Krooninen sairaus

tiivistelmä

3 adenosiinireseptorit (AR) on keskeinen rooli kehitettäessä syövän ja niiden aktivointi on mukana kasvaimen kasvun inhibitiota. Vaikutukset pulssi sähkömagneettiset kentät (PEMFs) syövästä on kiistanalaisella keskusteltu ja yksityiskohtaisia ​​mekanismeja ei vielä täysin ymmärretä. Aiemmin olemme osoittaneet, että PEMFs lisääntynyt

2A ja A

3AR tiheys ja toimivuus ihmisneutrofiilien, ihmisen ja naudan synoviosyytit, ja naudan kondrosyyttien. Samoissa soluissa, PEMF altistuminen lisäsi anti-inflammatorinen vaikutus välittämä A

2A ja /tai A

3aRS. Ensisijainen tavoite Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli arvioida, PEMF altistuminen voimisti antituumorivaikutus A

3aRS PC12 rotan lisämunuaisen feokromosytooma ja U87MG ihmisen glioblastoomasolulinjoissa verrattuna rotan aivokuoren neuronien. Värikylläisyys sitoutumismääritykset ja mRNA-analyysi paljasti, että PEMF altistuminen sääteli

2A ja A

3aRS, jotka ovat hyvin kytketty adenylaattisyklaasin aktiivisuuden ja cAMP-tuotantoa. Aktivointi A

2A ja A

3aRS johti väheneminen tumatekijä-kappa B (NF-kB) tasot kasvainsoluissa, kun taas vain

3aRS osallistuvat lisäys p53 ilmaisua.

3AR stimulaation välittämän eston kasvainsoluproliferaation arvioitiin tymidiinin. Kasvua sytotoksisuuden laktaattidehydrogenaasin (LDH) vapautumista ja apoptoosin kaspaasi-3-aktivaation PC12 ja U87MG soluja, mutta ei aivokuoren neuronien havaittiin seuraavat A-

3AR aktivointia. Vaikutus A

3AR agonistin tuumorisoluissa oli parannettu läsnä ollessa PEMFs ja estää käyttämällä tunnettuja selektiivinen antagonisti. Yhdessä nämä tulokset osoittivat, että PEMF altistuminen lisää merkittävästi kasvaimen vastaisen vaikutuksen moduloidaan A

3aRS.

Citation: Vincenzin F, Targa M, Corciulo C, Gessi S, Merighi S, Setti S, et ai . (2012) Anti-kasvain vaikutus

3 adenosiinireseptorit voimistetaan Pulssi sähkömagneettiset kentät viljellyissä Neural syöpäsoluja. PLoS ONE 7 (6): e39317. doi: 10,1371 /journal.pone.0039317

Editor: Ming Tan, University of South Alabama, Yhdysvallat

vastaanotettu: 29 maaliskuu 2012; Hyväksytty: 23 toukokuu 2012; Julkaistu: 25 kesäkuu 2012

Copyright: © 2012 Vincenzi et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Kirjoittajat ei ole tukea tai rahoitusta raportoida.

Kilpailevat edut: kirjoittajat lukenut lehden politiikan ja ovat seuraavat konflikteja. SS on työntekijä ja Ruggero Cadossi on presidentti ja tieteellinen johtaja IGEA (Carpi, Italia), joka on toimittanut PEMF generaattori järjestelmä. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamista ja materiaaleja.

Johdanto

Lisääntyvä todistusaineisto osoittaa, että adenosiini vaikuttavat lukuisat patofysiologisia prosesseja säätely mukaan lukien solukuoleman ja lisääntymistä [1], [2]. Adenosiini vuorovaikutuksessa neljän G-proteiiniin kytkettyjen reseptorien nimetty

1, A

2A A

2B ja A

3 adenosiinireseptorit (AR).

1 ja A

3aRS estävät adenylaattisyklaasiaktiivisuuden ja vähentää cAMP-tuotantoa taas

2A ja A

2BARs aiheuttavat lisäystä cAMP: n kerääntymisen [3]. A

3aRS ovat osallistuneet säätelyyn solusyklin ja sekä pro- ja antiapoptoottisten vaikutukset liittyvät läheisesti tasoon reseptorin aktivoitumisen [4].

3aRS osallistuvat modulaatioon mitogeeniaktivoidut proteiinikinaasi (MAPK) aktiivisuutta ja säätelyssä ekstrasellulaarisen signaalin säännelty kinaasien (ERK1 /2) [5]. On hyväksytty, että A

3aRS ovat erittäin ilmaistaan ​​kasvainsoluissa osoittaa tärkeä rooli syövän kehittymiseen [6] – [10]. Kasvainsolun kasvun inhibitio havaittiin eri mallia rotan Nb2-11C ja hiiri Yac-1 lymfooma, B16-F10 melanooma, MCA sarkooma, PC3 eturauhassyöpä, MIA-PaCa haimakarsinooma-, Hep-3B maksasyövän ja HCT-116 paksusuolen karsinoomasolut [11] – [14]. Vuodesta solu näkökulmasta A

3AR agonisti 2-kloori-

N

6- (3-jodibentsyyli) adenosiini-5 ’-

N

metyyli uronamide (CI-IB-MECA) esti kasvaimen kasvua kautta de-sääntelyn NF-kB signaalintransduktioreitteihin, jolloin kasvainsolujen apoptoosin [10]. Farmakologiset tutkimukset osoittivat, että A

3AR agonistit inhiboivat melanoomasolujen, edisti proliferaatiota luuydinsolujen, vähensi solujen elinkelpoisuuden ihmisen rintasyövän soluissa ja indusoi pidätys solusyklin etenemisen ihmisen keuhkosyövän soluja [15], [ ,,,0],16]. Lisäksi CI-IB-MECA parannettu apoptoosin kautta modulaatio tumatekijä-kappa B (NF-kB) signalointireitin kilpirauhasen syöpäsoluja ja vähentää kykyä syöpäsolujen siirtyä

in vitro

ja etäispesäkkeitä

in vivo

[17], [18]. Lisäksi prekliinisissä ja vaiheen tutkimukset osoittivat, että A

3AR agonistit ovat turvallisia ja hyvin siedettyjä ihmisissä ja täten voidaan pitää mahdollisimman terapeuttisia aineita tiettyjä syöpäsairauksia [5].

Suuri tutkimustoiminta on herättänyt noin mekanismeja vuorovaikutusta alhaisen magneettikentät ja biologisten järjestelmien [19]. Erilaiset fysiologiset järjestelmät näyttävät vaikuttaa sähkömagneettisen kentän (EMF) position ilmestyy

in vitro

kokeita eri soluissa tai kudoksissa [20] – [25]. Viime aikoina on raportoitu, korrelaatio EMF altistumisen ja hermostoa rappeuttavien sairauksien, kuten Alzheimerin tai Parkinsonin tauti [26] – [28]. Lisäksi pulssi sähkömagneettiset kentät (PEMFs) hoito vähensi merkitsevästi leikkauksen jälkeisen kivun ja huume käyttää välittömässä leikkauksen jälkeen mekanismilla, joka liittyy endogeenisen interleukiini-1β (IL-1β) haavassa sängyssä [29]. Vaikka jotkut tutkijat osakkuusyrityksen kentille altistumista kanssa syövän synnyn [30], [31], muut tutkimukset kokeellisilla malleilla ja ihmisen syövissä ovat osoittaneet, että EMF ei lisää riskiä useiden syöpätyyppien, ja että hoito kasvain-taajuuksia on toteutettavissa ja hyvin siedetty ja voi olla biologinen tehokkuus potilailla, joilla on kehittynyt kasvaimia [32] – [34]. Lisäksi altistuminen naisten C3H /HeJ hiirillä nisärauhassyöpä taajuutta 120 Hz intensiteettejä 4 ja 5 mT johti merkittävään vähenemiseen kasvaimen kasvua, joka on ilmiö, joka liittyy angiogeneesiin esto [35]. Altistuminen naisten kateenkorvattomia nude-hiirissä, joilla ihmisen rintasyöpä ksenograftien taajuutta 120 Hz jonka intensiteetti on 15 mT, joko yksin tai yhdessä gammasäteilyn, johti vähentyneeseen kasvuun ja vähensi vaskularisaatiota ja kasvainten [36]. Vastaavalla tavalla 50 Hz 0,5 gt ja 0,5 mT kehittämisestä kemiallisesti indusoidun pesäkkeitä rotan maksasta osoitti vähäistä estämistä niiden muodostumisen [37]. Tuoreessa työtä, soveltaminen EMF estää esineoplastiset vaurioita kemiallisesti indusoidun rotan maksassa vähentämällä soluproliferaation muuttamatta apoptoosin prosessi [38]. Novel havainnot ovat osoittavat, että magneettikenttä yhdistettynä X-Ray välittävät selviytymisen parannus ja kasvaimen inhibitiota hepatooma-istutettu hiiriin [39]. Monilääkeresistenssin (MDR) luusarkoomasolulinjassa, PEMFs lisääntynyt doksorubisiini sitova kyky DNA: han ja inhiboi solun kasvua, mikä viittaa siihen, että PEMFs voivat olla hyödyllisiä, koska paikallinen hoito MDR osteosarkooman [40].

Nykyisessä tutkimuksessa selvitti PEMFs ilmentymisen moduloimiseksi ja vaikutus A

3aRS eri soluissa edustaa rotan lisämunuaisen pheochromocytoma soluja (PC12) ja ihmisen glioblastoomasolulinjoissa (U87MG) verrattuna rotan aivokuoren neuronien. Käyttämällä näitä solu malleja olemme korostaneet vaikutus PEMFs A-

3AR stimulaation NF-kB ja p53 aktivaation, solujen lisääntymistä, sytotoksisuutta ja apoptoosin. Nämä tulokset osoittavat mahdollisuuden, että kasvaimen vastainen vaikutus välittyy

3aRS voitaisiin voimistaa ei invasiivisia ärsyke edustaa PEMFs.

Tulokset

PEMFs sääteli

2A ja A

3AR tiheys ja Expression

ensimmäinen tavoite nykyisen tutkimuksen tarkoituksena oli todentaa, jos affiniteetti ja tiheys A

1, A

2A A

2B ja

3aRS vaikuttivat PEMFs rotan aivokuoren neuronien PC 12 ja U87MG soluja. Erityisesti taulukossa 1 raportoi affiniteetti (K

D) ja tiheys (Bmax) arvot AR kalvoissa tai ehjien solujen, jotka ovat peräisin rotan aivokuoren neuronien U87MG-solujen ja käsittelemättömän tai NGF-käsiteltyjen PC12-soluissa ilman ja läsnäolo PEMFs 1,5 mT. Affinity arvot ARS eivät vaikuttaneet PEMF käsittely soluissa tutkittiin taas

2A ja A

3AR tiheys lisääntyi merkittävästi.

PEMF hoitoon primaariviljelmää rotan aivokuoren neuronien 1,5 mT indusoi ylössäätöä A

2AAR tiheys suhteessa valvoa olosuhteet sekä valmisteilla kuten kalvoja tai ehjät solut (taulukko 1). Valotuksen PEMFs käsittelemättömän tai NGF-käsiteltyjen PC12-soluissa indusoi ylössäätöä A

2AAR tiheys kanssa 2,20 tai 2,10-kertainen kasvu verrattuna valvontaa membraanipreparaatissa, vastaavasti. A

2AAR ylössäätöä näkyi myös kalvoilla U87MG soluihin, joissa Bmax- arvot kasvoi 91 ± 9 (ohjaus ehto) 207 ± 19 (PEMFs käsittely) fmol /mg proteiinia. Samanlaisia ​​tuloksia A-

2AAR ylössäätöä saatiin myös suorittamalla saturaatiositoutumisella kokeita koskemattomien solujen kanssa (taulukko 1).

PEMF hoito indusoi ylössäätöä A

3aRS by 2.11 tai 2.32 kertaiseksi rotan aivokuoren neuronien ja U87MG solujen kunnioittaa hallita ehto membraanipreparaatin, vastaavasti (taulukko 1). Samanlaisia ​​vaikutuksia saatiin altistamalla käsittelemättömän tai NGF-käsiteltyjen PC12 solut PEMFs 1,5 mT.

3AR Bmax- arvot kasvoi 94 ± 9 (ohjaus ehto) 215 ± 20 (PEMF käsittely) fmol /mg proteiinia kalvo käsittelemättömästä PC12-soluissa. Vuonna kalvo valmistaminen NGF-käsiteltyjen PC12 soluissa

3AR tiheys kasvoi 102 ± 9 (ohjaus ehto) 222 ± 21 (PEMFs käsittely) fmol /mg proteiinia. Vastaavasti, A

3AR up-regulation havaittiin myös suorittamalla saturaatiositoutumisella kokeissa koskemattomien solujen kanssa (taulukko 1).

Kuvio 1 esittää mRNA: n suhteellinen ekspressio A

1, A

2A A

2B ja A

3aRS rotan aivokuoren neuronien, käsittelemättömän tai NGF-käsiteltyjen PC12-soluissa ja U87MG solujen puuttuessa ja läsnä ollessa PEMFs. Mielenkiintoista

2A ja A

3AR mRNA-tasot olivat sääteli jälkeen PEMF hoidon vahvistetaan kasvua tiheys löytyy saturaatiositoutumisella kokeissa (taulukko 1).

suhteellinen mRNA ilmaus

1, A

2A A

2B ja A

3aRS rotan aivokuoren neuronien, käsittelemättömän tai NGF-käsiteltyjen PC12-soluissa ja U87MG solujen puuttuessa tai läsnä ollessa PEMFs. Arvot ovat keskiarvo (n = 6) ± SEM.

2A ja A

3AR Stimulation ja PEMFs Mediated Merkittävä Modulation cAMP Production

A

2AARs kytketään stimulaatio adenylaattisyklaasin välityksellä PG proteiineja, joka välittää kasvua cAMP-tuotantoa. Rotan aivokuoren neuronien U87MG-solujen ja käsittelemättömän tai NGF-käsiteltyjen PC12-soluissa, CGS 21680 on 100 nM konsentraatio oli välittäjinä merkittävään kasvuun cAMP: n muodostumisen, joka voimistaa soluissa käsiteltiin PEMFs. Kaikissa koeolosuhteissa tutkittiin, SCH 58261 on 1 uM kykeni täysin estää vaikutus CGS 21680. vaikutus A

3AR agonistin Cl-IB-MECA (100 nM), arvioitiin, kun läsnä oli 1 uM forskoliini- ja 0,5 mM Ro 20-1724. Tämä kokeellinen ehto valittiin matalan-tasojen (15-20 pmol cAMP määritystä kohti), jotka vaikeuttavat arviointia suora estävä vaikutus. Cl-IB-MECA välitteisen merkittävää laskua cAMP-tuotantoa, ja tämä vaikutus oli merkittävästi monistettiin soluja käsiteltiin PEMFs (Fig. 2). Lisäksi kaikki solut tutkittiin, kun läsnä on MRS 1523 (1 uM) esti vaikutus Cl-IB-MECA vahvistetaan osallistumista A

3aRS moduloinnissa cAMP-tuotantoa.

Effect of tunnettu

2AAR ja -antagonisteja (CGS 21680, 100 nM, SCH 58261, 1 uM) tai A

3AR ja -antagonisteja (CI-IB-MECA, 100 nM, MRS 1523, 1 uM) rotan aivokuoren neuronien, käsittelemättömän tai NGF-käsiteltyjen PC12-soluissa ja U87MG-solujen puuttuessa tai läsnä ollessa PEMFs on cAMP-tuotantoa. Arvot ovat keskiarvo (n = 6) ± SEM.

2A ja A

3AR stimulaatio välittämä Merkittävä NF-kB Activation läsnäolossa PEMFs

vaikutus A

2A tai A

3AR stimulaation NF-kB p65-alayksikköä aktivoitumista tutkittiin käsittelemättömän tai NGF-käsiteltyjen PC12-soluissa ja U87MG solujen suhteen rotan aivokuoren neuronien paljastaen valmiutta A

2A (CGS 21680) tai A

3AR (CI-IB-MECA) agonistit vähentämään merkittävästi NF-kB kasvainsoluissa 24 tunnin kuluttua hoidon (Fig. 3). PEMF altistus pystyi parantamaan A

2A tai A

3AR agonistin aiheuttama väheneminen NF-kB aktivaation. A

3AR stimulaatio välittämä entistä ilmeinen NF-kB kuin A-

2A aktivointi sekä läsnä ollessa tai puuttuessa PEMFs. Mielenkiintoista on, että samanaikainen hoito A

3AR agonistia ja PEMFs välittämän merkittävän NF-kB tasoa suhteessa A

3AR aktivointi yksinään. Niiden vaikutukset agonistien estettiin käyttämällä hyvin tunnetaan

2A tai A

3AR antagonistit, kuten SCH 58261 ja MRS 1523, vastaavasti (Fig. 3).

Effect of hyvin -known

2AAR ja -antagonisteja (CGS 21680, 100 nM, SCH 58261, 1 uM) tai A

3AR ja -antagonisteja (CI-IB-MECA, 100 nM, MRS 1523, 1 uM) rotan aivokuoren neuronit, käsittelemättömän tai NGF-käsiteltyjen PC12-soluissa ja U87MG-solujen puuttuessa tai läsnä ollessa PEMFs NF-kB aktivaation, joka arvioitiin havaitsemalla fosforyloitu p65-proteiinien tumauutteet. Arvot ovat keskiarvo (n = 6) ± SEM.

aktivointi A

3AR läsnäolossa PEMFs Lisääntynyt p53 johtavilla tasoilla esto kasvainsoluproliferaation

2AAR agonisti CGS 21680 ei kyennyt moduloimaan p53-proteiinin tasoa ei ole ilman tai, kun läsnä on PEMFs eri solutyypeissä tutkittiin. Toisaalta, A

3AR agonistin Cl-IB-MECA (100 nM) välittämän merkittävää kasvua p53 ilmentymistä tuumorisolulinjoja tutkittiin vaikuttamatta p53 tasoja rotan kontrolli aivokuoren neuronien (Fig. 4). Vaikka PEMF altistus yksin ei voi muuttaa p53 ilmentymisen samanaikainen hoito kasvainsolujen PEMFs ja Cl-IB-MECA johti edelleen merkittävään kasvuun p53-proteiinin tasoa verrattuna Cl-IB-MECA yksinään (p 0,05, kuva 4B-D).

Effect of tunnettu

2AAR ja -antagonisteja (CGS 21680, 100 nM, SCH 58261, 1 uM) tai a

3AR ja -antagonisteja ( Cl-IB-MECA, 100 nM; MRS 1523, 1 uM) rotan aivokuoren neuronien, käsittelemättömän tai NGF-käsiteltyjen PC12-soluissa ja U87MG-solujen puuttuessa tai läsnä ollessa PEMFs p53 tasoilla. Arvot ovat keskiarvo (n = 6) ± SEM.

arvioimiseksi, jos modulaation NF-kB ja p53 liittyvät säätelyyn kasvainsolujen proliferaatiota, joka on tymidiininsisällytysmääritys suoritettiin, kun läsnä tai puuttuessa PEMFs. Meidän koeolosuhteissa pohjapinta tasoilla [

3H] -tymidiinin rotan aivokuoren neuronien, käsittelemättömän tai NGF-käsiteltyjen PC12 ja U87MG soluja 447 ± 42, 8228 ± 782, 856 ± 78, 9535 ± 844 cpm näytettä kohti vastaavasti. Tulokset osoittivat, että ei ole CGS 21680 tai PEMFs (yksin tai yhdistelmänä) pystyivät merkittävästi moduloimaan solujen lisääntymisen (Fig. 5). Stimulaatio A

3aRS avulla CI-IB-MECA (100 nM) välittämä merkittävän eston tymidiinin 39%, 41% ja 32% käsittelemättömän, NGF-käsiteltyjen PC12-soluissa ja U87MG soluja, tässä järjestyksessä. Erityisesti, PEMF altistuminen tehostua tilastollisesti merkittävällä tavalla (p 0,05) vaikutus Cl-IB-MECA kasvaimen solujen lisääntymisen (kuvio. 5B-D). Lisäksi A

3AR stimulaation puuttuessa tai läsnä ollessa PEMFs, ei vaikuttanut tymidiinin rotan aivokuoren neuronien, mikä viittaa siihen, että havaittu vaikutus on selektiivinen kasvaimen solut (Fig. 5). Suora rooli

3aRS välittämisessä vaikutus CI-IB-MECA osoitettiin valikoivan

3AR antagonisti, MRS 1523, että täysin kumosi agonisti-indusoidun säätelyyn p53 ja solujen lisääntymistä (kuviot . 4 ja 5).

Effect of tunnettu

2AAR ja -antagonisteja (CGS 21680, 100 nM, SCH 58261, 1 uM) tai a

3AR ja -antagonisteja (CI -ib-MECA, 100 nM; MRS 1523, 1 uM) rotan aivokuoren neuronien, käsittelemättömän tai NGF-käsiteltyjen PC12-soluissa ja U87MG-solujen puuttuessa tai läsnä ollessa PEMFs on tymidiinin. Arvot ovat keskiarvo (n = 6) ± SEM.

PEMF Altistuminen Enhanced Cl-IB-MECA-indusoitu solukuolema ja apoptoosi tuumorisoluissa

Kuvio 6 esittää vaikutusta A

2A tai A

3AR stimulaation laktaattidehydrogenaasin (LDH) vapautumista (% valvonnan basaali kunnossa) rotan aivokuoren neuronien, käsittelemättömän tai NFG käsiteltyjen PC12-soluissa ja U87MG solujen puuttuessa tai läsnä ollessa of PEMF altistus (1,5 mT). Kaikilla tarkasteltavilla solujen läsnäolo CGS 21680 (100 nM) ei pystynyt muuttaa LDH: n vapautuminen ei ole ilman tai, kun läsnä on PEMFs. Rotilla aivokuoren neuronien ja kasvaimen soluihin, PEMF altistus pohjapinta kunnossa ei voinut moduloimaan LDH: n vapautuminen. A

3AR agonisti CI-IB-MECA (100 nM) välittämä sytotoksinen vaikutus kaikissa kasvainsolut tarkastellaan osoittaa merkittävää lisäystä LDH: n vapautuminen. Mielenkiintoista, samanaikainen läsnäolo PEMFs johti lisääntymiseen entisestään LDH tuotannon välittämien CI-IB-MECA saavuttaa arvot 192%, 226% ja 243% suhteessa pohjapinta ehto hoitamatta, NGF-käsiteltyjen PC12 ja U87MG soluja, tässä järjestyksessä (Fig. 6B-D). Arvioida, onko synergistinen vaikutus CI-IB-MECA ja PEMFs mukana apoptoottisten signaalien tasot aktiivinen kaspaasi-3 arvioitiin. Joukossa eri käsittelyolosuhteet vain A

3AR stimulaatio pystyi merkittävästi korottaa aktiivinen kaspaasi-3 kaikissa tuumorisoluissa, mutta ei rotan kontrolli aivokuoren neuronien (Fig. 7). Lisäksi PEMF altistuminen parannettu pro-apoptoottinen vaikutus Cl-IB-MECA syöpäsoluissa saada kasvua 1,97, 2,64 ja 3,24-kertainen suhteessa perustilan käsittelemättömissä tai NGF-käsiteltyjen PC12 ja U87MG-soluissa, vastaavasti (Fig. 7B- D). Käyttämällä hyvin tunnetaan

3AR antagonisti, MRS 1523, palasi vaikutus agonistin, mikä viittaa tietyn osallistumisen tämän reseptorin alatyyppi.

Effect of hyvin tunnetaan

2AAR agonistin ja antagonisti (CGS 21680, 100 nM, SCH 58261, 1 uM) tai A

3AR ja -antagonisteja (CI-IB-MECA, 100 nM, MRS 1523, 1 uM) rotan aivokuoren neuronien, käsittelemättömän tai NGF-käsiteltyjen PC12-soluissa ja U87MG-solujen puuttuessa tai läsnä ollessa PEMFs on laktaattidehydrogenaasin (LDH) tasot. Arvot ovat keskiarvo (n = 6) ± SEM.

Effect of tunnettu

2AAR ja -antagonisteja (CGS 21680, 100 nM, SCH 58261, 1 uM) tai A

3AR ja -antagonisteja (Cl-IB-MECA, 100 nM; MRS 1523, 1 uM) rotan aivokuoren neuronien, käsittelemättömän tai NGF-käsiteltyjen PC12-soluissa ja U87MG-solujen puuttuessa tai läsnä ollessa PEMFs aktiivisen kaspaasin 3 tasoa. Arvot ovat keskiarvo (n = 6) ± SEM.

Keskustelu

Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että mukana on

3aRS säätelyssä solusyklin, vuonna pro- ja anti-apoptoottiset vaikutukset, vähentämisessä solujen elinkelpoisuuden ja inhibitio syövän kasvua [4], [15] – [18]. Lisäksi prekliinisissä ja vaiheen tutkimukset osoittivat, että A

3AR agonistit ovat turvallisia ja hyvin siedettyjä ihmisissä ja täten voidaan pitää mahdollisimman terapeuttisia aineita tiettyjä syöpäsairauksia [5]. Kuten raportoitu eri teoksia jotkut tutkijat osakkuusyrityksen kentille altistumista kanssa syövän synnyn [30], [31], kun taas muut tutkimukset ovat osoittaneet, että EMF eivät lisää riskiä useiden syöpätyyppien, ja että käsittely taajuuksia on hyvin siedetty ja sillä voi olla biologinen teho potilailla, joilla on pitkälle edennyt kasvaimia [32] – [34]. Tällä hetkellä ei ole tietoja raportoidaan kirjallisuudessa vaikutuksesta Ars ja PEMF altistuminen

in vitro

tai

in vivo

malleja syövän, vaikka joitakin tuloksia ovat osoittaneet vahvistava vaikutus anti -inflammatory vaikutukset ARS läsnäolo PEMFs [22] – [25].

tässä tutkimuksessa olemme yhdistäneet rooli

3aRS tavoitteeksi syövän kasvava havainto, että PEMFs voi hyödyllisiä vaikutuksia moduloinnissa fysiologisia prosesseja, jotka liittyvät kasvainsolujen signalointia. Tarkemmin nykyinen kokeet osoittavat, että PEMFs ilmentymisen moduloimiseksi ja vaikutus A

3aRS eri viljellyissä hermo kasvainsoluja edustaa PC12 ja U87MG soluja verrattuna rotan aivokuoren neuronien. On hyvin todettu, että solulinjat ovat käyttökelpoisia farmakologisten tutkimusten koska ne tarjoavat mahdollisuuden opiskella signaalitransduktion ja sääntelyn reseptorien alle enemmän valvotuissa olosuhteissa kuin natiivi soluissa tai kudoksissa [41]. Lisäksi olemme käsitelty PC-12-solujen NGF arvioida toimintavasteisiin kasvainsolujen eriytetty neuroni kaltaisia ​​soluja. Käyttämällä näitä solu malleja olemme korostaneet yhdistetty vaikutus PEMF altistuksen ja A

3AR stimulaatiota eri fysiologisia reaktioita, kuten NF-kB ja p53 aktivaation, solujen lisääntymistä, sytotoksisuutta ja apoptoosin.

Ensinnäkin, PEMF altistuminen lisäsi merkittävästi A

2A ja A

3AR mRNA ja tiheys kasvainsoluissa sekä rotan aivokuoren neuronien. Saturaatiositoutumisella kokeissa A

2A ja A

3aRS suorituksen jälkeen PEMF altistuksen rotan aivokuoren neuronien hoitamattomilla tai NGF-käsiteltyjen PC12-soluissa ja U87MG soluissa (kalvoja tai ehjät solut) paljasti merkittävän kasvun Bmax- arvojen verrattuna valottamattomat solujen viittaa modulaatio PEMF kohtelu reseptoritiheyttä. Nämä tiedot ovat hyvin korreloi aiempien tulokset osoittavat, että PEMFs pystyvät ajan säännellä

2A ja A

3AR tiheys ja toimivuus ihmisneutrofiilien, ihmisen ja naudan synoviosyytit, ja naudan kondrosyyttien [22] – [25 ]. Lisäksi nämä tulokset ovat tiiviisti mukana tuoreet tiedot osoittavat kasvua A

2AARs rotan aivokuoren neuronien seuraavat PEMF altistus [42]. Tällä hetkellä mekanismeja PEMF toiminta ovat edelleen huonosti määritelty, vaikka molekyylitasolla voi liittyä muutoksia reseptorin kierrätystä solukalvon sekä sääntelyn vaikutusta transkription tasolla, ehdottivat lisääntyminen A

2A ja A

3AR mRNA seuraavat PEMF altistuksen.

tutkia jos ylössäätöä A

2A ja A

3aRS liittyi korkea toiminnallisuus näiden reseptorien eri soluvasteita on tutkittu. Ensinnäkin olemme arvioineet vaikutusta tunnettu adenosiiniagonistien kuten CGS 21680 ja CI-IB-MECA cAMP kertymiseen. Solulinjoissa tutkittiin stimuloimalla CGS 21680 A-

2AARs kasvoi käsittelyn jälkeen PEMFs. Samoin estovaikutus CI-IB-MECA oli voimistaa PEMF altistuminen ensisijainen rotan aivokuoren neuronien, käsittelemättömän tai NGF-käsiteltyjen PC12-soluissa ja U87MG soluja viittaa siihen, että kasvu reseptoreihin liittyy kasvua reseptorin toiminnallisuutta. Koska tiiviin NF-kB signaalintransduktioreitteihin ja monenlaisia ​​solun prosesseja kuten lisääntymistä, eloonjääntiä ja apoptoosin olemme analysoineet rooli

2A ja A

3aRS puuttuessa ja läsnä ollessa PEMFs . Huomasimme, että kasvainsoluissa, PEMF altistus pystyi parantamaan vähentämään NF-kB indusoituu

2A ja A

3AR stimulaatiota. Koska välinen ylikuuluminen NF-kB ja p53 oncosuppressor proteiini todettu olevan ratkaiseva merkitys syövän kehittymiseen [43], olemme arvioineet vaikutus

2A ja A

3AR aktivointi ja PEMFs altistumisen p53 -proteiinin tasoja. Kasvainsoluissa, mutta ei rotan aivokuoren neuronien, A

3AR agonistin Cl-IB-MECA välitteisen kasvua p53 tasoilla, vaikutus, joka on parantunut läsnäolo PEMFs. Nämä tulokset ovat yhtäpitäviä löytyy viime työtä, joka osoittaa, että A

3AR agonisti esti eturauhasen syöpäsolujen lisääntymistä ja indusoi G1 solukierron pysähtymisen läpi p53 induktion [44]. Arvioida, onko sääntelyä näitä olennaisia ​​tekijöitä liittyi modulaatioon kasvainsoluproliferaation, joka on tymidiininsisällytysmääritys suoritettiin. Estovaikutusta Cl-IB-MECA soluproliferaatioon havaittiin kasvainsoluissa vahvistetaan osallistumista A

3AR aktivaation esto kasvaimen kehittymisen, ja se oli paljon selvempää, kun läsnä on PEMF altistumista. Tämä anti-proliferatiivinen vaikutus voimistua PEMFs kasvainsoluissa tutkittiin. PEMF hoito ei ole muuttanut proliferaatiota aivokuoren neuronien puuttuessa tai läsnä ollessa AR stimulaation vaikka alhainen proliferatiivinen indeksi voisi olla haitta. Lisäksi nämä vaikutukset kumottiin läsnäolo A

3AR antagonisti viittaa suora osallistuminen tämän nimenomaisen AR-alatyyppiä. Nykyään, anti-proliferatiivista vaikutusta Cl-IB-MECA on laajasti tutkittu ristiriitaisia ​​tuloksia, koska kudosten tai solujen analysoitiin. Esimerkiksi on osoitettu, että CI-IB-MECA johdannaiset välittävät väheneminen solujen lisääntymisen kautta solusyklin pysähtymisen ihmisen keuhkosyövän soluja viittaa ensisijainen rooli

3aRS estävän kasvainsolujen proliferaatiota ja solumigraatio [45]. Olemme myös havainneet, että A

3AR agonisti CI-IB-MECA välittämä sytotoksinen vaikutus eri tuumorisoluissa tarkastellaan osoittaa merkittävää lisäystä LDH: n vapautuminen. Vaikutus A

3AR stimulaation LDH: n vapautuminen oli voimistaa PEMF altistuminen käsittelemättömän tai NGF käsitelty PC12-solujen ja U87MG soluissa. Erityisesti, ei ole sytotoksinen vaikutus Cl-IB-MECA havaittiin rotan aivokuoren neuronien, mikä viittaa siihen, että tämä vaikutus voi liittyä kasvainsoluihin. Nämä tulokset ovat yhtäpitäviä aiemmin raportoitu osoittavat, että A

3AR agonistit sytotoksista vaikutusta kemoterapeuttisten aineiden koolonkarsinoomasoluja [46]. Jotta voidaan arvioida, jos havaittu vaikutus A

3AR aktivointi kasvainsolujen merkinanto- ja syöttämällä mukana apoptoottisia tapahtumia, aktiivinen kaspaasi-3-tasot tutkittiin sen jälkeen, kun hoidon AR-agonistien läsnä ollessa tai puuttuessa PEMF altistumista. Kumpikaan CGS 21680 tai CI-IB-MECA, yksin tai yhdessä PEMFs, pystyivät vaikuttamaan aktiivinen kaspaasi-3 tasoa rotan aivokuoren neuronien. Mielenkiintoista, kasvainsoluissa, CI-IB-MECA, mutta ei CGS 21680 pystyi kasvattamaan kaspaasi-3 tasoa, vaikutus, joka tehostui PEMF altistumisen, mikä viittaa synergistinen rooli

3AR stimulaatiota ja PEMFs induktiohoidossa apoptoosin. Nämä tulokset ovat yhdenmukaisia ​​äskettäin raportoitu osoittaa, että A

3AR agonisti IB-MECA aiheuttaman apoptoosin rotan eturauhassyövän solulinjoissa ja ihmisen metastaattisen androgeenista riippumaton eturauhassyöpä solulinjassa [18]. Kaikki nämä tiedot vahvistavat aiemmat papereita, joissa eri kasvaimissa on havaittu suoraa osallistumista A

3AR ilme ja toiminnallisuus [14], [47].

Huolimatta yhä enemmän kokeellista tietoa PEMFs, kiistanalainen vaikutuksia on raportoitu johtunee eri järjestelmien ja käytetty laitteisto

in vivo

tai

in vitro

kokeita. Erityisesti erilaiset fyysiset muuttujat, kuten taajuus, voimakkuus ja aaltomuoto voitaisiin käyttää empiirisiä perusteella. Tässä tutkimuksessa olemme käyttäneet hyvin tunnettu PEMF altistumisen järjestelmä, joka perustuu järkevään ajettu metodologia, joka pystyi muuntamaan eri kuin kasvainsolutyypit, ilmaisu ja toimivuutta AR aiemmin raportoidun [22] – [25], [42], [48].

In vitro

kokeita eri tuumorisolulinjoissa ovat ehdottaneet, että PEMF hakemuksen yhdessä syöpälääkkeiden ovat erittäin tehokkaita, koska ei-invasiivinen sovelluksia kasvaimen hoito [49]. Eräässä

in vivo

eläinmallissa soveltamisesta matalataajuista EMF estää esineoplastiset vaurioita kemiallisesti indusoidun rotan maksassa vähentämällä soluproliferaation [50]. Äskettäin kliinisissä tutkimuksissa erilaisia ​​syöpiä käyttämällä ei-invasiivisia palaute menetelmää tunnistaa kasvaimeen tiettyjä taajuuksia ja toteutettavuuden testaamiseksi antamisen tällaisten taajuuksien potilaille, joilla on pitkälle edennyt syöpä tehtiin ja voi johtaa löytö uusia reittejä valvoa syövän kasvua [34].

Edellinen

in vitro

määrityksissä ovat raportoineet, että A

3AR agonistit kohdistavat ero vaikutusta normaaleihin ja syöpäsoluja. Normaaleissa soluissa, agonistit indusoivat kasvutekijöiden ja kasvainsoluissa agonistit indusoivat apoptoosin ja kasvaimen kasvun inhibition kautta vapauttaminen NF-kB ja Wnt signalointireitteihin [5] – [7], [11], [ ,,,0],12]. Tuloksemme ovat yhtä mieltä nämä tiedot ja vahvista kaksoisrooli A

3aRS herättää kysymyksen siitä mekanismia ero vaikutuksen. Mahdollinen selitys voi liittyä eri ilmentymistä ratkaiseva säätelytekijän kasvainsoluissa. On hyvin tunnettua, että NF-kB on erittäin ilmaistaan ​​kasvainsoluissa, joissa sen konstitutiivinen aktivaatio näyttää vaikuttavan syövän solujen eloonjäämistä edistetään anti-apoptoottisia geenejä ekspressiota [51], [52]. Tutkimuksessamme alhainen pitoisuus Cl-IB-MECA oli todennäköisesti riittävä inhiboimaan NF-kB tuumorisoluissa vaikuttamatta tämän reitin kontrollisoluissa. Analogisesti, vaikutus A

3AR stimulaation säädeltyyn p53-proteiinin kasvainsoluissa voisi perusteella eri vasteet havaittiin suhteessa kontrollisoluihin. PEMF altistuminen tehosti näitä vaikutuksia kasvainsoluihin ilman pitoisuuden lisäämiseksi A

3AR agonisti. Farmakologisista kannalta mahdollinen etu yhdistelmä pienen annoksen agonistin ja lokalisoidun ulkoisen PEMF hoito voisi olla riskin vähenemiseen haitallisten tai systeemisiä sivuvaikutuksia, kasvaa dramaattisesti, kun lääkkeet annetaan suuri annos.

Nämä tulokset osoittavat mahdollisuuden, että kasvaimen vastainen vaikutus välittyy

3aRS voitaisiin voimistaa ei-invasiivisia ärsyke edustaa PEMFs, jonka avulla on mahdollista käyttää alhaisten pitoisuuksien agonistin rajoittaa sen mahdolliset sivuvaikutukset . [3]dioxol-5-yl-2-[5-(2,6-dioxo-1,3-dipropyl-2,3,6,7-tetrahydro-1H-purin-8-yl)-1-methy-1H-pyrazol-3-yl-oxy]-acetamide,