Krooninen sairaus

tiivistelmä

munuaissolukarsinooma (RCC) on kaikkein vaarallisin tyyppi urogenitaalinen syöpä johtuu sen okkultismin puhkeamista ja kestävyys kemoterapiaa ja säteily. Äskettäin, varaamiseen tutkimusten mukaan tahroja, estäjiä 3-hydroksi-3-metyyli glutaryyli-koentsyymi A: n (HMG-CoA) reduktaasin, liittyivät riskien vähentämisen syöpään. Esillä olevassa tutkimuksessa pyrittiin tutkimaan mahdollisia vaikutuksia simvastatiinin RCC soluihin ja taustalla mekanismeja, joilla simvastatiini aiheutti sen toimintaa. Solun elinkelpoisuuden pesäkkeiden muodostumista, ja virtaussytometria apoptoosin määrityksiä, huomasimme, että simvastatiinin voimakkaasti tukahdutti solujen kasvua A498 ja 786-O solujen aika- ja annoksesta riippuvasti. Johdonmukaisesti, The ksenograftimallia suoritetaan nude-hiirissä esiintyi alentunut kasvaimen kasvua kanssa Simvastatiinihoidon. Lisäksi estäviä vaikutuksia simvastatiinin muuttoliikettä ja invaasio havaittiin myös

vitro

. Mekaanisesti, esitimme, että simvastatiini voi tukahduttaa leviämisen ja motiliteettia RCC-solujen kautta fosforylaation inhibitiota AKT, mTOR, ja ERK on aika- ja annoksesta riippuvasti. Lisätutkimuksia oleva mekanismi paljasti simvastatiini voisi käyttää anti-kasvain vaikutuksia estämällä IL-6-aiheuttama fosforylaatiota JAK2 ja STAT3. Johtopäätöksenä nämä havainnot ehdotti, että simvastatiinin aiheuttama apoptoosin ja sen anti-etäpesäke aktiivisuutta RCC solut mukana estämällä AKT /mTOR, ERK, ja JAK2 /STAT3 reittejä, jotka edellyttävät, että simvastatiini voi olla potentiaalinen terapeuttinen aine hoitoa varten RCC potilaista.

Citation: Fang Z, Tang Y, Fang J, Zhou Z, Xing Z, Guo Z, et al. (2013) simvastatiini Estää Munuaisten syöpäsolujen kasvua ja metastaasin kautta AKT /mTOR, ERK ja JAK2 /STAT3 Pathway. PLoS ONE 8 (5): e62823. doi: 10,1371 /journal.pone.0062823

Editor: Zhongjun Zhou, The University of Hong Kong, Hongkong

vastaanotettu: 15 tammikuu 2013; Hyväksytty: 26 maaliskuu 2013; Julkaistu: 17 toukokuu 2013

Copyright: © 2013 Fang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat National Natural Science Foundation of China (nro 81172435). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

munuaissolukarsinooma (RCC) on yleisin munuaissyövän, noin 90-95% munuaisten kasvaimet [1]. Maailmanlaajuisesti johtuvan kuolleisuuden RCC on ylittänyt 100000 potilasta vuodessa [2]. Noin 25-30% potilaista kehittyy etäpesäkkeitä diagnoosin RCC [3], jossa selviytymisen ≥5 vuotta vaihtelee 5%: sta 10%, ja yleinen mediaanielossaolosta alle vuoden [4], [5]. Kirurginen toimenpide on ensisijainen hoito lokalisoitu RCC, mutta yksin se on rajallinen hyöty, jos potilaalla on aggressiivinen tauti [1]. Lisäksi perinteinen solunsalpaajahoito ja immunoterapia ovat epäonnistuneet osoittamaan hyötyä potilaille liitännäishoitona [6]. Viime vuosina nopean kehityksen molekulaarisen täsmähoitoihin [7]. Joukossa ensilinjan kohdistettuja hoitomuotoja, sunitinibin ja temsirolimuusi ovat edustavia, jotka voivat tukkia signalointireitille useiden reseptorin (RTK: t) ja nisäkkään rapamysiinin kohde (mTOR) vastaavasti [8], [9]. Tosin yhtäkään tukitoimien katsotaan kustannustehokkaita halu maksuun kynnyksen 30000 paunaa laatu-adjusted life vuoden [10]. Näin ollen on olemassa suuri tarve hoitoja, jotka voivat pidentää elinaikaa ilman suuresti kohoavia kustannuksia tai heikentää laatua potilaan hengen.

Statiinit (tai 3-hydroksi-3-metyyliglutaryylikoentsyymi koentsyymi [HMG-CoA] reduktaasin inhibiittorit) ovat ryhmä lääkkeitä, jotka ovat rakenteellisia analogeja HMG-CoA-, jotka estävät HMG-CoA mevalonaatin [11], [12]. Beyond niiden kolesterolia alentava ominaisuudet, statiinit näytteille lukuisia dalmatialaistäpläisiä, mukaan lukien anti-tulehdus ja immunomodulaatio [13], [14], pienempi riski eri dementiaa [15], ja lasku proteinuria ja etenemistä munuaisten tauti [16], [17]. Merkitystä, kehittyvien osoittaisivat, että statiinit voivat ilmetä antineoplastinen vaikutuksia erilaisissa syöpäsoluissa [18], mukaan lukien eturauhassyöpä [19] – [22], rintasyöpä [23] – [25], maksasyöpä [26], [ ,,,0],27] ja paksusuolen syöpä [28], [29]. On rohkaisevaa, takautuva sisäkkäisiä tapauskontrollitutkimuksessa että mukana 500000 veteraanit raportoitu suojaava tehtävä statiinien kehittymistä vastaan ​​RCC [30]. Kuitenkin tarkka simvastatiinin vastaan ​​RCC soluja ja taustalla molekyylitason mekanismeja ei ole vakiintunut.

Tässä työssä, meidän data vahvistaa kasvua estävän ja proapoptoottisiin Simvastatiinin vaikutus RCC soluissa sekä

vitro

ja

vivo

. Samalla olemme myös todeta, että simvastatiini voi voimakkaasti vähentää maahanmuuttoa ja hyökkäyksen RCC soluja. Lisätutkimukset taustalla olevien mekanismien osoittaa AKT /mTOR, ERK ja JAK2 /SAT3 reitit on keskeinen asema näiden toimien. Tulosten perusteella näyttää kliininen vaikutuksia simvastatiinin hoidossa RCC potilaista.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

Eläinten Koejärjestely noudattanut eläinten Management säännöt Kiinan terveysministeriön (asiakirja nro 55, 2001) ja hyväksyi Animal Care ja käyttö komitean Shandong University. Patogeenittomassa BALB /c-nude-hiiriä (paino 19 ± 2 g, SPF laatu, todistus SCXK2011-0012) 4-5 viikkoa vanhojen hankittiin Department of Laboratory Animal Science Pekingin yliopisto (Beijing, Kiina). Kaikki eläimet pidettiin keskeiset laboratoriossa Cardiovascular Remodeling ja Tehtävä tutkimus Qilu sairaalan Shandong University.

Solulinjat ja reagenssit

Ihmisen A498 ja 786-O solulinjat saatiin American Type Culture Collection (ATCC) ja niitä viljeltiin DMEM korkea glukoosi väliaineessa (HyClone), jossa oli 10% naudan sikiön seerumia (FBS) olosuhteissa 5% CO 2 37 ° C: ssa. Simvastatiini (natriumsuola, C25H39O6 · Na) hankittiin Sigmalta (St. Louis, MO, USA), joka oli aktivoitu mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Ihmisen IL-6 ostettiin R 0,05. Kaikki tiedot esitetään keskiarvona ± SD kolmen erillisen kokeen.

Tulokset

simvastatiini estää soluproliferaatiota Munuaissyöpäsolujen

tutkia, mitä vaikutuksia simvastatiinin proliferaatioon RCC-solujen, A498 ja 786-O-solut altistettiin eri pitoisuuksia simvastatiinin 48, 72 ja 96 tunnin MTT-määrityksessä. Näin ollen, simvastatiini merkittävästi inhiboivat A498 ja 786-O-solujen ajasta ja annoksesta riippuvalla tavalla (* P 0,05, ** P 0,01) (Fig. 1A ja 1B). Elinkelpoisuus A498 ja 786-O-solut laskettiin 52,6% ja 38,8% käsittelyn jälkeen simvastatiinin (16 uM) 72 tunnin ajan, jossa IC50 on 18,434 ± 1,26 uM ja 16,311 ± 1,21 uM.

Euroopan simvastatiinin vaikutusta solujen elinkelpoisuus mitattiin MTT: llä. (A) A498-solujen ja (B) 786-O-soluja käsiteltiin simvastatiinia 48, 72 ja 96 tuntia. Simvastatiini esti merkitsevästi solujen elinkelpoisuus molemmissa solulinjoissa annoksesta ja ajasta riippuvalla tavalla. Morfologiset muutokset A498 ja 786-O-solujen aiheuttama simvastatiini oli esillä. Kuvat (C) A498 ja (D) 786-O-solut ennen lisäämistä ja sen jälkeen simvastatiinin (16 um) otettiin 48 tuntia. Sen jälkeen kun simvastatiinia 48 tuntia, apoptoottisten elinten (C) A498 ja (D) 786-O-solut voidaan havaita optisella mikroskoopilla. (E) inhiboiva simvastatiinin vaikutusta pesäkkeen muodostumiseen. (F) Siirtokunta määrä laskettiin mikroskoopilla ja pesäkkeiden määritellään koostuvan vähintään 50 solua. Tulokset edustavat keskiarvona ± SD kolmesta toisistaan ​​riippumattomasta kokeesta ja vastaava keskivirhe. * P 0,05; ** P 0,01.

simvastatiinin solumorfologiaan Munuaissyöpäsolujen

yhdenmukainen aiempien havaintojen [32], myös havaittu kaksivaiheinen vaste kasvaimen solujen simvastatiinihoito. Alkuvaiheessa näin dramaattisen muutoksen solun morfologiassa ensimmäisten 6 h 24 h. Myöhemmässä vaiheessa reaktio tapahtui välillä 24 h 72 h, jonka mukana plasmamembraanin menetys eheyden. Morfologia muutos A498 ja 786-O-solujen hoidon jälkeen simvastatiinin (16 uM) 48 tunnin oli kuvassa. 1C ja 1D. Esitetyllä simvastatiini aiheutti solujen perumaan prosesseja ja menettää solukalvon eheyden. Kutistuminen keskeinen solun elin ympäri ytimien havaittiin solukalvon, joka osoittaa apoptoosin tapahtui näissä soluissa. Apoptoottiset ruumis oli selvästi näkyvissä sen jälkeen, kun simvastatiinihoito (16 uM) 48 tunnin ajan.

simvastatiini estää pesäkkeenmuodostusta munuaissyöpäsoluissa

tutki myös simvastatiinin solujen pesäkkeiden muodostumiseen RCC-solut. Tutkimuksemme osoittavat, että simvastatiinin esti pesäkkeiden muodostumista A498 ja 786-O-solujen annoksesta riippuvalla tavalla (kuvio. 1E). Siirtomaa määrä väheni huomattavasti, kun RCC solut simvastatiinia (8 ja 16 uM), verrattuna kontrolliin solut (* P 0,05, ** P 0,01) (Fig. 1 F).

Simvastatiini indusoi apoptoosin munuaissyöpäsoluissa

Voit tarkistaa ja kvantifioida apoptoottisten solujen aiheuttama simvastatiini, käytimme anneksiini V-konjugoidun Alexa Fluor 488 ja propidiumjodidivärjäys analysoida prosenttiosuutta apoptoottisten solujen. Prosenttiosuudet varhaisen ja myöhemmin apoptoottiset solut näkyy oikeassa alakulmassa (LR) ja ylhäällä oikealla (UR) neljänneksessä histogrammien vastaavasti (Fig. 2A ja 2B). Kokonaisprosenttiosuus apoptoottisten solujen (UR + LR) kasvoi 2,64% ei-simvastatiinin käsiteltyjen A498 solujen 7,82% ja 10,15% vuonna simvastatiinia käsiteltyjä soluja (8 ja 16 uM) 48 tunnin kuluttua (* P 0,05, ** P 0,01) (Fig. 2C). Löysimme samanlainen ilmiö 786-O-solujen ja kokonaisprosenttiosuus apoptoottisten solujen nostettiin 6,32%: sta 9,68% ja 17,6% (* P 0,05, ** P 0,01) (Fig. 2D). Hoito A498 ja 786-O solujen 8 ja 16 uM simvastatiinin 48 tuntia indusoi apoptoosia sekä solulinjoissa, ja se oli annoksesta riippuvaisella tavalla. Merkittävä apoptoosin induktio jälkeen Simvastatiinihoidon ilmoittanut syövän vaikutusta on RCC soluihin.

(A) A498 ja (B) 786-O-soluja simvastatiinia (0, 8 ja 16 uM) 48 tuntia ja värjättiin FITC-anneksiiniV ja PI. Prosenttiosuus eloonjääneiden solujen osoitettiin vasemmassa alakulmassa neljännekseen; prosenttiosuus alkuvaiheessa apoptoosin ja myöhäisessä vaiheessa apoptoosin soluja näkyy oikeassa alakulmassa ja oikeassa yläkulmassa neljännesten, vastaavasti. (C, D) kvantifiointi indusoiman apoptoosin simvastatiini laskettiin. Tiedot esitetään keskiarvona ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta. * P 0,05, ** P 0,01.

Muuttoliike ja invaasio estyy simvastatiinin munuaissyöpäsoluissa

tyhjästä määritys toteutettiin havaitsemaan simvastatiinin annetun migraatio munuaisten syöpäsolun. Kuten on esitetty kuviossa. 3A ja 3B, migraatio A498-solujen hillitsi simvastatiinia annoksesta riippuvaisella tavalla. Ja samanlainen vaikutus on havaittu myös 786-O-solut (Fig. 3C ja 3D). Edelleen testaamiseksi vaikutuksen simvastatiinin solun muuttoliikettä ja invaasiota, A498-solut käsiteltiin lisääntyvä keskittyminen simvastatiini levitettiin siirtokuoppaan muuttoliikettä ja matrigeelin-perustana transwell invaasio määrityksiä. Tuloksemme osoittivat, että simvastatiini voisi merkittävästi estää munuaissyövän solumigraatioon ja invaasiota (* P 0,05, ** P 0,01) (Fig. 4A ja 4B) annoksesta riippuvalla tavalla. Löysimme sama vaikutus simvastatiinin 786-O-solut (* P 0,05, ** P 0,01) (Fig. 4C ja 4D).

(A) Scratch määritys A498-solujen käsitelty 0, 8 ja 16 um simvastatiinia. (B) toinen kulkeutumisen inhibition transformoitiin prosenttiosuus välisen etäisyyden kaksi reunaa. Simvastatiinia saaneilla A498-solut osoittivat alhaisempaa haavan kuin kontrolli soluja. (C) Scratch määritys 786-O-soluja käsiteltiin 0, 8 ja 16 um simvastatiinin. (D) simvastatiinia 786-O-solut osoittivat alhaisempaa haavan kuin kontrolli soluja.

(A) Käsittely 0, 8 ja 16 pm simvastatiinin osoitti estetty muuttoliike ja invaasio of A498 soluja. (B) määrä A498 soluja, jotka otettu onnistuneesti ja hyökkäsi laskettiin. (C) Muuttoliike ja hyökkäys 786-O-solujen estyi käsittelyn jälkeen eri pitoisuuksilla simvastatiinia. (D) Vähentynyt määrä 786-O-solut osoittivat suurta estävä simvastatiinin vaikutusta solun liikkuvuuteen. Tiedot esitetään keskiarvona ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta. *

P

0,05, **

P

0,01.

simvastatiini kasvaimen kasvu estyy ja indusoivat kasvainsolujen apoptoosin ksenograftimallia

Voit selvittää simvastatiini estää kasvaimen kasvua

vivo

, A498-solut (5 x 10

6) injektoitiin ihon alle kuhunkin kylkeen nude-hiirten. Kasvaimen kasvun inhibitio oli selvä käsitellyillä hiirillä simvastatiinin 5 mg /kg /d, kun hiiret, joita käsiteltiin PBS: llä (* P 0,05) (Fig. 5A, 5B ja 5C). Lisäksi ei ollut mitään merkittävää toksisuutta hiirillä simvastatiinia (5 mg /kg /d) arvioimalla hiiret painosta 2-ryhmät (Fig. 5D). Jotta saadaan käsitys siitä, simvastatiini voi indusoida RCC-solujen

vivo

parafiinileikkeitä A498 tuumoriksenografteja alkaen nude-hiiret johdetaan napaan deoksinukleotidyylitransferaasilla dUTP nick end merkinnät (TUNEL) määritys. Lisääntymisen TUNEL-positiivisten solujen osoitti selvästi, että simvastatiinin voisi indusoida RCC:

vivo

(* p 0,05) (Kuva. 5E ja 5F).

Kuvia leikatun kasvaimet (A) ja nude-hiirten (C) otettiin ohjaus- ja hoitoryhmässä. Nuolet osoittavat ksenografteista. (B) Kuvaajat edustavat keskimääräistä kasvaimen tilavuutta A498 ksenograftien käsitelty tai ilman simvastatiini. (D) Paino käyrä kantavien nude-hiirten A498 kasvaimia simvastatiinia. (E) edustaja TUNEL värjäytymistä (punainen fluoresenssi) ja A498 munuaissyöpäsolujen ksenograftien. (F) Pylväsdiagrammi osoittaa määrällisesti TUNEL positiiviset A498 solujen kasvain xenogafts. Tiedot esitetään keskiarvona ± SD, * p 0,05.

Simvastatiinin vaikutus ilmentymisen solun apoptoosiin liittyvien proteiinien

ilmentymisen pro-apoptoottisen proteiinin Bax on usein liittyy voimistunutta apoptoosia, kun taas anti-apoptoottisen proteiinin Bcl-2 on liitetty apoptoosin estämiseen kohdesoluissa [33], [34]. Sen jälkeen käsiteltiin kohonneet pitoisuudet simvastatiinin 48 tuntia, havaitsimme ilmaus Bax ja Bcl-2: n RCC-soluissa. Yhdenmukainen lisääntynyt apoptoosin A498 ja 786-O, taso Bax nostettiin samalla tasolla Bcl-2 vähennettiin (Fig. 6A). Suhde Bax /Bcl-2-proteiinin taso on ratkaiseva tekijä lähettämään apoptoosisignaalin. Vertaamalla intensiteetti niiden bändejä, löysimme suhde Bax /Bcl-2 lisääntyi annoksesta riippuvalla tavalla (* P 0,05, ** P 0,01) (Fig. 6B). Kun kohonnut suhde Bax /Bcl-2, alavirran casepase-3 apoptoosin on aktivoitu. Kuten on esitetty, surviviinin ilmentymiseen ja pro-kaspaasi-3-oli vähentynyt, kun taas ekspressio katkaistun kaspaasi-3 ja lohkaisu PARP nostettiin.

(A) A498 ja 786-O-solut määritettiin Bcl-2, Bax, täyspitkät kaspaasi 3 ja pilkottiin kaspaasi 3, täyspitkät PARP ja lohkaistaan ​​PARP western blotting-analyysi GAPDH kontrollina. (B) Bax /Bcl-2 suhde A498 ja 786-O-solut. Densitometrian arvo kunkin kaistan määritettiin ImageJ. Aineisto esitetään keskiarvona ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta. * P 0,05, ** P 0,01. (C-H) tasot mTOR, AKT, ERK ja niiden fosforyloituu muotoja analysoitiin western-blottauksella. Kvantitointi p-mTOR /mTOR, p-AKT /AKT ja p-ERK /ERK-suhde määritettiin densitometrisesti analyysi.

simvastatiini estää proliferaatiota ja etäpesäkkeiden RCC-solujen kautta AKT /mTOR ja ERK polku

Western blotting käytettiin tunnistamaan taustalla mekanismi, jonka simvastatiini aiheutti sen toimintaa. mTOR on usein väärin säädellystä syöpäsoluissa, joka on alle tutkimusta mahdollisena kohteena RCC potilaille [35]. AKT, koska ylävirtaan mTOR, on ratkaiseva rooli lisääntymistä, eloonjääntiä ja liikkuvuus syöpäsolujen ja se voi suoraan fosforyloida mTOR [36]. Siksi tutkimme simvastatiinin vaikutusta sääntelyä AKT /mTOR-reitin. Sen jälkeen A498 ja 786-O-soluja simvastatiinia (8 ja 16 uM) 24 ja 48 tuntia, fosforylaatiota tasot AKT ja mTOR oli tehokkaasti tukahdutettu. Suhteet p-AKT /AKT sekä p-mTOR /mTOR myös väheni aika- ja annoksesta riippuvasti (Fig. 6C, 6D, 6E ja 6F). ERK, joka on taajuus poikkeavasti aktivoituu syöpäsoluissa, edistää syöpäsolujen lisääntymistä ja etäpesäkkeiden [37]. Sitten testasimme vaikutuksia simvastatiinin ERK aktivointia, ja löysi simvastatiinin esti fosforylaatiota ERK on aika- ja annoksesta riippuvaisella tavalla sekä A498 ja 786-O-solut (Fig. 6G ja 6H).

roolin tutkimiseksi AKT ja ERK: in leviämisen ja liikkuvuuden RCC soluja, käytimme siRNA on pudotus AKT ja ERK1 /2-geenin ilmentymisen A498-soluissa. Kuten on esitetty kuviossa. 7A ja 7B, Länsi-blotting-analyysi osoitti merkittävästi vähentää proteiinin tasot AKT ja ERK1 /2 solut, jotka oli transfektoitu AKT ja ERK1 /2 campared soluihin transfektoitu mock siRNA. Seuraavaksi arvioimme simvastatiinin aiheuttama apoptoosin ja sen anti-etäpesäke aktiivisuus A498-soluissa, jotka oli transfektoiduissa kanssa AKT tai ERK1 /2 siRNA. Tulokset osoittivat, että knockdovvn AKT tai ERK1 /2 merkittävästi tukahdutetaan solujen proliferaatiota, migraatiota ja invaasiota (Fig. 7C, 7D, 7E ja 7F), mikä osoittaa, että AKT ja ERK1 /2 on tärkeä rooli solujen lisääntymisen, migraation ja invaasion in RCC soluissa . Lisäksi simvastatiini merkittävästi inhiboivat ja motiliteetin AKT tai ERK1 /2 pudotus soluja, jotka viittaavat siihen, että inhibitio AKT tai ERK-signalointireitin voisi parantaa syövän vaikutusta simvastatiinin.

(A, B ) A498-solut transfektoitiin ja simvastatiinia (8 uM), ja tasot AKT ja ERK analysoitiin western-blottauksella GAPDH kontrollina. Sen jälkeen, kun on transfektoitu AKT tai ERK siRNA, A498-soluja inkuboitiin puuttuessa tai läsnä simvastatiinin (8 uM) 48 tuntia. Solun elinkelpoisuus mitattiin MTT: llä (C, D), ja solujen maahanmuuton ja invaasiota mitattiin transwell määrityksellä (E, F). * P 0,05 tai ** p 0,01, verrattuna käsittelemättömiin soluihin (Mock). # P 0,05 tai ## p 0,01, verrattuna soluihin transfektoitu AKT tai ERK siRNA.

simvastatiini estää proliferaatiota ja etäpesäkkeiden RCC soluihin IL-6 indusoi JAK2 /STST3 reitin

Aiemmin statiinit on raportoitu aiheuttavan pleiotrooppisia vaikutuksia solun signaloinneista ja toiminnot liittyvät tulehdukseen [38]. Näin ollen meidän spekuloida onko simvastatiini kiinnostavuus kasvaimen estävää vaikutusta kautta moduloiva kasvain edistäviä tulehdus. Kertyvät todisteet on raportoitu proinflammatoristen JAK2 /STST3 reitin näyttelee kriittistä roolia syövän etäpesäkkeiden, apoptoosin ja angiogeneesin [39]. Erityisesti IL-6 on sytokiini, joka voi aktivoida JAK2 /STAT3 signaloinnin syöpäsoluissa, jolla on merkittävä vaikutus kasvaimen synnyssä [40]. Sen arvioimiseksi, onko IL-6 voi indusoida proliferaatiota ja etäpesäke RCC syöpäsolujen, me seerumin puutteessa A498-soluja 12 tunnin ajan ja sitten viljeltiin niitä läsnä ollessa tai ilman IL-6: ssa 48 tuntia. Sitten solujen elinkyky mitattiin MTT-määrityksellä, kun taas solujen metastaasin kyky mitattiin transwell määrityksessä. Huomasimme, että IL-6 voi oleellisesti aiheuttaa lisääntymistä ja etäpesäkkeiden A498 soluja. Lisäksi, IL-6 indusoitua proliferaatiota ja etäpesäkkeiden A498-soluja voidaan tukahduttaa simvastatiinin (8 uM) (Fig. 8A ja 8B).

(A, B) A498-soluja käsiteltiin IL-6 ( 10 ng /ml) 48 h, ja solujen elinvoimaisuus ja liikkuvuus arvioitiin käyttäen MTT: n ja transwell määrityksessä vastaavasti. Kukin pylväs edustaa keskiarvoja ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta. * P 0,05 tai ** p 0,01, verrattuna soluihin hoitaa ilman IL-6. (C-H) Simvastatiini esti fosforylaatiota Jak2, STAT3 (Tyr705) ja STAT3 (Ser727) munuaisten syöpäsoluissa ja ajasta riippuvaisella tavalla. Kvantitatiivinen analyysi p-JAK2 /JAK2, p-STAT3 (Tyr705) /STAT3 ja p-STAT3 (Ser727) /STST3 suhde näkyy jokaisessa alapaneeli.

Seuraavaksi tutkimme onko simvastatiini inhiboi fosforylaatiota JAK2 ja STAT3 indusoi IL-6 RCC-soluissa. A498 ja 786-O-soluja esi-simvastatiinia (8 ja 16 uM) 12, 24 ja 48 tuntia, ja sitten näitä soluja inkuboitiin IL-6 (10 ng /ml) 10 min. Western blotting analyysit osoittivat, että simvastatiinin merkitsevästi esti IL-6 indusoi fosforylaatiota JAK2 ja STAT3 sekä Tyr705 ja Ser727 päällä (Fig. 8C-8H).

Sen arvioimiseksi, onko STST3 osallistuu simvastatiinin aiheuttama apoptoosin ja anti -metastasis RCC soluja. Käytimme siRNA on pudotus STST3 geeniekspression A498-soluissa. Sen jälkeen kun oli transfektoitu STST3 siRNA tai kontrollioligonukleotidit, The A498 soluja simvastatiinia (8 uM) tai kontrolli. Kuten on esitetty kuviossa. 9A, knockdovvn STAT3 merkittävästi tukahdutti jakaantumiseen, kulkeutumiseen ja invaasion A498-soluissa (kuvio. 9B ja 9C), mikä osoittaa, että STST3 tärkeä rooli leviämisen ja potevilla A498-soluissa. Lisäksi, yhdistettynä simvastatiinihoito (8 uM) ja STAT3 siRNA laski solujen elinkelpoisuuden ja motiliteetti A498-solujen, verrattuna soluihin käsiteltiin STAT3 siRNA yksin. Sen vuoksi nämä tulokset viittaavat siihen, että IL-6 indusoi JAK2 /STAT3-reitin liittyi eloonjäämisen ja etäpesäkkeiden RCC-soluissa, ja inhibitio IL-6 indusoi JAK2 /STAT3-signalointireitin voi herkistää RCC solujen Simvastatiinihoidon.

(A) A498-soluja transfektoitiin STAT3 siRNA ja simvastatiinia (8 uM), ja tasot STAT3 analysoitiin western-blottauksella GAPDH kontrollina. (B, C) jälkeen transfektoitiin STAT3 siRNA, A498-soluja inkuboitiin puuttuessa tai läsnä simvastatiinin (8 uM) 48 tuntia. Solun elinkelpoisuus mitattiin MTT: llä, (B), ja solujen maahanmuuton ja invaasiota mitattiin transwell määritys (C). * P 0,05 tai ** p 0,01, verrattuna käsittelemättömiin soluihin (Mock). # P 0,05 tai ## p 0,01, verrattuna soluihin, jotka on transfektoitu STST3 siRNA.

simvastatiini estää fosforylaatiota AKT, ERK ja STST3 ksenograftikasvaimissa

Voit selvittää vaikutus simvastatiinin kasvuun A498 -tuumoriksenografti liittyy esto AKT, ERK1 /2 ja STAT3 toimintaa. Western blotting-analyysi AKT, ERK1 /2 ja STAT3 aktivointi osoitti, että fosforylaatiota tasot AKT, ERK1 /2 ja STAT3 kohdentuvat tehokkaasti tukahdutettiin A498 -ksenografti, hoidon jälkeen simvastatiinin

vivo

(Fig. 10). Kaiken Tutkimuksemme osoitti, että simvastatiini voi estää munuaisten kasvaimen kasvua

vivo

joihin esto AKT, ERK1 /2 ja STST3 toimintaa.

Western blotting-analyysin tekeminen fosforyloidun AKT, ERK ja STAT3 tasot -tuumoriksenografti kerätty nude-hiirissä käsitelty tai ilman simvastatiini. Kvantitointi p-AKT /AKT, p-ERK /ERK ja p-STAT3 /STAT3-suhde määritettiin densitometrisesti analyysi. * P 0,05 verrattuna ohjaus.

Keskustelu

tahrat ovat HMG-CoA-reduktaasin, joita käytetään laajasti hoidettaessa lipidihäiriöiden, erityisesti hyperkolesterolemia [41]. Viime aikoina useat Tutkimukset ovat osoittaneet, että statiinit näytteille antituumorivaikutuksia vastaan ​​eri syöpäsoluja eri alkuperää [42].