Krooninen sairaus

tiivistelmä

D-vitamiinin puutos on yhdistetty useiden yleisten sairauksien, kuten syövän ja tutkitaan mahdollisena riskitekijänä näitä ehtoja. Me raportoitu silmiinpistävä esiintyvyys D-vitamiinin puutos Skotlannissa. Aiemmat epidemiologiset tutkimukset ovat osoittaneet yhdistyksen välillä alhaisen ruokavalion D-vitamiinin ja peräsuolen syöpä (CRC). Käyttämällä tapauskontrollitutkimuksessa suunnittelu, testasimme sekä plasman 25-hydroksi-D-vitamiinin (25-OHD) ja CRC (2001 tapausta, 2237 tarkastukset). Sen määrittämiseksi, onko plasma 25-OHD tasot olekaan yhteydessä CRC riski, haimme ohjaustoiminto instrumenttimuuttujamenetelmää (IV) menetelmä Mendelin satunnaistaminen (MR) lähestymistapa neljällä yhden nukleotidin polymorfismien (rs2282679, rs12785878, rs10741657, rs6013897) aikaisemmin osoitettu liittyvän plasman 25-OHD. Low plasma 25-OHD tasot olivat yhteydessä CRC riskin raakaa mallissa (riskisuhde (OR): 0,76, 95%: n luottamusväli (CI): 0,71, 0,81, p: 1,4 × 10

-14) ja säätämisen jälkeen iän, sukupuolen ja muiden häiritsevien tekijöiden. Käyttämällä alleeli pisteet, joka yhdistetään kaikki neljä SNP kuin IV arvioitu syy-vaikutus oli OR 1,16 (95% CI 0,60, 2,23), kun se oli 0,94 (95% CI 0,46, 1,91) ja 0,93 (0,53, 1,63) käytettäessä ylävirran (rs12785878, rs10741657) ja alavirran alleeli pisteet (rs2282679, rs6013897), tässä järjestyksessä. 25-OHD-tasot käänteisesti yhteydessä CRC riski, kanssa viime meta-analyysit. Se, että tämä havainto ei monistaa, kun MR lähestymistapaa käytettiin ehkä heikon välineisiin, antaa pienitehoisia osoittaa vaikutusta ( 0,35). Esiintyvyys ja aste D-vitamiinin puutos keskuudessa asuvien henkilöiden pohjoissuunnassa leveysasteilla on erittäin tärkeä, koska sen suhde tauti. Valaista vaikutus D-vitamiinin CRC syöpäriskiin, lisäksi iso tutkimukset D-vitamiinin ja CRC riskien tarvitaan ja /tai vaihtoehtoisten menetelmien, jotka ovat vähemmän herkkiä tehoton väline rajoituksia.

Citation: Theodoratou E Palmer T, Zgaga L, Farrington SM, McKeigue P, Din FVN, et ai. (2012) instrumenttimuuttujamenetelmää Arvio Syy vaikutus Plasma 25-hydroksi-D-vitamiini on peräsuolen syöpäriski A Mendelin Satunnaistaminen Analysis. PLoS ONE 7 (6): e37662. doi: 10,1371 /journal.pone.0037662

Editor: Siu Tim Cheung, University of Hong Kong, Hongkong

vastaanotettu: 29 marraskuu 2011; Hyväksytty 23. huhtikuuta 2012 Julkaistu: 06 kesäkuu 2012

Copyright: © 2012 Theodoratou et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat seuraavat tukitoimet: Cancer Research UK Programme avustus (C348 /A12076), Medical Research Council (G0000657-53203) ja Scottish Executive Chief Scientist toimisto (CŽH /4/529 CZB /4/449), ja Centre Grant CORE osana Digestive Cancer kampanja. Dr. Theodoratou rahoittaa Cancer Research UK Fellowship C31250 /A10107. Dr. Palmer rahoittaa MRC keskustaan ​​apurahan G0600705. Dr. Zgaga tukee Yhdysvaltain National Institute for Terveys- National Cancer Institute U19 ohjelman avustus (1U19CA148107-01) osana corect konsortion. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

D-vitamiinia voidaan nauttia tai syntetisoida ihoa inaktiivisia esiasteita toiminnan kautta UV auringonvalolta. Sen aktiivinen muoto, 1,25 (OH)

2D (1,25 (OH)

2D

2 ja /tai 1,25 (OH)

2D

3) tuotetaan jälkeen kaksi hydroksylaation vaiheet maksassa ja munuaisissa (kuvio 1) [1]. Esiintyvyys D-vitamiinin puutos Skotlannissa on korkea johtuen korkeasta pohjoista leveyttä, usein pilvisyys (puute auringonvalo heikentää D-vitamiinin synteesin talvikuukausina), sisätiloissa suuntautunut elämäntapa ja huono ruokavalio, ja niin rutiini D-vitamiinin ja kalsiumin täydentämistä varten kotiin sidottu ( 65-vuotiaat) suositellaan [2]. Tuoreessa tutkimuksessa yli 2000 terveiden yksilöiden asuu Skotlannissa, huomasimme, että 77,5%: n yksilöt olivat D-vitamiinin puutosta [3]. Vaikka Reference ravinteiden saannin (RNI) D-vitamiinin tieteellisen neuvoa-antavan komitean ravitsemusta Skotlannissa yli 65-vuotias on 10 ug päivässä [4], on olemassa suuri vaihtelu suositeltavasta päiväannoksesta (RDA) eri tutkimusryhmien ja laitosten [5] – [8].

D-vitamiini on pidetty merkitystä luuston sairaus ja kalsiumin aineenvaihduntaan, mutta on yhä enemmän todisteita siitä, että D-vitamiinin puutos saattaa olla riskitekijä syöpään , sydän-, metabolinen, infektio- ja autoimmuunisairauksiin [3]. Erityisesti D-vitamiini voi vaikuttaa peräsuolen syöpä (CRC) riski kautta sen sitoutumisen D-vitamiini- reseptoriin (VDR) [9] vaikutetaan solujen lisääntymistä, erilaistumista, apoptoosin ja angiogeneesin [10], [11] tai jotka vaikuttavat insuliiniresistenssiin [12] . Tulokset tapaus-verrokki ja kohorttitutkimukset ovat epäselviä, mutta tulokset Kohorttitutkimusten mitataan 25-hydroksi-D-vitamiinin (25-OHD) veressä tai seerumissa ovat yhdenmukaisia ​​osoittaa käänteisen yhdessä CRC [13] – [15] .

luominen syy välisiä ympäristöaltisteiden ja yleisten sairauksien käyttäen tavanomaisia ​​menetelmiä havainnointitutkimukset on ongelmallista johtuen ratkaisematta sekoittavia, kääntää syy-yhteyttä ja valinta bias [16]. Teoria taustalla Mendelin satunnaistaminen (MR) lähestymistapa perustuu satunnaisen valikoiman alleelien aikaan sukusolujen muodostumista, mikä vastaa satunnaistetussa kontrolloidussa tutkimuksessa, jossa ihmiset jaetaan satunnaisesti hoitotoimenpiteiden. Tärkein käsite MR Tutkimus perustuu kolmeen suhteisiin: genotyyppi keskitason fenotyyppi; väli fenotyyppi-tauti; genotyyppi-tauti [17], [18] ja sitä voidaan käyttää tunnistamaan syy ympäristön riskitekijät ilman useita mahdollisia ongelmia observational epidemiologian [19]. MR lähestymistapa voi myös vahvistaa syy päätelmät rajoittamalla käänteisen syy ongelmiin (biologinen, altistumisen tehtävä, koska raportointi bias), valinta bias ja regressio laimennus bias [19]. Kuvio 2 havainnollistaa tätä käsitettä sovelletaan ilmoittamaan syy päättely.

instrumenttimuuttujamenetelmää mallit käyttävät yhdistysten C ja A arvioida syy-seuraus riskitekijän päälle tulos (B).

analyyttinen lähestymistapa käytetty täällä MR on instrumenttimuuttujamenetelmää (IV) malli, jossa geneettinen variantti käsitellään välineenä, jonka oletetaan liittyvän sairauden vain sen yhdessä väli- fenotyyppi [18]. Tämä edellyttää ensinnäkin tunnistaa yhden tai useamman geneettisiä variantteja (tyypillisesti yhden nukleotidin polymorfismin tai SNP) kuin IV, joka on tunnettu julkaistuihin tietoihin liittyvän fenotyypin [18]. Kolme keskeiset olettamukset MR lähestymistapa ovat: a) genotyyppi liittyy fenotyyppi; b) genotyyppi on riippumaton mitataan ja mittaamatta sekoittavat tekijät; ja c) vaikutus genotyypin lopputuloksesta välittyy vain väli- fenotyyppi (ei pleiotropia) [17], [18].

Tässä tutkimuksessa, ryhdyimme arvioida suhdetta CRC, plasman 25-OHD tasojen ja genotyypin 4 geenipaikkojen koodaus geenien D-vitamiinin aineenvaihdunnan (taulukko S1) ja joka on aiemmin osoitettu olevan yhteydessä plasman D-vitamiinin yhdistetyssä meta-analyysi genomin laajuinen yhdistys tutkimukset [20]. Sen arvioimiseksi, onko syy-yhteyttä plasman 25-OHD ja CRC riski sovelsimme ohjaustoiminnon IV estimaattori.

Methods

Ethics lausunto

Eettinen hyväksyntä SOCCS tutkimus saatiin monikeskustutkimus Research eettinen komitea Skotlanti (viitenumero 01/0/05) sekä tutkimuksen ja kehittämisen toimisto NHS Lothian (viitenumero 2003 /W /GEN /05).

tutkimus Väestö

Tutkimme osajoukko 2001 tapauksissa ja 2237 tarkastuksia peräisin tapauskontrollitutkimuksessa CRC (tutkimus paksusuolisyövän Skotlannissa, SOCCS). Meidän tavoitteena oli rekrytoida kaikki tapahtuman tapauksissa (1999-2006) adenokarsinooma colorectum esitellä kirurgisia yksiköitä Skotlannissa (18-79 vuotta vanha). Exclusions olivat potilaan kuolemaan ennen toteamista, potilas liian sairas osallistua, toistuvia tapauksia, tai potilas kykene antamaan tietoista suostumustaan ​​johtuen oppimisvaikeudet tai muita sairauksia. Me palvelukseen noin 40% kaikista tapahtumasta tapauksista Skotlannissa tutkimuksen aikana. Samana aikana tarkastuksia tehtiin sattumanvaraisesti väestöpohjaisen rekisteriin (yhteisön terveyttä indeksi) ja kutsutaan osallistumaan. Osallistumisaste joukossa lähestyi olivat noin 58% tapauksista ja arviolta 57% valvontaa. Yli 99% tutkimukseen osallistuneista oli valkoinen valkoihoinen (katso [21] edelleen rekrytoinnin lisätietoja).

Koehenkilöt suorittanut yhden kyselyn elintapoihin ja syöpä tietoa ja heitä pyydettiin ilmoittamaan niiden asema vuosi ennen diagnoosia tai rekrytointi, mukaan lukien tiedot niiden yleisestä terveydentilasta, fyysinen aktiivisuus, tupakointi, saanti tahansa säännöllinen saanti aspiriinia ja tulehduskipulääkkeiden, pituus, paino ja vyötärönympärys kirjattiin. Lisäksi on esitettävä puolikvantitatiivinen ruokailutiheyskyselyn kyselyn (Scottish Collaborative Group FFQ, Version 6.41) valmistui osallistujat (https://www.foodfrequency.org), joka koostui 150 elintarvikkeita ja yksilöt pyydettiin kuvaamaan määrä ja taajuus kunkin ruoan luettelossa he syövät vuodessa ennen diagnoosia tai rekrytointia. Lisätietoja kyselylomakkeet esitetty yksityiskohtaisesti aiemmin [21]. Lisäksi jokainen palvelukseen syöpä aihe on valittu amerikkalainen sekakomitean Cancer (AJCC) vaihe johdettu synteesi kliinisiä, patologisia ja kuvantamisen tiedot [22]. Lopuksi, osajoukko syöpätapauksista (1423, näistä 1376 25-OHD mitattuna) oli tietoa oireista he olivat kehittäneet ennen rekrytointia. Ryhmittelimme tapauksissa neljään ryhmään: (1) mitään oireita (190 tapausta), (2) lieviä oireita (290; mukaan lukien: muutokset suolen, ummetus, ajoittainen ripuli ja ummetus, useammin ulosteet, ripuli, löysät ulosteet, ylimääräinen tuuli, limaa ulosteessa ja vatsavaivat) ja (3) vaikeat oireet (220; mukaan lukien verenvuoto peräsuolesta, oksentelu, laihtuminen, voimattomuus, ruokahaluttomuus ja pahoinvointi) ja (4) sekä, lieviä ja vakavia oireita (676) .

suvussa riski määritettiin mukaan Scottish Executive syövän suuntaviivat (https://www.sehd.scot.nhs.uk/), kriteerit suuren suvussa paksusuolen syövän riskiä ovat: 1) vähintään kolme perheenjäsenet kärsivät peräsuolen syövän tai ainakin kaksi kolorektaalisyöpä ja yksi endometriumsyöpätapausta vähintään kaksi sukupolvea; yksi kyseinen suhteellinen on oltava 50 vuotias diagnoosin ja yksi sukulaisia ​​on oltava ensimmäisen asteen sukulainen kahden muun; tai 2) läsnäolo HNPCC oireyhtymän; tai 3) testaamattomia ensimmäisen asteen sukulaiset tunnetun geenin kantajia. Kriteerit kohtalainen riski ovat: 1) yksi ensimmäisen asteen sukulainen vaikuttaa peräsuolen syöpään ikäinen 45 vuotias; tai 2) kaksi vaikutti ensimmäisen asteen sukulaiset yhdellä ikäinen 55-vuotias; tai 3) kolme vaikuttaa sukulaisten kanssa peräsuolen tai kohdun limakalvon syöpä, jotka ovat ensimmäisen asteen sukulaisia ​​keskenään ja yksi ensimmäisen asteen sukulainen konsultti. Yksilöt, jotka eivät täytä kaikkia edellä mainittuja perusteita luokitellaan matalan suvussa riski (Scottish Executive syöpä suuntaviivat). Tätä analyysiä suvussa oli koodattu niin alhainen vs. keski /korkea suvussa CRC.

Measurement of Plasma 25-OHD

nestekromatografia-tandem-massaspektrometrialla (LC-MS /MS ) menetelmää käytettiin mittaamaan 25-hydroksi-D3 ja D2. Tutkimuksessa esitetään 25-OHD (yhteensä 25 OHD2 ja 25-OHD3); kuitenkin, suurin osa näytteistä ei sisältänyt D2 ( 3 ng /ml). Alempi havaitsemisraja kanssa LC-MS /MS-menetelmällä oli 4 ng /ml D3 [23]. LC MS /MS-menetelmä suoritettiin seuraavien standardien mukaisesti asianmukainen laadunvalvonta (mukaan lukien useita mittauksia samasta näytteestä meidän kohortin ja standardointi vakiokaasujen vertailumateriaali, SRM 972) ja se on mitoitettu niin edullinen 25-OHD mittausmenetelmä populaatiotutkimuksiin kansainvälinen asiantuntijapaneeli [23]. Lisätietoja tästä menetelmästä löytyy muualta [23], [24]. Jotta tulos 25-OHD mittaukset standardoitu poistaa merkittävä vaikutus kuukausi, kun verta otettiin 25-OHD pitoisuus, kuten kuvataan yksityiskohtaisesti Zgaga ym [3].

genotyypin Data

DNA-näytteet täsmällinen määrittely Pico-GreenTM ja laatua valvotaan ennen lähettämistä. Genotyypin tehtiin käyttäen TaqMan vuonna Wellcome Trust Clinical Research Facility (WTCRF) Edinburgh. 2000 aiheita varten rs2282679 genotyypattiin osana array-pohjainen kandidaattigeeni lähestymistapaa käyttäen Illumina Infinium I Custom array alusta ja suorittaa Illumina (San Diego). Case ja kontrolli-DNA-näytteet on tallennettu, genotyyppi ja analysoitiin samalla tavalla. Lisäksi vältetään mahdolliset systemaattista erä-erien vaihtelu tai bias, näytteet tunnistetiedoista voidaan mielialan tilan ja jaettiin satunnaisesti sisällä levyjä. Data kohdistui Illumina tai WTCRF laadunvalvontamenettelyjä. Oletukset Hardy-Weinberg Equilibrium (HWE) testattiin käyttäen chi-squared test.

Tilastollinen analyysi

tilastopaketista käytettiin Stata versio 11.0 (Stata Corp, College Station, Texas). Osallistujat jaettiin kvintiileihin perustuu yhdistettyyn jakaumat tapauksissa ja valvontaa. Logistinen regressio malleja käytettiin arvioitaessa vahvuutta yhdistyksen välillä CRC riskin ja D-vitamiinin pitoisuus plasmassa. Yhdistykset testattiin kolmessa logistinen regressio mallia (raa’at malli, malli I ja malli II). Malli I korjattiin iän ja sukupuolen ja malli II korjattiin ikä, sukupuoli, Carstairs Deprivaatio Index, energia (MJoules /vrk), tupakointi (tupakoi, entinen tupakoitsija ja nykyinen tupakoitsija), painoindeksi (BMI, kg /m

2, jatkuva), säännöllinen NSAID saanti (kyllä ​​vs. ei), suvussa (low vs. keski /korkea) syövän ja liikunnan (h pyöräilyä ja muiden urheilutoimintaa, 4 ryhmää). Testasimme myös yhdistyksen jälkeen sukupuoli, vaihe syövän diagnoosin (AJCC), kun oireita ja välinen aika diagnoosin ja rekrytoinnin kerrostumista. Lisäksi yhdistyksen välillä CRC ja rs2282679, rs12785878, rs10741657 ja rs6013897 testattiin. Dataset tähän analyysiin oli suurempi, ja se käsitti kaikki SOCCS TET joille genotyypitys valittujen SNP oli onnistunut (jopa 5449). Testasimme myös vuorovaikutusta genotyypin ja D-vitamiinin pitoisuus plasmassa on CRC vertaamalla mallin ja ilman vuorovaikutusta termi kahden muuttujan välillä, käyttäen uskottavuusosamäärä. Oletukset Hardy-Weinberg Equilibrium testattiin käyttäen chi-squared test.

arvioida syy-riskisuhde haimme säätötoiminon IV estimaattori 3-tason kategorinen väline Z koodattu 0, 1, 2 (SNP ) jatkuva väli- fenotyyppi X (plasma 25-OHD

3) ja binäärisen tuloksen Y (CRC). Ensimmäisessä vaiheessa ohjaus on lineaarinen regressio, jossa oli välituotetta fenotyyppi (X) instrumentin (t) (Z), joka generoi ennustetut arvot välissä fenotyyppi. Toinen vaihe on logistinen regressio tuloksista (Y) on ennustetut arvot väli- fenotyyppi, johon sisältyy arvioitu jäännökset ensimmäisen vaiheen lineaarinen regressio toisen vaiheen logistinen regressio [25]. Ajatuksena on, että ensimmäisen vaiheen jäännökset voidaan korreloida mittaamattoman sekoittavia tekijöitä. Lisäksi raakaöljyn mallia, myös ikä- ja sukupuoli. Vahvuus sovellettu välineiden arvioitiin käyttämällä F tilastoja ensimmäisen vaiheen lineaarinen regressio, jossa arvot alle 10 pitää todisteena heikko väline [26]. Lopuksi levitetään neljä ylimääräistä IV estimaattorit jotka esitellään ja kuvataan oheismateriaali (Methods S1).

Tulokset

plasman 25-OHD ja CRC

peräsuolen syöpäriski oli heikompi plasman 25-OHD raa’assa mallissa (Ristitulosuhde (OR): 0,76, 95%: n luottamusväli (CI): 0,71, 0,81, p: 1,4 × 10

-14), kun säätämällä ikä ja sukupuoli (OR: 0.75, 95% CI: 0,70, 0,81, p: 9.1 x 10

-15) ja oikaisun jälkeen ikä, sukupuoli, Carstairs Deprivaatio Index, energia, tupakointi, painoindeksi, säännöllinen NSAID saanti , suvussa syövän ja liikunnan (OR: 0.75, 95% CI: 0,69, 0,81, p: 4,6 × 10

-12) (taulukko 1). 25-OHD CRC yhdistys oli vahvempaa miesten (raakaöljyn malli: OR: 0,68, 95% CI: 0,62, 0,75, p: 1,1 × 10

-13) kuin naisilla (raa’at malli: OR: 0,84, 95% CI : 0,76, 0,93, p: 0,0009) (taulukko S2). 25-OHD CRC yhdistys oli samanlainen varhainen (raakaöljyn malli: OR: 0,79, 95% CI: 0,72, 0,86, p: 2,0 × 10

-8) versus myöhäisessä AJCC vaiheessa (raakaöljyn malli: OR: 0,74, 95 % CI: 0,68, 0,80, p: 5,8 × 10

-12, taulukko S3). Lisäksi 25-OHD CRC yhdistys oli heikompi niille CRC potilailla, jotka olivat oireettomia aikaan diagnoosin (raakaöljyn malli: OR: 0,87, 95% CI: 0,73, 1,02, p: 0,09), verrattuna niihin, joilla lievä (raa’at malli: OR: 0,80, 95% CI: 0,70, 0,91, p: 0.001) tai vakavia oireita (raakaöljyn malli: OR: 0,78, 95% CI: 0,67, 0,90, p: 0,001; taulukko S4). Lopuksi 25-OHD CRC yhdistys oli samanlainen niille CRC potilaista, jotka rekrytoitiin pian diagnoosin jälkeen (raakaöljyn malli: OR: 0,77, 95% CI: 0,71, 0,83, p: 7.8 x 10

-5), verrattuna niille, jotka on otettu palvelukseen myöhemmin (raakaöljyn malli: OR: 0,76, 95% CI: 0,70, 0,83, p: 1,3 × 10

-10, taulukko S5).

genotyypin ja Plasma 25 -OHD tasot

ei ollut näyttöä lähtö HWE kaikkien neljän SNP: rs2282679 p-arvo = 0,25, rs12785878 p-arvo = 0,78, rs10741657 p-arvo = 0,07 ja rs6013897 p-arvo = 0,52. A-alleelin rs2282679 ja T-alleelin rs12785878 liittyi korkeampi plasman 25-OHD (taulukko 2). Erityisesti olemme havainneet, että rs2282679 ja rs12785878 genotyypit liittyy alentuneeseen 25-OHD puutos määritellään 10 ng /ml (rs2282679: kunkin alleelin OR = 0,88, 95% CI 0,80, 0,98, p = 0,02 , rs12785878: kunkin T-alleelin OR = 0,89, 95% CI 0,79, 1,00, p = 0,05; rs10741657, taulukko 2). Yhdistykset eivät olleet erilaisia, kun rajoitettu analyysi vain kontrolleissa (tuloksia ei ole esitetty).

genotyypin ja CRC

Kaiken ei ollut näyttöä yhdistyksen välillä jollekin neljä SNP ja CRC riski (taulukko 3). Kun stratifioitiin plasma 25-OHD tasojen, rs10741657 SNP liittyi alentunut CRC riski niille matalien plasman 25-OHD tasojen (per alleelin OR = 0,88, 95% CI 0,75, 1,02, p = 0,09) ja suurentunut CRC riski niille korkean plasman 25-OHD tasojen (OR = 1,12, 95% CI 0,98, 1,27, p = 0,09), joiden p-arvo vuorovaikutuksen (p = 0,05).

Ennen MR lähestymistapa arvioimme IV oletuksia. Ensimmäinen (joka genotyyppi liittyy fenotyyppi) täyttyi, koska meillä on valittu neljä SNP joiden todettiin olevan yhteydessä plasman 25-OHD tasojen yhdistetyssä meta-analyysi genomin laajuinen yhdistys tutkimukset [20]. Toinen (genotyyppi on riippumaton mitataan ja mittaamatta sekoittavien tekijöiden) testattiin tutkimalla onko instrumentit liity mihinkään mitattujen sekoittavia tekijöitä, jotka saattavat vaikuttaa suhdetta plasman 25-OHD tasojen ja CRC (taulukko S6) ja odotetusti [ ,,,0],27], ei ollut näyttöä yhdistyksen näiden häiritsevien tekijöiden ja genotyypit. Kolmas oletus (vaikutus genotyypin lopputuloksesta välittyy vain välituotteen fenotyyppi) testattiin kyselemällä on pleiotrooppisten yhteyksiä geenien ja SNP että me äskettäin [28]. Kaikille SNP ei ollut näyttöä pleiotropia ja ne olivat vain todettu olevan yhteydessä plasman D-vitamiinin.

Käyttämällä rs2282679 kuin IV arvioitu syy-vaikutus plasmassa 25-0HD CRC riski oli 0,94 (95% CI 0,49, 1,83), ja F-tilasto varten rs2282679 ensimmäisestä vaiheesta IV analyysi oli 15,80 ikä ja sukupuoli säätää analyysi (taulukko 4). Käyttämällä rs12785878 kuin IV syy vaikutus oli 1,23 (95% CI 0,60, 2,53), ja F–tilasto rs12785878 ensimmäisen vaiheen IV analyysi oli 13,50 (taulukko 4). Käyttämällä rs10741657 kuin IV syy vaikutus oli 0,89 (95% CI 0,40, 1,98), ja F–tilasto rs10741657 ensimmäisen vaiheen IV analyysi oli 10,89 (taulukko 4). Lopuksi, käyttäen rs6013897 kuin IV syy vaikutus oli 0,99 (95% CI 0,40, 2,45), ja F–tilasto rs6013897 ensimmäisen vaiheen IV analyysi oli 0,98 (taulukko 4). Tulokset Muiden IV estimaattorit esitetään taulukoissa S7, S8, S9 ja S10.

Lisäksi yhdistimme nämä neljä SNP muodostamaan kolme alleelin tulokset: 1) yksi alleeli pisteet joka yhdistetään kaikki neljä SNP, 2) ylävirran alleeli pisteet, jossa yhdistyivät SNP rs12785878 ja rs10741657 ja 3) alavirran alleelin pisteet, jossa yhdistyivät SNP rs2282679 ja rs6013897. Sitten käytimme tätä alleeli tulokset kuin IV. Syy vaikutus yleisestä alleelin pistemäärä oli 1,16 (95% CI 0,60, 2,23, F-tilasto 16.52), että alkupään alleelin pistemäärä oli 0,94 (95% CI 0,46, 1,91, F-tilasto 7,87) ja loppupään alleelin pisteet oli 0,93 (95% CI 0,53, 1,63, F-tilasto 12,67) (taulukko 4).

keskustelu

plasman 25-OHD ja CRC

tässä tutkimuksessa , alhainen plasman 25-OHD liittyi suurempi riski CRC koko näytteen jälkeen ositusta sukupuoli, kasvaimen vaiheesta ja vakavuudesta oireita esitys. Nämä tulokset ovat sopusoinnussa kahden viime meta-analyysit seerumia tai plasmaa tulevaisuudentutkimuksista [14], [29]. Lisäksi järjestelmällinen katsaus ja meta-analyysi suolen kasvainten (CRA) osoitti pienentynyt riski sekä esiintyvyys ja toistumisen CRA korottaa 25-OHD 20 ng /ml [30]. Kuitenkin satunnaistetussa kliinisessä tutkimuksessa (RCT) (2686 keskimäärin riskin henkilöiden) ei löytänyt vaikutusta D-vitamiinin ja ilmaantuvuuden CRC [31]. Samalla tavalla toinen RCT (Naisten Health Initiative -WHI) vaikutusten tutkiminen päivittäisen kalsiumin ja D-vitamiinilisän seitsemän vuotta osoitti mitään vaikutusta CRC ilmaantuvuus postmenopausaalisilla naisilla [32]. On kuitenkin syytä huomata, että kumpikaan näistä RCT suunniteltu ja kytketty syövän kuin ensisijainen tulos. Lisäksi uusi analyysi WHI RCT todettu, että samanaikainen estrogeenihoito oli vaikutus muokkaaja kalsiumin ja D-vitamiinilisän ja naisille, jotka eivät osoitettu estrogeenihoito kalsium- ja D-vitamiinilisän laski CRC riski [33]. Tiedot tapaus-verrokki ja kohorttitutkimukset tutkimalla yhdistysten välillä ravinnon D-vitamiinin saanti ja CRC ovat tuloksettomia [13].

genotyyppi, Plasma 25-OHD tasot ja CRC

A alleeli rs2282679 ja T-alleelin rs12785878 liittyi korkeampi plasman 25-OHD. Nämä tulokset ovat mukaisesti GWAS tutkii geneettisiä tekijöitä D-vitamiinin puutos [20]. Rs2282679 SNP sijaitsee

GC

-geeni, joka koodaa D-vitamiinia sitovaa proteiinia, joka sitoo ja kuljettaa D-vitamiini (kuvio 1) [20]. Rs12785878 SNP sijaitsee

DHCR7

geeni, joka koodaa entsyymiä 7-dehydrokolesteroli (7-DHC) reduktaasin, joka muuntaa 7-DHC kolesteroliin. 7-DHC on esiaste vitamiini D

3. Mutaatiot

DHCR7

voi johtaa vähentyneeseen aktiivisuuteen 7-DHC reduktaasin ja siten korkeita 7-DHC ja vitamiini D

3 (kuvio 1) [20]. Kuitenkin kaksi muuta SNP (rs10741657, rs6013897), jotka todettiin myös olevan voimakkaasti yhteydessä D-vitamiinin D-vitamiinin genomin laajuinen yhdistys tutkimuksessa ei liittynyt D-vitamiinia asema meidän kohortissa. rs10741657 sijaitsee

CYP2R1

geeni, joka koodaa entsyymiä, ajatellaan olevan osallisena 25-hydroksylaation vitamiinin D

3-25 (OHD) [20]. rs6013897 sijaitsee

CYP24A1

geeni, joka koodaa entsyymiä, joka aloittaa hajoaminen 1,25 (OH)

2D [20]. Todisteet rooliin entsyymien koodattu

CYP2R1

ja

CYP24A1

on rajallinen eikä muissakin ehdokas tutkimuksissa [20].

Yksikään näistä neljästä SNP oli liittyy CRC riski, vaikka löysimme vuorovaikutusta 25-OHD tasojen ja rs10741657. Tulokset MR analyysi ei tue kausaalista suhdetta plasman 25-OHD ja CRC riski. Vaikka ei ole merkittävä, käänteinen suhde todettiin, kun rs2282679 tai rs10741657 käytettiin välineenä, mutta ei silloin, kun rs12785878 tai rs6013897. Tulokset pysyivät epäjohdonmukainen kolmen alleelin tulokset neljästä SNP käytettiin. Se, että käänteinen yhdistys, joka havaittiin, kun haimme tavanomaista epidemiologisia menetelmiä ei monistaa, kun MR oli menetelty voi johtua useista syistä. On mahdollista, että mittaamatta tai piilevä muuttujia sekoitti yhdistysten ja ei ole todellista vaikutusta D-vitamiinin CRC. Vaihtoehtoinen selitys on, että saattaa olla käänteinen välinen syy D-vitamiinin ja CRC, koska plasman tapauksista kerättiin diagnoosin jälkeen: sitä ei voida sulkea pois, että plasmaproteiineihin 25-OHD on seurausta sairauden tai seurauksena potilaiden ollessa bedbound ja josta puuttuu auringolle altistuminen. Kuitenkin kun katsoimme tapauksissa hyvin lieviä tai ei lainkaan oireita tai tapauksissa aivan alkuvaiheessa sairauden vielä havaittu käänteinen yhdistyksen välillä 25-OHD tasojen ja CRC. Kun lisäksi otetaan biologinen potentiaali D-vitamiinin, joiden syy-yhteys syöpään, vaikuttavia tekijöitä suorituskykyyn IV estimaattorien saattaa myös selittää näitä havaintoja.

Suurimmat rajoitukset perinteisen instrumenttimuuttujamenetelmää lähestymistavat johtuvat tiukat oletukset että tarve täytyttävä menetelmän olevan luotettava. On totta, että genotyyppi liittyy fenotyyppi, kuitenkin, SNP: itä, joita on käytetty välineinä ovat vain heikosti liittyvät fenotyypin ja selittää vain pienen osan piirre varianssi. Vaikka testasimme yhteisiä sekoittavat tekijät, on mahdollista, että piilossa sekoittavia peräisin mittaamatta muuttujista vaikuttaa analyysiin. Vaikka emme näe mitään yhdistyksen välillä genotyypin ja tuloksen, heikompia pleiotrooppista yhteyksiä ei voida varmuudella sulkea pois.

Olemme parhaillaan uusia instrumenttimuuttujamenetelmää tapoihin arvioida syy-25-OHD pitoisuudet ja CRC, joka perustuu alustan varten Bayes mutkikasta tilastollisten mallien avulla Markovin ketju Monte Carlo menetelmiä. Tämä menetelmä parantaa klassiseen Mendelin Satunnaistamisessa lähestymistapaa kuin se mahdollistaa pleiotrooppista yhteyksiä komponenttien mallin, mahdollistaa helpon sisällyttäminen muiden covariates ja ei riipu niin paljon vahvuus välineitä.

laaja soveltaminen genomin laajuinen yhdistys tutkimukset (GWAS), on mahdollistanut MR tutkimuksia tulla helpommin toteutettavissa nyt, kun yhteinen SNP liittyy eri väli- fenotyypit on määritetty [34]. Tähän mennessä vuonna 2011, useat soveltavan MR tutkimuksia julkaistiin tutkivat syy suhteita monenlaisia ​​sairauksia kuten syöpää [35], sepelvaltimotauti [36], [37], diabetes [38], [39], mielenterveyshäiriöt [40 ] – [42], keuhkojen toiminta [43] ja muita sairauksia [44], [45]. Jotkut näistä tutkimuksista monistaa tulokset tavanomaisten epidemiologisia menetelmiä ja vahvisti syy (tai ei syy) välituotteen fenotyyppi tuloksista [40], [44], [45]. Yksi tärkeimmistä syistä tämä puute replikointi on se, että geneettinen välineitä, jotka työskentelevät ovat yleensä heikkoja ja siksi voima MR tutkimukset riittämättömiä [34].

Tuoreen tutkimuksen teho ja otoskoko vaatimukset MR tutkimukset perustuvat vahvuus välineitä, todettiin, että MR tutkimukset edellyttävät suuria (n 1000) ja usein erittäin suuri (n 10000) otoskokoihin vetää syy-päätelmiä, jotka ovat tilastollisesti merkittäviä [34 ]. Perustuen niiden havaintojen simuloitu analysoi useimmat julkaistut MR tutkimukset ovat alle-powered (katso taulukko S11 tarkistamaan 11 MR tutkimukset julkaistiin vuonna 2011). Simulaatioiden esitetty paperin Pierce et al [34] ja osuus otoksen koko, vahvuus palveluksessa välineiden ja havaittujen vaikutus koko arvioimme, että otoskoko tässä tutkimuksessa antoi voimaa ~0.35.

johtopäätös

Tämä tutkimus osoittaa, että suuremmat plasman 25-OHD arvot liittyvät alemman CRC riski, päätelmä on yhdenmukainen viime meta-analyysit tulevaisuudentutkimusta. Tämä havainto ei ole toistettu, kun MR lähestymistapaa käytettiin. Tämä havainto voi johtua puute todellisen vaikutuksen D-vitamiinin CRC tai johtuen kääntää syy. Se voi johtua myös heikosta välineisiin ja rajallinen tilastollinen voima. Puute teho on yhteinen piirre monissa MR tutkimuksia ja siksi huolellinen valinta instrumenttien sekä riittävän otoskoko pidetään välttämättöminä, jotta tämä tapa voi tehdä syy johtopäätöksiä. Koska nämä merkittävät D-vitamiinin puutos yksilöiden asuvat korkeilla leveysasteilla, monilukuisen samanlainen D-vitamiinin ja CRC tutkimukset ja /tai vaihtoehtoisten menetelmien, jotka ovat vähemmän herkkiä tehoton väline bias [46] ovat tarpeen tarkentaa vaikutus D-vitamiinin CRC syöpää ja muita kroonisia sairauksia.

tukeminen Information

Taulukko S1.

Tietoa SNP, joka käytettiin Instrumental muuttujia MR analyysissä.

doi: 10,1371 /journal.pone.0037662.s001

(DOC) B Taulukko S2.

Logistinen regressioanalyysi varten sekä plasman 25-0HD on peräsuolen syöpäriskiä seksin jälkeen kerrostumista.

doi: 10,1371 /journal.pone.0037662.s002

(DOC) B Taulukko S3.

Logistinen regressioanalyysi varten sekä plasman 25-0HD on peräsuolen syöpäriskiä jälkeen vaiheessa kerrostumista.

doi: 10,1371 /journal.pone.0037662.s003

(DOC) B Taulukko S4.

Logistinen regressioanalyysi varten sekä plasman 25-0HD on peräsuolen syöpäriski jälkeen ositusta kun oireita.

doi: 10,1371 /journal.pone.0037662.s004

(DOC) B Taulukko S5.