Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Eturauhassyövän koodaavat geenit androgeenisäädellyn, Y-kromosomi-koodattu, ja kudosspesifisiä antigeenejä voidaan kaikki yliekspressoitu. Vuonna aikuinen mies isäntä, mutta Korkeimman affiniteetin T-solut kohdistuvat näitä mahdollisia kasvaimenhylkimisantigeenit poistetaan aikana negatiivinen valinta. Sen sijaan naisten kypsän T-soluvalikoima tulisi sisältää runsaasti esiasteita pystyy tunnistamaan näiden luokkien eturauhassyövän antigeenejä ja välittävä antituumorista immuunivasteen.

Menetelmät /Principal Havainnot

Huomaamme että syngeeniset TRAMP-C2 eturauhasadenokarsinoomaa solut spontaanisti hylätään naisten hosts. Adoptiovanhemmat siirto naiivia naisten lymfosyyttien säteilytetty mies isännät ottaen valmiiksi istutettu TRAMP-C2-kasvainsoluja hidastaa kasvaimen kasvua ja välittää kasvaimen hyljinnän joillakin eläimillä. Onnistuminen adoptiovanhemmat siirto riippui siirrosta naisten CD4-T-solujen ja riippumaton läsnäolo CD25-ilmentävien säätelijä-T-solujen siirretyn lymfosyyteissä. Tunnistamme naisten CD4-T-solut stimuloidaan TRAMP-C2 määräävä MHC II rajoittunut vaste Y-kromosomi antigeenin DBY. Lisäksi CD8 T-solujen vasteita naisten lymfosyyttien immunodominantille MHC I-rajoitettu antigeeni SPAS-1 suurenevat huomattavasti verrattuna uroshiirille. Lopuksi emme löydä pahenemista Käänteishyljintä joko syngeenisiä tai vähäinen-antigeeni sopimattomasta allogeenisten lymfosyyttien adoptiovanhemmat siirtomalleja käyttämällä naaras koskevat miesten versus uros koskevat miesten soluihin.

Johtopäätökset /merkitys

Tämä tutkimus osoittaa, että adoptiivisesti siirrettyjen nainen lymfosyyttejä, erityisesti CD4-T-solut, voi ohjata seuraus ennalta istutettu eturauhasen adenokarsinooma soluissa. Tämä lähestymistapa ei pahentua huomattavasti siirre-versus-host vasteet viittaa se voi olla kannattava klinikalla. Edelleen parantaa käytettävissä immuuni ohjelmistoon naaras johdettuja T-solut voivat tarjota erinomaisen altaan eturauhassyövän reaktiivisia T-soluja edelleen augmentation yhdistelmällä joko rokotuksen tai immunosäätelyvaikutuksia saarto strategioita.

Citation: Jenq RR, Curran MA, Goldberg GL, Liu C, Allison JP, van den Brink MRM (2012) Ohjelmisto tehostusta siirrettiin adoptiivisesti Nainen Lymfosyytit Ohjaa kasvu Pre-implantoidut Hiiren Eturauhassyöpä. PLoS ONE 7 (4): e35222. doi: 10,1371 /journal.pone.0035222

Editor: Jonathan Powell, Johns Hopkins University School of Medicine, Yhdysvallat Amerikka

vastaanotettu: 10 tammikuu 2012; Hyväksytty: 13 maaliskuu 2012; Julkaistu: 06 huhtikuu 2012

Copyright: © 2012 Jenq et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat National Institutes of Health palkinnon numeroita R01-HL069929 (MvdB), R01-CA107096 (MvdB), R01-AI080455 (MvdB). Sisältö on ainoastaan ​​vastuulla kirjoittajien ja ei välttämättä edusta näkemyksiä National Institutes of Health. Tuki saatiin myös Yhdysvaltain puolustusministeriön: USAMRAA Award W81XWH-09-1-0294 (MvdB), Säteilyturvakeskuksen Effects Research Foundation (rerf-NIAID) (MvdB), The Experimental Therapeutics Center Memorial Sloan-Kettering Cancer Center rahoittama William H. Goodwin ja rouva Alice Goodwin, lymfooma Foundation, Alexin limonadi seistä, The Geoffrey Beene Cancer Research Center Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, Peter Solomon Fund, tutkimus- ja Therapeutics Program eturauhassyöpä. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

huolimatta parannuksista havaitsemiseen ja hoitoon, eturauhassyöpä (CAP) on toiseksi suurin syy syövän kuoleman miehillä Yhdysvalloissa ja toiseksi yleisin syöpä miehillä maailmanlaajuisesti. Kun paikallinen, korkki on usein parannettavissa kautta ensilinjan hoitomuotoja, kuten eturauhasen. Harvat parantava hoitoja ei ole olemassa, kuitenkin, uusiutuvassa tai metastaattisen korkki. Äskettäin sipuleucel-T, rokote on suunniteltu saamaan aikaan immuunivasteen eturauhasen hapan fosfataasi, on osoitettu parantavan mediaanielossaolosta metastasoituneen kastraatio korkilla [1]. Saarto immuunijärjestelmän säätelymolekyyli CTLA-4 on myös osoittanut kliinisiä lupaus eturauhassyövän [2], [3]. Kehittäminen immuuniterapeuttista interventioiden, jotka kohdistuvat useita näkökohtia immuunijärjestelmän Cap voi tarjota enemmän kliinistä hyötyä ja kestävämpi vastauksia. Kehittäminen immuuniterapeuttista interventioiden, jotka kohdistuvat useita antigeenejä korkki voi tarjota enemmän kliinistä hyötyä ja kestävämpi vastauksia.

Eturauhasen syöpiä todennäköisesti ilmaisevat tähdistö mahdollisten tuumoriantigeenien lukien mutatoitunut self-proteiineja [4], yli-ilmentynyt androgen-reagoiva ja androgeenisäädellyn proteiinit [5], [6], ja ilmennetty eri kudosspesifisiä ja miehen Y-kytkeytyneitä proteiineja [7]. T-solut kehittää miehillä, jotka tunnistavat jonkin näistä androgen liittyviä tai Y-kromosomi antigeenejä korkealla affiniteetilla todennäköisesti poistetaan aikana negatiivisen valinnan kateenkorvassa. Matalan affiniteetin T-solut, jotka paeta keskeinen poistoa puolestaan ​​yleensä anergisoitu kautta perifeerisen toleranssin mekanismien seuranneer antigeenin kohtaamisen. Sitä vastoin kypsän naisten T-solu-ohjelmistoon tulisi sisältää runsaasti taajuus T-solun esiasteet, jotka kykenevät tunnistamaan kaikki edellä luokkien eturauhassyövän antigeenejä.

Allogeeninen Luuytimensiirto (allo-HSCT) on eräs keino muuttaa potilaan immuuni ohjelmistoon ja voittamaan immuuni sääntelymekanismeja. Tiukka kemoterapeuttisia ja /tai säteily ilmastointi ohjelmia ablate isännän verisoluista, joka sitten liuotetaan luuytimen tai käyttöön kantasoluja sopivasta luovuttajalta. Nämä luovuttajan solut laajentaa potilaassa synnyttäen uuden immuunijärjestelmä, joka pystyy tunnistamaan pahanlaatuisia soluja potilaan vieraaksi prosessissa kutsutaan siirteen-versus-kasvain (GVT) vaikutus [8], [9]. GVT voi johtaa täydellisen ja pysyvän remission potilailla, joilla on syöpiä, joita ei muuten voida parantaa kemoterapiaa tai sädehoitoa. Tästä syystä, allo-HSCT käytetään laajasti hoidettaessa erilaisia ​​hematologisia syöpiä.

välittämisen lisäksi toivottavaa GVT vaikutuksia, luovuttajan immuunijärjestelmän solut voivat myös hyökätä isännän normaalin kudosten jolloin siirre-versus-host sairaus (GVHD). GVHD sekä akuuttien ja kroonisten muotojen on merkittävä lähde sairastavuuden ja kuolleisuuden saajien allo-HSCT. Valinta allogeenisen luovuttajan tiedetään mahdollisesti vaikuttaa riski sairastua GVHD; uros vastaanottajat naisten köynnöksen, esimerkiksi olla kohonnut riski sekä akuutteja ja kroonisia GVHD, erityisesti naispuolisia luovuttajia, jotka ovat läpikäyneet useita raskauksia [10] – [12].

Adoptive siirto autologisen

ex vivo

laajennettu kasvaimeen tunkeutuva tai rakennettua kasvain-T-soluja on osoittanut parantavaa potentiaalia sekä metastaattisen melanooman ja krooninen lymfaattisessa leukemia [13]. Nämä lähestymistavat vaativat kuitenkin huomattavaa asiantuntemusta ja usein viikon viljelyn laajentaa T-soluja. Siirtämällä adoptiivisesti syngeneeisissä naiivi nainen lymfosyyttien uroshiirillä valmiiksi istutettu eturauhasen kasvaimia, pyrimme potentiaalin testaamiseksi naisten T-soluvalikoima tunnistamaan ja hyökätä korkki. Parantaakseen laajentaminen adoptiivisesti siirrettyjen solujen sekä vähentää riskiä GVHD ja mahdollisesti lisätä GVT vaikutuksia, käsittelimme vastaanottaja hiiriä nonmyeloablative säteilyannoksia, annettava ennen raportteja, seka kimeerinen tila voi edistää GVT vastauksia minimoiden GVHD [14] , [15].

tulokset

Female Mice Immunologisesti Hylkää TRAMP-C2 eturauhasen adenokarsinooma Cells

transgeeninen adenokarsinooma hiiren eturauhasen (TRAMP) malli, kasvaimia, jotka kehittävät ovat aluksi androgeeniriippuvaisissa mutta myöhemmin tulee androgeenista riippumaton, pääpiirteittäin normaalin etenemisen eturauhasen syöpää [16]. Näihin tutkimuksiin, käytimme TRAMP-C2-solulinja on johdettu näistä hiiristä. Nämä transplantoitavissa CaP solut muodostavat kasvaimia, kun istutetaan C57BL6 hiiriin, ovat osittain androgen-herkkien

in vitro

ja express mutatoitunut versio SPAS-1-proteiinia, joka on kohteena hallitsevan CD8 T-soluvasteen [ ,,,0],17].

haastoi naarashiirille nuori uroshiirillä, ja kypsä uroshiirillä TRAMP-C2-solujen ja mitataan kasvainten kasvua ajan myötä (kuvio 1A). Kasvaimet kasvoi reippaasti aikuinen mies hiirillä, mutta kasvoivat hitaammin nuorissa uroshiirillä ehkä johtuu joko alempaan androgeenitason tai puute immuunitoleranssin androgeenisäädellyn geenejä. Naarashiirille kuitenkin TRAMP-C2 kasvaimet kasvoivat aluksi ja sitten spontaanisti taantunut. Kyky näistä kasvaimista kasvaa aluksi ehdotti, että niiden häviäminen johtui immunologisen hylkimisen sijaan riippuvuus korkeita androgeenien kestävää kasvua. Vahvista Tämän hypoteesin, me toistuva kasvain haaste luuytimen iinikimeerivalmis jota istutetut naisen ja miehen T-solut on poistettu luuytimen naaraspuolisiin isännät. TRAMP-C2 kasvaimet olivat täysin hylätty naisten-into-naaras-kimeerojen, kun taas mies-into-naaras-kimeerojen TRAMP-C2 kasvaimet kasvoivat progressiivisesti (kuvio 1 B). Mielenkiintoista on, että naaras hiirissä, seoksen kanssa naisten ja miesten luuytimen olivat myös voi toimia välittäjänä kasvaimen hyljinnän. Tämä koe osoittaa, että nämä eturauhassyövän solut eivät vaadi mies androgeenitason kestävän kasvun

in vivo

, ja että niiden hylkääminen naarashiirillä välittyy hematolymphoid järjestelmän. Lisäksi läsnäolo mies hematopoieettisten solujen näyttää olevan hallitseva estävä vaikutus kykyyn naisten hematopoieettisten solujen hylkäämään TRAMP-C2 kasvaimia, ehkä johtuu kateenkorvan negatiivisen valinnan välittävät ilmentymistä mies antigeenejä luuytimestä peräisin kateenkorvan dendriittisolut.

A) TRAMP-C2-kasvain solut kasvavat asteittain aikuisilla uroshiirillä, jossa hitaampi kineettinen mutta täydellinen penetrance pre-karvainen uroshiirillä, ja kasvaa nopeasti, mutta sitten hylätään aikuisten naarashiirillä. n = 5 hiirtä /ryhmä, yksi 2 kokeita samanlaisin tuloksin. B) Aikuisten naisten hiiriä, joihin on siirretty nainen, mies tai 01:01 seoksella naisen ja miehen T-solut on poistettu luuytimen ja 10 viikon kuluttua transplantaation altistettiin TRAMP-C2 kasvaimia. n = 5 hiirtä /ryhmä, tulokset yhden kokeen. C) estäminen murrosikään uroshiirillä voi välittää viivästynyttä kasvua TRAMP-C2 kasvaimia. Aikuisten uroshiirillä kirurgisesti kastroitu ennen murrosikään (4 viikkoa) osoittavat viivästynyt kasvu TRAMP-C2, kun kastraatio 1 viikko ennen kasvaimen haasteeseen (7 viikkoa) ei ollut vaikutusta kasvaimen kasvua. n = 10 hiirtä /ryhmä, kasvaimen kasvukäyrä ja ala käyrän normalisoida mediaani ryhmä 3 kustakin kokeessa. Yhdistetty tulokset 2 kokeita.

Tulokset uros-into-naaras-kimeeran hiiriä myös hiljaista, että heikentynyt kasvu TRAMP-C2 soluja pre-karvainen 5 viikon ikäisille hiirille johtui todennäköisesti epätäydellinen immuunitoleranssin aikuisen miehen eturauhassyöpä sijaan riittämätön androgeenitason. Suoremmin arvioida, että mahdollisista vaikutuksista androgeenitason sekä muita ikä aiheuttama eroja, me haastoi aikuinen mies hiiriä samanikäisiä (8 viikkoa), jotka oli kirurgisesti kastroitu joko aikaisin (4 viikon iässä ennen murrosikään ) tai myöhään (yksi viikko ennen kasvain haaste). Huomasimme, että aikuinen mies hiiret, jotka eivät ole suorittaneet murrosiän vuoksi aikaisin kastraatio näkyy selvästi hidastunut kasvu TRAMP-C2 kasvaimet (kuvio 1 C). Vaikka TRAMP-C2 soluja viljellään rutiininomaisesti läsnä dihydrotestosteronin [16], tuloksemme osoittavat, että TRAMP-C2 voi kehittyä progressiivinen kasvaimet

in vivo

puuttuessa kivekset-johdettu androgeenit, mahdollisesti läsnäolon takia androgeenien peräisin muista umpierityselinten kuten androsteenidionin tuottama lisämunuaisten. Todellakin, TRAMP-hiirimallissa, josta TRAMP-C2 lähtöisin, on tunnettua tuottaa eturauhasen adenokarsinoomat, joka voi edetä huolimatta kastraation [18]. Tuloksemme viittaavat lisäksi siihen, että vaikka joitakin mahdollisuuksia immuunijärjestelmän tunnustamista kypsä eturauhasen antigeenejä esiintyy miehillä varhaisessa iässä, toleranssi näitä eturauhasen antigeenejä on kehitetty seuraavat murrosikä ja johtaa kiihtyi kasvaimen kasvua.

Adoptive siirtäminen Nainen Lymfosyytit osaksi Mies hiiret Pre-istutettu TRAMP-C2 Cells Voit hidastaa kasvaimen kasvua ja silloin tällöin sovittelee kasvainta

Koska havaittiin, että hylkääminen CaP solujen naarashiirillä oli välittämä hematopoieesijärjestelmän, kysyimme siirtämällä nainen hematopoieesijärjestelmän osaksi uroshiirillä tekisi ne kestävät TRAMP-C2 kasvain haaste. Meillä syntyy luuytimen kimeeroita jossa mies isännät siirrettiin yhdessä naisten T-solut on poistettu luuytimen. Huolimatta siitä hematopoieettinen järjestelmä naisten alkuperää, TRAMP-C2 kasvaimet kasvoivat helposti näissä kimeerisiä hiiriä (kuvio 2A). Tämä viittaa siihen, että naisten johdettuja T-solut toleranteiksi eturauhasen antigeenejä kun ne kehittyvät mies isäntä. Sietää näitä soluja voivat olla sekä johtuen kateenkorvan ”koulutus” välittyy mies säteilyresistenteille kateenkorvaepiteelisoluilla, ja perifeerisen toleranssin mekanismien kytkettynä, kun nämä naisten T-solut kohtaavat eturauhasen ja muiden uros kudoksissa.

A) Aikuinen mies hiiret myeloablated kautta säteilytys ja joihin on siirretty naisten T-solut on poistettu luuytimen seurasi haaste TRAMP-C2 kasvaimia 10 viikkoa elinsiirron jälkeen. n = 5 hiirtä /ryhmä, tulokset yhden kokeen. B) Aikuisten uroshiiret sublethally säteilytettiin 6 Gy ja haastoi intradermaalisesti 1 x 10

6 TRAMP-C2. Seuraavana päivänä hiiret saivat luovuttajan lymfosyyttien infuusio (DLI) 3 x 10

7 pernasolua

i.v.

. n = 10 hiirtä /ryhmä, yksi 3 kokeen samanlaisin tuloksin. C) adoptiivisesti-siirretty CD25 + säätelijä-T-solut eivät välittävät lisääntynyt kasvaimen kasvu nähdään seuraavat miespuolinen DLI. Hiiriä säteilytettiin ja kasvaimen haastoi kuin B, ja sai splenosyytit, jotka olivat CD25-köyhdytettyä käyttäen magneettisia helmiä toisin mainita. n = 10 hiirtä /ryhmä, tulokset yhden kokeen. D) Nainen CD4-T-solut välittävät viivästynyttä kasvua TRAMP-C2 kasvaimia. Hiiriä säteilytettiin ja kasvaimen haastoi kuin B, ja sitten sai 1,5 × 10

7 pernasolua, jotka olivat

in vivo

CD4-köyhdytettyä, sekoitettuna 1,5 × 10

7 pernasolua, jotka olivat CD8- tyhjentynyt, joko mies tai nainen alkuperää. n = 10 hiirtä /ryhmä, yksi 2 kokeita samanlaisin tuloksin.

ohittamista keskeinen toleranssi mekanismeja, me seuraavaksi arvioidaan mahdollisuuksia kypsä nainen lymfosyyttien siirtää anti-cap immuniteetti. Nämä solut ovat läpikäyneet kateenkorvan valinta naisten luovuttajan ennen siirtoa, ja siten tulisi sisältää T-soluja, jotka kykenevät tunnistamaan Y-kromosomin, androgeenisäädellyn, eturauhasen kudosspesifisiä ja mutaatiostatuksesta antigeenejä. Olemme urospuolisille hiirillä nonmyeloablative säteilyannoksen aiheuttaa lymfopeniaa ja luoda tilaa myös siirretty soluihin. Myöhemmin samana päivänä, hiiret altistettiin TRAMP-C2-kasvainsoluja. Yksi päivä myöhemmin, joko mies tai nainen pernasoluja Infusoituna nämä kasvaimen hiiriin. Huomasimme, että vaikka infuusio mies pernasolujen ei ollut vaikutusta kasvaimen kasvuun, naispuolinen splenosyyttejä välittämä viivästyy merkittävästi kasvaimen kasvua ja parantunut kasvaimen elinaika, joissakin tapauksissa johtaa täydelliseen kasvaimen hyljinnän (kuvio 2B).

siirtämällä yhteensä splenosyyttejä, olemme siirtämällä CD4 + CD25 + FoxP3 + säätelijä-T-solut (Treg) lisäksi efektori-T-soluja vastaa GVT vaikutuksia. On mahdollista, käyttäen erityisesti miespuolinen luovuttajan hiiriä, että nämä Treg solut voivat haitata tehoa siirretyn efektorien. Sen varmistamiseksi, että havaintoja ei vaarannu läsnäolo Treg-solujen, käytimme magneettisia helmiä heikentävistä Tregs päässä siirrettiin adoptiivisesti lymfosyytit lähtevät alle 1% FoxP3 + jäljellä oleviin soluihin siirteen (tuloksia ei ole esitetty). Ehtyminen Treg solut eivät parantaa tehoa joko nainen tai mies adoptiivisesti siirretään lymfosyyttien (kuvio 2C). Tämä viittaa siihen, että pääasiallinen määräävä GVT teho on antigeenispesifisyys siirrettyjen efektorisolujen, ja että luovuttajan Treg solut eivät ole merkittävää vaikutusta GVT.

selkeyttämiseksi suhteelliset osuudet CD4 ja CD8 T-solujen välittämisessä valvonta kasvaimen kasvua naispuolinen splenosyyteistä, suoritimme sekoitus-ja-ottelu kokeilu käyttäen miehen ja naisen luovuttajien että depletoitiin

in vivo

kanssa vasta-aineita joko CD4 tai CD8. Kiinnostavaa kyllä, havaitsimme, että siirto naisten CD4-T-solujen välittämä samankaltaisia ​​kasvaimen ohjaus, kun siirretään CD8-T-solujen joko mies tai nainen alkuperää, kun taas miesten CD4-T-solut eivät pystyneet toimimaan välittäjänä kasvaimen valvontaa myös silloin, kun infusoida samanaikaisesti naaras CD8-T-soluja (kuvio 2D). Kaiken kaikkiaan nämä tulokset viittaavat siihen, että naiivi CD4-T-solut naarashiirillä ovat välttämättömiä ohjaamiseksi kasvun TRAMP-C2-kasvaimia uroshiirillä, kun taas naisten CD8-T-soluja ei vaadita.

nainen DBY-specific CD4 T Cells voimistaa CD8 T-soluvasteen TRAMP-C2 tuumoriantigeeneistä

Varmista, että CD4-T-solut on keskeinen rooli ohjaamisessa naisten immuunivasteisiin eturauhassyöpää, suoritimme kokeita tunnistaa T-soluvasteiden määrätyiltä antigeenien epitooppien ilmaistaan ​​TRAMP-C2. Aiemmin tunnistimme SPAS-1, antigeeni kromosomissa 2 ilmaiseman TRAMP-C2 Immunodominantin luokan I epitoopin johtuvat spontaanista pistemutaatio [17]. RT-PCR, myös tunnistettu ilmaus tunnetun luokan I-rajoitettu Y-kromosomi antigeenejä, mukaan lukien SMCY, UTY, ja EIAFIAY, sekä ilmentymistä luokan II rajoittunut Y-kromosomi-antigeenin DBY (tuloksia ei ole esitetty). On raportoitu, Y antigeenit ovat usein valikoivasti yliekspressoituvat ihmisen CaP solulinjoissa ja kasvaimia [7]. Samoin havaittiin, että geenit

smcy

,

lituksen

, ja

DBY

näytti selektiivisesti yliekspressoituvan TRAMP-C2-solulinja ja spontaanisti johtuvat eturauhassyövän alkaen TRAMP hiiristä verrattuna normaaliin B6 eturauhasen (kuva S1).

Jos haluat vertailla immuunivasteita TRAMP-C2 antigeenejä syntyvät uros- ja naarashiirillä, käytimme solun rokote koostuu säteilytettyä GM-CSF-yliekspressoivassa TRAMP- C2-solut (TRAMP-GM-CSF), joka meillä oli aiemmin luotu ja tunnettu [19]. Me analysoitiin rokotettujen uros ja naaras hiiret CD4 ja CD8 T-solujen vasteita tunnettuihin ja ennustettu peptidiepitoopeista johdettu näistä antigeeneistä. Seuraavat uudelleen stimulointi peptidilisätty dendriittisolut, arvioimme T-solujen IFN-γ. Olemme havainneet, että rokottaminen naaraspuolisia hiiriä TRAMP-GM-CSF johtaa voimakkaan CD4-T-solujen vasteita DBY, kun taas uroshiiriä eivät kehity mitattavissa vasteita DBY, vaikka naisten ja miesten CD4-T-solut olivat samanlaiset vasteet stimulaatiolle anti-CD3ε /anti-CD28-helmiä, tai forbolimyristaattiasetaattia (PMA) ja ionomysiinillä (kuvio 3A). Todennäköinen tämä johtuu puute Keski sietokyvyn DBY Naisilla uroshiirillä ja korkea ilmentyminen DBY by TRAMP-C2-soluja. Huomasimme, että uroshiirillä tehdä mount CD8 T-solujen vasteet mutatoitunut antigeeni SPAS-1 seuraavat TRAMP-C2 solujen rokotuksen. Nainen CD8 T-soluja, mutta näytteille vahvempia vastauksia SPAS-1 kuin miehillä (kuvio 3A), odottamaton havainto, koska ilmentyminen SPAS-1 ei ole tasa-rajoiteta eikä hormoneja säännelty. Vasteet SPAS-1 oli dominoiva vasteet muita antigeenejä, mukaan lukien Y-kromosomin antigeenejä SMCY, UTY, ja EIAFIY sekä vastaukset kuuden transmembraanisen epiteelin antigeeni eturauhasen (STEAP), joka oli raportoitu määrä olla immunogeeninen uroshiirillä ja valikoivasti yli-ilmentyy eturauhaskasvaimissa [20]. Kaiken kaikkiaan nämä tulokset viittaavat siihen, että naisten DBY-spesifisten CD4-T-solut kykenevät voimistamaan CD8-T-soluvasteita immuunidominantin kasvainantigeeniä johtuvat spontaani mutaatio.

A) immunisointi naaraiden kanssa TRAMP-GMCSF solujen tuottaa täydennetty CD4 vasteet DBY ja CD8-vasteita SPAS-1. Uros ja naaras B6 hiiriin injektoitiin intradermaalisesti 1 x 10

6 säteilytetty TRAMP-GMCSF päivinä -9, -6 ja -3 ennen lopettamista. CD4 + ja CD8 + pernasoluja puhdistettiin magneettiset helmet ja stimuloitiin uudelleen CD 11 c + naaras pernan DC pulssitettiin ilmoitetun peptidin, tai vaihtoehtoisesti stimuloitiin anti-CD3ε /anti-CD28 helmiä, tai forbolimyristaattiasetaattia (PMA) ja ionomysiinillä. Supernatantti pitoisuudet IFN-γ ja muiden sytokiinien analysoitiin BD sytometria helmi array. Tulokset yhden kokeen. B) DNA-rokotuksen SPAS-1 tuottaa immuunivasteet koirashiirillä adoptiivisesti siirrettiin naaras lymfosyyttien. Mies B6-hiirille annettiin 6 Gy säteilytys sen jälkeen mies tai nainen adoptiivisen lymfosyyttien siirtoa. Hiiret rokotettiin geenitekniikan pistoolin SPAS-1 ilmentävien DNA plasmidien päivinä 1, 7, ja 13 seuraavaa adoptiovanhemmat siirto. Päivänä 19 pernasoluja inkuboitiin kanssa tai ilman SPAS-1 ja DBY peptidejä, ja IFN-γ CD4 ja CD8 T-solut arvioitiin solunsisäisen virtaussytometrialla. Tulokset yhden kokeen.

Voit selvittää, samanlainen ilmiö DBY-CD4 T-solujen ”help” oli esiintyvät asettaminen adoptiovanhemmat soluhoidot, siirsimme joko mies tai nainen pernasolujen koskevat miesten isännät ja sitten rokotettu DNA-plasmidi ilmentävät mutatoidun SPAS-1. Olemme havainneet, että uros- hiirillä, jotka saivat naaras pernasoluja spontaanisti CD4 T-soluvasteita DBY, osoituksena solunsisäisen IFN-γ. Huomattavaa on, miehillä, jotka saivat naaras pernasoluja vahvat CD8-T-soluvasteita SPAS-1 rokotuksen, kun taas miehillä, jotka saivat uros pernasolujen ei ollut merkittävää vastausta SPAS-1 rokotuksen jälkeen (kuvio 3B). Tulokset näistä adoptiovanhemmat siirto kokeet osoittavat, että mahdollisia mekanismeja parantaa valvontaa kasvaimen kasvu mies- saajat naisen lymfosyyttien sisältävät sekä CD4 ja CD8 T-solu tunnistaa antigeenejä ilmaistaan ​​TRAMP-C2.

Adoptive siirtäminen Nainen Lymfosyytit osaksi Lymphopenic Mies palvelimet eivät johda merkittäviin GVHD

meidän naaras-into-uros immuuni elinsiirtoa malleja, olemme aktiivisesti seurata kliinisiä oireita GVHD, johon voi kuulua laihtuminen sekä aktiivisuuden muutokset, asento , ihon ja turkin. Olemme nähneet mitään näyttöä GVHD näissä kokeissa. Vuonna luuydinsiirron asetus kuitenkin valitsemalla naispuolinen luovuttaja voi johtaa lisääntyneeseen riskiin GVHD [10] – [12]. Jotta turvallisuuden tutkimiseksi edelleen Adoptiivisen naisten soluhoidot potilaille, joilla on eturauhassyöpä, arvioimme histologisesti subkliinistä todisteita GVHD kahta mallia, B6 osaksi B6 (syngeneeisissä) ja LP osaksi B6 (MHC-sovitettu, pienet antigeenin paritonta allogeenisen ), katsomalla GVHD kohde-elimiin kuten maksaan, ohutsuoli, ja paksusuolen. Olemme havainneet, että syngeenisessä ympäristössä, kahdessa eri ajankohtina (päivät 21 ja 42 siirron jälkeen) naaras lymfosyytit eivät aiheuta merkittävää GVHD kuin miesten lymfosyytit (kuvio 4). Vuonna enemmän kliinisesti merkittäviä asettaminen MHC-sovitetun, pienet-antigeeni ristiriitaiset malli, löysimme samantasoisen GVHD käyttää naisten ja miesten luovuttajien sekä varhainen ja myöhäinen ajankohtina. Kaiken GVHD patologinen tulokset havaittu tässä subletaalitesteissä säteilytys lymfosyyttien siirtoa mallit olivat lieviä verrattuna MHC-yhteensopimattomien luuydinsiirron allogeenisten T-solujen asetus (kuvio 4), joka vahvistaa havaintomme, että GVHD on lievä näissä malleissa, ja että käyttö naisten lymfosyyttien ei näytä lisäävän esiintyvyyttä tai vakavuutta GVHD.

Male B6-hiirille annettiin 6 Gy säteilytys seurasi

iv

infuusio 3 x 10

7 pernasolua, joko mies tai nainen, syngeenisistä B6 tai allogeenistä LP luovuttajilta. Vertailun, naispuolinen B6 hiiret olivat kuolettavasti säteilytettyä (11 Gy), ja siirrettyjen 5 x 10

6 T-solut on poistettu luuydinsolujen ja 2 x 10

6 puhdistettua pernan T-solujen MHC-yhteensopimattomien B10.BR-hiiriä (H2K osaksi H2b). Hiiret arvioitiin ilmoitettuna päivänä histologista näyttöä GVHD maksassa, ohutsuolessa, ja paksusuolen. Tulokset yhden kokeen.

Keskustelu

Kirjoittajat raportoivat, että adoptiivisesti siirrettyjen naiivi nainen lymfosyyttien hidastaa kasvua ja joissakin tapauksissa hylätä valmiiksi istutettu TRAMP-C2 eturauhasadenokarsinoomaa solut sublethally säteilytetty uroshiirillä. Samankaltainen havainto on myös äskettäin raportoineet Yi et. ai, joka käytetään myös TRAMP-C2-solujen [21]. He tunnistivat T-solut välittäjinä anti-eturauhassyövän immuunivasteet naarashiirillä ja totesi, että adoptiovanhemmat siirto rokotettujen naisten lymfosyyttien voi johtaa valvontaan kasvun TRAMP-C2 kasvaimia miespuolinen hosts. Tutkimuksemme tukee niiden alustavat tulokset ja laajentaa niitä huomattavasti tunnistamalla mekanismeja, joilla naisen immuunijärjestelmä kiinnikkeet parempia vastauksia eturauhassyöpää. Osoitamme, että naisten CD4-T-solut ovat välttämättömiä välittäjiä tämän vaikutuksen, erityisesti spesifisiä -epitoopilla koirassteriilistä antigeeni DBY. Kun Yi et. al havaitsivat, että naarashiirillä immunisoitu TRAMP-C2 kehittäneet T-soluvasteita normaalin eturauhasen kudosta sekä eturauhasen antigeeni STEAP, meidän tiedot osoittavat, että vastaukset STEAP ovat suhteellisen pieniä verrattuna vastauksissa spontaanisti aiheutuvat immunodominantille tuumoriantigeeniin mutatoitunut SPAS-1, jota ei ole analysoitiin edellisessä tutkimuksessa. Tuloksemme osoittavat, että CD4-T-solujen vasteita DBY, jotka ovat ainutlaatuisia naisten immuuni valikoimia, voi merkittävästi lisätä CD8-T-soluvasteita spontaanisti johtuvat mutantti kasvaimen antigeeni, kuten SPAS-1. CD4 T-solujen vasteita DBY näyttävät olevan erityisen vahvana asettaminen I-Ab MHC II rajoitus; T-solut, jotka ovat peräisin hiirillä, joilla on siirtogeeninen T-solureseptorin spesifinen saman DBY epitooppi on aiemmin esitetty, jotka kykenevät asennus vasteita TRAMP-C2 kasvainten RAG hiirissä, [22]. Huomasimme, että naisten lymfosyyttien mies isäntä oli myös aikaiseksi parempia vastauksia rokottaminen SPAS-1, asettamisessa samanaikaisesti kehittää spontaaneja vasteita DBY.

On mahdollista, että CD4-T-solut ovat spesifisiä DBY voi toimittaa apua CD8 T-solut, jotka välittävät GVHD sekä GVT. Kuitenkin hyödyntämällä malli subletaaleja säteilytys sen jälkeen lymfosyyttien siirtoa ilman co-siirto Veren kantasolut, pystyimme merkittävästi minimoida Käänteishyljintä vaikutuksia. Uroshiirillä hoidettiin suuria annoksia naisten lymfosyyttien ei ollut kliinistä näyttöä Käänteishyljintä ja vain hyvin lieviä patologisia merkkejä. Samalla kuitenkin tämä lähestymistapa mahdollisesti voinut perustaa toleranssin uros- ja eturauhasen antigeenejä tunnustettu siirrettiin naaras johdettuja T-soluja, mikä mahdollisesti rajoittaa tehoa tämän strategian ja mikä vähemmän hiirissä täysin hylätä heidän kasvaimia.

Monet viimeaikaiset edistysaskeleet kasvaimen immunoterapia ovat keskittyneet joko rokotusstrategioista tai saarto immuunijärjestelmän sääntelymekanismeja. Kaksi viimeaikaista immuuni strategioita, jotka on saatu FDA ovat rokotukset sipuleucel-T metastaattisen CaP [1], ja vasta-aine-välitteinen salpauksen T-solujen negatiivinen kostimulatorinen reseptori CTLA-4 metastaattisen melanooman [23]. Tavoitteena rokotusstrategioiden on tuottaa uusia anti-kasvain T-soluvasteita, kun taas immuuni sääntelyn salpauksen strategioita pyrkivät vapauttamaan endogeenisen anti-kasvain immuunivasteita, joita syntyy spontaanisti, mutta hillitty ja tehoton [24]. Vaikka molemmat lähestymistavat ovat lupaavia, kliiniset tiedot osoittavat, että useimmat potilaat lopulta vielä periksi etenemisen niiden syövän. Yhdistelmät immuuni lähestymistavat voivat olla lupaavin. Tässä tutkimuksessa olemme tunnistaa Kolmas lähestymistapa, nimittäin parantaminen immuuni ohjelmistoon siirtämällä adoptiivisesti sukupuoleen paritonta lymfosyyttien parannettu kyky tunnistaa kasvaimen antigeenejä. Ohjelmisto lisälaite on mahdollista dynaamisesti synergoida sekä kasvain rokotusta ja immunosäätelyvaikutuksia saarto strategioita.

metastaattinen kastraatio vastustuskykyisten eturauhassyöpä, sairaus, joka on edelleen huono ennuste, osoitamme, että naisten lymfosyyttejä, erityisesti CD4 T-solut, adoptiivisesti siirretään eturauhasen syövän altistettiin uroshiiriä voi välittää huomattavia antituumorivaikutuksia. Turvallisuuden kannalta tämä lähestymistapa näyttää kliinisesti elinkelpoinen havaitsimme ole merkittävää GVHD joko syngeenisiä tai MHC-sovitettu, pienet ristiriitaiset allogeeninen naaras lymfosyyttien siirtoa. Tässä esitetyt tiedot tukevat edelleen arvioida tätä lähestymistapaa eturauhassyövän immunoterapiaa ja sen mahdollisuuksia synergoida tukeviin muihin immuuniterapeuttista lähestymistapoja.

Materiaalit ja menetelmät

Hiiret

Kaikki hiiri menettelyt suoritettiin mukaisesti institutionaalisten protokollan ohjeet Memorial Sloan-Kettering Cancr Center (MSKCC). Hiiriä pidettiin mukaan NIH Animal Care ohjeiden mukaisesti protokollien hyväksymä MSKCC Institutional Animal Care komitean kuvaavat kokeita erityisesti tätä tutkimusta. C57BL /6 ja LP-hiiret saatiin Jackson Laboratory: sta.

Vasta-aineet

CD4 (GK1,5) ja CD8 (2,43) heikentäviä vasta-aineet hankittiin Bio-Xcell. Virtaussytometria suoritettiin käyttäen vasta-aineita tunnistamaan CD45 (30-F11), CD4 (RM4-5), CD8a (53-6.7), IFN-γ (XMG1.2) hankittiin BD Biosciences.

Peptidit

Kaikki käytetyt peptidit hankittiin Biosynthesis, Inc.: n lopullinen pitoisuus on 10 um. CD8 peptidit sisältyvät SPAS-1 (244-252), SMCY (738-746), UTY (246-254), EIAFIY (63-71) ja STEAP (262-270, 327-335). CD4 peptidit sisältyvät DBY (608-622), ja kontrollina, Pep25, hallitseva luokan II MHC-esitetty epitoopin M.

tuberculosis

Ag85B [25].

Cell Lines

TRAMP-C2-kasvainsoluja saatiin Dr. Norman Greenberg [26], ja viljeltiin, kuten aikaisemmin on kuvattu [16]. TRAMP-GM-CSF solujen on myös aiemmin kuvattu [19].

BMT

Kaikki elinsiirrot protokollat ​​tarkistettiin ja hyväksyttiin Memorial Sloan-Kettering Cancer Center IACUC. Elinsiirrot protokollat ​​on kuvattu aiemmin [27].

kirurgisen kastraation

Hiiret nukutettiin ja pieni kivespussin viilto tehdään paljastaa kivekset. Nämä ommeltiin ja poistettiin yhdessä ympäröivän rasvakudokseen.