Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

peräsuolen syöpä (CRC) on merkittävä taakka julkisen terveys ja terveydenhuolto maailmanlaajuisesti. Mikrobiston on ehdotettu edistämisessä krooninen tulehdus suolessa, joka puolestaan ​​edistää kasvainten kehittymiseen. Tutkimuksessa selvitetään mahdollisia korrelaatioita ihmisen papilloomaviruksen (HPV) infektio proinflammatoristen Stat3 signalointiaktiivisuuksiaan ja tuloksena tasot sen loppupään proinflammatoristen sytokiinien IL-17 CRC potilailla.

Methods

HPV tutkittiin käyttämällä HPV genotyypin Chip teknologiaa ja konstitutiivisesti aktiivinen Stat3 (p-Stat3) ja IL-17-tasot testattiin käyttämällä immunohistokemiallinen (IHC) in parafinoidut syöpä- ja viereisten normaaleissa kudoksissa (ANT) peräisin kohortin 95 CRC potilaista. Korrelaatio analyysit suoritettiin välillä HPV-infektion ja kliinis ominaisuudet, Stat3 toimintaa ja IL-17-tasot näillä CRC potilailla.

Tulokset

kolme suurta löydöksiä: (1) HPV-infektion esiintymättömiä korkea CRC tapauksista (48,4%, 46/95), joista 45 tapauksessa (45/46, 97,8%) oli korkean riskin HPV16-positiivisia ja vain yhdessä tapauksessa oli HPV53-positiivisia. (2) HPV-infektio korreloi huonompi kliinisen vaiheen (III + IV) CRC. (3) HPV-infektio korreloivat voimakkaasti sekä konstitutiivisesti korkeampi Stat3 toiminta (P 0,01) ja korkea IL-17 tasossa (P 0,01) ainoastaan ​​CRC kudoksissa mutta ei ANT kudoksissa.

Johtopäätökset

HPV-infektio on yleinen CRC potilailla viittaa mahdollisesti ennaltaehkäisevää tehokkuutta HPV-rokotteen keskuudessa korkean riskin nuoria yksilöitä. Olemme ensimmäistä kertaa paljasti tri-sivuttainen välisiä suhteita HPV-infektio, konstitutiivinen Stat3 aktiivisuus ja IL-17 tason, jonka yhteistyöhön teko voi hieromaan proinflammatoristen mikroympäristön siinä colorectum joka puolestaan ​​voi edistää syövän synnyn ja mahdollisesti helpottaa etenemistä CRC .

Citation: Li YX, Zhang L, Simayi D, Zhang N, Tao L, Yang L, et al. (2015) papilloomavirukset korreloi tulehduksellinen Stat3 signalointiaktiivisuuteen ja IL-17-taso potilailla, joilla on peräsuolen syövän. PLoS ONE 10 (2): e0118391. doi: 10,1371 /journal.pone.0118391

Academic Editor: Zhi-Ming Zheng, National Institute of Health – National Cancer Institute, Yhdysvallat |

vastaanotettu 22 lokakuuta 2014; Hyväksytty: 15 tammikuu 2015; Julkaistu: 23 helmikuu 2015

Copyright: © 2015 Li et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tätä työtä tukivat avustusta Oasis Scholar Fund of Shihezi University (LZXZ201023), National Natural Science Foundation of China (NSFC nro. 81160301 ja 81260301 ). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistelua käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on kolmanneksi yleisin syöpä maailmanlaajuisesti seuraavien keuhkosyövän ja rintasyövän, jossa esiintyvyys, kuolleisuus ja 5 vuoden esiintyvyys oli 9,7%, 8,5% ja 10,9%, vastaavasti, kaikista syövistä mukaan että GLOBOCAN 2012 [1]. CRC kuolleisuus on laskenut maailmanlaajuisesti viime vuosina ansiosta Seulontaohjelmia perustettu monissa maissa ja osoitettavissa vaikutuksia riskien vähentämisen ja hoidon parantamiseksi [2,3].

Nykyinen paradigma on, että useimmat kiinteitä kasvaimia mukaan lukien CRC liittyvät krooniseen tulehdukseen, suoraan tai epäsuorasti [4]. Monien mikro-organismit tutkitaan, virusinfektiot ehdotetaan syövän kehittymisessä etenkin joka aiheutuu ihmisen papilloomaviruksen (HPV). Virusinfektioiden korkean riskin HPV-alatyyppien, kuten HPV16 ja HPV18 ovat paljastavia kehittämiseen kohdunkaulan, peräaukon ja sukuelinten syöpiin. Äskettäin HPV16 /18-infektioita on raportoitu liittyvän nielusta syöpään [5,6]. Viime vuosina, HPV-infektio on osoitettu liittyvän kolorektaalisyöpä [7,8].

Monesta eri tulehdussolujen ja sytokiinien läsnä kasvaimen mikroympäristössä, kasvaimia on nimitystä ”haavat eivät parane ”[9]. Signaalin anturin ja aktivaattori transkription 3 (Stat3) on kriittinen signalointireitin, joka on mukana muodostumista kasvaimen mikroympäris- kautta säädellään alavirran proinflammatoristen sytokiinien ja edistäviä tekijöitä kasvaimen kasvua ja etenemistä [10]. Fosforyloitua Stat3 (p-Stat3) on aktiivinen muoto Stat3, joka voidaan havaita erilaisten syöpien, mukaan lukien peräsuolen syöpä [11]. Niistä loppupään molekyylien indusoima Stat3 aktivaatio, IL-17 on tärkeä proinflammatorinen sytokiini, erittävät T-auttaja-IL-17-tuottamiseen (Th17) solut, jotka on tuotettu CD4

+ T-solut mukaan induktion TGF-β. Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että IL-17: lla on kaksoisrooli palvella joko promoottorina tai tuumorin vastaisen tekijän riippuen syövän malleja [12]. CRC, suuri elin tutkimukset osoittavat, että IL-17 toimii promoottorina sijasta kasvainta torjuvaa tekijä kasvaimen taudin alkamisen ja etenemisen [4,13,14]. Konstitutiivisesti aktiivista p-Stat3 voi säädellä erilaistumista ja kypsymistä Th solujen salainen IL-17, joka puolestaan ​​positiivisesti syöttää takaisin Stat3 signalointi, jotka lisäävät IL-17 voidaan ilmaista. Stat3 signalointi on rooli edistää kasvaimen kautta indusoimalla tuumorin verisuonia, mikä helpottaa neutrofiilien kerääntyminen, parantaa kasvainsolujen kykyä vastustaa apoptoosia ja jatkuvasti laajenevan paikallisen tulehdusvasteen [4]. Toisaalta, IL-17 edistää karsinogeneesiä ensisijaisesti herättää aktivoituminen Stat3 signalointireitin indusoida resistenssin apoptoosia ja edistää angiogeneesiä, joka helpottaa kasvaimen kasvua ja etenemistä [15].

Bakteeri-infektiot ovat osoittaneet tehdä yhteistyötä Stat3 signalointireitin aiheuttavan CRC [4]. Ei tiedetä, kuitenkin, onko virusinfektiot voivat myös toimia samalla tavalla kuin bakteerit. Tutkimuksessa selvitetään mahdollisia korrelaatioita HPV-infektion kanssa proinflammatoristen Stat3 signalointi aktiivisuutta ja sen loppupään IL-17 sytokiini CRC. Olemme tutkineet oletusta, että samanlainen bakteeri-infektioita, krooninen HPV-infektio voi myös pystyä tekemään yhteistyötä Stat3 signalointi, liipaisu tulehdusreaktio, helpottaa muodostumista mikroympäristön suotuisa syövän synnyn ja /tai syövän etenemistä CRC. Tarkastelemalla kohortin 95 CRC potilaiden kudoksista ja niiden viereisten normaaleissa kudoksissa (ANT), olemme saaneet kolme suurta havainnoista: (1) HPV-infektio on tunnettu lähes puolet CRC tapausta, joista 97,8% ovat saaneet korkean riskin HPV16 tyyppi; (2) HPV-infektio korreloi huonompi kliininen vaiheissa CRC; ja (3) HPV-infektio vahvasti korreloi konstitutiiviset toimintaan Stat3 ja sen loppupään IL-17 tasoja CRC kudoksissa. Nämä havainnot ovat mahdolliset vaikutukset taustalla HPV-Stat3 mekanismi patogeneesissä CRC ja mahdollisesti ennaltaehkäisevää soveltamista HPV-rokotteen keskuudessa korkean riskin nuoret henkilöt ainakin alueilla, joilla esiintyy HPV: hen liittyvän CRC.

Methods

Ethics lausunto

tutkimus hyväksyi Institutional eettinen Review Board (IERB) meidän ensimmäinen Affiliated sairaala Shihezi University School of Medicine (IERB nro SHZ2010LL02). IERB luopua tarve potilaiden suostumuksen vuoksi anonyymi analyysejä tiedoista ja standardi yliopistollisen sairaalan ohjeiden mukaisesti Helsingin julistuksen kuten luottamuksellisuus ja nimettömyys seurattiin käsittelyssä ja julkaiseminen potilaiden kudosten.

Potilaat

yhteensä 235 kirurgisesti toistoleikattiin ja parafinoidut arkistointi ihmisen kudokset saatiin, kuten 95 CRC kudosten ja 90 pariksi ANT kudoksia, ja 50 suolen kasvainten (CRA) kudoksiin patologian osaston, ensimmäisen Affiliated sairaalan Shihezi University School of Medicine päivätty vuodesta 2005 vuoteen 2007. Kaikki valitut kudokset perustuivat histopatologisia diagnooseista ja vahvisti varten diagnooseihin ennen kokeilua. Nämä potilaat perin valittiin, koska kummankin niiden saatavilla kliinistä tietoa ja riittävät kudosten kokoa kokeellisiin analyyseihin (mukaan lukien toistoja). CRC Potilaiden ikä 33-85 vuotta (mediaani-ikä 66 vuotta), mukaan lukien 43 tapausta paksusuolen syöpä (41 pariksi muurahaisia ​​saatavilla) ja 52 tapausta peräsuolen syöpä (49 pariksi muurahaisia ​​käytettävissä). 5 CRC potilaat ilman pariksi muurahaisia ​​pysyi tutkimuksessa saadakseen tilastotehoa kliinisissä analyyseissä useita sub-ryhmittymiä. Nämä CRC potilaat eivät saaneet ennen leikkausta kemoterapiaa tai kemosädehoidon ja niiden kliinis ominaisuudet tiivistetysti.

Koska kulutus kudosten aikaisemmissa tutkimuksissa ja tarvitaan suuri koko kudosten DNA: n eristämisessä ja myöhemmät HPV testauksen, vain 50 pariksi ANT kudokset olivat saatavilla, jotka täyttivät valintaperusteena on 5 cm: n etäisyydelle reunasta syöpä. DNA: n eristämisessä ja HPV testaus, siis olimme vain voi testata näitä saatavilla 50 pariksi ANT kudoksia, jotka jaettiin satunnaisesti kesken pariksi CRC kudoksiin. Lisäksi meillä on myös testattu 50 etuyhteydettömille viestintävirasto kudoksiin, yhteinen ei-syöpä sairaus ruoansulatuskanavan, HPV-infektio tutkia, oliko mitään eroa CRC ja CRA, joista CRA kudosten toimi eri kontrolliryhmään kannalta HPV-infektio.

HPV Infection käyttäen Gene Chip Technology

Genominen DNA uutettiin kudoksista käyttäen DNA Extraction kit seuraavat valmistajan protokollien (QIAGEN, Saksa). DNA näytteet koodataan ilman tunnistamista syöpää tai ei-syöpä diagnooseja ja lähetetään erikoisuus DNA genotyypityksen laboratorio (Yaneng Bioscience Co., Ltd, Shenzhen, Kiina, https://www.yanengbio.com/en/home2.asp) HPV testauksen. Laatu ja eheys uutettu DNA testattiin PCR: llä käyttämällä β-aktiini-geenin sisäisenä kontrollina (eteenpäin aluke: 5′-CTTAGTTGCGTTACACCCTT-3 ’ja reverse-aluke: 5’TGTCACCTTCACCGTTCC-3’). 155 emäsparin PCR-tuote β-aktiini-geenin havaittiin elektroforeesilla 2% agaroosigeelissä.

pyynnöstä Yaneng Bioscience Co., seuraavat varotoimet otettiin välttämiseksi ristikontaminaation prosessin aikana: (1) Kertakäyttöinen disposables työskenteli DNA: n eristämistä ja myöhemmät HPV testaus; (2) Valitse ensimmäinen erä uutettu DNA ja HPV testituloksia, valitsimme yhden negatiivisen HPV kontrolli (ANT näytteen suuri koko kudoksen) ja yksi positiivinen HPV kontrolli (CRC näyte suuri koko kudosta) on sisällytettävä jokainen erä DNA: n eristämiseksi (20 näytettä erää kohti); (3) jokaisen erän DNA: n eristämiseksi, yhtä paljon CRC kudosten (10 erää kohti) ja ANT tai CRA kudoksista (10 erää kohden) olivat mukana DNA: n eristämiseksi; ja (4) Nämä kontrolli DNA: t testattiin HPV yhdessä saman erän DNA otteita. Koko DNA: n eristämiseksi ja HPV testaus, huomasimme kahdessa erässä DNA otteita joista positiivinen kontrolli ei osoittanut positiivisuutta HPV ja näiden kahden erissä 40 kudokset sitten uudelleen uutettu DNA ja uudelleen testattiin HPV kunnes positiivinen HPV ohjaus oli positiivinen HPV-testi. Emme kuitenkaan ole noudattanut negatiivisen HPV kontrolli kääntyi positiiviseksi kautta DNA: n eristämistä ja HPV-testaus.

HPV tehtiin genotyypin käyttäen HPV genotyypin Kit, kliininen diagnostinen tuote Yaneng Bioscience Co. (Kiinan valtio FDA no. 2008-340099) Specialty HPV genotyypin Laboratory sisällä Yaneng Bioscience Co., joka oli valinnut International Agency for Research Cancer (IARC, World Health Organization) suorittamaan yleisyys Surveys HPV Infection ja kohdunkaulan neoplasian Kiinassa. PCR-reaktioseos (25 ui) sisälsi 5 ui genomista DNA: ta, 20 ui PCR-reaktiopuskuria. Sykliolosuhteet olivat seuraavat: Alkuperäinen denaturaatio 95 ° C: ssa 5 min, sitten 40 sykliä 94 ° C: ssa 30 s, 42 ° C: ssa 90 s, 72 ° C: ssa 30 s, ja lopullinen pidennys 72 ° C: ssa 5 min. Positiivinen HPV kontrolli-DNA sijoitettiin kuhunkin hybridisaatioon blot (S1 Kuva.). Päinvastainen linja blot -menetelmällä (RLB) käytettiin kaikissa yksilöt monistettavissa DNA ja hybridisaatio-olosuhteiden kuvattiin aiemmin [16,17]. PCR-tuotteet käsin syötetyn siruun pyyhkii ja hybridisaatio menettely suoritettiin automaatiota. Blotit perin luetaan automaattisesti ja tarkistetaan manuaalisesti ennen raportointi (S1 Kuva.). HPV genotyypin Kit pystyi havaitsemaan 23 HPV-alatyyppien lukien 18 korkean riskin HPV (HR-HPV) tyyppien (HPV16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 83, ja MM4) ja 5 matalan riskin HPV (LR-HPV) tyyppien (HPV 6, 11, 42, 43, ja 44) (S1 Kuva.). Kukin DNA näyte kolmena rinnakkaismäärityksenä 3 kaltevuus pitoisuudet genotyypityksen siru pyyhkii ja positiivinen sattuma oli 100%. Tämä HPV genotyyppitestiä on herkkyys havaita 103 kopiota HPV-DNA /ml ja spesifisyys 99% perustuen yhtiön tiedot. HPV testitulokset palautettiin meille ja dekoodataan vastaamaan potilaiden tunnistemerkintöjä ennen analyysiä.

Detection of Active p-Stat3 ja ilmaistuna IL-17 käyttäminen immunohistokemia (IHC) Pitoisuus

parafinoidut kudokset leikeltiin 4-pm viipaleiksi ja IHC analyysit suoritettiin käyttäen streptavidiini peroksidaasimenetelmää (SP kit, Zhongshan Golden Bridge Co, Peking, Kiina). Lyhyesti, kudosta dioja poistettiin vaha ja endogeeninen peroksidaasi estettiin 3% vetyperoksidia. Jälkeen estää normaalin vuohen seerumia, ensisijainen kanin anti-ihmis-polyklonaalisia vasta-aineita IL-17 (IL-17A, 1: 200 laimennos, Santa Cruz, CA, USA) ja p-Stat3 (1: 400 laimennos, Santa Cruz, CA, USA) levitetään kudokseen liukuu menettelyjä noudattaen, kuten aiemmin on kuvattu [18].

Positiiviset IHC tahroja määriteltiin kellanruskeita mukaan valmistajan demonstratiivinen dioja (Fig. 1). IHC värjäystä diat luettiin Olympus optisella mikroskoopilla yli kellanruskeita tahroja 12 peräkkäistä kenttää ja teki mukaan kaksi vaihtuvista tekijöistä: (1) laskemalla positiivisesti värjäytyneiden solujen (0 = 5%, 1 = 6% -25%, 2 = 26% -50%, 3 = 51% -75%, ja 4 = 76% -100%); ja (2) teki Värjäytymisen intensiteetti (0 = puuttuu, 1 = heikko, 2 = kohtalainen, 3 = voimakas). Lopullinen pistemäärä oli tuote (1) kertomalla (2) yksittäisten dioja (taulukko 1). Tämä pisteytysjärjestelmä oli samanlainen periaatteessa julkaistun kirjallisuuden [19]. Kuten esitetty taulukossa 1, esitimme lopullinen värjäys tulokset seuraavilla tavoilla yksinkertaisuuden: negatiivinen värjäytyminen kuin 0 (-); inkrementaalinen positiivista värjäytymistä kuin 1+ (+); 2 + for (++); ja 3+ varten (+++), tässä järjestyksessä.

Kuusi edustaja IHC värjäystä paneelit näytetään. Vasta-aine-värjäys vastaan ​​p-Stat3 pääasiassa tumassa (A, B ja C, positiivista värjäytymistä kellanruskeata), kun taas vasta-aine-värjäys IL-17 on pääasiassa sytoplasmassa (D, E ja F, positiivista värjäytymistä kellanruskeata). A ja B tuli pariksi kudoksista saman potilaan mutta C oli peräisin liity kudoksesta. D ja E tuli pariksi kudoksista saman potilaan mutta F oli peräisin liity kudoksesta. Voidaan nähdä, että p-Stat3 voimakkaasti värjättiin CRC (2) (C, pisteytetään 3+) verrattuna toisen CRC (1) (B, 2+) tai ANT kudoksen (A, pisteytetään negatiiviseksi tai 0). Vastaavasti IL-17, CRC (2) kudos osoittaa vahvaa värjäytymistä (F, pisteytettiin 3+) verrattuna toisen CRC (1) (E, pisteytettiin 1+), mutta ANT osoittaa vähän tai ei lainkaan värjäytymistä (D, sai negatiivisena tai 0). Mikroskooppinen suurennos on X200 kanssa inserttejä X400. ANT = viereiset normaalit kudokset ja CRC = peräsuolen syövän, vastaavasti.

TILASTOANALYYSI

Tilastolliset analyysit tehtiin SPSS tilastollista ohjelmistopaketti (versio 17.0). χ

2 testi ja t-testiä varten hyväksyttiin varianssianalyysi ja korrelaatio analysoitiin Spearmanin menetelmällä. Erot

P

0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

HR-HPV-infektio on yleinen tapahtuma Kiinan CRC Potilaat

Koko koko DNA: n uutto ja HPV testaus, huomasimme kahdessa erässä DNA otteita joista positiivinen kontrolli ei osoittanut positiivisuutta HPV ja näiden kahden erissä 40 kudokset sitten uudelleen uutettu DNA ja uudelleen testattiin HPV kunnes positiivinen HPV kontrolli oli positiivinen HPV-testi. Emme kuitenkaan ole noudattanut negatiivisen HPV kontrolli kääntyi positiiviseksi kautta DNA: n eristämistä ja HPV testauksen, mikä viittaa asianmukainen hallinta ristikontaminaatiota HPV testauksen. HPV-infektio havaittiin 46/95 CRC tapauksissa (48,4%, 95% CI 38% -58%), joka oli paljon korkeampi kuin ANT (15/50, 30,0%, 95% CI 17% -42%) ja peräsuolen adenoomien (CRA, 14/50 tai 28,0%, 95% CI 16% -40%), vastaavasti (taulukko 2). Niistä 46 HR-HPV positiivisia CRC tapauksissa 45 (97,8%) infektoitiin HPV16 taas vain yksi tapaus tartunnan HR-HPV-alatyypin, HPV53.

Lisäksi analysoidaan 50 CRC kudosten kanssa pariksi ANT kudokset (taulukko 2) osoittivat, että taajuus HPV-infektion kasvoi myös CRC kudoksissa (54%, 27/50) kuin että ANT kudoksissa (30%, 15/50, χ

2 = 5,9,

P

= 0,015). Näistä 50 pariksi tapauksissa 6 tapaukset olivat HPV16-positiivisia sekä CRC ja ANT kudoksissa (6 tapausta, CRC-positiiviset /ANT-positiivinen); 14 tapausta olivat HPV-negatiivisia sekä CRC ja ANT kudosten (14 tapausta, CRC-negatiivinen /ANT-negatiivinen); 21 tapausta olivat HPV-positiivisia CRC mutta HPV-negatiivinen ANT kudoksissa (21 tapausta, CRC-positiiviset /ANT-negatiivinen, 20 HPV16-positiivisia ja 1 HPV53-positiivisia); ja loput 9 tapauksista oli HPV16-positiivisia ANT kudoksissa mutta HPV16-negatiivinen CRC kudoksissa (9 tapausta, ANT-positiiviset /CRC-negatiivinen). Mitä HPV-infektio, ei korrelaatio löytyi 50 CRC kudokset ja niiden pariksi ANT kudoksiin (r = -0,18,

P

= 0,201). Edellä havainnot osoittivat, että HPV-infektio oli yleinen tapahtuma Chinese CRC potilaalla (48,4%), ja CRC kudokset oli korkeampi taajuus HPV-infektion kuin molemmat heidän pariksi ANT kudoksiin (χ

2 = 5,9,

P

= 0,015) sekä parittomia ANT kudokset (χ

2 = 4,6,

P

= 0,033, taulukko 2). Määrä HPV-infektio, ei kuitenkaan ollut eroa 50 ANT kudosten ja 50 CRA kudoksissa (χ

2 = 0,05,

P

= 0,826, taulukko 2).

Kaksi ylimääräistä havainnot olivat mielenkiintoisia: (1) no matalan riskin HPV-alatyyppien havaittiin kaikessa testatuissa kudoksissa; (2) kaikkien kudosten peräisin ANT ja CRA, me vain havaitsi yhden HR-HPV16-alatyypin (taulukko 2). Lisäksi kaikki HPV-tartunnan kudokset olivat positiivisia yhden HPV-alatyyppien eikä kudoksissa havaittiin positiivisiksi kaksi tai useampia infektioita HPV-alatyyppien. Niistä 50 tapausta peräsuolen adenoomien (CRA), ei eroja HPV16 tartunnan huomattiin kesken 3 CRA alatyyppejä putkimainen, villous-putkimainen, ja villous adenoomia (χ

2 = 1,2,

P

= 0,543, taulukko 2).

HPV Infection korreloi Late Clinical vaiheet CRC

Kun haluat selvittää, HPV-infektio vaikuttaisi potilaan kliinis ominaisuudet, tutkimme mahdollisia vaikutuksia HPV-infektion useista of kliinis ominaisuudet kuten ikä, sukupuoli, kasvaimen sijainti, histologinen luokittelua, imusuonten etäpesäke, kliininen lavastus [20] mm. Analyyseissä osoittautui osoittaa, että HPV-infektio korreloi myöhään tai huonompi kliininen lavastus III + IV (taulukko 3). Lisäksi tarkempia analyysejä HPV-infektion vastaan ​​kliinisten vaiheita järjestyksessä I + II vs III tai IV tai III + IV osoitti inkrementaalinen eroja määrittelemien

P

arvot (I + II vs III,

P

= 0,058; I + II vs IV,

P

= 0,034; I + II vs III + IV,

P

= 0,028, tässä järjestyksessä). Koska kliiniset vaiheet III + IV määriteltiin positiivisia etäpesäke joko imusolmuke tai muihin kaukaisiin elimiin, edellä korrelaatiot ehdotti mahdollista roolia HPV-infektion etenemisen ja etäpesäkkeiden CRC. Niistä 50 pariksi ANT kudoksissa, emme onnistuneet tarkkailla välistä korrelaatiota HPV-infektion ja kliinis ominaisuudet esitetään taulukossa 3, kuten solujen erilaistumisen, etäpesäke, kliininen pysähdyspaikan muun muassa analysoitu (tuloksia ei ole esitetty).

konstitutiivisesti Overactive p-Stat3 ja yli-ilmentyminen IL-17-sytokiinin CRC

Kuten kuviossa. 1, p-Stat3 vasta-aine vähän värjättiin ANT kudoksessa (A, pisteytettiin 0) kuitenkin voimakkaasti värjättiin CRC kudoksessa (C, pisteytettiin 3+). Samoin IL-17-aineella ei ollut värjäytymistä ANT kudoksessa (D, pisteytettiin 0), mutta osoitti vahvaa värjäytymistä CRC kudoksessa (F, pisteytettiin 3+). Yliaktiivinen p-Stat3 ja yli-ilmentyy IL-17 CRC olivat ilmeisiä verrattuna ANT koko kohortissa. Kuten esitetty taulukossa 4, vertasimme kolmeen ryhmään positiivista värjäytymistä yhdistelmien (1+, 2 + /3 +, ja 1 + /2 + /3 +, vastaavasti), negatiivinen värjäys (0) p-Stat3 ja IL-17 vastaavasti. Yleensä huomattavasti lisää CRC kudosten osoitti aktiivista p-Stat3 kuin ANT kudokset (1 + /2 + /3 + vs 0: 95,8% vs. 76,7%,

P

0,001). Erot olivat erityisen ilmeisiä vahvaa aktiivista p-Stat3 (2 + /3 + vs 0: 50,5% vs. 18,9%,

P

0,001). IL-17, toisaalta, tämä ilmiö (katso taulukko 4) oli silmiinpistävän samankaltainen p-Stat3 että monet CRC kudoksissa osoitti vahvaa IL-17 kuin ANT kudokset (2 + /3 + vs 0: 45.3 % vs. 22,2%,

P

0,001).

tutkia yleisiä eroja CRC ja ANT niiden Stat3 toimintaa ja IL-17 tasossa, vertasimme yhdistettiin IHC pisteiden kaikki yksilöt testattiin p-Stat3 ja IL-17 käyttäen t-testiä. Kuten on esitetty kuviossa. 2, paneeli A, konstitutiiviset p-Stat3 oli merkittävä korkeampi CRC kudoksissa kuin ANT kudoksissa (M ± SD, 4,5 ± 3,0 vs. 3,1 ± 2,5,

P

= 0,001). Hyvin samanlaista, IL-17-tasot olivat myös korkeampia CRC kudoksissa kuin ANT kudoksissa (M ± SD, 5,0 ± 2,7 vs. 3,3 ± 2,4,

P

0,001). Nämä havainnot, eri näkökulmasta, jotka tukevat havainnot esitetään taulukossa 4, mikä osoittaa tulehtunut mikroympäristön kasvainkudoksissa. Toisaalta, paneeli B on esitetty. 2 paljasti ilmiö, joka CRC todellisuudessa oli enemmän yksittäisissä kudoksissa vahvojen värjäytyminen (2 + /3 + positiivisia) sekä p-Stat3 (

P

0,001) ja IL-17 (

P

0,001), jälleen, sopusoinnussa havaintojen kuten taulukossa 4 (2 + /3 + positiivisia). Prosentuaalinen yksilöiden heikkoa värjäytymistä (1+ positiiviset), ei kuitenkaan ollut eroa CRC ja ANT kudoksia joko p-Stat3 (

P

= 0,07) tai IL-17 (

P

= 0,25).

(A) Perustuu pisteytys kriteerit (taulukko 1), yhdistettiin pistemäärät p-Stat3 tai IL-17 verrataan CRC ja ANT yksilöiden käyttäen t-testiä ja mittaustulokset esitetään keskiarvo ± keskihajonta (M ± SD). Kuten nähdään, konstitutiiviset p-Stat3 on korkeampi CRC kuin ANT (M ± SD, 4,5 ± 3,0 vs. 3,1 ± 2,5,

P

= 0,001). Samoin ilmaisi IL-17 on myös suurempi CRC kuin ANT (M ± SD, 5,0 ± 2,7 vs. 3,3 ± 2,4,

P

0,001). (B) vertailu CRC ja ANT varten yksilöiden lukumäärä (%) vaihtelevalla värjäytymisvoimakkuuksia käyttäen χ

2 testiä. Kuten esitetty p-Stat3, CRC luokka on vähemmän yksilöiden pisteytettiin 0 kuin ANT-luokan (4,2% vs. 23,3%,

P

0,001). Päinvastoin, CRC on paljon enemmän yksilöitä pisteytettiin vahva positiivisia (2 + /3 +) kuin ANT (50,5% vs. 18,9%,

P

0,001). Silmiinpistävä samankaltaisuus pätee IL-17, joista CRC luokassa on vähemmän yksilöiden pisteytettiin 0 kuin ANT-luokan (2,1% vs. 16,7%,

P

0,001), mutta jälleen, CRC on paljon enemmän yksilöitä sijoitettiin kuten vahvempi positiivisia 2 + /3 + kuin ANT (45,3% vs. 22,2%,

P

0,001). Sekä p-Stat3 ja IL-17, värjäytymisen intensiteetti heikko positiivisuus (1+) ei merkittävästi poikkea välillä CRC ja ANT luokat (

P

= 0,07 ja

P

= 0,25, vastaavasti ). ANT viereiset normaalit kudokset ja CRC esittää peräsuolen syövän, vastaavasti.

Se oli hämmentävää ilmiö, emme onnistuneet noudattamaan mitään korrelaatiota joko p-Stat3 toimintaa tai IL-17 tasossa kliinis ominaisuuksia näistä CRC-potilailla solujen erilaistumista, etäpesäke, kliininen pysähdyspaikan mm analysoitiin (taulukko 5). Lisäksi olemme myös jättänyt noudattamatta korrelaatiota p-Stat3 toimintaa tai IL-17 tasossa kliinis ominaisuuksien joukossa 50 pariksi ANT kudoksiin, vastaavasti (tuloksia ei ole esitetty). Nämä tulokset voivat mahdollisesti ehdottaa aikaisessa vaiheessa Stat3 signalointireitin patogeneesissä CRC.

HPV Infection korreloi p-Stat3 Toiminta ja IL-17-tasot

Sen tutkimiseksi HPV infektio olisi oma roolinsa orchestrating kasvain ympäristössä kohonnut aktiivisen Stat3 ja IL-17 tasossa, teimme bivariate korrelaatiotutkimusta analyysejä. CRC, kuten on esitetty taulukossa 6, vahva positiivinen korrelaatio paljastui välillä HPV-infektion ja aktivoitu Stat3 tasolla (r = 0,38,

P

0,01); välillä HPV-infektio ja IL-17 tasossa (r = 0,33,

P

0,01); ja välillä p-Stat3 ja IL-17 tasossa (r = 0,44,

P

0,01). Tällaiset korrelaatiot joukossa HPV-infektio, p-Stat3 tasoilla ja IL-17-tasot eivät olemattomat ANT kudoksissa (r = 0,05, 0,06 ja -0,07, lla,

P

0,05).

keskustelu ja päätelmät

nykyinen paradigma on, että immuunijärjestelmä ja mikrobiston keskenään vuorovaikutuksessa säilyttää homeostaasiin ihmisen suolistossa. Kuitenkin osat mikrobiston voi muuttaa tätä tasapainoa ja edistää krooninen tulehdus, edelleen ruokkii kasvainten kehittymiseen [4]. Niistä raportoitu enimmäkseen ovat John Cunningham virus (JC-virus), BK-virus, ihmisen sytomegalovirus (CMV), ihmisen papilloomavirukset (HPV, etenkin tyypin 16 ja 18) [21].

Korkean riskin HPV (HR HPV-) infektio on suurin syy kohdunkaulan syövän ja HPV-rokotteen on tehokas estämään kohdunkaulan syövän [22]. Mielenkiintoista on, että HPV-infektio on löydetty myös monia ei-kohdunkaulan syövistä. Esimerkiksi useat meta-analyysit peräsuolen ja -adenokarsinoomien ovat raportoineet, että niistä 2630 adenokarsinoomat ositettu maantieteellisesti, HPV-infektioita on todettu olevan paras niillä potilailla, Etelä-Amerikasta (45,1%), Aasia (39,2%), ja Lähi-itä (32,2%) [23,24]. Muut meta-analyysit ovat myös raportoineet HPV-infektioiden syövät munasarja [25], virtsarakon [26], keuhko [27] ja rintojen [28]. Nämä havainnot osoittavat, että HPV-infektio on yleinen tapahtuma monenlaisia ​​syöpiä, mikä viittaa siihen, HPV: n patogeneesissä ei-kohdunkaulan syöpiä, mukaan lukien peräsuolen syöpä. Meidän potilasryhmässä olemme havainneet hyvin yleisiä HR-HPV infektioiden CRC potilailla (46/95 eli 48,4%), joista 45 CRC tapaukset ovat positiivisia HPV16 (45/46 eli 97,8%) ja vain yksi tapaus tartunnan HR-HPV53.

lisäksi olemme myös testattiin HPV-infektioita muissa syövissä ja löysi aivan eri taajuuksilla HPV-infektion. Esimerkiksi 10,5% HPV-infektion oli rintasyöpäpotilaiden (käsikirjoitus toimitettu); 48,4% vuonna CRC potilaista (tämä tutkimus); ja 90,4% kohdunkaulan syöpäpotilailla (käsikirjoitus valmisteilla). Meidän havaittu taajuudet HPV-infektion näissä syövissä yleensä yhtä mieltä useimpien julkaistujen raporttien, mikä viittaa laatua ja luotettavuutta HPV genotyypityksen tässä käytetty menetelmä.

Parhaan tietomme mukaan tämä on korkein esiintyvyys HPV-infektio havaittiin Kiinan CRC, viittaavia mahdollisten ennalta ehkäisevän HPV-rokotteen [22] joukossa riskiryhmään kuuluvien henkilöiden Xinjiangin maakunnassa, jossa nämä CRC potilailla diagnosoitiin. Eräs kätevä tapa todistaa tämän hypoteesin on seurata näitä nuoria tyttöjä ja poikia rokottaa HPV-rokotteiden nähdä, jos ne on vähentänyt CRC on mahdollinen pitkäaikainen epidemiologinen tarkkailu.

On useita ehdotuksia miten HPV tarttuu peräsuolen ja paksusuolen. Jotkut näkymän HPV mahdollisesti matkustaa ylöspäin kupuolikanavassa peräsuoleen ja alemman puoliskon laskeva paksusuoli [29]. Toiset kuitenkin ovat raportoineet mitään yhdistyksiä HPV DNA tuumorikohdat kuten nouseva, poikittainen, laskeva tai sigmasuolessa, ja peräsuolen [7,30]. Suurin osa raporteista ehdottaa, että HPV voi kulkea verenkiertoa tartuttaa paksusuolen ja peräsuolen [6,31,32,33,34]. Meidän CRC potilailla, olemme vain havaittu korrelaatiota HPV-infektion kanssa pitkällä kliinisessä vaiheessa CRC (I + II vs III + IV, 44,2% vs. 88,8%,

P

= 0,028), mutta ei mitään muuta kliinis ominaisuuksia, kuten kasvain sivustoja (paksusuolen vs peräsuoli) (taulukko 3). Kuitenkin reitti HPV-infektio colorectum on epäselvää, mikä vaatii lisätutkimuksia. Toisaalta, havaintomme HPV-infektio ehdottaa mahdollisuutta, että aikana syövän etenemisessä, immunologisesti ja metabolisesti heikentynyt potilailla, joilla on pitemmälle CRC voi aiheuttaa opportunistisia virusreplikaation räjähdyksessä muuten piilevä HPV-infektio, joka voi johtaa lisääntyneeseen kopioluvun HPV havaitaan kasvaimessa sivustolla. Tämä opportunistisia HPV-infektio voi edelleen laukaisemaan Stat3 signaloinnin ja myöhemmin proinflammatoristen sytokiinien, kuten IL-17 kasvaimen mikroympäristössä.

Todellakin, konstitutiivisesti aktivoitua Stat3 (p-Stat3) on merkittävästi lisääntynyt CRC kudosten kuin viereisissä normaaleissa kudoksissa tai ANT (Fig. 1), erityisesti voimakas positiivisia p-Stat3 värjäytymistä (50,5% vuonna CRC vs. 18,9% vuonna ANT, Fig. 2 ja taulukko 4). Sattumalta ilmaistu IL-17 seuraa vaiheet p-Stat3 näyttää paljon korkeampi CRC kuin että ANT (45,3% vuonna CRC vs. 22,2% vuonna ANT, Fig. 2 ja taulukko 4). Vahva p-Stat3 toimintaa ja korkea IL-17 tasoja CRC kuin ANT on vahvistettu kahdella verrattuna strategiat: yksi on eroja yhdistettyjen IHC tulokset (Fig. 2A), ja toinen, erot prosenttiosuudet yksittäisissä kudoksissa ( kuva 2B). Tukeakseen meidän edellä havaintojen tutkimukset muissa syövissä, kuten munasarja-, rinta-, ruokatorven, mahalaukun syöpiin ja ihon T-solulymfooman [35,36,37,38,39]. Yksi hämmentävä havainto on ollut se, että, toisin kuin HPV-infektio (taulukko 3), joko p-Stat3 toimintaa tai IL-17-tasot eivät ole korreloivan tahansa kliinis-CRC (taulukko 5). Mahdollisuuksia on kaksi. Yksi on, että HPV-välitteinen Stat3 aktivaatio voi vain olla mukana alkuperäisessä orkestrointi suolistotulehdus ja syövän synnyn ja sitten se kulkee releen muiden tulehdussairauksien signalointireittien kuten NF-KB: n [4], jotka voivat olla mukana jatkokehitystä CRC. Toinen voi johtua meidän otoskoko, joka ei ole riittävän suuri poimia erot verrattuna siihen, joukossa kliiniset piirteet.