Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

johdolla ja sponsorointi National Cancer Institute, raportoimme ensimmäisen ennalta kliininen tutkimus Comparative Oncology Trials Consortium (COTC). COTC on uusi infrastruktuuri integroida syöpiä, jotka luonnostaan ​​kehittyä koirien kohdalla kehityskulku uusien ihmisten lääkkeitä. Kokeilut on suunniteltu kysymyksiä haastava tavanomaisissa prekliinisissä malleissa ja varhaisessa vaiheessa ihmisten tutkimuksissa. Suuri eläin spontaani syövän malleja voi olla arvokas lisä onnistunut tutkimuksia syövän biologian ja uusien terapeuttisten huumeiden, kuvantaminen ja laitteiden kehittämiseen.

Menetelmät /Principal Havainnot

Tämän vakiintunut infrastruktuuri, ensimmäinen oikeudenkäynti ja COTC (COTC001) arvioitiin kohdennetun AAV-faagivektoriin tuottaa tuumorinekroositekijä (RGD-A-

TNF

) ja aV-integriinien kasvaimen endoteelin. Trial edistystä ja tietojen tarkasteli samanaikaisesti käyttäen www-pohjainen sähköinen raportointijärjestelmä kehitetty konsortion. Annoksensuurentamistutkimuksessa kohortit 3 koiraa (n = 24) määritetään optimaalinen turvallisen annoksen (5 x 10

12 transdusoivaa yksikköä laskimoon) RGD-A-

TNF

. Tämä osoitti valikoivaa kohdistamista kasvaimeen liittyvän verisuoniston ja säästäviä normaalien kudosten arvioidaan sarja- biopsia sekä kasvaimen ja normaalin kudoksen. Toistuvat annostelu kohortin 14 koiraa, on määritelty optimaalinen annos oli hyvin siedetty ja aiheutti objektiivinen kasvaimen taantumiseen kahdella koiralla (14%), stabiili tauti kuudessa (43%), ja taudin etenemiseen kuusi (43%) välityksellä Response arviointiperusteet kiinteitä kasvaimia (RECIST).

Johtopäätökset /merkitys

ensimmäinen tutkimus COTC on osoittanut hyödyllisyys ja tehokkuus vakiintunut infrastruktuuri ilmoittaa uusien syöpälääkkeiden suurissa eläin luonnossa esiintyvä syöpä malleja. Prekliininen arviointi RGD-A-

TNF

tässä verkossa saatu arvokasta ja tarpeellista tietoa loppuun suunnittelun first-in-man tutkimuksissa.

Citation: Paoloni MC, Tandle A, Mazcko C, Hanna E, Kachala S, LeBlanc A, et al. (2009) Käynnistetään Novel Prekliiniset Infrastructure: Comparative Oncology Trials Consortium suunnatun terapeuttinen kohdistaminen TNFa Cancer verisuonistossa. PLoS ONE 4 (3): e4972. doi: 10,1371 /journal.pone.0004972

Editor: Alfred Lewin, University of Florida, Yhdysvallat

vastaanotettu: 10 joulukuu 2008; Hyväksytty: 19 helmikuu 2009; Julkaistu: 30 maaliskuu 2009

Tämä on avoin-yhteys artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Public Domain ilmoitus, jonka mukaan, kun se on saatettu julkisia, tämä työ saa vapaasti kopioida, levittää, lähetetään, modifioitu, rakennettu, tai muuten käyttää kuka tahansa laillista tarkoitusta.

Rahoitus: Haluamme kiittää Center for Cancer Research, National Cancer Institute, NIH niiden tuesta tätä työtä. Tämä tutkimus oli mahdollista osittain Intramural tutkimusohjelma NIH, National Cancer Institute, Center for Cancer Research. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

nykyinen syöpälääkkeen kehityskulku liittyy lineaarinen kehitys, johon sisältyy arviointi tehoa pieneläinten ja turvallisuuden arviointiin ei-kasvain laakeri suuria eläimiä, jotka johtavat first-in-man kliinisissä tutkimuksissa. Monista syistä tämän prekliinisen kehitysprosessi on arvosteltu sen kyvyttömyys tunnistaa lääkkeitä, jotka ovat todennäköisimmin onnistuu ihmisen klinikalla. Esimerkiksi käyttämällä yhden lajin (eli jyrsijät) määritellä tehoa ja toisella lajilla määritellä turvallisuuden (eli koira) ei arvioida terapeuttisen indeksin kunnes aine todella siirtyy alkuvaiheessa ihmisillä tehdyt tutkimukset. Biologinen monimutkaisuus ja heterogeenisuus syöpä ei ole riittävän hyvin vastaa luku jyrsijöiden kasvainmuotoja yleisesti käytetty prekliinisen tehon seulonta [1]. Monimutkaiset suhteet lääkealtistuksen ja tarvittavat biologisia muutoksia kasvainkudoksessa tai kiertävä tila ei ole helppo mallinnettu hiiren syöpiin. Tämän seurauksena monet kysymykset jäävät vaille vastausta ennen alkuvaiheessa ihmisillä tehdyt tutkimukset. Samankaltaisia ​​tai kiireellisempiä kysymyksiä jatkuvat seuraavat varhaisessa vaiheessa ihmisten tutkimuksissa, jotka voivat merkittävästi rajoittaa optimaalinen suunnittelu myöhemmässä vaiheessa ihmisillä tehdyistä tutkimuksista.

Spontaani syöpiä kumppani (PET) koirilla tarjoavat ainutlaatuisen, ja suurelta osin hyödyntämättä translaatiotutkimusta tilaisuus syöpä kuvantamisen, laite ja lääkekehityksen [2], [3]. Tämä opintolinjan, joka tunnetaan vertaileva syöpätautien, on pitkä historia etenee kirurgisten tekniikoiden, kuten raajan sparingin lapsipotilaille sarkooma potilaille, valaisemaan hypertermia ja radiobiologian, ja arvioitaessa uusia syöpälääkkeitä ja toteuttamisvälineissä, kuten hengitysteitse sytokiinien ja kemoterapia strategiat [4], [5], [6], [7], [8], [9]. Piirteet ja käyttö syöpien lemmikkikoirilla jotka saattavat edistää ymmärrystä syövän synnyssä, etenemistä ja hoito on myös äskettäin arvioitu [2]. Mahdollisuus arvioida lääkeainepitoisuuksiin, myrkyllisyys ja tehokkuus (terapeuttinen indeksi) yhdessä suuren eläinmalli on erittäin informatiivinen. Nämä syövät tarkemmin kerrata heterogeenisyys ja monimutkaisuus ihmisen maligniteettien ja sen seurauksena liittyvät ongelmat toistumisen, kestävyys ja etäpesäke. Koko koiran ja kasvaimia näillä koirilla tekevät arvion kiinnekohta päätepisteitä kuten farmakodynaamiset muutokset kasvaimeen tai toissijainen kudoksen täysin mahdollista. Niinpä nämä mallit soveltuvat hyvin integroida olemassa oleviin mallin lähestymistapoja ja optimoida lääkekehityksen polku.

Jotta hyödyntää mallin tarjoamia mahdollisuuksia koirien, jotka ovat luonnollisesti kehittyneet syöpä, National Cancer Institute center for Cancer Research-Comparative Oncology Program (CCR-COP) on hiljattain kehittänyt infrastruktuurin, joka pystyy monikeskustutkimus maanlaajuisesti tutkimuksissa kasvain koirilla käyttäen syöpälääkkeet, jotka ovat kehitteillä ihmispotilaille. Kutsutaan Comparative Oncology Trials Consortium (COTC), tämä infrastruktuuri sisältää 18 state-of-the-art akateemisen eläinlääkärin onkologian keskuksia. COTC tutkimuksissa hoidetaan keskitetysti ja suunniteltu sisältämään useita päätepisteitä, jotka määrittelevät turvallisuus, biologinen ja kliininen aktiivisuus uusien käsittelyaineiden.

Ensimmäinen valmistunut oikeudenkäynti COTC on esimerkki farmakodynaamisesti keskittynyt tutkimus ilmoittaa suoraan seuraavaan vaihe päätökset kliinisessä kehittäminen adenoliitännäisvirus faagi [10], [11], [12] toimittamisesta tuumorinekroositekijä-α (RGD-A-

TNF

) ja aV-integriinien kasvaimen ja kasvaimeen liittyvien verisuonten endoteeliin. Kehittäminen angiogeneesin ja verisuonten kohdistettujen aineita on ollut monimutkainen ja epäsuhteessa tuloksia tutkimuksista on kasvain ja ihmissyöpäpotilaat [13], [14]. On kohtuullista, että jotkut ominaisuudet vertailevan onkologian lähestymistapa voi olla erityisen paljon tietoa arvioinnissa sekä anti-angiogeenisten tekijöiden ja geenisiirtoja toimitustavat [15]. Näin ollen ensimmäinen oikeudenkäynti COTC on arvioinut tämän ligandin kohdistaminen suoraan geeninkuljetussysteemiä [10], [11], [12], [16], [17], [18]. Kautta vaiheittainen tutkimus suunnittelu osoitimme turvallisuutta, kasvain-selektiivinen ihmiskaupan, ja kasvaimen aktiivisuus RGD-A-

TNF

kasvaimen verisuonten ja kohdennettua ilmentymistä TNFa asiaa kliinisessä ympäristössä. Nämä tulokset antavat vahvan prekliinisen perustan first-in-man tutkimuksissa ihmissyöpäpotilaat. Laajemmassa yhteydessä, tässä raportissa ensimmäisen kliinisen tutkimuksen päässä COTC, viittaa siihen, että olemassa oleva populaatio koirien spontaaneja kasvaimia ja tämä kehittynyt kliinisen tutkimuksen infrastruktuuri voi toimia tehokkaana välivaiheena kääntämiseen uusien syöpähoitojen prekliinisistä malleja ihmiselle.

tulokset

annoksensuurentamistutkimuksessa ja kerta-annoksen turvallisuus kokeiluvaiheen

Modified Fibonacci sääntöjä annoksen suurentaminen seurattiin viiden annoksen kohortteja (n = 3) kunkin vastaanottavan yksi anto RGD-A-

TNF

(kuvio 1A, taulukko 1). Kaikki koirat kävivät esikäsittely koepala kasvaimen ja normaaleissa kudoksissa (kuvio 1 B). Koirat viiden ensimmäisen ikäluokat (n = 18) sai RGD-A-

TNF

seurasi lopullinen resektioleikkaukselle niiden kasvainten neljä päivää myöhemmin (kasvain ja hallita normaaleissa kudoksissa kerättiin jälkikäsittelyä); ylimääräinen kuudes kohortin (n = 6) sai RGD-A-

TNF

ja tehtiin lopullinen leikkaus samana päivänä (4-6 tunnin kuluessa laskimoon) (kuvio 1 B). Klo ilmoittautuminen annoksensuurentamistutkimuksessa tutkimuksessa vaiheen tutkimuksessa oli 9 ensisijainen luusarkoomien ja 15 pehmytkudossarkoomien (suuontelon 3; aksiaalinen tai appendicular 12) (taulukko 1). Ikä (vaihteluväli 2,7-14,1 vuotta; mediaani 9,7 vuotta), paino (vaihteluväli 15-61,2 kg; mediaani 34,4 kg) ja rodun (11 sekarotuinen ja 13 puhdasrotuinen) koirista joka tuli tämä kokeiluvaiheessa kirjattiin.

(A) Tämä tutkimus rakenteeltaan annoksensuurentamistutkimuksessa käyttäen modifioitua Fibonacci suunnittelu hallita annoksen suurentaminen kohti MTD. (B) Kolme koiraa otettiin lähtö- annoksen kohortti, ja kolme koiraa kohti kohortissa otettiin siellä jälkeen kunkin viiden annostasot suunnitteilla. Koiria oli määrä saada RGD-A-

TNF

päivänä nolla ja tehdään lopullisia tuumoriresektion 4 päivää myöhemmin. Tämä ensimmäinen 4-päivän ryhmä suunniteltiin (i) voidaan arvioida vektorin lokalisointi ja TNFa ilmaisun kasvaimiin ja (ii) varmistaa, että alustava seurannan aikataulu RGD-A-

TNF

hallinnon yhden viikon annosväliä oli biologisesti sopiva. Sen jälkeen ryhmä koiria (n = 18) hoidettiin mukaan tähän aikatauluun, ylimääräinen ryhmä oli kirjoilla vastaavilla kriteereillä vastaanottaa RGD-A-

TNF

samana päivänä lopullisten kirurginen resektio. Tässä alaryhmässä koirien (n = 6), Leikkaus suoritettiin 4-6 tuntia antamisen RGD-A-

TNF,

tämän saman päivän aikana kokeellinen osajoukko suunniteltiin luomaan akuutti selektiivisyys RGD-A –

TNF

kaupan ja sen kasvaimen verisuonten lokalisoinnin.

Kaikki tiedot eivät raportoineet samanaikaiset sähköistä raportointia siten, että haittavaikutuksia tasaisesti valvotaan ja hallitaan tällä monikeskustutkimus COTC tutkimusjärjestelyissä. Single-annokset RGD-A-

TNF

olivat suurimmaksi osaksi hyvin siedetty kaikilla annoksensuurentamistutkimuksessa kohortteja suunnitellut tämän vaiheen tutkimuksesta. Ainoa merkittävä haittavaikutus havaittiin tapahtui laskimoinfuusiona RGD-A-

TNF

suurimman annoksen kohortti (10

13 TU), jossa yksi annosta rajoittavaa toksisuutta (DLT) Todettiin ( koira # 1.18, 3. asteen yliherkkyysreaktio); tämä tapahtuma (pahoinvointi, takykardia ja hypotensio) oli ohimeneviä ja minimaalisella tukihoitoon. Kolme uutta koiria tuli tämä annos kohortin ilman muita toksisuus. Ei maksimaalisesti siedetty annos (MTD) oli saavutettu, sillä suurin annos ei aiheuta annosta rajoittavaa toksisuutta. Ei ollut kliinisesti merkittäviä neurologisia, sydämen, hengityselinten, ruuansulatuskanavan, munuaisten tai hematologista toksisuutta liittyvät hoitoon koiraa tässä vaiheessa tutkimuksen. Lisäksi ei ollut viivästyksiä haavan paranemista (leikkaushaavaan) havaitaan, tai kuumeinen jaksot liittyvät yhden annoksen RGD-A-

TNF

Nämä tiedot viittaavat siihen, että RGD-A-

TNF

oli turvallinen laskimoon annetun kerta-annoksen RGD-A-

TNF

jopa 10

13 TU. Koska mitään MTD saavutettiin, on mahdollista, että suuremmat kerta-annoksina RGD-A-

TNF

voidaan turvallisesti antaa.

Ihmiskauppa kasvaimen verisuonten endoteelin ja kohdennettuja TNFa toimitus

Voit selvittää, RGD-A-

TNF

salakuljetetaan kasvain vs. normaaleissa kudoksissa, analysoimme esikäsittely ja jälkikäsittely (4-6 tunnin kuluttua ja sen jälkeen 4 päivää) koepaloja kasvaimen ja normaaleissa kudoksissa ( eli suun limakalvojen, ihon ja lihasten) kerta-annoksen jälkeen on RGD-A-

TNF

by dual-värin immunofluoresenssilla (IF) värjäytymistä faagin (Fig. 2A, B). Värjäysrintamaan kaikki koepalojen pisteytettiin positiivinen tai negatiivinen, kuten on kuvattu (Methods). Clear kolokalisaation RGD-A-

TNF

hiukkasia havaittiin ainoastaan ​​kasvain verisuonten endoteelin kasvainbiopsioissa, mutta ei verisuonissa normaaleissa kudoksissa, jo 4-6 tunnin kuluttua altistuksesta (kuvio . 2A) ja 4 päivän ajan käsittelyn jälkeen (kuvio. 2B). Spesifisyys IF määrityksen tukivat puute värjäytymistä nähdään esikäsittelyn koepaloja millään koirilla (Fig. 2A, B). Toissijaisesti, ei ollut kasvainsolun RGD-A-

TNF

värjäystä selvää, vain kasvaimen verisuonten endoteelin värjäytymistä. Havaitsimme heterogeeninen RGD-A-

TNF

värjäyskuviot eri osissa samasta Tuumorinäytteiden ja eri koepaloja saman kasvaimia. Tämä kuvastaa heterogeenisyys kasvaimen verisuoniston biologian spontaani syöpä, joka johti differentiaaligeometriaan ottoa RGD-A-

TNF

kasvainkudoksissa. Johdonmukainen kaupan RGD-A-

TNF

kasvaimen verisuonten havaittiin kaksi ikäluokat saivat suurimman annoksen; Erityisesti, kaksi kolmesta koiraa (67%) kohortin, jotka saivat 5 x 10

12 TU ja viisi kuudesta koiraa (83%) kohortin jotka saivat 1 x 10

13 TU. Ei ollut mitään näkyvää yhdistyksen välillä kasvainhistologiaa ja kasvaimen verisuonten kohdistamista.

(A, B) RGD-A-

TNF

valikoivasti kohdistettu kasvaimeen liittyvä verisuonistossa (nuolet) ja oli poissa normaaleista kudoksista 4-6 tuntia (A) ja 4 päivää (B). Suurennos, 400-kertainen; mittakaavajana, 100 uM. Esikäsittely kasvainbiopsioissa, jälkikäsittelyä kasvainbiopsioissa, ja jälkikäsittely normaalien kudosten koirilla, jotka saivat kerta-annoksen RGD-A-

TNF

double-värjättiin anti-CD31 spesifistä vasta-ainetta plus anti-bakteriofagin spesifistä vasta-ainetta. Detection suoritettiin Alexa Fluor 488 (vihreä, verisuonet), Alexa Fluor 594 (punainen, AAVP) ja DAPI (sininen, solutumien). (C) Esikäsittely kasvainbiopsioissa (päivä 0), jälkikäsittely normaalia koepaloja (päivä 4) ja jälkikäsittely kasvainbiopsioissa (päivä 4) käytettiin uuttamalla kokonais-RNA. RT-PCR suoritettiin mittaamiseksi transkriptipitoisuuksissa ihmisen TNFa neljänä kappaleena. Y-akseli edustaa suhteellista TNFa ekspressiotasot jälkeisessä hoidossa normaali koepaloja ja jälkikäsittely kasvainbiopsioissa verrattuna esikäsittely kasvainbiopsioissa normalisoinnin jälkeen GAPDH lauseke (Kruskal-Wallisin testi, p = 0,0107). Kaikki tiedot esitetään keskiarvoina ± standardipoikkeamat. (D-F) läsnäolo RGD-A-

TNF

arvioitiin hoidon jälkeen (päivä 28) ruumiinavauksessa näytteet kasvain (D) ja normaaleissa kudoksissa (E, F). Kudokset värjättiin RGD-A-

TNF

edellä kuvatulla. RGD-A-

TNF

valikoivasti kohdistettu kasvaimeen liittyvää verisuonistossa jälkeisessä hoidossa kasvaimen näytettä (nuolet). Sen sijaan vektori ei ollut ilmeistä esikäsittelyn kasvainnäytteestä tai hoidon jälkeen normaalia ohjaus ruumiinavauksessa näytteiden (kuten keuhko-, maksa-, perna tai suolisto) jälkeen sarja hallinnot RGD-A-

TNF

.

Todettuaan, että RGD-A-

TNF

valikoivasti paikantuu sisällä kasvaimen verisuonten endoteelin systeemisesti me seuraavaksi arvioida, onko vektori lokalisointi johtaisi suunnattu TNFa geeniekspression. Kolme neljästä koiraa testataan hTNFa geeniekspression osoitti merkitsevästi kohonneeseen hTNFa jälkeisessä hoidossa kasvainbiopsioissa (päivä 4) verrattuna esikäsittely kasvainbiopsioissa (Kruskal-Wallisin testi p = 0,0107) kerta-annoksen RGD- A-

TNF

(Fig. 2C). Sen sijaan, jälkikäsittely koepaloja normaalista kudoksesta ei näkynyt havaittavissa kasvua tasoilla hTNFa verrattuna esikäsittelyyn kasvainbiopsioissa (Kruskal-Wallisin testi, p 0,05).

Multi-annoksen vaiheessa tutkimuksessa

monen annoksen vaiheen tutkimuksen, kohortin koirien (n = 18) oli kirjoilla ja sarjoittain käsiteltiin kiinteällä systeemistä annosta (5 x 10

12 TU viikossa) RGD-A-

TNF

(kuva 3). Kasvainbiopsioissa saatiin esikäsittely (katsotaan päivä nolla) ja päivinä 7, 28 ja 56 jälkikäsittely (kuvio 3). Klo ilmoittautuminen monen annoksen vaiheen tutkimuksessa, patologinen kasvaintyypeille (taulukko 2) mukana pehmytkudossarkoomien (n = 8), pahanlaatuinen ihosyövän (n = 5), osteosarkooma (n = 1), multilobular osteochondrosarcoma (n = 1 ), hemangiosarkooma (n = 1), lymfooma (n = 1), ja okasolusyöpä (n = 1). Kaikki kasvaimet sijaitsivat syrjäisillä sivustoja, jotka olivat saatavilla koepala; kuitenkin, samanaikainen etäpesäkkeitä olemassa kaksi koiraa. Ikä (vaihteluväli 6-14,8vuotta; mediaani 10,2 vuotta), paino (vaihteluväli 11-55 kg; mediaani 33,3 kg) ja rodun (7 sekarotuinen ja 11 puhdasrotuinen) koirista joka tuli tämä kokeiluvaiheessa rekisteröitiin (taulukko 2).

tutkimus suunniteltiin avoimessa, usean kiinteän annoksen tutkimuksessa (i) laatia toteutettavuus ja (ii) tunnistaa krooninen ja /tai kumulatiivinen toksisuutta toistuvasti annettuna RGD-A-

TNF

. Koirat saivat viikoittain annoksia (5 x 10

12 TU suonensisäisesti) RGD-A-

TNF

. Syövän vastaista aktiivisuutta tämän aineen arvioitiin käyttäen RECIST kriteerit. Kohtelu Potilaspopulaatiosta koiria, jotka saivat vähintään neljä viikoittaista annosta (toisin sanoen yhden syklin 1). Tämä koostui 14 koiraa. Koirat saivat saivat lisähoitoa seuraavilla jaksoilla, jos on todisteita joko stabiili tauti tai tuumorivasteita. Kasvaimen mittaukset kirjattiin kahden viikon välein koko restaging 28 päivän välein.

Serial, useita kiinteitä annoksia (yhteensä, 78.25 annoksilla tarkoittaa 4,34 annosten /koira, alue, 1-8 annosta /koira) annettiin. Neljätoista koirat tässä kohortissa (78%) suorittanut vähintään yhden täyden jakson aikana (määritellään neljä viikoittaista annosta) hoidon ja sisällytettiin hoitoa saanut väestö arviointiin kasvaimen vasteen. Death sairauden etenemiseen (n = 2) tai tutkimuksen peruuttaa omistajan pyynnöstä (n = 2) oli yleisin syy koirien epäonnistua loppuun hoitosyklin 1. Kolme 14 koiraa (21%) suorittanut toinen täysi sykli ( eli kahdeksan viikoittaiset annokset) hoidon.

Samanlainen annoksensuurentamistutkimuksessa vaiheen tutkimuksessa kaikki tiedot on sähköisesti raportoidaan muodossa tämän COTC monikeskustutkimus muotoilu. Lisäksi sama kliininen arviointi, kuvantamis- ja laboratoriotutkimukset saatiin ennen ja annon jälkeen kunkin viikoittaisen annoksen RGD-A-

TNF.

Koirilla, jotka saivat toistuvia viikoittaisia ​​annoksia, yleisin myrkyllisyys (n = 9) oli 3. asteen yliherkkyysreaktio aikana laskimoon; kuusi koiraa ulos 14 (42%) oli enemmän kuin yksi kliininen episodi (ts, oksentelu, hypotensio, ja takykardia), jotka eivät estäneet esilääkityksen (famotidiini, difenhydramiini ja deksametasoni). Kuitenkin kaikki nämä haittatapahtumat olivat ohimeneviä ja ratkaista seuraava tilapäinen tauko ( 30 min) hallinnon ja minimaalinen tukevaa hoitoa, jonka jälkeen hitaampi infuusiona nopeudella (100 ml /tunti) jatkettiin ilman komplikaatioita. Ei ollut mitään näkyvää pitkäaikaisia ​​kliinisistä seuraamuksista näihin tapahtumiin. Asteen 3 tai 4 ei-neutropeenisia kuumetta havaittiin viisi koiraa (36%) tutkimuksessa (kolme huomattava infuusion aikana ja kaksi ei-anto päivää). Kaikki kuume jaksot ratkaista oireenmukaista hoitoa. Yhdessä tapauksessa (koira # 2.2) esittelyyn 3. asteen kuolion (avoin haava ja salaojitus tuumoripaikkaan) hoidon päivänä 19; tämä sama koira oli 18% vähennys kasvaimen koon tuolloin (määritelty RECIST vakaiksi tauti). Oli kolme muuta tapahtumaa Tuntematon myöntämiseen, mukaan lukien luokan 2 ihoreaktioita liittyy demodectic kapi (Karvatuppipunkit

canis

), arvosana 1 kammioarytmian, ja ensimmäisen tapahtuma-kuolema tuntemattomasta syystä kahden päivän kuluttua viides annos RGD-A-

TNF

. Ensimmäisessä-tapahtuma-kuolema tapauksessa haittavaikutuksia ei havaittu (koira # 2.14) viikon aikana ennen tätä tapahtumaa. Ensimmäinen tapahtuma kuoleman koirilla, joilla on edennyt syöpä (ei toisin varhaisessa vaiheessa ihmisten tutkimuksissa) ei ole harvinaista, ja voi liittyä taudin etenemiseen, varsinkin kun havaitaan yksittäisiä tapahtumia. Muita merkittäviä haittavaikutuksia luettuna kliininen tai laboratorio ilmoittaa neurologisten, sydän-, hengitys-, maha, munuaisten tai hematologisen myrkyllisyyden liittyvä sarja hoidon RGD-A-

TNF

nähtiin. Kolme koiraa ulos 14 (21%) lopetettiin johtuen etenevä sairaus ja tehtiin nopea (lämmin) ruumiinavaus; patologinen arviointi sisäelimissä (aivot, sydän, keuhkot, maksa, perna, maha-suolikanavan, munuaisten, ja imusolmukkeiden) ei havaittu mitään hoitoon liittyviä histologista poikkeavuuksia näissä elimissä; tukevia tietoja suhteellinen turvallisuus ja kasvaimen kohdentamiseen RGD-A-

TNF

. Tietyissä lämmin ruumiinavauksessa tapauksissa (n = 2), kaksivärinen IF suoritettiin ja kasvainspesifisiä kaupan RGD-A-

TNF

nähtiin (Fig. 2D); no RGD-A-

TNF

havaittiin tutkittiin normaaleissa kudoksissa (keuhko, maksa, perna, ja maha-suolikanavan) (Fig. 2E, F).

hoito-liittyvä tavoite vastaus

hoitoon saivat väestöstä 14 koiraa, käytimme sarja kasvain mittauspyyntöjä aktiivisuuden RGD-A-

TNF

mukaan Response arviointiperusteet kiinteitä kasvaimia (RECIST) (taulukko 2 ). Jälleen neljä koiraa, joka ei ole täydellinen yhden syklin (4 viikkoa) hoidon jätettiin arvioimiseksi vasteen. Arvioitavissa koirat mukana ne kasvaimia ei voida tutkia kirurgisen poiston, kasvaimia, joille aikaisempi hoito oli epäonnistunut, ja kasvainten mikä standardi-of-care hoito hylättiin. Kaksi eläintä (Koirat # 2.11 ja # 2,16) oli RECIST määritelty osittainen vaste (PR) (14%, 95%: n luottamusväli 2-43%), yksi päivä 28 ja toinen päivä 56 (taulukko 2). Kuusi koiraa oli stabiili tauti (SD) (43%, 95%: n luottamusväli 18-71%), mukaan lukien koiran 18% tuumorin koon pienentäminen, ja kuusi koiraa oli taudin etenemiseen (PD) (43%, 95%: n luottamusväli 18-71%) yhden jakson jälkeen hoidon. Kahden hoitosyklin, kaksi koiraa, joilla on aikaisemmin määritelty stabiili tauti 28. päivänä edennyt (taulukko 2). Kun kyseessä on merkittävä kliininen PR on kuvattu havainnollistaa suuruus sarja- terapeuttista vaikutusta RGD-A-

TNF

koiran, joilla oli suuri pehmytkudoksen sarkooma (Fig. 4). Tämä koira (# 2.11) olivat saaneet ≥85% pienempi mitä aikaisemmin leikkaushoitoon tauti. Tämän vastauksen 2 cm jäljellä vaurio resektoitiin tuloksena patologinen tarkastelu paljastaa mitään toteuttamiskelpoisia kasvain. Nämä tulokset tukevat aikaisempia tutkimuksia turvallisuuden arviointiin ja toimintaa tämän strategian kasvain jyrsijöiden [10], [19].

suuri ensisijainen pehmytkudossarkoomaa kupeessa koira # 2.11 näkyy on mahdollinen laajuus kasvaimen vasteen. Ennen hoitoa (päivä 0), kasvain mitattuna 12,3 cm pisimpään halkaisijaltaan. Päivänä 28, sen jälkeen kun 4 viikoittain infuusiot RGD-A-

TNF

, kasvain mitattiin 8,2 cm pisimpään halkaisija (33% regressio) ja RECIST perustuva osittainen vaste (PR). Päivänä 56, kun yhteensä 8 viikoittaista systeemisen infuusiot RGD-A-

TNF

, kasvain mitattuna 1,85 cm pisimpään halkaisija ennen resektiota. Siksi tämä vastaus rinnastaa 85% regressio lähtötilanteesta ja jatkuvan kliinisen PR. Kun kirurginen resektio jäljellä vaurio, ei elinkelpoinen kasvain löytyi ja patologinen täydellinen vaste määritettiin.

RGD-A-

TNF

suunnattu immuunivaste saaneilla koirilla

Analysoimme esikäsittelyn ja jälkikäsittelyn seeruminäytteistä kerta-annoksen ja sarja monen annoksen tutkimuksessa koirilla mitata anti-AAVP vasta-aineita. Yhdessä havaitsimme 1,8-2,0 kertaiseksi kasvaa anti-AAVP vasta-ainetiitterit hoidon jälkeen verrattuna hoitoa edeltävälle tasolle. Emme kuitenkaan ole noudattanut lisäkorotukset anti-AAVP vasta ajan myötä sarja monen annoksen hoidettavan koiran (päivä 7 vs. päivä 28 vs. päivä 56).

Keskustelu

mahdollisuus sisällyttää syöpiä, jotka luonnostaan ​​kehittyä koirien sisällä kehityskulku ihmisen uuden syöpälääkkeen edelleen toteutuu perustava tutkimus COTC. Tässä raportissa kuvaamme täsmäannostelujärjestelmiä TNFa kanssa AAVP geeninkuljetussysteemiä kasvaimen verisuonten koirien kanssa spontaani syöpä. Valikoiva AAVP itseohjautuva, kasvaimeen liittyvät verisuonten ilmentymä TNFa, systeeminen turvallisuus, ja RECIST perustuva tavoite vasteita (sama laji terapeuttinen indeksi). Nämä suuret eläin spontaanit syövän mallit soveltuvat hyvin tiedottamaan prekliinisen kliiniseen siirtymiä onnistuminen edellyttää lääkekehityksen ja kohteliaisuus käyttäen sekä nykyisiä jyrsijöiden ja ihmisen kliinisiin kokeisiin.

COTC on aktiivinen verkosto akateemisten vertaileva onkologian keskukset, hallitaan keskitetysti NCI: n Comparative Oncology Program. COTC suunnittelee ja toteuttaa kliinisissä tutkimuksissa koirilla, joilla on syöpä, jonka tavoitteena on tarjota tarvittavat translationaalisen tiedot Uusien hoitomuotojen, tekniikoita tai laitteita tulevia syöpäpotilaille. Kokeilut toimeksiantopäivälle COTC jäsenlaitoksista, joka tällä hetkellä kuuluu kahdeksantoista eläinlääkärin opetussairaaloissa eri puolilla Yhdysvaltoja. Kuten edellä on kuvattu, tutkimuksista, jotka COTC voi sisältää useita biologisia ja kliinisten päätepisteiden, jotka voidaan integroida suoraan suunnitteluun ihmisen vaiheen I ja II kliinisissä kokeissa. Vaikka ei mukana tutkimuksessa esitetään tässä, kiinnekohta kuvantamisen strategioita, kuten PET /TT tai dynaaminen MRI, joilla on kyky yhdistää nämä kuvantamisen päätepisteet kasvaimen tai liikkeitä biologiset korvikkeet ovat mahdollisia kautta suunniteltu infrastruktuuri. Tällainen monimutkainen Vastaavaa tutkimukset voidaan seulottu kliinisesti relevantti asetus kautta COTC tutkimuksia, ja niissä toimia mallina arvioida kaikkia osia tämän prosessin myös kudosten kerääminen ja -tekniikoita, ajoitus kuvantamisen ja koepala, ja määritys menetelmiä ennen varhaisessa vaiheessa ihmisen tutkimukset .

nykyisessä tutkimuksessa COTC001, arvioimme sujuvuutta ja rakenne tämän uuden prekliinisen infrastruktuuria. Prosessissa määrittelimme turvallisuutta ja tehoa RGD-A-

TNF

kohdistaminen kasvaimen endoteelin lemmikkikoirilla spontaaniin syöpä. RGD täsmäannostelujärjestelmiä kasvaimen aV-integriinien on kuvattu aiemmin [20], [21] ja tämän suuruinen kohdistaminen oli perusteella RGD-A-

TNF

vektori kehittäminen [11], [19], [22 ]. Aikaisemmin julkaistut työt hiiren ksenograftimalleissa, me kuvattu kohdennettua systeemisessä annostelussa RGD-A

VVP

ilmentävät joko HSVtk tai TNF-α, kasvaimen verisuoniston [12], [22], [23], [ ,,,0],24]. Antituumorivaikutus on nähty Kaposin sarkooma, virtsarakon karsinooma, eturauhassyöpä ja melanooma [12], [22]. Vaikka aktiivisuus RGD-A-

TNF

on osoitettu perinteisissä pieni eläinmalleissa, vertaileva onkologian lähestymistapaa edellyttäen ainutlaatuista tietoa turvallisuudesta RGD-A-

TNF

että ei olisi voitu tavanomaisissa eläinten turvallisuustutkimuksissa. Koska kumpikaan kasvaimen eikä kasvaimen verisuonistossa esiintyy terveille eläimille (ts kasvatettujen tutkimus koirilla), turvallisuusarviointi näillä eläimillä todennäköisesti alle-raportti johtuvia haittavaikutuksia RGD-A-

TNF.

Huumeisiin liittyvä joita raportoitiin meidän väestöstä kasvain koirien olivat todellakin yleensä lieviä ja itsestään. Itse asiassa MTD ei saavutettu yhden annoksen ikäluokat arvioitiin annoksensuurentamistutkimuksessa kuin annosta suurennetaan RGD-A-

TNF

rajoittivat valmistusprosessiin. Useimmat haittavaikutukset, jotka dokumentoitiin nähtiin joko aikana hallinnon tai 2 tunnin kuluessa annettuna koirilla, jotka olivat saaneet toistuvia annoksia RGD-A-

TNF.

Administration liittyviä tapahtumia olivat yliherkkyys kaltaiset reaktiot ja kuume. Koska per-akuutti luonne näistä tapahtumista, on todennäköistä, että tällainen ne liittyvät joko havaita jäänne endotoksiinin hoidossa tuotetta tai tiettyyn vastausta vektori itse. Testaus kaikki tuotanto paljon RGD-A-

TNF

jättänyt paljastaa jäljellä endotoksiini; kuitenkin, ei voi täysin sulkea pois tätä tai muita epäpuhtauksia syynä joidenkin haittatapahtumia.

Serial kasvain ja ohjaus kudoskoepaloihin otetaan ennen ja jälkeen annon RGD-A-

TNF

tarjosi mahdollisuuden korreloida lääkeainealtistukseen tuumorin ja normaalin kudosten kaupan RGD-A-

TNF.

Nämä kokeet validoitu kasvain kohdistamisesta RGD-A-

TNF

asettamisessa koirien kanssa spontaani syöpiä. Havaitsimme vektori lokalisointi kasvaimen verisuonten endoteelin jälkeisessä hoidossa kasvainbiopsioissa otettu 4-6 tuntia ja 4 päivää systeemisen annon RGD-A-

TNF.

Erityisesti oli täydellinen puuttuminen vektorin normaalissa kudosbiopsioista kaikilla käsitellyillä koirilla. Siten RGD-A-

TNF

hyödyntää poikkeavaan sairauteen liittyvien verisuoniston kohdistaa hoito kiinnostava nimenomaan kasvain. Mikä vahvistaa turvallisuutta tämän jakelujärjestelmä ensimmäinen havaittu pienessä eläinmalleissa [22]. Tämän mukaisesti, lämmin ruumiinavauksen koirista lopetettiin sairauden etenemistä osoitti, että RGD-A-

TNF

suunnattu kasvaimen verisuoniston mutta ei verisuonet normaaleissa sisäelimissä. Mikä tärkeintä, emme tarkkailla RGD-A-

TNF

missään kontrollisilkkipaperia analysoidaan, kuten maksassa, kun taas läsnä RGD-A-

TNF

on aiemmin nähty maksassa ja perna jyrsijät hoidettiin RGD-A-

TNF

[22]. Nämä suuret eläimiä koskevat tiedot ovat erityisen arvokkaita, koska riskit ja edut AAVP antostrategioita ihmisen syöpäpotilailla pidetään. Tehokkaan kohdentamisen RGD-A-

TNF

nähtiin annoksina 5 x 10

12-10

13 TU. Annos 5 x 10

12 TU valittiin optimaalinen annos Moniannostutkimuksessa vuoksi vastaavia kaupan, kohdistaminen ja turvallisuutta sekä meidän kyvyttömyys tuottaa 1 x 10

13 TU hyvissä tavalla. Tällä annoksella vektori kohdistaminen johti myös mitattavissa ilmaus ihmisen TNFa. Lisätukea biologista merkitystä havaitun kaupan RGD-A-

TNF

yhdessä kohdennettua ilmaus ihmisen TNFa, saatiin tavoitteena antituumorivaikutuksen havaittiin koirilla, jotka saivat useita viikoittain hoitoja. RECIST-pohjainen vasteita kaksi koiraa kanssa pehmytkudossarkooman ja metastaattinen melanooma; tällainen tavoite tuumorivasteita ovat erityisen germane, koska kaikki koirat tässä tutkimuksessa oli suuri vieviä kasvaimia eivätkä ehdokkaita perinteisen paikallista alueellista hoitoja, kuten leikkaus tai sädehoitoa. Me spekuloida, että havaitut tavoite vasteet olivat seurausta TNFa ilmentymistä, koska mitään aktiivisuutta ei havaittu meidän hiiren malleissa joko ei-kohdennettu AAVP tai kohdistettu-null vektori [22].