Krooninen sairaus

tiivistelmä

esto syövän voi olla seurausta vaimennus oksidatiivisen stressin aktivoimalla antioksidantti puolustusjärjestelmää, palauttaminen ja vakauttaminen tuumorisuppressorin proteiinien kanssa modulaatio tulehduksellisten välittäjäaineiden. Aikaisemmin olemme rajattu merkittävä rooli curcumin aikana pitkän aikavälin vaikutus säätelyyn glykolyyttisen reitin ja angiogeneesiä, mikä puolestaan ​​johtaa syövän ehkäisyssä moduloimalla stressiä aktivoitu geenejä. Tässä tutkimuksessa pyrittiin selvittämään pitkäaikaistehoa curcumin säätelyyn Nrf2 välittämän vaiheittain II antioksidanttientsyymejä, tuumorisuppressoriproteiinia p53 ja tulehduksen hapettavissa kasvain microenvironment maksan T-solujen lymfooma hiirille. Esto Nrf2 signalointi havaittu lymfooman eteneminen, johti alas säätely vaiheen II antioksidanttientsyymejä, p53 sekä aktivoitumista tulehduksellinen signaaleja. Curcumin voimistua merkittävä kasvu Nrf2 aktivointi. Se palautti aktiivisuuden vaiheen II antioksidanttientsyymejä kuten GST, GR, NQO1, ja kasvaimen p53 tasolla. Lisäksi curcumin moduloitu tulehdus kautta ylössäätely TGF-β ja vastavuoroinen sääntelyn iNOS ja COX2. Tutkimuksen mukaan pitkäaikaishoidossa vaikutus, curcumin johtaa syövän indusoimalla vaiheittain II antioksidanttientsyymejä aktivoimalla Nrf2 signaloinnin palauttaminen tuumorisuppressorin p53 ja modulaatio tulehduksellisten välittäjäaineiden, kuten iNOS ja COX2 maksassa lymfoomaa kantavien hiirten.

Citation: Das L, Vinayak M (2015) Long Term vaikutus Curcumin palauttaminen Kasvaimen p53 ja Phase-II antioksidanttientsyymejä kautta aktivointi Nrf2 Signalling ja modulaatio tulehdus syövän ehkäisy. PLoS ONE 10 (4): e0124000. doi: 10,1371 /journal.pone.0124000

Academic Editor: Gautam Sethi, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, SINGAPORE

vastaanotettu: 3. joulukuuta 2014; Hyväksytty: 24 helmikuu 2015; Julkaistu: 10 huhtikuu 2015

Copyright: © 2015 Das, Vinayak. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: työtä tukivat avustuksia Ministry of Science and Technology (Grant No.-SR /S0 /AS-97/2007), Intian hallitus MV. Rahoittaja ei ollut roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Nuclear tekijä E2 liittyvä tekijä 2 (Nrf2) on kriittinen transkriptiotekijä, joka sitoutuu promoottorialue useita geenejä, jotka koodaavat vaiheen II antioksidanttientsyymejä [1]. Nrf2 korreloi rutiini detoksifikaatioprosessin ja sen lisääntynyt ilmentyminen on kuvattu hiiren maksassa, suolistossa, keuhkoissa ja munuaisissa. On olemassa korkea samankaltaisuus Nrf2 sitovan sekvenssin (NF-E2 konsensussekvenssi) ja antioksidantti-elementti (ARE), jotka säätelevät elementit promoottorialue Asteittain II antioksidanttientsyymejä kuten GST ja NQO1. GST on suojaava rooli vastaan ​​hapettumisprosessiin ja sillä on keskeinen rooli vieroitus eri vierasaineiden pahanlaatuisia soluja tai kudoksia. GST myös näyttelyitä useita ei katalyyttinen toimintoja kuten solunsisäistä kuljetusta monenlaisia ​​hydrofobisten ligandien ja modulaatio signaalinvälitysreitin, joka johtaa takavarikoinnin karsinogeeneja [2]. NQO1 on sytosolinen flavoproteiini, joka ilmaistaan ​​konstitutiivisesti monenlaisia ​​nisäkkäiden kudoksissa ja solulinjoissa. Se katalysoi kahden elektronin pelkistys Useiden ympäristön elektrofiilisen epäpuhtaudet ja endogeenisten yhdisteiden, estää sukupolven ROS, sieppaa happiradikaalien ja siten osoittaa suora rooli suojaa oksidatiivista stressiä. NQO1 säätelee vakaus p53 vasteena oksidatiivisen stressin [3]. Kasvaimen p53 rajoittaa epänormaalit solut indusoimalla kasvun pysähtymistä /liipaisu apoptoosin. p53 osoittaa myös antioksidantti ominaisuus, joka suojaa genomin hapettumiselta ROS, joka on suurin syy DNA-vaurion ja geneettinen epävakaus johtaa syövän syntyyn [4, 5]. Nrf2 on kriittinen ylläpitämiseksi glutationin (GSH) redoksitilassa kautta transkription säätelyyn GR [6]. GSH on hallitseva solunsisäinen tiolipitoiset antioksidantti maksassa. Sillä on monipuolisia toimintoja, kuten geeniekspression säätelyä, apoptoosin ja antioksidanttipuolustuksen kohti modulaatiota solujen lisääntymisen. p53 puutteellisia syöpäsoluja raportoitu olevan alentunut induktion Nrf2 kohdegeenien verrattuna p53 taitavia soluihin, mikä viittaa siihen, tärkeä rooli p53 aktivaation Nrf2 syöpäsoluissa [7].

Wild-type p53 ja TGF- β ovat keskeisiä tuumorisuppressoreilla jotka säätelevät erilaisia ​​soluvasteita. p53 fyysisesti vuorovaikutuksessa Smad: ien ja yhteistyössä ordinately indusoi transkriptio useiden keskeisten kasvaimen ehkäisevästä geenit [8]. TGF-β toimii anti proliferatiivinen tekijä varhaisessa vaiheessa syöpä ja säätelee solusyklin kautta alavirran kohdegeenien mukana ajo soluproliferaatiokokeessa [9, 10]. Se indusoi apoptoosia ihmisen lymfooman soluissa ja estää tulehdusta [11, 12, 13]. Edistäminen tulehduksen säätelee COX2 kautta synteesi PGE2 eri kudoksissa. Expression of COX2 sekä PGE2-tuotantoa säätelee TGF-β1 [14, 15, 16]. COX2 usein koekspressoitu iNOS ja molemmat ovat osallisina syövän etenemisen säätelemällä lisääntymistä, apoptoosin ja angiogeneesin jne iNOS on keskeinen rooli sovittelun tulehduksen kautta typpioksidin (NO) biosynteesin, joka puolestaan ​​moduloi COX2 ilmaisun ja PGE2 synteesiä in tulehdustila [17]. Kohtuullisen tehostettuun iNOS ilmaisun edistää kasvaimen kasvua, kun taas lisääntyvän edelleen tasolla on raportoitu olevan sytotoksisia kasvaimen soluihin, mikä iNOS osoittaa kaksoisrooli aikana kasvainten kehittymiseen [18]. Maksa on raportoitu olevan erikoinen ominaisuus, jossa kasvainsolut indusoi endogeenisen NO: n vapautumisen kautta säätelyä iNOS, mikä tappaminen sinimuotoista kasvainsolun ja vähentää maksan etäpesäkkeiden [19]. Koska merkittävä metabolisen ja detoxifying elin elin, maksa ottaa aktiivisesti anti oksidatiivista puolustusjärjestelmää ja on suuresti vaikuttanut pitkälle syöpä. Etäpesäke ja maligniteetin on vahvistettu aiemmin maksan Dalton lymfooma laakeri (DL) hiirillä [20].

käyttö täysuutteella kasviperäisiä lähteen tai yhden eristetty aineella tai aineenvaihduntatuote yksittäinen osatekijä, saavuttaa toivottavaa terveyshyötyjä on ollut kysymys aiemmin useita vuosia. Curcumin, joka on polyphenolic phytochemical on raportoitu estävän kemiallisesti indusoidun syövän synnyn useilla elinkohdissa useissa eläinmalleissa. Rapid aineenvaihduntaa ja poistaminen ovat tärkeitä tekijöitä alhainen hyötyosuus curcumin at kudosten tasoilla, riippumatta antoreitistä, vaikkakin aineenvaihduntatuotteiden curcumin säilyä pitempään eri kudoksissa. Kuitenkin pitkäaikainen vaikutus curcumin, peruuttamisen jälkeen annon on vielä raportoitu. On epäselvää, onko anti-karsinogeeninen toiminnan curcumin johtuu kumulatiivinen vaikutus sen aineenvaihduntatuotteiden tai johtuu curcumin itseään. Edelleen on osoituksena, että kulutus kokonaisuudessaan tai osittain puhdistettu ruoka otteita on edullisempaa yli yhden eristetty osatekijän olemassaolon johdosta synergistisiä vuorovaikutuksia fytokemikaalit koko elintarvikkeet [20, 21]. Aiemmin olemme raportoineet, että syöpää toiminta curcumin aikana pitkän aikavälin vaikutusta välittää säätelemällä glykolyyttisen reitin ja angiogeneesiä, seurauksena seurauksena modulaatio stressiä aktivoitu geenien [20]. Tämän tutkimuksen tarkoituksena on selvittää pitkän aikavälin vaikutus curcumin säätelyyn Nrf2 välittämän vaiheittain II antioksidanttientsyymejä, tuumorisuppressoriproteiinia p53 ja tulehduksen hapettavissa kasvain microenvironment metastaattisessa maksan Dalton lymfooma hiirille.

Materiaalit ja menetelmät

kemikaalit

Kaikki kemikaalit olivat analyyttistä ja molekyylibiologian laatu sekä endotoksiinivapaita, ja käytettiin ilman lisäpuhdistusta. Curcumin, reagenssit RNA: n eristämistä, Taq-polymeraasin, PMSF, menadioni, Sephadex G50 ja HRP konjugoitua anti-β-aktiini-vasta-aine hankittiin Sigma Aldrich. Käänteiskopioijaentsyymin ribonukleaasi Inhibitor, satunnaisia ​​alukkeita (heksameereja), 100 emäsparin Plus DNA tikkaat ja Klenow entsyymi Fermentase Life Science ja TURBO DNA-Free

TM Kit I ostettiin Ambion. Gene spesifisiä alukkeita RT-PCR syntetisoitiin Metabion. Anti-hiiri-p53-vasta-ainetta Imgenix, anti-hiiri-iNOS ja COX2 vasta-aine Cayman ja HRP konjugoitua vuohen anti-kaniini-vasta-aine Bangalore Genie. Radioaktiivisesti α

32P-dCTP alkaen hallituksen Säteilyturvakeskuksen Isotooppi Technology (BRIT) ja ECL (Super signaali Kit) hankittiin PIERCE Biotechnology HYSEL India Pvt. Ltd

Eläimet ja induktio T-solulymfooma (Dalton lymfooma) B

Hiiret (

Mus musculus

, AKR kanta) kasvatettiin ja ylläpidettiin vakio laboratorio-olosuhteissa kunnon kivutonta hoito, kohti suuntaviivat institutionaalisten eläimen eettisen komitean, 25 ± 2 ° C: ssa 12 h valo /12 h pimeäjaksoilla ja varustettu standardin hiirillä rehun, juomaveden

halun

. Kaikki eläinkokeet suoritettiin hyväksymisestä Institutional Animal eettisen komitean, Banaras Hindu University. Tervettä aikuista uroshiirillä (30 ± 2 g, 16-20 viikkoa vanhoja) käytettiin kokeellista työtä. Dalton-lymfooma askites-soluja istutettiin aikuisilla uroshiirillä läpi vatsaonteloon (i.p.) sarjasiirteillä, kuten aiemmin on kuvattu [20]. Dalton-lymfooma askites solut lahjakas professori Ajit Sodhi, School of Biotechnology, Banaras Hindu yliopisto, Varanasi, Intia. Dalton-lymfooma on transplantable non-Hodgkin-hiiren T-solulymfooma, alkunsa kateenkorva DBA /2-hiiren National Cancer Institute, Bethesda, MD, vuonna 1947. [22].

kehittäminen DL oli vahvistettu vatsan turvotusta ja lisääntynyt kehon paino, joka oli näkyvissä selvästi 10-11 jälkeisen päivän elinsiirron ja DL hiiret selvisivät 20 ± 2 päivää. Kasvu Dalton lymfooma ei osoittanut mitään suurta muutosta kehon painon ja askites nesteen kertymistä aikana ensimmäisen 7-9 päivää alkaen seuraavan päivän DL transplantaation (S1 Kuva). Niinpä ensimmäinen 7-9 päivää voidaan verrata lag-vaihe /valmistelu–vaiheessa sigmoidikäyrä varten askites solupopulaation kasvua. Siksi aikataulu curcumin hoidon DL hiiret valittiin vastaavasti 9 päivää alkaen seuraavan päivän DL elinsiirtojen ja hiiret tapettiin 18. päivänä jälkeisen DL elinsiirron (ennen DL hiiret kuolee luonnollisesti) saada pitkän aikavälin vaikutus curcumin. Jos curcumin hallinnoi kautta i.v. /i.p., se metaboloituu dihydrocurcumin, tetrahydrocurcumin, hexahydrocurcumin ja hexahydrocurcuminol. Kurkumiinia odotetaan täysin metaboloituu sen aineenvaihduntatuotteiden viime 9 päivää käsittelyn jälkeen. Näin ollen vaikutus ei pitäisi johtua välitöntä vaikutusta curcumin mutta saattaa johtua aineenvaihduntatuotteiden curcumin [20].

Aikataulu curcumin hoidon DL hiirille ja kudoksen keräys

Kuusi ryhmää hiiriä otettiin 6 hiirtä kussakin ryhmässä (n = 6), ja kurkuma hoito DL hiirillä oli suunniteltu, kuten aikaisemmin on kuvattu [20]. Kaikki hiiret lopetettiin päivänä 18 jälkeisen DL transplantaation (välttää septinen kunnossa ennen DL hiiriä kuolee kasvain) by inhimillisesti euthanization (niskanmurrolla jälkeen nukutettujen; hiiret altistettiin eetteri esitettyinä puuvillaharsoliinan pieneen kammioon ja eetteriä keskittyminen oli noin 80μl /litra tilavuudesta). Maksa irrotettiin heti lopettamisen jälkeen ja pestiin jäähdytetty normaalissa suolaliuoksessa ja kudoksen kustakin ryhmästä (n = 6) yhdistettiin ja hienonnettu aseptisesti 4 ° C: ssa keskimääräinen tulos. Kudos käytettiin välittömästi tai säilytettiin -80 ° C: ssa jatkotutkimuksiin.

Elektroforeettisen liikkuvuuden siirtymän määrityksellä (EMSA) B

Nuclear proteiini uutettiin ja sitoutumisaffiniteetti Nrf2-sekvenssit määritettiin elektroforeettisen liikkuvuuden shift-määritys (EMSA) kuten aiemmin on kuvattu [23, 24, 25]. Puhdistettu synteettinen oligonukleotidikoettimia, jotka vastaavat NF-E2-konsensussekvenssi (sense 5′-TGGGGAACCTGTGCTGAGTCA-3 ’, antisense 5′-CTCCAGTGACTCAGCACAGGTTCC-3′ tai ON-konsensussekvenssi (sense 5’-AGTCACAGTGACTCAGCAGAAT-3 ’, antisense 5’-AGATTCTGCTGAGTCACTGTGA -3 ’) liitettiin, pää leimattiin [α-32P] CTP käyttäen Klenow-entsyymiä. Titraus spesifisyyden ja sitoutumisaffiniteetin syntetisoitiin oligonukleotidi vastaa ARE ja NFE2 sitova elementti määritettiin käyttämällä merkitsemätöntä koetin erityisinä kilpailijana ja poly-dI /dC epäspesifisinä kilpailija vastaavasti. voimakkuus kompleksin autoradiogrammia kuvattiin ja analysoitiin densitometrinen skannaus käyttämällä Alpha Image Analyser-järjestelmää (Alpha Innotech, San Leandro, CA, USA).

RNA: n eristys ja RT-PCR

RNA: n eristämistä, cDNA-synteesi ja monistus tehtiin kuten aiemmin on kuvattu [20, 23, 24, 25]. Expression of Nrf2, isotsyymien GST, GR, NQO1, p53: n, TGF-β1, iNOS ja COX2-geenien tutkittiin semikvantitatiivinen RT-PCR käyttäen syntetisoitiin cDNA. Sopiva alukeparia (S1 taulukko) käytettiin PCR-reaktioissa käyttämällä Lämpösyklilaitteen (Applied Biosystem). Band intensiteetti monistettujen tuotteiden tehtiin näkyväksi, valokuvattu ja analysoitiin käyttämällä Gel Doc-järjestelmää (Alpha Innotech

EY) ja arvot normalisoitiin kanssa β-aktiini sisäisenä kontrollina.

Toiminta geeli määritys

toiminta GR ja NQO1 sekä aktiivisuuden ja isoentsyymin kuviot GST mitattiin geeli aktiivisuuden värjäytymisen. Ei-denaturoivaa PAGE-analyysi antioksidanttia entsyymien parempana immunologisesti, koska muutos entsyymin aktiivisuuden liittyy aineenvaihdunnan muutoksia ja menetelmässä käytetään substraattispesifisyys perustuva tunnistus vain aktiivisen osan entsyymien samassa geelissä. Sitä pidetään erittäin merkityksellisiä korreloimiseksi muutosta tason tietyn isoentsyymin kanssa, aineenvaihdunnan muutoksia solutasolla [20].

Glutationi-S-transferaasi (GST).

Toiminta geeli suoritettiin ei-denaturoivalla PAGE, kuten per menetelmää Ricci et ai. pienin muutoksin [26]. Sama määrä proteiinia kustakin näytteestä erotettiin 10% ei-denaturoivaa PAGE 4 ° C: ssa. Geeli inkuboitiin 100 mM kaliumfosfaattipuskuria (pH-6,5), joka sisälsi 4,5 mM GSH, 1 mM CDNB ja 1 mM NBT 37 ° C: ssa 10-15 minuutin ajan varovasti sekoittaen. Sitten geeli pestiin vedellä ja siirrettiin liuokseen, jossa oli 100 mM Tris-CI (pH-9,6), joka sisälsi 3 mM PMS 3-5 min ja valaistu valossa till ulkonäkö sininen formazen monimutkaisia ​​bändejä geelillä. Yhtye voimakkuus eri isotsyymien visualisoitiin, valokuvattiin ja analysoitiin käyttäen Gel Doc-järjestelmää (Alpha Innotech

EY).

glutationireduktaasi (GR).

aktiivisuus värjäytyminen GR suoritettiin menetelmän mukaisesti Hou et ai. [27]. Sama määrä proteiinia kustakin näytteestä erotettiin 8% ei-denaturoivaa PAGE 4 ° C: ssa. Kun täydellinen elektroforeesi, geeli upotettiin 50 mM Tris-CI (pH-7,9), joka sisälsi 4 mM GSSG, 1,5 mM NADPH: ta ja 2 mM DTNB 30 min RT: ssa, huuhdottiin 50 mM Tris-CI (pH-7,9) ja siirrettiin 1,2 mM NBT ja 1,6 mM PMS. GR aktiivisuus värjättiin negatiivisesti pimeässä 10-15 minuuttia huoneenlämpötilassa kevyesti ravistamalla ja sitten altistetaan valolle, kunnes ulkonäkö selkeä vyöhykkeiden GR aktiivisuuden bändi. Geeli pestiin vedessä värin poisto ja bändi intensiteetti oli visualisoida valokuvattiin ja analysoitiin käyttäen Gel Doc-järjestelmää (Alpha Innotech

EY).

NAD (P) H: kiniini oksidoreduktaasi (NQO1).

geeli aktiivisuuden värjäyksen NQO1 suoritettiin, kuten ovat kuvanneet Wrobelin et al. [28]. Sama määrä proteiinia kustakin näytteestä erotettiin 10% ei-denaturoivaa PAGE 4 ° C: ssa. Elektroforeesin jälkeen geeli värjättiin 50 mM Tris-CI (pH-7,5), 0,3 mg /ml MTT, 1 mM NADH ja 30 uM menadionia varovasti akselinsa pimeässä kunnes väri kehittyy (10-15 min) alueilla, joilla NQO1 aktiivisuutta. Reaktio pysäytettiin siirtämällä geeli 5% (v /v) liuokseen, jossa oli etikkahappoa. Band intensiteetti oli visualisoida, valokuvattiin ja analysoitiin käyttäen Gel Doc-järjestelmää (Alpha Innotech

EY).

Arvio redox tilan

Yhteensä glutationi ja pelkistettyä glutationia määritettiin yhteensä sulfhydryl (T- SH) sisältö ja ei-proteiini sulfhydryyli- (NP-SH) pitoisuus vastaavasti käyttäen molaarista absorptiokerrointa 13100 M

-1 cm

-1, ja ilmaistiin mikro moolia per mg proteiinia [29]. Redox tila laskettiin suhteena NP-SH proteiiniin sitoutuneen sulfhydryyli- (P-SH) pitoisuus.

Western blotting

Equal määrä proteiinia kustakin näytteestä erotettiin 10% SDS -sivu ja siirrettiin PVDF-kalvolle yön yli 4 ° C: ssa. Membraani blokattiin 5% rasvatonta maitoa PBS: ssä (pH 7,4) 2 tunnin ajaksi RT: ssä. Blottia inkuboitiin yön yli 4 ° C: ssa kaniinin anti-hiiri-p53 (1: 500 laimennos, Imgenix) tai kanin anti-hiiri-iNOS (1: 200 laimennos, Cayman) tai kanin anti-hiiri-COX2 (1: 500 laimennos, Cayman) 1% BSA: ta ja 0,05% Tween-20 PBS: ssä (pH 7,4). Blot pestiin ja inkuboitiin HRP-konjugoitua vuohen anti-kani-IgG: tä (1: 2500 laimennus, Bangalore genei) PBS: ssä (pH 7,4), joka sisälsi 1% BSA: ta ja 0,05% Tween-20: ssa 2 h ajan RT: ssä. Immunoreaktiivisia proteiineja tunnistettiin ECL Super signaali (Pierce Biotechnology) X-ray elokuva. Band tiheyden arvot normalisoitunut β-aktiini.

typpioksidin (NO) Pitoisuus

NO tasolla maksassa arvioitiin käyttämällä Griessin reagenssia; 100 ui maksahomogenaatti sekoitettiin 100 ui Griessin reagenssia (0,1% naftyylietyleenidiamiinidihydrokloridia, ja 1% sulfaniiliamidia 5% fosforihappoa), inkuboitiin 10 min RT: ssä ja absorbanssi mitattiin 540 nm: ssä levylukijalla (ECL ELISA-lukija) . NO: n konsentraatio määritettiin käyttämällä standardikäyrää, syntyy ottamalla tunnettu määrä natriumnitriittiä ja arvot ilmaistaan ​​ug vastaavuuden NaNO2 /mg proteiinia

Tilastollinen analyysi

Tilastollinen analyysi oli suoritettiin SPSS-ohjelmistoa käyttäen yksisuuntaista ANOVA, jota seuraa Tucky testi. Arvot ilmaistiin keskiarvo ± SEM saatiin kolmesta eri sarjaa kokeita, p 0,05 otettiin tilastollisesti merkitsevä (95% luottamusväli) verrattuna N-ryhmän (#) ja DL + DMSO ryhmä (*).

Tulokset

Vaikutus curcumin sitomisesta Nrf2 kanssa ARE konsensussekvenssi

erityisyys ja sitoutumisaffiniteetti syntetisoitiin oligonukleotidi vastaa antioksidantti vaste-elementtiin (ARE konsensussekvenssi) validoitiin. Titraus merkitsemätöntä anturi (kylmä koetin) erityisinä kilpailijana ja epäspesifistä kilpailijaa (poly-dI /dC) vahvisti spesifisyys ja affiniteetti vastaavasti [Kuva 1A ja 1B]. Intensiteetti spesifisten DNA-proteiini-kompleksi (ARE-Nrf2), joka saatiin DL ja DL + DMSO-hiirissä oli noin 60% ja 56% normaalien hiirten vastaavasti. Merkittävät aktivointi ja ydinvoiman Nrf2 indusoitiin curcumin hoitoa jopa 148%, 164% ja 143% DL + DMSO hiiriä 50, 100 ja 150 mg curcumin /painokilo vastaavasti [Kuva 1 (C)].

Effect of kurkumiinista DNA: ta sitovaa aktiivisuutta Nrf2 kanssa OVAT konsensussekvenssien. (A) Titraus leimaamattoman keräysputkea kilpailijan. (B) Titraus poly-dI /dC ei-spesifistä kilpailija-. (C) -autoradiodiagrammi osoittaa Nrf2-ovat monimutkaisia ​​(D) Densitomet- skannausta Nrf2-ovat monimutkaisia. Maksa kaikista kuudesta eläimestä kussakin ryhmässä yhdistettiin erikseen ja uuttamisessa käytetty ydin- proteiinia. Data edustaa keskiarvoa ± SEM # Ja * merkitsee merkittävää eroa verrattuna N- ja DL + DMSO vastaavasti ryhmä. Cur on curcumin ja bw on kehon painoa. N, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 ja DLT150 edustaa normaalia, Dalton lymfooma laakerin, Dalton lymfooma kantavien hiirten käsiteltiin DMSO: n ja Dalton lymfooma, joissa hiirissä, joita hoidettiin 50, 100 ja 150 mg curcumin /kg liuotettuna DMSO: hon vastaavasti.

vaikutus curcumin sitomisesta Nrf2 NF-E2-konsensussekvenssi

Titraus merkitsemätöntä koetin erityisinä kilpailijana ja poly-dI /dC epäspesifisinä kilpailijaa vahvisti spesifisyys ja affiniteetti vastaavasti [Kuva 2A ja 2B]. Intensiteetti spesifisten DNA-proteiini-kompleksin (NF-E2 kanssa Nrf2) DL ja DL + DMSO-hiirissä oli noin 32% ja 70% normaalien hiirten vastaavasti. Intensiteetti kompleksin havaittiin olevan merkittävästi indusoi 100 mg curcumin /kg, joka oli enintään noin 144% DL + DMSO-hiirissä [kuviossa 2 (C)].

Effect of kurkumiinista DNA: ta sitovan aktiivisuus Nrf2 kanssa NFE2 konsensussekvenssien. (A) Titraus leimaamattoman keräysputkea kilpailijan. (B) Titraus poly-dI /dC ei-spesifistä kilpailija-. (C) -autoradiodiagrammi osoittaa Nrf2-NFE2 kompleksi (D) Densitomet- skannausta Nrf2-NFE2 monimutkainen. Maksa kaikista kuudesta eläimestä kussakin ryhmässä yhdistettiin erikseen ja uuttamisessa käytetty tumaproteiinien. Data edustaa keskiarvoa ± SEM # Ja * merkitsee merkittävää eroa verrattuna N- ja DL + DMSO vastaavasti ryhmä. Cur on curcumin ja bw on kehon painoa. N, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 ja DLT150 edustaa normaalia, Dalton lymfooma laakerin, Dalton lymfooma kantavien hiirten käsiteltiin DMSO: n ja Dalton lymfooma, joissa hiirissä, joita hoidettiin 50, 100 ja 150 mg curcumin /kg liuotettuna DMSO: hon vastaavasti.

vaikutus kurkumiinista ilmentymisen Nrf2 mRNA

ilmentymistä Nrf2 oli alas säännelty DL ja DL + DMSO hiirillä enintään noin 63% ja 73% normaalista hiirten, jotka oli merkittävästi up säännelty kohti normaalitasolle curcumin hoitoa. Ilmentyminen Nrf2 oli 107%, 127% ja 108% DL + DMSO 50, 100 ja 150 mg curcumin /painokilo vastaavasti [Kuva 3].

Effect of kurkumiinista mRNA ilmaus Nrf2. (A) RT-PCR Nrf2 ja β-aktiini. (B) Densitomet- skannausta Nrf2 jälkeen normalisoinnin β-aktiini. Maksa kaikista kuudesta eläimestä kussakin ryhmässä yhdistettiin erikseen ja uuttamisessa käytetty kokonais-RNA. Data edustaa keskiarvoa ± SEM # Ja * merkitsee merkittävää eroa verrattuna N- ja DL + DMSO vastaavasti ryhmä. Cur on curcumin ja bw on kehon painoa. N, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 ja DLT150 edustaa normaalia, Dalton lymfooma laakerin, Dalton lymfooma kantavien hiirten käsiteltiin DMSO: n ja Dalton lymfooma, joissa hiirissä, joita hoidettiin 50, 100 ja 150 mg curcumin /kg liuotettuna DMSO: hon vastaavasti.

vaikutus kurkumiinista mRNA ilmaisun ja entsyymiaktiivisuus GST isoentsyymien

ilmaisu ja aktiivisuus viisi isotsyymien GST nimittäin GSTa, GSTm, GSTP, GSTt ja GSTo havaittiin hiiren maksa, jossa GSTa on todettu olevan yleisin isotsyymiä. Verrattuna normaaleihin hiiriin, ilmaus GSTa, GSTm, GSTP, GSTt ja GSTo oli säädeltiin noin enintään 30%, 71%, 80%, 50% ja 71% vastaavasti DL hiirillä ja noin 35%, 61%, 82% , 68%, ja 76% vastaavasti DL + DMSO hiirillä. Curcumin hoidon indusoima viisi isotsyymien 50, 100 ja 150 mg curcumin /kg verrattuna DL + DMSO, joka oli seuraava-GSTa: 137%, 180%, 150%; GSTm: 117%, 110%, 125%; GSTP: 113%, 107%, 108%; GSTt: 102%, 122%, 115%; GSTo: 107%, 108% ja 102%: lla [kuviossa 4 (A)].

Effect of kurkumiinista ilmaisun entsymaattista aktiivisuutta GST-isotsyymien (A) RT-PCR-GST-isotsyymien ja β-aktiini (B) densitometrinen skannaus GST-isoentsyymejä normalisoinnin jälkeen, jossa β-aktiini. (C) Erityiset värjäys osoittaa aktiivisuutta GST isotsyymien. (D) densitometrinen skannaus toiminnan bändi GST isotsyymien. Maksa kaikista kuudesta eläimestä kussakin ryhmässä yhdistettiin erikseen ja uuttamisessa käytetty kokonais-RNA ja proteiinit. Data edustaa keskiarvoa ± SEM # Ja * merkitsee merkittävää eroa verrattuna N- ja DL + DMSO vastaavasti ryhmä. Cur on curcumin ja bw on kehon painoa. N, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 ja DLT150 edustaa normaalia, Dalton lymfooma laakerin, Dalton lymfooma kantavien hiirten käsiteltiin DMSO: n ja Dalton lymfooma, joissa hiirissä, joita hoidettiin 50, 100 ja 150 mg curcumin /kg liuotettuna DMSO: hon vastaavasti.

toiminta viisi isotsyymien GST kuten GSTa, GSTm, GSTP, GSTt ja GSTo ei seurannut samanlainen vaihtelu -kuvioltaan ilmaisua. Aktiivisuus GSTa, GSTm ja GSTP väheni DL ja DL + DMSO-hiiriä, jossa sillä GSTt ja GSTo isotsyymien osoittivat indusoimaa aktiivisuutta DL ja DL + DMSO-hiirissä verrattuna normaaleihin hiiriin. Väheneminen aktiivisuus GSTa: 46%, 41%; GSTm: 59%, 67% ja GSTP: 35%, 21% DL ja DL + DMSO hiirten verrattuna normaaleihin hiiriin. Kuitenkin GSTt ja GSTo isotsyymien osoitti aiheuttama aktiivisuus enintään 172% ja 123%, jos GSTt ja 145% ja 126%, jos GSTo vastaavasti DL ja DL + DMSO hiirillä verrattuna normaaleihin hiiriin. Curcumin moduloitu aktiivisuus isotsyymien GST kohti normaalia tasoa. GSTa, GSTm ja GSTP stimuloitiin eri tavoin eri annoksilla curcumin hoitoon. Kaikki annokset curcumin kohonnut aktiivisuus GSTa ja GSTP. GSTa nostettiin enintään noin 132%, 155%, 143% ja GSTP enintään noin 247%, 366%, 420% DL + DMSO hiiriä 50, 100 ja 150 mg curcumin /kg vastaavasti. Kuitenkin aktiivisuus GSTm stimuloitui merkittävästi enintään 156%, 106% ja 100 ja 150 mg curcumin /kg vastaavasti. Vähennys aktiivisuus GSTt oli enintään noin 94%, 81% 50 ja 100 mg curcumin /painokilo vastaavasti ja GSTo Jopa noin 75% 50 mg curcumin /kg verrattuna DL + DMSO hiirillä [Kuva 4 (C)] .

vaikutus kurkumiinista mRNA ilmaisun ja entsymaattinen aktiivisuus GR

ilmentyminen GR maksassa DL ja DL + DMSO hiirien säädeltiin enintään noin 58% ja 72% normaalista hiiristä vastaavasti. Curcumin indusoi ilmentymisen GR annoksesta riippuvaisella tavalla. Säätelyn ilmentymisen GR mukaan curcumin on noin 118%, 129%, 134% DL + DMSO hiiriä 50, 100 ja 150 mg curcumin /painokilo vastaavasti [Kuva 5A ja 5B]. Aktiivisuus GR havaittiin vähentynyt DL ja DL + DMSO hiirillä enintään noin 69% ja 70% normaalista hiirillä. Hoito curcumin merkittävästi kohonnut aktiivisuus GR enintään noin 126%, 136%, 109% DL + DMSO hiiriä 50, 100 ja 150 mg curcumin /painokilo vastaavasti [Kuva 5C ja 5D].

Effect of kurkumiinista ilmaisun entsymaattisen aktiivisuuden GR (A) RT-PCR-GR ja β-aktiini (B) densitometrinen skannaus GR normalisoinnin jälkeen, jossa β-aktiini. (C) Erityiset värjäys osoittaa aktiivisuutta GR. (D) densitometrinen skannaus toiminnan bändi GR. Maksa kaikista kuudesta eläimestä kussakin ryhmässä yhdistettiin erikseen ja uuttamisessa käytetty kokonais-RNA ja proteiinit. Data edustaa keskiarvoa ± SEM # Ja * merkitsee merkittävää eroa verrattuna N- ja DL + DMSO vastaavasti ryhmä. Cur on curcumin ja bw on kehon painoa. N, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 ja DLT150 edustaa normaalia, Dalton lymfooma laakerin, Dalton lymfooma kantavien hiirten käsiteltiin DMSO: n ja Dalton lymfooma, joissa hiirissä, joita hoidettiin 50, 100 ja 150 mg curcumin /kg liuotettuna DMSO: hon vastaavasti.

redox tila

redox asema maksassa lymfooman kantavien hiirten mitattiin vähentymisen kannalta verrattuna hapettuneen muodon glutationi (NP-SH /P-SH), kuten redox tila on ovat tärkeä osoitus oksidatiivisen stressin. Aseman havaittiin olevan 51% ja 58% normaalien hiirten DL ja DL + DMSO hiirten. Kaikki kolme annosta nostetaan redox tilan merkittävästi, mikä oli enintään noin 131%, 159% ja 124% DL + DMSO hiirillä 50, 100 ja 150 mg curcumin /kg vastaavasti [Kuvio 6].

Effect kurkumiinin solu- redox tilan ilmaiseminen NP-SH /P-SH. Maksa kaikista kuudesta eläimestä kussakin ryhmässä yhdistettiin erikseen ja uuttamisessa käytetty koko proteiineja. Data edustaa keskiarvoa ± SEM # Ja * merkitsee merkittävää eroa verrattuna N- ja DL + DMSO vastaavasti ryhmä. Cur on curcumin ja bw on kehon painoa. N, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 ja DLT150 edustaa normaalia, Dalton lymfooma laakerin, Dalton lymfooma kantavien hiirten käsiteltiin DMSO: n ja Dalton lymfooma, joissa hiirissä, joita hoidettiin 50, 100 ja 150 mg curcumin /kg liuotettuna DMSO: hon vastaavasti.

vaikutus kurkumiinista mRNA ilmaisun ja entsymaattinen aktiivisuus NQO1

lymfooma hiirille oli vähentynyt ilmentyminen vaiheen II antioksidantti-entsyymin NQO1. Ilmaisu oli alaspäin säännelty DL ja DL + DMSO hiirillä enintään noin 66% ja 77% normaalista hiirillä. Curcumin hoito merkitsevästi ylös säädellään ilmaisu kohti normaalia tasoa (95% normaalista) kanssa annoksella 100 mg curcumin /painokilo. Lisääntynyt ilmentyminen NQO1 mukaan curcumin oli noin 104% ja 123% DL + DMSO-hiiriä 50 ja 100 mg curcumin /kg vastaavasti [kuvio 7A ja 7B]. Aktiivisuus NQO1, havaita aktiivisuus geelillä määritys seuraa vaihtelua mallia sen ilmaisua. Se havaittiin vähentynyt DL ja DL + DMSO hiirillä enintään noin 52% ja 51% normaalien hiirten vastaavasti. Curcumin käsittelemällä 100 ja 150 mg /kg kohonnut aktiivisuus NQO1 merkittävästi, mikä oli noin Jopa 134% ja 115% DL + DMSO hiirten [Kuva 7C ​​ja 7D].

Effect of kurkumiinista mRNA ilme entsymaattista aktiivisuutta NQO1 (A) RT-PCR NQO1 ja β-aktiini (B) densitometrinen skannaus NQO1 mRNA normalisoinnin jälkeen, jossa β-aktiini. (C) Erityiset värjäys osoittaa aktiivisuutta NQO1. (D) densitometrinen skannaus toiminnan bändi NQO1. Maksa kaikista kuudesta eläimestä kussakin ryhmässä yhdistettiin erikseen ja uuttamisessa käytetty kokonais-RNA ja proteiinit. Data edustaa keskiarvoa ± SEM # Ja * merkitsee merkittävää eroa verrattuna N- ja DL + DMSO vastaavasti ryhmä. Cur on curcumin ja bw on kehon painoa. N, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 ja DLT150 edustaa normaalia, Dalton lymfooma laakerin, Dalton lymfooma kantavien hiirten käsiteltiin DMSO: n ja Dalton lymfooma, joissa hiirissä, joita hoidettiin 50, 100 ja 150 mg curcumin /kg liuotettuna DMSO: hon vastaavasti.

vaikutus kurkumiinista mRNA: n ilmentymisen ja proteiinin taso p53

p53 ollessa labiilin proteiinin, hajoaa nopeasti alle oksidatiivista stressiä. MRNA: n ilmentyminen Trp53 (p53-geeni), havaittiin olevan säädeltiin DL ja DL + DMSO hiirillä enintään noin 43% ja 40% normaalista hiirillä. Kaikki kolme annosta curcumin indusoima Trp53 merkittävästi. Ylös sääntely Trp53 ilmaisun oli noin Jopa 200%, 240% ja 223% DL + DMSO hiiriä 50, 100 ja 150 mg curcumin /painokilo vastaavasti [Kuva 8A ja 8B]. Taso tuumorisuppressorin p53-proteiinin seuraa samanlainen vaihtelu mallia sen ilmaisua. Proteiini taso aleni tapauksessa DL ja DL + DMSO hiirillä enintään noin 47% ja 50% normaalista hiirten.