimentua alkuvaiheissa pään ja kaulan syövän syntymistä [30]. Suun squamous-cell carcinoma, IGFBP3 mRNA ilmaisu on korreloinut suotuisamman kehityksen, mikä edelleen tukee rooliaan IGF1- inaktivaattorin [31]. Äskettäin julkaistussa tutkimuksessa [32], yhdistelmä IGF1 R ja IGFBP3 IHC yli-ilmentyminen oli ennustetekijöitä huonosta hengissä kohortin 131 potilailla, joilla on SCCHN. Meidän kohortti koostui yksinomaan potilaiden kurkunpään syöpä, sisällyttäminen IGFBP3 IHC ilmaisua ei parantanut ennustetekijöiden kapasiteettia IGF1 R yksin. Lopuksi rooli IGF2R vuonna kurkunpään syöpä on vielä selvittämättä [33], vaikka on todennäköistä, että puute tyrosiinikinaasialueeseen riistää reseptorin kykyä transduce proliferatiivisia signaaleja ja voi siten selittää puuttuessa ennustetekijöitä arvosta markkeri havaittiin meidän kohortissa.

tärkeä osa suunnittelussa Tutkimuksemme oli erillisten monoklonaalisia vasta-aineita, joiden tavoitteena on kahden erillisen isoformeja IGF1 R-proteiinin (alfa ja beta).