Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

ID2 kuuluu alaluokka transkription sääntelyviranomaisten kuuluvan yleisen bHLH (perus-helix-loop-helix) perheen transkriptiotekijöiden. Normaaleissa soluissa, ID2 joka sääntelee tasapainon lisääntymistä ja erilaistumista. Uudemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että ID2 osallistuu syövän etenemisen useissa syöpätyypeissä kuten eturauhas- tai rintojen.

Menetelmät /Principal Havainnot

Tässä työssä selvitettiin, ensimmäistä kertaa, suhde ilmentymisen ID2 ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) potilaiden ja kliinis ja ennusteen näistä potilaista. Immunohistokemia suoritettiin kudossiruina, johon kuului 62 NSCLC kasvaimia. Pahanlaatuisissa kudoksissa, ID2 ilmentyminen on havaittu sekä ydin- ja sytoplasmisen osastoja, mutta olemme osoittaneet, että vain ydinvoiman ilmentyminen ID2 korreloi käänteisesti erilaistumista luokan kasvain (p = 0,007). Mielenkiintoista, potilailla, joilla on huonosti eriytetty kasvaimia, ydinvoiman ilmaus ID2 oli itsenäinen ja epäsuotuisa ennustetekijä hengissä (p = 0,036).

Johtopäätökset

Nämä tulokset viittaavat siihen, että ID2 voisi osallistua kasvaimen erilaistamattomuuden prosessien NSCLC, ja voitaisiin käyttää prognostinen markkeri potilaille, joilla on huonosti eriytetty kasvaimia.

Citation: Rollin J, Bléchet C, Régina S, Tenenhaus A, Guyétant S, Gidrol X (2009) solunsisäinen lokalisaatio ID2 Expression Onko ennustearvo Non pienisoluinen keuhkosyöpä. PLoS ONE 4 (1): e4158. doi: 10,1371 /journal.pone.0004158

Editor: Axel Imhof, University of Munich ja keskus Integrated Protein Science, Saksa

vastaanotettu: 08 heinäkuu 2008; Hyväksytty: 04 joulukuu 2008; Julkaistu: 8. tammikuuta 2009

Copyright: © 2009 Rollin et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Kirjoittajat ei ole tukea tai rahoitusta raportoida.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

ID2 (Inhibitor of DNA: ta sitovaa 2) kuuluu alaluokka proteiineja, ID-perhe, tavataan suuren bHLH (perus-helix-loop-helix) ryhmä transkriptiotekijöiden. Mielenkiintoista, koska niillä ei ole perus verkkotunnuksen, ID proteiinit eivät suoraan sitoudu DNA ja sen sijaan toimia hallitseva negatiivinen antagonisteina luokan bHLH transkriptiotekijöitä. Tunnettuja tavoitteita ID proteiinit ovat E-proteiinin ja jäsenten Ets perhe [1]. ID proteiinit ovat osallisena kudoksen kehittäminen [2], [3], ja niitä on kuvattu inhibiittoreina erilaistumista lukuisissa solutyypeissä mukaan lukien myeloidisoluissa [4], B-lymfosyytit [5], ja lihassolut [6]. ID2 ilme on yleensä alhainen normaaleissa kudoksissa, ja on säädelty kasvaimissa. Korkeita ilmentymisen on havaittu maligniteetteja, kuten neuroblastooma [7], [8], ja peräsuolen adenokarsinooma [9], Ewingin sarkooma [10], eturauhassyöpä [11], ja haimasyövän [12]. Kaiken kaikkiaan nämä tulokset viittaavat siihen, että ID2 voi olla tärkeä rooli kasvaimen aloittamista ja etenemistä.

Toistaiseksi on vain yksi tutkimus, jossa arvioidaan roolia ID2 keuhkosyövän, erityisesti pienisoluinen keuhkosyöpä (SCLC ) [13]. Keuhkosyöpä on johtava syy kuolemista syöpä maailmassa. Runsain histologinen tyyppi, joka vaikuttaa noin 80%: lla potilaista on ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC), toisin kuin pienisoluinen keuhkosyöpä. Yleinen 5 vuoden pysyvyys NSCLC potilailla on noin 15% [14]. Kun diagnoosi on vahvistettu, hoitovaihtoehdot perustuvat tyypillisesti vaiheessa ja histologia [15], vaikka tämä kerrostuneisuus järjestelmä ei aina heijasta biologiaan kasvain. Tämän seurauksena yli 50% potilaista, joilla alkuvaiheen keuhkosyöpään kuolee, kun taas toiset pitemmälle selviävät [14], [16], taustalla tarvita ylimääräisiä ennustetekijöitä markkereita paremmin ennustaa tuloksista tauti [17].

tässä tutkimuksessa olemme arvioineet ilmaus ID2 immunohistokemiallisesti on NSCLC kudossiruina sisältää 62 kasvaimia. Sitten tutki tarkemmin suhteita ID2 ilmaisun ja ennusteeseen viittaavia parametreja, jotta voidaan arvioida sen mahdollista roolia ennustetyövälineenä merkkiaine NSCLC.

Tulokset

ID2 ilmentäminen Normaali Lung ja NSCLC kudokset

immuunivärjäykseen ID2 suoritettiin kasvaimen mikrosirulla (TMA), joka sisältää 62 NSCLC näytteitä ihmisen potilaista. Kliiniset ja histologiset piirteet potilailla on kuvattu taulukossa 1. Ei-syöpä keuhkokudokseen, heikko tai kohtalainen ID2 ekspressiota havaittiin keuhkoputken epiteelisoluissa sekä sytoplasmassa ja ytimeksi. Lisäksi, heikko ID2 värjäytyminen havaittiin sytoplasmassa endoteelisolujen (kuvio 1A-D).

A-B: ID2 värjäys epiteeli- ja endoteelisolujen ei-syöpä keuhko. C-F: edustaja ilme TMA vahvojen ID2 värjäytyminen tumassa ja joilla on kohtalainen (C, D) tai heikko (E, F) sytoplasmista värjäytymistä. C, D ovat huonosti eriytetty adenokarsinoomia ja E, F on heikosti eriytetty suuri cell carcinoma. G-H: Kasvain kanssa puuttuminen tumavärjäystä joilla on kohtalainen (G, H) sytoplasmista ilmentymä ID2. G, H kohtalaisesti eriytetty levyepiteelikarsinoomia.

ID2 ilmentymistä kasvainsoluissa alkaen 62 pienisoluista keuhkosyöpää oli hyvin erilaisia ​​sekä intensiteettinä ja lokalisointi (kuvio 1). Out of 62 NSCLC potilaiden suuri osuus (98%, 61/62) ilmaistuna ID2 proteiini lähes yksinomaan kasvainsoluissa (mediaani maailmanlaajuinen värjäystä pisteet = 3, alue 0 18). Nuclear immunoreaktiivisuus oli positiivinen 33 (53,3%) ja NSCLC näytteiden (mediaani tumavärjäystä pisteet = 1, alue 0 11), ja sytoplasminen ID2 havaittiin 57 (92%) 62: sta kasvainten (mediaani sytoplasmista värjäytymistä pisteet = 2, alue 0-8). Monet huonosti eriytetty kasvaimia osoitti vahvaa ID2 värjäytymistä ytimet yhdessä heikko tai kohtalainen sytoplasmista värjäytymistä (kuvio 1 E-J). Sen sijaan, ID2 ei ilmaistu ytimet osittain tai hyvin eriytetty kasvaimia, kun taas heikko tai kohtalainen ilmentymistä havaittiin sytoplasmassa (kuvio 1K-P).

Association of ID2 Expression kanssa kliinis parametrit

mediaani värjäytymisen pisteet joko ydin-, sytoplasmisen tai globaali ilmaus ID2, kuten edellä on kuvattu, käytettiin cut off luokitella potilaat kahteen ryhmään: ”low” (eli matala ID2 lauseke) ja ”korkea” (eli korkeat ID2 ilme). Useita komponenttien analyysi (MCA) suoritettiin kerättyjen 62 potilasta ja graafinen esitys on esitetty kuviossa 2A. Lyhyesti, muuttuva lähiöissä kuvaajan ovat mahdollisesti liittyvät yhteen. MCA osoitti, että pieni ydin- ilmentymistä ID2 liittyi hyvin erilaistunut kasvaimia ja imusolmuke osallistuminen. Sen sijaan korkea ilmentyminen ID2 tumassa nähtiin useammin kasvaimia, jotka olivat huonosti eriytetty ja oli kehittynyt paikallinen invaasio (T3-T4 tila). Yhteistyössä MCA, DEMOD analyysi tehtiin ja osoittivat merkitsevästi yhteydessä ydin- ilmaus ID2 ja histologisen erilaistumisen NSCLC (kuvio 2B). Tuloksemme osoittivat 15 ulos 17 (88%) on hyvin erilaistunut kasvainten osoittautunut alhaiseksi ekspressiotasot ID2. Lisäksi huonosti eriytetty kasvaimet oli vahva ydin- ilmaus ID2 (p = 0,007) 12 ulos 19 (63%) tapauksista. Kuitenkaan mitään merkittävää suhdetta välillä havaittiin ID2 ilmaisun ja imusolmukemetastaaseja T tila, mahdollisesti johtuen epätasaisesta jakautumisesta T aseman ryhmien välillä (52 ja 10 potilaalla T1-T2 ja T3-T4, vastaavasti). Soluliman ilmentyminen ID2 ei liittynyt erilaistumista arvosana NSCLC, mutta yllättäen liittyy histologinen tyyppi kasvaimia. Kasvain ilmaus ID2 oli korkea 22 ulos 33 (67%) tapauksista adenokarsinooma verrattuna 5 out of 19 (26%) tapauksista okasolusyöpä (p = 0,016) (kuvio 2B).

: Nuclear, soluliman ja maailmanlaajuinen ilmaus ID2 sisällä NSCLC kasvaimia on käytetty aktiivisina muuttujat ja edustaa rohkeita neliöt ja ympyrä. Kliinis-(ts eriyttäminen, histologinen tyyppi, genre, tupakointi, vaihe, ja TNM-luokitus) on käytetty kuvaavia muuttujia ja edustaa auki pastilli. Kaikki muuttujat sijoitettiin vakavuuden keskellä kaikkea potilaiden kuuluvien edustettuina luokkaan. Kliinisten parametrien liittyy mahdollisesti ID2 ilme on alleviivattu ja kursivoitu. B: DEMOD analyysi suoritettiin tunnistamiseksi tilastollisia assosiaatioita ID2 ilmaisun ja kliinis. Vain parametrit tunnistetaan MCA on esitetty taulukossa (eli histologinen tyyppi, T tila, imusolmuke osallistuminen tila, ja erilaistumisen kasvain).

yhden ja usean Survival Analysis

Sen määrittämiseksi, immunovärjäyksen ID2 oli ennusteen arvioinnissa, selvitimme yhdistyksen välillä globaalin, ydin- ja sytoplasmista ilmaus ID2 kanssa eloonjäämisaste potilaiden. Ensin analysoidaan tavanomaisilla kliinis parametreja. Havaitsimme merkittävä vaikutus kasvaimen vaiheen (p = 0,0001) ja kasvaimen kokoa (p = 0,014) potilaan yleiseen eloonjäämiseen (kuviot 3A-C), kun taas imusolmukestatuksesta (N0 vs. N +) oli rajatapaus merkitystä (p = 0,06) . Histologinen eriyttäminen ei ennustetyövälineenä merkki meidän kohortissa NSCLC potilaiden (p = 0,48; tuloksia ei ole esitetty). Samoin emme havaita merkittävää eroa yleisen potilaiden välillä, joilla on korkea ekspressiotasot ID2 ja ne joilla alhainen ekspressiotasot ID2 (kuva 3D-E). Kuitenkin, kun kerrostuneisuus tietojen mukaan histologinen eroavuus (kuvio 3G-I), huonosti eriytetty NSCLC potilailla, joilla on korkea ydinvoiman ilme näytti lyhyempi kokonaiselossaoloaikaa kuin potilailla, joilla on alhainen ID2 ydin- lauseke (mediaani säilyminen = 24 vs. 41 kuukautta, vastaavasti ; p = 0,036, kuvio 3G). Lisäksi Monimuuttuja-analyysissä käyttäen Coxin regressiomallin osoitti, että ydinvoiman ID2 ilmentymistä potilailla, joilla on huonosti eriytetty kasvaimia oli itsenäinen ennustetekijä kokonaiselinaika (p = 0,034; RR = 13,7; IC 95% = 1,2-161, taulukko 2). Ei ennusteen arvioinnissa on ID2 ydin- ilmentymistä havaittiin kohtalainen tai hyvin eriytetty kasvaimia (tuloksia ei ole esitetty).

A-F: Kaplan-Meier käyrät määritettiin kaikkien NSCLC potilaiden (n = 59) mukaan sairauden vaiheeseen (A), imusolmukestatuksesta (B), T tila (C), ydin- (D), sytoplasman (E), ja globaali ilmaus ID2 (F). G-I: Kaplan-Meier-käyrät on saatu potilailla, joilla on huonosti eriytetty kasvaimia (n = 18) mukaan ydin (G), sytoplasminen (H), ja globaalin (I) ilmaus ID2. Käyrät verrattiin log-rank-testi.

Keskustelu

rooli ID2 on tutkittu useiden syöpätyyppien (eli eturauhas-, rinta-, paksusuolen ja peräsuolen, neuroblastooma , ja aivan äskettäin pienisoluinen keuhkosyöpä), mutta tähän mennessä ei ole tietoa ilmaus ID2 ei-pienisoluinen keuhkosyöpä, joka vaikuttaa 80%: lla keuhko syöpäsairauksia. Tässä olemme keskittyneet ilmentymistä ID2 NSCLC ja sen suhdetta kliinis parametrit ja taudin ennusteen. Expression of ID2 arvioitiin 62 NSCLC kasvaimissa immunohistokemiallisesti käyttämällä kudossiruina. Vaikka suurin osa potilaista analysoitiin tässä tutkimuksessa ilmaisi ID2, potilas ryhmä oli hyvin heterogeeninen osalta sekä ekspressiotason ja solunsisäinen sijainti. Olemme kuitenkin osoittaneet, että korkeat ID2 ilmaisun ytimien näyttää korreloivan huonon erilaistumista kasvain. Tämä havainto on hyvin mieltä tunnettujen ominaisuuksien ID2, sillä proteiini on luonnehdittu estäjänä erilaistumisen lukuisissa kudoksissa, kuten orvaskeden ja lihasten [18], [19]. Siten ID2 estää lihasten erilaistamista suora vuorovaikutus MyoD, joka on bHLH transkriptiotekijä tarvitaan myoblastisen eriyttämisen [20]. Lisäksi eturauhassyöpä, vahva ID2 ilmentyminen liittyi huonosti eriytetty laadut kasvain, mikä viittaa siihen, että ID2 voisi myös olla mukana sääntelyn kasvaimen erilaistamattomuuden [11], [21]. Tuloksemme osoittivat, että ydinvoiman ilmentymistason ID2 oli itsenäinen ja negatiivinen prognostiset markkeri eloonjäämisen potilailla, joilla on huonosti eriytetty keuhkokasvaimia. Siten potilailla, joilla on kasvaimia, joilla ydinvoiman ilmaus ID2 on 13,7-kertainen kuolemanriski kuin potilailla, joilla on alhainen ilmaus ID2. Prognostisia arvo korkea ID2 ilmaisun on jo osoitettu muihin syöpätyyppeihin, kuten neuroblastooma ja eturauhassyövän [7], [11], [21], [22], [23]. Aikaisemmat tutkimukset rintasyöpä ja SCLC ovat raportoineet, että korkea sytoplasmista ilmentymistä ID2 liittyi ennuste oli hyvä, kun taas mitään korrelaatio löytyi ydin- ilmaus ID2 ja selviytymisen potilaista [13], [22]. Kamalian

et al.

Ehdotti, että SCLC lisääntyneen ilmentymisen ID2 sytoplasmassa voisi johtua sen vientiin ytimiä voi lyhentää pro-kasvaimen vaikutus ID2. Nämä tulokset olivat yhtä mieltä Tutkimuksessamme koska osoitimme suora suhde ydin- ilmaus ID2 ja selviytymisen potilaista. Erot koskevat ID2 kotoistuksesta peräisin osittain eroja kahden patologioita, mutta myös eroja vasta-aineiden spesifisyys. Todellakin, olemme käyttäneet Zymedin vasta suosittelema Perk

et al.

, Joka varoitti käyttöä huonosti erityisten ID2 vasta [24]. Kaikkiaan meidän tiedot viittaavat siihen, että sekä ID2 ilmaisua ja solunsisäinen sijainti on arvioitava, jotta voidaan määrittää ennuste syöpäpotilaille, mukaan lukien keuhkosyöpä. Solunsisäinen lokalisaatio ID2 voi olla merkittävä rooli valvonnassa ID2 toiminta ja solujen kohtalon sääntelyä. Kurooka

et al.

Määritetty, että nucleo-sytoplasman sukkuloimisen ID2 on aktiivisen mekanismin riippuvainen CRM-1-proteiinia, ja korreloi käänteisesti transkription tukahduttamisen kautta E-box-sekvenssi [25]. Lisäksi, Lasorella ja Iavarone osoitti, että vuorovaikutus ID2 ja aktiini liittyvä proteiini arvoitus homologi (ENH) ohjaa myös lokalisoinnin ID2 [26]. Todellakin, downregulation ENH ilmaisun estää relocalization on ID2 sytoplasmaan in eriytetty neuroblastoomasoluilla. Tämä tulos antaa meille mahdollisuuden spekuloida ilmenee, ENH tai CRM-1 proteiinin erilaistamattomuuden mekanismi NSCLC. Tuloksemme osoittavat, että ydinvoiman ID2 on todennäköisesti ennustetekijä NSCLC ja ENH välittämä translokaatiota ID2 sytoplasmaan voi selittää puute ennusteen arvioinnissa sytoplasmaan ID2. Kuitenkin rooli ID2 lokerointi keuhkoissa syövän etenemiseen, vaikka mahdollisesti kiinnostavia, vaatisi tarkempaa arviointia.

Mekanismi, jolla ID2 edistää keuhkojen syövän etenemiseen ei ole vielä selvää. Kuitenkin saadut tulokset muissa malleissa viittaavat siihen, että toiminta ID2 voisi riippua inhibitioon Rb tuumorisuppressorin koulutusjakson [3], [27]. Lisäksi on osoitettu, että ID2 myös angiogeneesiä säätelevän ja apoptoosin kautta transkription säätelyn

VEGF

ja

BCL2

geenit, vastaavasti [28], [29]. Kuitenkin toiminta ID2 voisi myös olla kudosspesifisiä: rintasyövän solulinjoissa, korkea ilmentyminen ID2 vähensi kasvupotentiaalia ja invasiivisuus, kun taas säätely ylöspäin ID2 kasvoi leviämisen ja invasiivisia mahdollisia eturauhaskasvainsoluissa [11], [22], [23].

Lopuksi, vaikka tuloksemme ovat alustavia, ne viittaavat siihen, että ID2 voisi osallistua kasvaimen erilaistamattomuuden prosessit NSCLC, ja voitaisiin käyttää prognoosimarkkerina potilaille, joilla on huonosti eriytetty kasvaimia. Mielenkiintoista on, että NSCLC, huonosti eriytetty karsinoomat on vaikea luokitella, ja sellaisenaan, tunnistaminen romaani ennustetekijöitä päättäjien tälle nimenomaiselle voi parantaa hoitotulokseen potilaista.

Materiaalit ja menetelmät

Tuumorinäytteet

Olemme analysoineet kudosnäytteitä kerätään mahdollinen ryhmässä 62 potilasta NSCLC, joille oli tehty täydellinen resektioleikkaukselle keuhkojen kasvain kuin hoidon alkuvaiheessa (eli ilman erillistä sädehoitoa tai kemoterapiaa) välillä tammikuussa 2002 ja elokuuta 2004 Torakaaliikirurgia Department of Trousseau Hospital (Tours, Ranska). Kirurginen Näytteet kiinnitettiin 10% formaliinilla ja parafiiniin upotettuja tavanomaisesta histologista tutkimusta ja immunohistokemia. Histologinen tyyppejä, erilaistuminen, TNM luokittelu, ja vaihe ryhmittely (yhteenveto taulukossa I) määritettiin mukaisesti Maailman terveysjärjestön (WHO) kriteerit keuhkokasvaimia [30]. Kirjallinen suostumus saatiin kaikki potilaat mukana tässä tutkimuksessa suosittelemia Ranskan lainsäädäntöä.

Tissue Microarray valmistus ja immunohistokemia

kudos microarray (TMA) valmistus, edustavalla NSCLC näytteiden tunnistettiin kirurgisella patologi hematoksyliini–eosiinilla (HE) värjätään dioja. Kullekin kasvain, kolme keskeistä koepaloja 1 mm halkaisijaltaan otettiin sitten valitut alueet luovuttajan lohkoja ja puettu vastaanottajaan parafiiniblokkiin manuaalisella kudosta ryhmittäjällä (Beecher välineitä, Sun Prairie, USA). Osaa (4 pm paksu) TMA lohkot oli leikattu ja immunohistokemia suoritettiin käyttäen kaniinin polyklonaalista spesifinen vasta-aine on nostatettu ID2 (ZMD.325, Invitrogen, Cergy Pontoise, Ranska). Lyhyesti, TMA jakso oli parafiini, vedettömät, ja toimitti lämmittää antigeenin haku käytettäessä etyleenidiamiinitetra etikkahappopuskuri (MS-Unmasker, pH 7,8, DIAPATH) 20 min. ID2 vasta-ainetta, jonka 1/50 laimennus. Immunovärjäys suoritettiin Lab Vision Autostaineriin (Lab Vision, Fremont, USA) käyttäen biotiini-streptavidiini-peroksidaasia tunnistusjärjestelmä diaminobentsidiiniä kromogeeni (ChemMate ™ Detection Kit, DakoCytomation). Objektilasit hematoksyliinillä vastavärjät-. TMA sisälsi kairausnäytteitä normaalin keuhkoputkien limakalvojen ja keuhkojen kudosta. Spesifisyys ID2 vasta-aine oli hallintaan käyttämällä puhdistettua ID2 proteiinia negatiivisena kontrollina estää sitoutumisen ID2 vasta-aineiden tuumorisoluihin (kuvio S1).

kaksi riippumatonta tarkkailijaa (JR, CB) arvioidaan sekä lokalisointi ja intensiteetti ID2 värjäystä. Tämä arviointi sokkoutettu kliiniset tiedot. Sekä ydin- ja sytoplasmista värjäytymistä tulokset syöpäsoluja perustettiin kertomalla värjäytymisen intensiteetti skaalataan 0-3 (null = 0, heikko = 1, kohtalainen = 2, ja voimakas = 3), jonka positiivisten solujen prosenttiosuuden (0 = 10%; 1 = 10-25%, 2 = 26-50%, 3 = 51-75%, 4 = 75%). Global ilmentyminen ID2 kasvainsoluissa saatiin lisäämällä ydin- ja sytoplasman värjäytymistä tulokset.

Tilastollinen analyysi

Multiple komponenttien analyysi (MCA) suoritettiin kerättyjen 62 käyttävillä potilailla SPAD ohjelmistoa . Tämä menetelmä on kuvaileva Monimuuttuja-analyysissä, joka mahdollistaa nopean tunnistamisen tilastollisia yhteyksiä muuttujia. Lyhyesti, eri luokkien, eli ID 2 ilmaisun ja kliinis-, oli sijoitettu moniulotteisessa avaruudessa. Jotta tarkkailla pisteiden välisiä etäisyyksiä, ne heijastetaan tasossa kaksi ortogonaalista tekijää,

F

1 ja

F

2. Nämä ”ensimmäinen” tekijöitä valittiin kaikkein edustaja maailmanlaajuisen varianssia tietoja. Koska asema luokat aktiivinen muuttujien (ydin-, sytoplasmisen, ja globaali ilmaus ID2) ja aseman havainnot (vaihe, imusolmuke tila, kasvain tila, histologiset tyypit, luokka erilaistumisen, genre, ja tupakointi) lasketaan samalla tavalla, ne voidaan sijoittaa samaan kuvaajaan (havainnot korvataan painovoiman keskukset). DEMOD menetelmä (SPAD ohjelmistot), samanlainen chi-neliö -testi, käytettiin myös täydentää MCA analysoimiseksi assosiaatiota aktiivinen muuttujien (ydin-, sytoplasmisen, ja globaali ilmaus ID2) ja kuvaavia muuttujia (kliinis).

Kokonaiselossaoloaika laskettiin ajan histologia diagnoosi kuolinpäivä johtuu tahansa syystä. Yleinen eloonjäämisluku analysoitiin mukaan Kaplan-Meier menetelmällä, ja erot eloonjäämisluvuissa arvioitiin log-rank-testi (MedCalc ohjelmistoversio 7.3.0.1). Monimuuttuja-analyysi ennustetekijöiden suoritettiin käyttäen Coxin suhteellista riskin malliin (MedCalc).

tukeminen Information

Kuva S1.

immunohistokemiallinen analyysi parafiiniin upotetut ihmisen NSCLC käyttämällä kanin polyklonaalista vasta-ainetta vastaan, ID2. IHC suoritettiin vasta-aineella (A ja C) tai sen jälkeen neutralointi vasta preinkuboimalla 2 ug /ml puhdistettua ID2 proteiinin (ID2 rekombinanttiproteiinin P01, Abnova, Taiwan), yön yli 4 ° C: ssa, (B ja D).

doi: 10,1371 /journal.pone.0004158.s001

(9,11 MB TIF) B

Kiitokset

Olemme kiitollisia A De Muret (Département d’Anatomie Pathologique, CHRU de Tours, Ranska) ja professori P Dumont (Département de Chirurgie thoracique, CHRU de Tours, Ranska) tarjoamiseksi keuhkojen näytteitä.