Krooninen sairaus

tiivistelmä

Makrofageja estävä sytokiini-1 (MIC-1 /GDF15), poikkeava jäsen TGF-β-superperheen, yli-ilmentyy monien yleisten syöpien mukaan lukien eturauhasen (PCA) ja sen ilmentyminen on yhdistetty syöpään lopputulokseen. Olemme arvioineet vaikutusta MIC-1 /GDF15 ilmentymisen vaikutus PCa kehitykseen ja levitä TRAMP siirtogeenisiä malli spontaanin eturauhassyöpää. TRAMP-hiiret risteytettiin MIC-1 /GDF15 yliekspressoivat hiiriä (MIC-1

FMS) tuottaa syngeenistä TRAMP

fmsmic-1 hiirissä. Eloonjäämisaste, eturauhasen kasvaimen koon, histopatologiset laadut ja laajuus kaukaisten elimen etäpesäkkeitä verrattiin. Etäpesäke TC1-T5, androgeenien itsenäinen TRAMP solulinja, josta puuttuu MIC-1 /GDF15 ilmaisun verrattiin ruiskuttamalla suonensisäisesti MIC-1

FMS ja syngeenistä C57BL /6-hiiristä. Vaikka TRAMP

fmsmic-1 selvisi keskimäärin 7,4 viikkoa pidempään, oli huomattavasti pienempi urogenitaalinen (GU) kasvaimet ja alempi PCa histopatologisia laadut kuin TRAMP hiiret, useampi näistä hiirille kehittyi kaukainen elin etäpesäkkeitä. Lisäksi suurempi määrä TC1-T5 keuhkosyövän pesäkkeitä havaittiin MIC-1

FMS hiirillä kuin syngeneeisissä WT C57BL /6-hiiristä. Tutkimuksemme viittaavat vahvasti siihen, että MIC-1 /GDF15 on monimutkainen toimia kasvaimen käyttäytymisen: se rajoittaa paikallinen kasvaimen kasvua, mutta voi sairauden edetessä, edistää etäpesäkkeitä. Koska MIC-1 /GDF15 indusoi kaikki syöpähoitojen ja etäpesäkkeiden on suurin syy syövän hoidon epäonnistumisen ja syöpäkuolemista nämä tulokset, jos sovellettavissa ihmisiin, voi olla suora vaikutus potilaan hoidon.

Citation : Husaini Y, Qiu MR, Lockwood GP, Luo XW, Shang P, Kuffner T, et al. (2012) makrofaagianalyysi Inhiboiva Sytokiini-1 (MIC-1 /GDF15) Hidastaa syövän kehittymisen mutta Lisäykset etäpesäkkeitä TRAMP Eturauhassyöpä Makuu hiiret. PLoS ONE 7 (8): e43833. doi: 10,1371 /journal.pone.0043833

Editor: Ming Tat Ling, Queensland University of Technology, Australia

vastaanotettu: 28 huhtikuu 2012; Hyväksytty: 30 heinäkuu 2012; Julkaistu: 27 elokuu 2012

Copyright: © Husaini et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tuettiin osittain Eturauhassyöpä Foundation of Australia (https://www.prostate.org.au), Cancer neuvosto New South Wales (https://www.cancercouncil.com.au/) ja National terveys Research Council of Australia (https://www.nhmrc.gov.au/). DAB on National Health ja Medical Research Council Biomedical Career Development Fellow. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: DAB ja SNB on nimetty keksijöiden omistamat patentit St Vincentin sairaalan, jotka liittyvät sen kliinisestä käytöstä MIC-1 /GDF15 diagnostista määritystä ja modulatorisen hoito. Nämä patentit on lisensoitu Novo Nordisk ja Roche Diagnostics. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamiseen ja materiaaleja, yksityiskohtaisena netissä https://www.plosone.org/static/policies.action#sharing.

Johdanto

Eturauhassyöpä (PCA) on yleisimmin diagnosoitu syöpä miehillä jälkeen ihosyöpä ja on toiseksi suurin syy miesten syöpäkuolemista. Vuonna 2011 USA: ssa yksin, oli 240890 uutta tapausta Eturauhassyövän ja noin 33720 kuolemantapausta [1]. PCa, kuten monet syövät, on tunnusomaista muuttunut sytokiinien ja kasvutekijöiden. Yksi tällainen sytokiini on MIC-1 /GDF15, poikkeava transformoivan kasvutekijä-β (TGF-β) superperheen [2], joka on yli-ilmentynyt, jonka monet potilaat, joilla on yhteisiä syöpiä mukaan lukien eturauhasen ja voidaan edelleen indusoitu syövän hoidot, mukaan lukien kirurgia, kemoterapia ja radio-terapiaan eturauhasen, paksusuolen ja rintasyövän [3] – [9].

MIC-1 /GDF15 proteiinin ekspressio kasvaa merkittävästi syövän kudoksissa ja syöpäsolulinjoissa . Vuonna syöpien, kuten eturauhasen, merkittävä lähde MIC-1 /GDF15 on pahanlaatuinen epiteelisolujen itse [5], [10], vaikka voi myös edistävän kasvaimen stromasoluja [11] ja soluttautuminen fagosyyttien [12]. Tämä kasvain ilmentyminen MIC-1 /GDF15 usein heijastuu sen veressä, jotka lisäävät syövän kehittymisen ja etenemisen [5], [10], [13] – [27], yleensä suhteessa vaiheessa ja laajuus tauti . Esimerkiksi seerumin nousee asteittain potilailla normaalista, ja matala-asteista paksusuolen polyypit, laadukkaat paksusuolen polyypit, paikallinen paksusuolensyöpä ja lopuksi levitetään paksusuolensyöpä [13]. Potilaat, joilla on paksusuolen syöpä, jotka ovat kohonneet seerumin MIC-1 /GDF15 tasot ovat huonompi yleistä ennustetta ja aikaisemman taudin uusiutumisen [13], [25]. Samanlaisia ​​tuloksia on havaittu monien muiden pahanlaatuisten kasvainten, mukaan lukien melanooma [28], [29] ja syövät, haima [12], [19], [30], kilpirauhasen [31], [32], munasarja [26] ja kohdun limakalvon [27]. Eturauhassyöpäpotilailla, seerumin MIC-1 /GDF15 pitoisuudet itsenäisesti ennustaa luumetastaasipotilailla kokonaiselossaolo [14], [21].

Potilailla, joilla on pitkälle edenneitä syöpiä, seerumin MIC-1 /GDF15 tasot nousevat keskimäärin ei-syöpäpotilailla noin 450 pg /ml [13] jopa 10,000-100,000 pg /ml [5]. Koska sen vaikutuksia ruokinta keskuksia aivoissa, korkeus seerumin MIC-1 /GDF15 on tärkeä syy syöpään liittyvien anoreksia /kuihtuminen [33]. Määrä MIC-1 /GDF15 läsnä seerumissa syöpäpotilaiden on osittain riippuvainen osuus MIC-1 /GDF15 lokalisoitu kasvaimeen vs. että diffundoitumasta liikkeeseen [34]. Muuttuva käsittely MIC-1 /GDF15 johtaa eritystä sekä käsittelemätön (jossa propeptidi) ja prosessoidun (ilman propeptidi) muodossa [34]. Kuten sen propeptidin verkkotunnuksen sitoutuu soluväliaineen, käsittelemättömät MIC-1 /GDF15 pysyy paikallisena kasvain strooman taas jalostetussa muodossa nopeasti diffundoituu verenkiertoon [12], [34]. PCA, lisääntynyt määrä MIC-1 /GDF15 lokalisoitu kasvaimeen parantaa potilaiden hoitotuloksiin, erityisesti ne, joilla Gleason summa pisteet 6 tai vähemmän [34].

Vaikka on olemassa useita rivejä todisteita yhdistävät MIC-1 /GDF15 syöpään yleensä ja PCa erityisesti vakuuttava ja johdonmukainen tietoa sen biologinen rooli patogeneesissä ja etenemistä syöpä on rajoitettu [4]. Todisteet, pääosin

in vitro

ja vierassiirrekokeissa tarjota näennäisesti ristiriitaisia ​​tuloksia. Useimmissa tutkimuksissa on esitetty, että MIC-1 /GDF15 on syövän vastaista aktiivisuutta ja indusoi tuumorisolun apoptoosia [35] – [38]. Esimerkiksi MIC-1 /GDF15 transfektoitu HCT-116, paksu- ja syöpäsoluja näytteillä lisääntynyt tyvi apoptoosin, lisääntynyt vaste ei-steroidi tulehduskipulääkkeitä ja vähentää pehmytagar kloonaustehokkuuteen [35]. DU145 PCa solulinja, yksi harvoista, joka ei ilmennä MIC-1 /GDF15, läpikäy apoptoosin käsitellään

in vitro

MIC-1 /GDF15 [36].

Vastoin edellä esitetyt tiedot, on myös näyttöä siitä

in vitro

kokeita, MIC-1 /GDF15 voi helpottaa kasvaimen etenemistä [39] – [42]. Esimerkiksi täytäntöön MIC-1 /GDF15 yli-ilmentymisen tai hoidon puhdistetulla yhdistelmä-MIC-1 /GDF15 lisäsi merkittävästi

in vitro

hyökkäystä mahasyövän solulinjoissa. Tämä välittyy kasvu urokinaasityyppi-plasminogeeniaktivaattorin (uPA), ja mukana aktivointi ekstrasellulaarisen signaalin säännelty kinaasi-puoli (ERK-1/2) [16]. Yli-ilmentymisen ja pudotus kokeiluja androgeeniriippuvaisissa LNCaP-C33 ihmisen PCa solulinjaa ja sen erittäin metastaattinen variantti, androgeenistä riippumaton LNCaP-LN3 ovat osoittaneet, että MIC-1 /GDF15 voi edistää leviämisen androgeenireseptorin (AR

+) – positiivinen LNCaP-solujen kautta stimulaation ERK-1/2 signaalireitin [20]. Sen sijaan muut eivät ole pystyneet tunnistamaan toiminnan MIC-1 /GDF15 on

in vitro

leviämisen LNCaP [36].

in vivo

syöpään liittyvät aktiivisuutta MIC-1 /GDF15, on myös tarkasteltu rajoitettu määrä -tuumoriksenografti tutkimuksia. Täytäntöön MIC-1 /GDF15 yliekspressio HCT-116 paksusuolen syövän soluja, ksenosiirrettyjä nude-hiiriin, johti kasvaimen koon pienentyminen [35]. Glioblastoomasolulinjan ilman antiproliferatiivinen vastausta MIC-1 /GDF15

in vitro

, ei kasvamaan -tuumoriksenografti nude-hiirissä, kun transfektoitu MIC-1 /GDF15 [43]. Sen sijaan, siRNA kaataa MIC-1 /GDF15 joka melanoomasolulinjalla vähensi kasvua Ksenosiirretyn kasvainten [28].

Koska MIC-1 /GDF15 on niin usein ja merkittävästi yli-ilmennetään syöpiä, ja koska anti-syöpähoitoihin indusoi MIC-1 /GDF15 ilmentymisen sekä syöpää ja ei-syöpä kudoksiin, mahdolliset vaikutukset kasvaimen ongelma voi olla korkea kliinistä merkitystä. Saadakseen mahdollisimman luotettavaa tietoa yleisestä roolista MIC-1 /GDF15 biologiassa PCA ja analogisesti syövän yleisesti, käytimme

T

ransgenic

denocarcinoma of

M

ouse

P

rostate (TRAMP) eturauhassyövän altis hiirillä. TRAMP hiiret ilmentävät SV40 aikaisten geenien (T ja t; Tag) eturauhasen epiteelin valvonnassa rotan Probasiinin (RPB) promoottori [44]. Heterotsygoottinen TRAMP uroshiirillä kehittyy etenevä eturauhasen syöpä näytteille tautikirjona kuin se esiintyy miehillä että on invasiivinen ja pystyy metastaaseja etäisiin paikkoihin, pääasiassa lantion imusolmukkeiden, maksan, munuaisten ja keuhkojen [45]. Olemme ristissä TRAMP-hiirten MIC-1 /GDF15 yli-ilmentävät hiiret (MIC-1

fms) tuottaa TRAMP-hiirissä, jotka yli-ilmentävät MIC-1 /GDF15 (TRAMP

fmsmic-1). MIC-1

FMS hiirillä ilmentymistä MIC-1 /GDF15 on peräisin ydinsoluissa (makrofagit, dendriittisolut ja neutrofiilien), ja riittää kasvattamaan seerumissa noin 10-90-kertainen [33]. Olemme verranneet eloonjäämisaste, kuvio Eturauhassyövän kasvun ja levitä TRAMP ja TRAMP

fmsmic-1 hiirissä. Nämä tutkimukset osoittavat, että vaikka TRAMP

fmsmic-1 hiiret ovat hitaammin kasvava kasvaimia, hengissä noin 1/3 pidempi ja on heikompilaatuisia kasvaimia, he kehittävät paljon enemmän etäpesäkkeitä. Siksi kuten TGF-β, MIC-1 /GDF15 on monimutkainen vaikutusta kasvaimen käyttäytymiseen, estämällä paikallista kasvaimen kasvua, mutta parantaa metastaaseja.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics Statement

Kaikki tutkimus ja eläinten hoito menettelyjä hyväksynyt Garvan Institute /St Vincentin sairaalan animal Experimentation eettisen komitean (Ethics No: 07/05 ja 10/05) ja olivat yhtä mieltä Australian käytännesäännöt hoitoon ja käyttöön eläinten käyttö tieteellisissä tarkoitus.

siirtogeenisiä hiiriä

Male TRAMP hiiriä heterotsygoottinen PB-Tag siirtogeenin, luotiin pariutumisen TRAMP

+/- naaraita (C57BL /6 tausta) kanssa ei-siirtogeeninen C57BL /6-uroksia. Vuonna TRAMP hiirillä, minimaalinen rotta probasiinin (RPB) säätelysekvenssi kohdistuu SV40 varhaisen geenin (T ja t; Tag) lauseke erityisesti eturauhasen epiteelin [44]. Hiirissä yli-ilmentävät MIC-1 /GDF15 ohjauksessa myeloidisolun erityinen c-fms-promoottori (MIC-1

fms) käytettiin kasvattaa TRAMP-hiirissä, että myös yli-ilmentävät MIC-1 /GDF15 (TRAMP

fmsmic-1 ). MIC-1 /GDF15 ilmentymisen MIC-1

FMS hiiriä on peräisin ydinsoluissa, mutta riittää myös kasvattamaan seerumissa noin 10-90-kertainen [33].

Kaksinkertainen siirtogeenisiä TRAMP

fmsmic-1-hiiret luotiin risteyttämällä TRAMP

+/- naaraat homotsygoottista MIC-1

fms miehillä. PB-SV40: n T-siirtogeenin tunnistettiin käyttämällä DNA: ta hännän näytteitä ja PCR-alukkeet on suunnattu PB-SV40: n T-antigeenin sekvenssi: Pb-eteenpäin: 5′-CCGGTCGACCGGAAGCTTCCACAAGTGCATTTA-3 ’ja SV40Tag-reverse: 5′-CTCCTTTCAAGACCTAGAAGGTCCA-3’ . PCR suoritettiin käyttäen reaktioseokseen ja olosuhteet on kuvattu aiemmin [46]. MIC-1 /GDF15 siirtogeenin TRAMP

fmsmic-1 hiirissä tunnistettiin PCR: llä käyttäen alukkeita, Flag-eteenpäin: 5′-GACTACAAGGACGACGATGACAAG-3 ’ja MS8-reverse: 5′- CGAAGCCTACCGCGTGCACCGAG-3’ ja reaktio-olosuhteet: denaturointi 95 ° C: ssa 10 s, pariutuminen 60 ° C: ssa 20 s, ja pidennys 72 ° C: ssa 30 s.

Survival Study

perusteella tilastollista analyysiä varten näyte koko, 35 TRAMP ja 35 TRAMP

fmsmic-1 hiiret jaettiin 4-6 viikon iässä, ja selviytymisen tutkimus. Siitä lähtien hiiret punnittiin kerran viikossa ja seurataan kahdesti viikossa tuumorin koon ja laajuuden tunnustelemalla vatsan. Hiiret joko kuolleet tai lopetettiin, kun he pääsivät eettisiä päätepisteestä kasvaimen kokoa suurempi kuin 11 mm x 11 mm x 11 mm, yli 20% painon tai tavata muita eettisiä loppupiste kriteerit eutanasian. Yleinen eloonjääminen Yksittäisten hiirien laskettiin syntymästä eettisiin päätepisteeseen tai kuolema kasvain. Survival jakelu arvioitiin käyttäen menetelmää Kaplan-Meier. Ruumiinavauksessa urogenitaalinen kompleksi (GU), joka koostuu eturauhasen (mukaan lukien selkä-, sivusuunnassa, vatsa- ja etulohkot), virtsaputken, ampullary rauhanen, rakkularauhanen (SV) ja virtsarakko poistettiin ja punnittiin. Paino GU, eturauhasen, ja SV kunkin hiiren normalisoitiin sen paino (elin paino /body paino).

primaarikasvaimen Koko

Erillisessä kohortti että edellä, GU ja eturauhasen kasvaimen kasvua verrattiin TRAMP ja TRAMP

fmsmic-1 hiirissä. Alussa tutkimuksen 60 TRAMP ja 60 TRAMP

fmsmic-1 hiirillä, 15 kunkin kunkin vaiheen, olivat ennalta käytettäviksi uhrataan eri ajankohtina varhaisesta pitkälle kasvaimen vaiheissa (8, 17, 25 ja 33 viikkoa iässä). Lisäksi 3 hiiret osoitettu TRAMP, 33 viikon ryhmä 3 alkuperäisen tämän ryhmän hiirellä kuoli tai saavutettiin eettisiä loppupisteet välillä 23 ja 33 viikon iässä. Kunkin 60 hiiret ruumiinavaus, GU leikattiin irti. Yhteensä GU, eturauhasen ja rakkula paino mitattiin ja eturauhasen mitat kirjataan. Kaikki mittaukset normalisoitiin luovuttajien hiiren kehon kokonaispainosta. Tämän jälkeen kudos on käytetty eturauhassyövän luokittelua.

eturauhassyövän Arvostelu

eturauhasen kudoksia 8, 17, 25 ja 33 viikkoa vanhoja TRAMP ja TRAMP

fmsmic-1 hiirissä edellä , pantiin kasetti ja kiinnitettiin 10% neutraaliin puskuroituun formaliiniin. Pidettiin huolta sijoittaa ja upottaa prostates kaikista hiiristä tässä kokeessa samansuuntaisesti. Osiot otettiin 200

–

um välein, kunnes kudos lohkon oli käytetty. Objektilasit värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla ja kaikki osiot yksittäisiä eläimiä tutkittiin valomikroskoopilla, jonka histopathologist kokenut eturauhasen patologian. Histopathologist oli sokkoutettu, että genotyypin hiirten josta kasvain on peräisin. Kudokset leikkeet arvostellaan kriteerit Gingrich et al [47]. Lyhyesti, (

) normaaliepiteelissä annettiin pistemäärä 1; (

b

) matala-asteinen eturauhasen intraepiteelinen neoplasia (PIN) kanssa tufting epiteelin ja nousi ydin sytoplasmaan suhde pisteytettiin 2; (

c

) korkealaatuista PIN kanssa huomattava cribiform rakenteet ja kasvu mitoosi ja /tai apoptoottiset luvut pisteytettiin 3; (

d

) hyvin eriytetty adenokarsinooma menetyksestä interduktaalisessa tilojen ja hyökkäys tyvikalvoissa pisteytettiin 4; (

e

) kohtuullisesti erilaistunut adenokarsinooma kanssa täydellinen menetys ductal lumenia näyttöä adenokarsinooma pisteytettiin 5; ja (

f

) huonosti eriytetty adenokarsinooma kanssa arkkia anaplastic soluista pisteytettiin 6. Jokainen osa kustakin hiirestä luokiteltiin ja osuus eturauhasen vaikuttavat kunkin luokan arvioitiin. Tietoja kaikkien osien tietyllä hiiren yhdistettiin antamaan keskimääräinen osuus eturauhasen vaikuttaa kunkin eturauhassyövän luokka.

tunnistaminen kasvaimen etäpesäkkeitä

arvioitu esiintyvän etäpesäke on kuolin- tai teurastusta selviytymisen ryhmässä TRAMP ja TRAMP

fmsmic-1 hiirissä. Tällä ruumiinavaus lantion imusolmukkeet, munuais-, maksa- ja peräsuolen kasvaimet (jos olemassa) kerättiin ja kiinnitettiin 10% neutraaliin puskuroituun formaliiniin. Keuhkot leikattiin, punnittiin ja kiinnitettiin Bouinin kiinnitysainetta (Sigma-Aldrich) visualisoida ja laskea keuhkojen kasvain pesäkkeitä. Etäpesäkeleesioita kaikki elimet olivat laskettiin preparointimikroskooppia. Osa leesioiden vahvistettiin H

0,05; ** P

0,01; *** P

0,001.

Aluksi molemmat TRAMP ja TRAMP

fmsmic-1 hiiret kuolivat samalla nopeudella. Kuitenkin, kun noin 38-40 viikkoa, TRAMP hiiret alkoivat periksi nopeammin TRAMP

fmsmic-1 hiirissä. 50% eloonjääminen 40 viikon TRAMP hiirillä jatkettiin 51 viikkoa TRAMP

fmsmic-1 ryhmässä. Edelleen, kun taas vain 9,4% TRAMP hiiristä selviytyi viikolla 50, 52% TRAMP

fmsmic-1 hiiret olivat vielä elossa (Fig. 1A). Kaiken kaikkiaan, keskimääräinen elinaika varten TRAMP

fmsmic-1 hiirillä oli 47,4 viikkoa ja oli 41 viikkoa TRAMP hiirillä. Siten keskimäärin TRAMP

fmsmic-1 hiiret selvisivät noin 7,4 viikon ajan (~ 2 kuukautta) kauemmin kuin TRAMP hiirillä. Nämä tiedot osoittavat, että lisääntynyt ilmentyminen MIC-1 /GDF15 pystyy parantamaan merkittävästi PCa liittyvät selviytymistä TRAMP-hiirissä.

yli-ilmentyminen MIC-1 /GDF15 hillitsee PCa Growth

suoraan arvioida vaikutus MIC-1 /GDF15 eturauhassyövän kasvua, me määritetty 60 TRAMP ja 60 TRAMP

fmsmic-1 hiirillä 4-6 viikon iässä ja lopetettujen ne asteittain koko 8-33 viikkoa iässä. Vertailut tehtiin käyttämällä 15 hiirtä ennalta kullekin ryhmän neljässä eri ajankohtina (8, 17, 25 ja 33 viikkoa), jotka edustavat hyvin varhain kehittynyttä kasvaimen vaiheissa. Tiedot hiiret tapettiin kussakin aikapisteessä osoitti, että TRAMP

fmsmic-1-hiirissä oli merkittävästi pienempi GU komplekseja kuin TRAMP-hiirissä (Fig. 1 B) kaikissa vaiheissa (p = 0,0004, p = 0,0005, p 0,0001 ja p = 0,02, vastaavasti).

Kun eturauhasen ja SV painot analysoitiin erillään GU monimutkainen, SV kasvainten koot vähensi merkittävästi TRAMP

fmsmic-1 hiirissä kaikkina ajankohtina (Fig. 1 C). Samanlainen, mutta monipuolisempi, vaikutus MIC-1 /GDF15 yli-ilmentymisen havaittiin eturauhasen kasvaimen kasvua (Fig. 1 D). Oli 17,0% ja 26%: n vähennys eturauhasen tuumorin paino viikoilla 8 ja 25 vastaavasti TRAMP

fmsmic-1 verrattuna TRAMP-hiirissä (p

=

0,04 ja 0,01, vastaavasti). Vaikka vähennettiin kasvaimen paino TRAMP

fmsmic-1 hiirillä 17 viikon ajan ( 10%), ero näiden kahden ryhmän välillä ei ollut merkittävä. Tällä 33 viikkoa, vaikka oli 55%: n vähennys keskimääräinen eturauhasen paino TRAMP

fmsmic-1 hiirissä verrattuna, että TRAMP-hiirillä, ero näiden kahden ryhmän välillä ei ollut merkittävä, koska suuri vaihtelu eturauhasen tuumorin koon että TRAMP ryhmässä. Muita hiiriä täytyi määrätty tähän ryhmään, koska monet perin määrätty hiiret kuolivat /saavutetaan eettisiä päätepisteen välillä 23 ja 33 viikkoa, mahdollisesti painottaminen TRAMP tuloksia, jonka valinta TRAMP hiiriä pienempiä kasvaimia. Nämä hiiret pienempiä kasvaimia olivat todennäköisesti hengissä 33 viikon iässä ja valita. Kuitenkin tiedot ehdotti, sopusoinnussa selviytyminen kohortin tiedot, että MIC-1 /GDF15 yliekspressio vähentää kasvaimen kasvua.

TRAMP

fmsmic-1 Hiirillä on Ala Grade Syövät

Lisäksi sen jälkeen kasvaimen kasvu, päätimme onko MIC-1 /GDF15 saattaa myös vaikuttaa PCa luokalla vertaamalla histopatologiset tulokset TRAMP ja kaksinkertainen siirtogeenisiä TRAMP

fmsmic-1 eturauhasen kasvaimia. Viikolla 8, alhainen (luokka 2) ja korkea (Grade 3) luokka PIN olivat hallitseva patologiat TRAMP ja TRAMP

fmsmic-1 hiirissä. Vaikka keskimääräinen osuus eturauhasen vaikuttaa PIN oli korkeampi TRAMP verrattuna TRAMP

fmsmic-1 hiirissä; kuitenkin, tämä ero ei ollut tilastollisesti merkitsevä (kuvio. 2A).

prostates 15 TRAMP ja 15 TRAMP

fmsmic-1-hiiriä leikattiin 8 viikon (paneeli A), 17 (paneeli B), 25 (paneeli C), ja 33 (paneeli D). Serial osat arvosteltiin ja tulokset kunkin luokan otettiin keskiarvo kaikista hiiristä ryhmässä. Käyrä edustaa keskiarvoa osuus eturauhasen kaikista hiiristä ryhmässä, jolla kukin eri patologisen asteen, sai välillä 1 ja 6 ± SEM. Numerot palkit osoittavat määrän hiiristä ryhmässä, jolla on tietty laatu. p-arvot näkyvät * p

0,05; ** P

0,01; *** P

0,001.

Viikolla 17, Grade 2 ja luokan 3 patologioiden olivat vielä hallitseva sekä hiiren linjat mutta Luokka 4, 5 ja 6 kasvaimet aloitti syntymässä TRAMP prostates. Tänä ajankohtana TRAMP hiirillä oli merkitsevästi enemmän asteen 3 sairaus (p 0,0001) ja huomattavasti vähemmän Grade 2 sairaus (p 0,0001) kuin TRAMP

fmsmic-1 hiirissä osoittaen nopeampaan kasvaimen etenemistä (Fig. 2B).

Klo 25 viikon iässä, 4. asteen kasvaimet olivat yhä näkyvämpi TRAMP hiirillä mutta alueet Grade 2 ja 3. asteen kasvain oli edelleen läsnä sekä hiiren linjat. Vertailu yksittäisten kasvaimen arvosanojen TRAMP ja TRAMP

fmsmic-1 eturauhasen osoitti, että suurempi prosenttiosuus TRAMP

fmsmic-1 eturauhasen oli alempi asteet 2 ja 3 kasvaimet (p

=

0,004 ja 0,02, vastaavasti), kun taas huomattavasti alhaisempi TRAMP

fmsmic-1 eturauhasen oli aggressiivisempi Grade 4 kasvaimia (Fig. 2C, p

=

0,019).

33 viikon iässä (kuvio. 2D), useimmat hiiristä, molemmissa ryhmissä, sairaus oli edennyt pitkälle, ja ero jakautuminen kasvaimen laadut välillä TRAMP ja TRAMP

fmsmic-1-hiirissä ei ollut merkittävä. Jälleen nämä tiedot ovat saattaneet vaikuttaa valintaan puolueellisuudesta 33 viikkoa TRAMP ryhmä, edellä. Hiiret TRAMP ryhmässä on aggressiivisempaa kasvaimia kuoli ennen 33 viikon iässä, ja vain hiiriä vähemmän aggressiivisia kasvaimia säilyneet tässä iässä. Kaiken kaikkiaan nämä tiedot osoittivat, että TRAMP

fmsmic-1 hiirillä on suurempi osa eturauhasen pienemmällä kasvaimen kuin TRAMP hiirillä (Fig. 2A, B, C ja D), mikä osoittaa, MIC-1 /GDF15 yliekspressio hidastuu paikallinen kasvain evoluutio.

TRAMP Eturauhasen Lacks MIC-1 /GDF15 Expression

jotta sulkea pois mahdollisuutta, että ilmentyminen MIC-1 /GDF15 jonka syöpiä TRAMP hiirillä saattaa vaikuttaa siihen, kasvain kasvun ja muuttaa niiden välisiä eroja ja hiirillä suunniteltu yliekspressoimaan tämän sytokiinin, me määrällisesti MIC-1 /GDF15 ekspressiota eturauhasen ja siemenrakkuloiden kasvainten TRAMP ja TRAMP

fmsmic-1-hiirissä. Johtuen epäkäytettävyys perustettu hiiren MIC-1 /GDF15 ELISA ja erityinen anti hiiri MIC-1 /GDF15 monoklonaalinen vasta-aine, käytimme qRT-PCR verrata MIC-1 /GDF15 ilmentymisen TRAMP ja TRAMP

fmsmic-1 eturauhas- ja ensisijainen kasvaimia. Oli merkityksetön MIC-1 /GDF15 ilmentymisen TRAMP-hiirissä, jotka ovat villin tyypin MIC-1 /GDF15, 8, 17 ja 25 viikon iässä (kuvio. 3A) ja kehittynyt kasvaimia (Fig. 3B). Sitä vastoin TRAMP

fmsmic-1-hiiret ilmaistuna 44-166-kertaisesti enemmän MIC-1 /GDF15 (Fig. 3A) niiden eturauhasen, joka on sopusoinnussa c-fms ajettu MIC-1 /GDF15 transgeeniekspression pääsemästä myeloidisoluissa.

(A)

MIC-1 /GDF15

ilmentyminen kvantifioitiin qRT-PCR eturauhasen TRAMP ja TRAMP

fmsmic-1 hiirissä 8, 17 ja 25 viikon ajan ja normalisoitiin

B-aktiinin

ilmentymisen kuvatun materiaalin ja menetelmät. (B) Suhteellinen

MIC-1 /GDF15

ilmentyminen kvantifioitiin qRT-PCR: llä TC1-T5 solulinja (n = 3) ja verrattiin TRAMP (n = 3) ja TRAMP

fmsmic- 1 (n = 3) eturauhasen kasvain normalisoinnin jälkeen kanssa

TBP

ilme. Arvot esitetään keskiarvona normalisoitu

MIC-1 /GDF15

ilmentymisen ± SEM. p arvot kaksisuuntaisia ​​parittomia

t

testi näkyvät *** p

0,001.

Vaikka TRAMP

fmsmic-1 hiiret elää pidempään heillä enemmän etäpesäke

Koska etäpesäke on merkittävä kuolinsyy kiinteiden kasvaimien potilailla PCA, arvioimme vaikutus MIC-1 /GDF15 ilmaantuvuutta ja laajuudesta etäpesäkkeiden TRAMP hiirillä. Vaikka TRAMP

fmsmic-1 hiiret elävät pidempään ja ovat hitaampia primaarikasvaimen kasvun (Fig. 1 A, B, C ja D), joka on huomattavasti suurempi osuus näillä hiirillä osoittivat elinten etäpesäke. 15 ulos 30 (50%) TRAMP

fmsmic-1 hiirillä oli etäinen elin etäpesäke verrattuna 6 ulos 30 (20%) TRAMP hiirten (Fig. 4A). Huomattavan suuri osa TRAMP

fmsmic-1 hiirillä oli makroskooppisesti detectible etäpesäkeleesioita maksassa, munuaisissa ja peräsuolen. Vaikka osuus TRAMP

fmsmic-1 hiirten pinta keuhkotuumoreiden lisääntyi, tämä jäi tilastollista merkitystä (Fig. 4A). Mielenkiintoista peräsuolen etäpesäkkeitä kehitetty 6 ulos 30 TRAMP

fmsmic-1, mutta ei missään TRAMP hiirten (Fig. 4A).