Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

häiriöiden soluadheesiomolekyylejä ovat liittyvät muutokset kadheriinin-kateniinin kompleksit ja todennäköisesti pelata suuria rooleja invaasiota ja etäpesäkkeiden; niiden vaikutus varhaisessa precancerous vaiheissa pysyy vielä tunneta. Osoitimme ALCAM yliekspressio alussa suun haavaumia ja sen soluliman kertymistä suun levyepiteelisyöpä (OSCC) olevan ennustaja taudin etenemisen ja huonon ennusteen. Tässä tutkimuksessa testattiin hypoteesia, että muutokset E-kadheriinin ja β kateniinin ilmaukset ovat varhainen tapahtumia suun kasvainten synnyssä, liittyy tautiin ennusteeseen, ja korreloivat häiriöiden ALCAM ilme.

Methods

Expressions E-kadheriinin ja β-kateniinin analysoitiin samassa kohortin 105 OSCCs, 76 suun vaurioihin ja 30 normaalia suun kudoksia immunohistokemiallisesti ja korreloivat kliinispatologiset parametrien ja ennustetta. Vaikutus siRNA välittämä ALCAM knockdown E-kadheriinin ja β kateniinin määritettiin käyttäen western blot, konfokaalimikroskopia ja RT-PCR-analyysi suullisesti syöpäsoluja.

Tulokset

Huomattava menetys membranous E-kadheriinin ja β-kateniinin ilmentymistä havaittiin normaalista, hyperplasia, dysplasia ja OSCCs (p

suuntaus 0,001); ja korreloi sytoplasman ALCAM kerääntyminen OSCCs (p = 0,006). Monimuuttuja-analyysi paljasti β-kateniinin kalvo menetys ja ALCAM /β-kateniinin

ydin- /sytoplasmisen kerääntymisen olevan voimakkaasti yhteydessä pitkällä kliinisessä vaiheessa (p 0,001, OR = 8,7; p = 0,006, OR = 9,9, tässä järjestyksessä) ja solmukohtien etäpesäkkeiden (p = 0,003, OR = 3,8; p = 0,025, OR = 3,4 vastaavasti). Coxin regressio osoitti E-kadheriinin kalvo menetys /ALCAM sytoplasmista ekspressiota [p 0,001; HR = 4,8] olevan riippumaton haitallisia prognosticators in OSCCs. siRNA välittämä vaiennettu ALCAM johti samanaikainen kasvu E-kadheriinin ja β-kateniinin sekä transkriptio ja proteiini tasoilla.

Johtopäätökset

tappiot E-kadheriinin ja β-kateniinin ilmaukset ovat varhainen tapahtumista suullinen tuumorigeneesiin; niiden yhteenliittymien kanssa aggressiivinen kasvain käyttäytyminen ja taudin uusiutumisen korostaa niiden mahdollisuuksia ennustetekijöitä markkereita. Korrelaatio menetys E-kadheriinin ja β-kateniinin sytoplasmista ALCAM kertymistä sekä

in vitro

ja

in vivo

viittaa siihen, että nämä dynaamisia muutoksia solun tarttumiseen järjestelmässä voi olla keskeinen rooli suusyövän .

Citation: Kaur J, Sawhney M, DattaGupta S, Shukla NK, Srivastava A, Walfish PG, et al. (2013) Clinical merkitys Altered Expression of β-kateniinin ja E-kadheriinin Oral dysplasia ja Cancer: Mahdolliset Yhteys ALCAM Expression. PLoS ONE 8 (6): e67361. doi: 10,1371 /journal.pone.0067361

Editor: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, Japani

vastaanotettu: 30 marraskuu 2012; Hyväksytty: 16 toukokuu 2013; Julkaistu: 28 kesäkuu 2013

Copyright: © 2013 Kaur et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: taloudellinen tätä työtä tukeakseen Mount Sinai Foundation of Toronto Da Vinci Gala Fundraiser, Alex ja Simona Shnaider professuurin kilpirauhassyöpä, Kanadan Institutes of Health Research Chair in Advanced Cancer Diagnostics, George Knudson Oakdale Golf Tournament varainkeräystilaisuus, ja Mount Sinai Hospital Department lääketieteen Research Fund kiittävät. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat totesi, että ei kilpailevia etuja olemassa.

Johdanto

häiriöt järjestettyjä modulaatioon soluadheesion aiheuttavat vikoja kudosrakenne että kriittisiä rooleja syövän kehitykseen [1] – [3]. E-kadheriinin on lokalisoitu pinnalla epiteelisolujen alueilla solu-solu-kontakti tunnetaan vyöliitos ja on osallisena solu-solu-adheesion epiteelikudoksissa [4] – [6]. β-kateniinin vuorovaikutuksessa kadheriineja kautta sytoplasmadomeenia. α-kateniinin yhdistää E-kadheriinin ja β-kateniinin monimutkainen aktiinisäikeiden. Dissosiaatio E-kadheriinin-kateniinin kompleksin solukalvossa on tärkeää maligni kehittyminen. Monissa epiteelisyöpien, kalvo E-kadheriinin on menetetty ja β-kateniinin dissosioituu sytoplasmassa ja kerääntyy tumaan transkriptiotekijän, samanaikaisesti kasvaimen etenemistä [5]. Down-regulation of membranous E-kadheriinin ja β-kateniinin, ja sytoplasminen /ydin- kertymistä β-kateniinin on aiemmin raportoitu useissa syövissä ja olla lupaava ennustetekijöitä markkereita [7].

kehitys suun squamous cell carcinoma (OSCC) on monivaiheinen prosessi, johon vuorovaikutukset useista tekijöistä, kuten tupakan liittyvä suunsisäisiä karsinogeeneja, areca pähkinä, betelpähkinöiden puntaa ja alkoholin kulutus, ja /tai virusinfektiot, [8], [9]. OSCCs edeltää usein kliinisesti todettu vaurioita usein leukoplakia, ja moninkertaiseen syöpiä on 5-10 kertaa suurempi potilailla, joiden OSCCs edeltää valkotäpläisyydestä [8], [10]. Nämä leesiot usein edetä syöpään hoitamattomana [11]. Keskimääräinen vuotuinen muutos korko 1% on ehdotettu perustuu useisiin tutkimuksiin raportointi 5% muutos havaittiin 5 vuoden [11], [12]. Intiassa yli 80% OSCCs syntyvät olemassa olevien suun haavaumia (OLS) [13], [14]. Kyky ennustaa lopputulos OLS edelleen suuri haaste varhaisen puuttumisen. Varhainen havaitseminen OLS, joka kehittyy invasiivisia kasvaimia on parannettava huonon ennusteen suun syöpäpotilailla.

Dynaaminen muutoksia solujen tarttumista ilmenee dissosiaatiota membranous E-kadheriinin-β-kateniinin kompleksi ovat osallisina menetykseen epiteelin yhteenkuuluvuuden tärkeä tapahtuma ja metastaasit. Aktivoidut leukosyyttisolun adheesiomolekyyli (ALCAM) /MEMD /CD166) on transmembraaninen glykoproteiini immunoglobuliinisuperperheen joka välittää solu-soluadheesion kautta sekä homofiilisiä (ALCAM-ALCAM) ja heterofiilisten (ALCAM-CD6) vuorovaikutuksia [15], [16]. Osoitimme ALCAM ilmentyminen lisääntyy OLS ja sen soluliman kerääntyminen OSCC on ennustaja taudin etenemisen ja huonon ennusteen [17]. Tässä pyrimme tutkimaan kliinistä merkitystä E-kadheriinin ja β-kateniinin ilmentymistä sarja kudosleikkeiden saman joukon potilaita eri sairaus vaiheista immunohistokemiallisesti, tunnistaa vaiheessa-spesifistä proteiinia muutoksia ja määrittää niiden suhdetta ALCAM ilme. Kokeellinen todisteita tueksi korrelaatioita häiriöiden ALCAM ilmaisun ja muutokset E-kadheriinin ja β-kateniinin ilmaisuja toimittivat lyhyt häiritsevä RNA (siRNA) välittämä ALCAM Knockdown ja muutos määritellään ilmaus kaikkien näiden kolmen proteiinin sekä transkriptio ja proteiinin tasot.

Materiaalit ja menetelmät

kudosnäytteiden

tutkimus hyväksyi Human eettinen komitea All India Institute of Medical Sciences, New Delhi, Intia. Immunohistokemiallista analyysia varten kirurgisesti resektoitiin kudoksia tai biopsia näytteitä OSCC, dysplasia, liikakasvu ja histologisesti normaaleissa suukudosten saatiin Surgical Oncology yksikkö Dr. B.R. Ambedkar Institute Rotary Cancer Hospital, All India Institute of Medical Sciences, New Delhi, Intia, etukäteen ilmoitettu kirjallisen suostumuksen potilaista.

kliinis Ominaisuudet Potilaiden

Sata ja viisi ensisijaista OSCC potilasta (ikäryhmä, 29-75 vuotta, keski-ikä 40 vuotta), joille tehtiin parantava suun syöpä, klo Surgical Oncology yksikkö Dr. BR Ambedkar Institute Rotary Cancer Hospital, All India Institute of Medical Sciences, New Delhi, Intia otettiin tässä tutkimuksessa jälkeen hankittaessa kirjallinen suostumus potilaista. Kliiniset ja patologisten tietojen mukaan luettuna kliininen TNM lavastus (kasvain, solmu, etäpesäkkeitä perustuu Union International Center le Cancer TNM-luokitus), vamman päälle, histopatologiset erilaistuminen, ikää ja sukupuolta kirjattiin ennalta suunniteltu Performa kuten aiemmin on kuvattu [ ,,,0],17]. Diagnoosi perustuu kliiniseen tutkimukseen ja histopatologista analyysia kudosnäytteitä. Sivusto jakauma OSCC tapauksista oli: suun limakalvolta (36), kielen (35), alveolus (12), huuli (6) ja muut sivustot (16) sisältäen ginigivobuccal sulcus, kova suulaki, pehmeä maku, retromolar trigone ja lattian suu. Kasvaimet olivat histologisesti arvostellaan samoin, kohtalaisesti tai huonosti eriytetty SCC. Koepalat OLS kanssa histologiset liikakasvun (56 tapausta) ja dysplasia (20 tapausta) on myös mukana tässä tutkimuksessa. Sivuston jakauma OLS: posken limakalvo (53), kielen (12), alveolus (5), huuli (4), ja ginigivobuccal uurteeseen (2). Kolmekymmentä ei-pahanlaatuisten kudosten otettu kaukainen sivuston OSCCs (joilla on histologisesti vahvistettu normaali suun kautta epiteelin tänne kutsutaan suun normaaleissa kudoksissa), arvioitiin myös ALCAM ilmaisua. Poistoleikkauksen jälkeen, kudokset välittömästi jäädytettiin nestemäisessä N

2 ja säilytettiin -80 ° C asti jatkokäyttöä ja yksiosainen kerättiin 10% formaliiniin ja upotettiin parafiiniin histopatologista ja immunohistokemiallista analyysejä.

immunohistokemia

Parafiini upotettujen leikkeiden (5 um paksuus) ihmisen suun kudosnäytteiden värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla histopatologista analyysiä, ja immunovärjäys tehtiin sarja osissa kuvatulla aiemmin Sawhney

et al

. [17]. Lyhyesti, kudosleikkeet jälkeen antigeeni haku sitraattipuskurissa inkuboitiin anti-E-kadheriini tai anti-β-kateniinin vasta-aineita (0,2 ug /ml) (Santa Cruz Biotechnology Inc., Santacruz, CA) 16 tuntia 4 ° C: ssa. Vasta-aineita todettiin käyttäen biotinyloitua sekundääristä vasta-ainetta ja peroksidaasilla leimattua streptavidiinia monimutkainen käyttää Dako LSAB plus kit (Dako Labs, Glostrup, Tanska) käyttäen diaminobentsidiiniä (DAB) kromogeenina. Negatiivisissa vertailuissa, ensisijainen vasta-aine korvattu ei-immuuni-lgG saman isotyypin spesifisyyden varmistamiseksi. Rintasyöpä kudosleikkeiden tunnettujen immunopositivity E-kadheriinin tai β-kateniinin käytettiin positiivisena kontrollina kuhunkin erän osaan analysoitu.

Positiivinen kriteeri immunohistokemiallinen värjäys

immunovärjäyksellä arvioitiin satunnaisesti valitsi viisi ei-päällekkäisiä alueita kudosleikkeiden yli 80% epiteelisolujen. E-kadheriinin, spesifistä värjäytymistä kalvoon määriteltiin positiivista värjäytymistä. Kalvot pisteytettiin seuraavasti: ≥50% kasvainsoluja, joka esittää immunologista luokiteltiin positiivisiksi E-kadheriinin ilmentymisen, kun taas osoittaa immunovärjäyksellä in 50% kasvainsoluja luokiteltiin negatiivisiksi [18]. Sillä β-kateniinin proteiinin ilmentymisen, spesifistä värjäytymistä kalvoon /solulimassa /ytimiä määriteltiin positiivista värjäytymistä. Kalvoon värjäys kalvot pisteytettiin seuraavasti: ≥50% kasvainsoluja, joka esittää immunologista luokiteltiin positiivisiksi, kun taas osoittaa immunovärjäyksellä in 50% kasvainsoluja luokiteltiin negatiivisiksi [18]. Sytoplasmaan /tumavärjäystä on β-kateniinin kalvot pisteytettiin seuraavasti: 0, 10% tuumorisolujen osoittaa immunoreaktiivisuus; 1 = 10-30% kasvainsoluja osoittaa immunoreaktiivisuus; 2, ≥31-50% kasvainsoluja osoittaa immunoreaktiivisuus; 3, 50% kasvainsoluja osoittaa immunoreaktiivisuus. Immuunihistokemialliset tutkimus oli sokea, eli kalvot koodattiin ja patologi ei ollut etukäteen tietoa paikallisen tuumorikuorma, lymphonodular leviäminen ja luokittelu on OSCCs samalla teki immunoreaktiivisuus.

seurantatutkimus

Seitsemänkymmentä kaksi 105 OSCC potilailla, joille tehtiin potilaiden primaarisesti OSCC 2002-2005, voisi seurata säännöllisesti seurata klinikan, kun taas 33 potilasta menetettiin seurata. Survival potilaan asemaan todennettiin ja säännöllisesti päivittää Kasvain rekisterin kirjaa, Institute of Rotary Cancer sairaalan, joulukuun 2010 Kuten kohti protokollan, OSCC potilaiden T

1 ja t

2 kasvaimia hoidettiin radikaalin sädehoidon tai leikkaus yksin, kun taas suurin osa potilaista T

3 ja T

4 tautia hoidettiin käyttämällä yhdistelmää radikaaleja seuraa leikkauksen jälkeinen radikaalin sädehoidon kuvatulla [19]. Potilaiden seurattiin säännöllisesti ja aika uusiutumiseen kirjattiin. Jos potilas kuoli seurannan, potilaan elinaika sensuroitiin aikaan kuolema. Sairaushistoria, kliininen tutkimus, ja radiologisten arviointia käytettiin onko kuolema johtuu toistuvia syöpään (relapsoivan potilasta) tai mistä tahansa muusta syystä. Taudista vapaa perhe määriteltiin potilaat kliinisiä ja radiologisia todisteita paikallisten, alueellisten tai kaukainen uusiutumisen aikaan viimeisen seurannan. Paikallista alueellista uusiutumisen /kuolema havaittiin 32/72 (44%) potilaista seurattiin tässä tutkimuksessa. Potilaat, joilla ei ilmennyt uusiutumisen olivat elossa loppuun asti sekä seurantajakson ajan. Niistä 33 potilaasta, jotka olivat menettäneet seurata, kuolleiden määrä ei ole voitu varmistaa; Siksi eloonjäämiseen ei voida pitää erillisenä parametri tutkimuksessamme. Vain taudista elinaika potilaiden tutkittiin. Taudista vapaa eloonjääminen ilmaistiin määrä kuukautta leikkauksen kuin paikallista alueellista uusiutumisen. Potilaita seurattiin ajan mediaani 24 kuukautta ja enintään 91 kuukautta.

Tilastollinen analyysi

Immuunihistokemialliset tiedot tehtiin tilastollinen analyysi SPSS 17.0 ohjelmistoa (Chicago IL). Väliset suhteet E-kadheriinin, β-kateniinin ja ALCAM ilmaisun ja kliinis parametrit testattiin yhden muuttujan analyysiin, Chi-Square test, Chi-Square testi trendi, Fisherin testiä ja logistista regressioanalyysiä. Määrittämään itsenäinen ennustavia kasvaimien synnyn, regressioanalyysimme toteutettiin vaiheittain yksittäisten muuttujien, clinicopatholgical parametrit ja proteiinien E-kadheriinin, β-kateniinin ja ALCAM. Erilaisia ​​yhdistelmiä muuttujien luotiin arvioimaan yhdistyksen näiden yhdistelmiä ja potilaan ennustetta. Seurantatutkimukset analysoitiin Kaplan-Meier, ja Coxin suhteellisten riskien testi. Vain taudista vapaa eloonjääminen arvioitiin tässä tutkimuksessa, koska kuolleiden määrä johtuu taudin etenemiseen ei salli luotettavaa tilastollista analyysiä. Yhdistyksen välillä potilaiden hoitotuloksiin ja muuttujia arvioitiin log-rank-testi. Kaksipuolinen p-arvot laskettiin ja p 0,05 pidettiin merkittävänä.

Short häiritsevän RNA-välitteisen ALCAM knockdovvn

Ihmisen pään ja kaulan levyepiteelikarsinoomasolu linja, SCC-4-soluja ylläpidettiin DMEM, joka sisälsi 10% FBS: ää, 100 ug /ml streptomysiiniä, 100 U /ml penisilliiniä, 37 ° C: ssa kostutetussa ilmakehässä, jossa 5% CO

2. SCC-4-solut transfektoitiin lyhytaikaisesti käyttämällä Hiperfect reagenssia (Qiagen) ja tasaiset päät duplex RNA oligonukleotidit, 5′- AAG CCC GAU GGC UCC CCA GUA UU-3’and 5′-AAU ACU GGG GAG CCA UCG GGC UU -3 ’. SCC-4-soluja käsiteltiin vaihtelevilla siRNA (1-15 nM) ja vaihtelevilla Hiperfect reagenssia (1-4,5 ui). ALCAM siRNA (15 nM) ja 4,5 ui Hiperfect reagenssia 48 h: n havaittiin olevan paras pitoisuus mahdollisimman transfektiotehokkuuden (95%) ja enintään hiljentäminen ALCAM geenien ilmentyminen (dataa ei esitetty). Neljäkymmentäkahdeksan tuntia transfektion jälkeen, siRNA-käsitellyt solut käytettiin myöhemmissä kokeissa.

Käänteinen transkriptio-PCR-analyysi

Kokonais-RNA eristettiin SCC-4-solut (kontrolli ja siRNA transfektantit) kuten aiemmin on kuvattu [20]. PCR-monistus suoritettiin kokonaistilavuudessa 20 ui, joka sisälsi 3 ui käänteistranskriptio cDNA, 10X PCR-puskuria, 10 mM dNTP: itä, 20 uM kutakin aluketta ja 1unit Taq-polymeraasia (Gibco BRL, Gaithersburg, MD). 5 minuutin jälkeen alkudenaturaation, 35 monistussykliä 1 minuutti 94 ° C: ssa, 2 minuuttia erityisiä hehkutus lämpötilassa ja 1 minuutti 72 ° C: ssa suoritettiin, jota seurasi 10 minuutin pidennys 72 ° ° C: ssa. Monistamiseen ALCAM cDNA alukkeesta, 5′-GTC TGG GCA ATA GTG ACT CC-3 ’ja reverse-aluke 5′- AAC CAT TGC AAG TGG AAA CC-3′ käytettiin. E-kadheriinin cDNA, forward-aluketta 5’-CAG CAC GTA CAC AGC CCT AA-3 ’ja reverse-aluke 5′- ACC TGA GGC TTT GGA TTC CT-3′ käytettiin. Sillä β-kateniinin cDNA, forward-aluketta 5’-GAA ACG GCT TTC AGT TGA GC-3 ’ja reverse-aluke 5′- CTG GCC ATA TCC ACC AGA GT -3 ”käytettiin. β-aktiini käytettiin sisäisenä kontrollina sen varmistamiseksi, että yhtä suuri määrä RNA: ta käytettiin kontrolli- ja siRNA transfektoituja soluja. Sillä β-aktiini-cDNA, aluketta 5’- CAG CCA TGT ACG TTG CTA TCC AG -3 ’ja käänteisaluketta 5′- GTT TCG TGG ATG CCA CAG GAC -3’ käytettiin. PCR-tuotteet erotettiin 1,5% agaroosigeelillä, värjättiin etidiumbromidilla ja visualisoitiin AlphaEase FC ohjelmiston (versio 3.1.1) intensiteetit PCR kvantitoitiin kanssa Chemi Imager IS-4400 (Alpha Innotech Corp, CA), kuten aiemmin on kuvattu [14].

immunoblottauksella

ALCAM siRNA transfektoitu SCC-4-soluja 48 h ja käsittelemätön kontrolli soluja käytettiin solu-uutteiden valmistus keittämällä solupelletti SDS-hajotuspuskuriin. Lyhyesti, kokosolu-uute (100 ug proteiinia /kaista) erotettiin SDS-PAGE: lla ja siirrettiin nitroselluloosakalvolle [21]. Nitroselluloosakalvoja blokattiin 10% rasvatonta maitoa yön yli 4 ° C: ssa ja tutkittiin anti-ALCAM; E-kadheriinin ja β-kateniinin vasta-aineita (Santa Cruz Biotechnology Inc., Santacruz, CA) 2 tunnin ajan 37 ° C: ssa. Tämän jälkeen membraanit tutkittiin sekundääriset vasta-aineet näitä proteiineja (anti-vuohi-1:5000 ja anti-hiiri-1:2000 laimennus). Täplät uudelleenseulottiin α-tubuliinin normalisoimaan samasta proteiinia lastaus. Blotit kehitettiin käyttäen tehostettua kemiluminesenssia Reagent (ECL) (Amersham, Buckinghamshire, UK), kuten on kuvattu [21].

konfokaali Laser Microscopy

SCC-4-soluja kasvatettiin peitinlaseilla käsiteltiin ALCAM siRNA 48 tuntia ja käsitellään konfokaali laser mikroskoopilla kuten aiemmin on kuvattu [21]. Solut huuhdeltiin Dulbeccon PBS (DPBS), kiinnitettiin metanolissa 5 minuutin ajan. -20 ° C: ssa, ja inkuboitiin anti-ALCAM, E-kadheriinin ja β-kateniinin vasta-aineita (10 ng /ml), joka saatiin SantaCruz Biotechnologies Inc., Santacruz, CA. Huuhtelun jälkeen DPBS: ssä, peitelasit inkuboitiin biotinyloidun sekundaarisen vasta-aineen (anti-kani /vuohi, LSAB + Kit, DAKO Cytomations, Glostrup, Tanska) 45 min. 37 ° C: ssa seurasi inkubointi streptavidiiniin konjugoiduilla fluorokromiin, fluoreseiini-isotiosyanaatti (FITC) (DAKO Cytomations, Tanska). Sen jälkeen peitinlasit vastavärjättiin propidiumjodidilla (PI) (10 mg /ml; Sigma-Aldrich, MO) 30 sekunnin ajan. Peitelaseja huuhdottiin sitten ja asennetaan kiinnitysväliaine. Objektilasit tutkittiin konfokaali laserskannaus mikroskooppi kuten aiemmin on kuvattu [21].

Tulokset

immunohistokemiallinen analyysi E-kadheriinin kalvomainen Expression Normal Oral Kudokset, liikakasvu, dysplasia ja OSCC

E-kadheriinin ilmentymisen kalvon epiteelisolujen havaittiin 27/30 (90%) ja histologisesti normaali suukudosten satunnaista sytoplasmisen ekspression (taulukko 1, kuvio 1A). Merkittävään vähenemiseen E-kadheriinin kalvomainen ilmentymistä havaittiin hyperplasia [19/56, 34% (kuvio 1 B) verrattuna normaaliin suun kudoksiin (3/30, 10%), [p = 0,015; OR = 4,6, 95% CI = 1,2-17,2] ja 12/20, 60% dysplasia (kuvio 1 C) [H /D: p = 0,06; OR = 2,9, 95% CI = 1,0-8,4]. Chi-Square trendi analyysi osoitti merkittävää vähenemistä E-kadheriinin kalvomainen ilmentymistä kudoksissa eri vaiheista suusyövästä kehitys (normaali, hyperplasia, dysplasia ja kohdunkaulan syöpä; p

suuntaus 0,001). Menetys E-kadheriinin kalvomainen ilmentymistä havaittiin 61/105 (58%) OSCCs (taulukko 1, kuvio 1 D), ja siihen liittyi pitkällä kliinisessä vaiheessa (p = 0,006, OR = 3,1, 95% CI = 1,3-7,0), lisääntynyt kasvaintaakkaa (p = 0,03; OR = 2,4, 95% CI = 1,1-5,3), ja solmukohtien etäpesäkkeitä (p = 0,04; OR = 2,4, 95% CI = 1,1-5,3).

histologisesti normaalissa kudosleikkeet esittää kalvo immunoreaktiivisuus E-kadheriinin (A), ja β-kateniinin (G) proteiinien kanssa. Hyperplastinen (B), dysplastisia (C), OSCC (D) kudosleikkeiden kuvaa menetys kalvo värjäytymistä E-kadheriinin. Hyperplastinen (H), dysplastisia (I), OSCC (J) kudosleikkeiden kuvaa menetys kalvo värjäytymistä β-kateniinin. Vuonna negatiiviset kontrollit, E-kadheriinin (E) ja β-kateniinin (F), ensisijainen vasta-aine korvattu ei-immuuni-lgG saman isotyypin spesifisyyden varmistamiseksi. Rintasyöpä kudosleikkeet käytettiin positiivisena kontrollina osoitti kalvon värjäytymistä E-kadheriinin (K) ja β-kateniinin (L) proteiineja. Alkuperäinen suurennus X 200.

Association of Loss of membranous E-kadheriinin Expression kanssa Disease tulokset

Seitsemänkymmentäkaksi OSCC potilaat voivat seurattiin enintään 91 kuukautta (mediaani 24 kuukautta). Kaplan-Meier selviytymisen analyysin ja Coxin suhteellista riskin malliin paljasti, että potilailla, joilla on E-kadheriinin kasvain oli kasvanut mediaani taudista vapaan eloonjäämisen (DFS) 74 kuukauden verrattuna niihin, joilla menetyksen kalvo immunopositivity (mediaani DFS = 18 kk) [p = 0,001; HR = 3,9; 95% CI = 1,6-9,6] (kuvio 2A).

V: tappio E-kadheriinin membranous (E-cad

-) lauseke, B: Loss of β-kateniinin membranous (β-catM

-) lauseke, C: tappio E-kadheriinin ja β-kateniinin membranous (E-cad

– /β-cat M

-) lauseke, D: ALCAM soluliman positiivinen ja E-kadheriinin kalvo menetys (E-cad

– /ALCAM C

+).

immunohistokemiallinen analyysi β-kateniinin Expression in Normal Oral kudokset, liikakasvu, dysplasia ja OSCC

β kateniinin oli pääasiassa läsnä kalvon epiteelisolujen 27/30 (90%) histologisesti normaalin suun kudoksia; joskus sytoplasminen /tumavärjäystä havaittiin myös (taulukko 1, kuva 1G). Merkittävään vähenemiseen β-kateniinin kalvon ilmentymistä havaittiin hyperplasia [20/56, 36%, p = 0,01; OR = 5,0, 95% CI = 1,3-18,6, (kuvio 1 H)] verrattuna normaaliin suun kudoksiin (3/30, 10%), ja dysplasia verrattuna hyperplasia [14/20, 70%, (kuvio 1 I), p = 0,008; OR = 4,2, 95% CI = 1,4-12,6]. Merkittävä lisäys sytoplasman /ydin- kertymistä β-kateniinin havaittiin dysplasia verrattuna liikakasvun (p = 0,046; OR = 3,1; 95% CI = 1,0-9,5) (taulukko 1). Chi-Square trendi analyysi osoitti merkittävää vähenemistä β-kateniinin kalvomainen ilmaisun ja kasvu sytoplasmisessa /ydin- kertymistä kudoksiin eri vaiheista suusyövän (normaali, hyperplasia, dysplasia, ja invasiivisia syöpiä; p

suuntaus 0,001 ja p

trendi = 0.003 vastaavasti).

menetys β-kateniinin kalvomainen ilmentymistä havaittiin 65 105 (62%) OSCCs (kuvio 1J, taulukko 1) ja siihen liittyi pitkällä kliinisessä vaiheessa (p = 0,001, OR = 7,4, 95% CI = 3,1-18,1), lisääntynyt kasvaintaakkaa (p = 0,001, OR = 4,1, 95% CI = 1,8-9,4) ja solmukohtien etäpesäkkeitä (p = 0,003, OR = 3,7, 95% CI = 1,6-8,9). Vuonna OSCCs 28 105 (27%) tapauksista osoitti sytoplasmista /ydin- kertymistä β-kateniinin ja liittyi pitkällä kliinisessä vaiheessa (p = 0,014, OR = 3,6, 95% CI = 1,2-10,6) ja kasvaintaakkaa (p = 0,025 TAI = 2,8, 95% CI = 1,1-7,2).

Association of Loss of membranous β-kateniinin Expression kanssa Disease tulokset

menetys membranous β-kateniinin immunopositivity nähtiin lisääntynyt tauti vapaa-eloonjääminen (mediaani DFS = 15 kuukautta) verrattuna potilaisiin, joiden β-kateniinin kalvo kasvain (mediaani DFS = 78 kuukautta) [p 0,001; HR = 7,8; 95% CI = 2,7-22,3] (kuvio 2B).

Association between E-kadheriinin ja β-kateniinin suun haavaumia ja OSCCs

merkittävää yhteyttä ei havaittu menetys membranous E-kadheriinin ja β-kateniinin ilmaisuja OLS (p = 0,001, OR = 16,7, 95% CI = 5,3-52,7, taulukko 2) ja OSCCs (p = 0,001, OR = 8,8, 95% CI = 3,6-21,7, taulukko 2). Menetys membranous E-kadheriinin ja β-kateniinin kun otetaan yksi fenotyyppi (E-cad

– /β-cat M

-) korreloi merkittävästi kehittyneitä kasvain vaiheessa (p = 0,004, OR = 3,2, 95% CI = 1,4-7,1), solmukohtien etäpesäkkeitä (p = 0,005, OR = 3,1, 95% CI = 1,4-6,9) ja pitkällä kliinisessä vaiheessa (p 0,001, OR = 5,5, 95% CI = 2,2-13,4). Chi-Square trendi analyysi osoitti merkittävää vähenemistä membranous E-kadheriinin ja β-kateniinin (E-cad

– /β-cat M

-) eri vaiheissa suun syövän synnyn (normaali, hyperplasia, dysplasia ja kohdunkaulan syöpä ; p

trendi = 0,008). Lisäksi menetys E-cad

– /β-cat M

– immunopositivity oli merkitsevästi yhteydessä heikentyneeseen taudista vapaan eloonjäämisen [mediaani DFS = 14 kuukautta verrattuna p-kateniinin ja E-kadheriinin kalvo kasvaimia kanssa mediaani tautivapaan elinajan 71 kk (p 0,001; HR = 4,7; 95% CI = 2,1-10,1)] (kuvio 2C).

Association between E-kadheriinin, β-kateniinin ja ALCAM Expression Oral Vauriot

tutkia merkitystä ALCAM biologisten kehittämiseen invasiivisen syövän ja etäpesäkkeitä, on tärkeää määrittää sen korrelaatio häiriöt ilmaus vyöliitos komponentteja. Yhdistykset joukossa proteiini ilmauksia E-kadheriinin, β-kateniinin ja ALCAM määritettiin (taulukko 2) kuin ALCAM proteiinin ilmentyminen oli myös analysoidaan samalla kohortin potilaiden aiemmassa tutkimuksessa [17]. Menetys β-kateniinin kalvomainen ilmentyminen havaittiin merkittävästi liittyy yleisesti (p = 0,018; OR = 3,3, 95% CI = 1,2-8,8, taulukko 2) ja sytoplasminen (p = 0,008; OR = 3,6, 95% CI = 1,4-9,3, taulukko 2) ALCAM ilme.

joukossa hyperplasioiden analysoitu (n = 56) tässä tutkimuksessa, menetys kalvo E-kadheriinin havaittiin merkitsevästi yhteydessä menetys β-kateniinin lauseke (p OR = 4,5, 95% CI = 1,2-16,0). Menetys kalvo E-kadheriinin ja β-kateniinin yhdessä yhtenä fenotyyppi (E-cad

– /β-catM

-) korreloi merkittävästi yleisten ALCAM immunopositivity in liikakasvua. Niistä dysplasiat analysoitiin (n = 20), menetys β-kateniinin kalvomainen ilmentymisen todettiin olevan merkittävästi yhteydessä ALCAM sytoplasmisen immunopositivity (p = 0,05; OR = 9,0, 95% CI = 1,0-100).

Association between E-kadheriinin, β-kateniinin ja ALCAM ilmentäminen OSCC

Associations keskuudessa ALCAM, E-kadheriinin ja β-kateniinin ilmaisuja määritettiin OSCC (taulukko 2). Menetys E-kadheriinin kalvomainen ilmentyminen havaittiin merkittävästi liittyy sytoplasmisen ALCAM lauseke (p = 0,038, OR = 2,2, 95% CI: = 1,0-5,0). Menetys β-kateniinin kalvo ilmentyminen korreloi merkittävästi yleistä ALCAM lauseke (p = 0,001; OR = 3,9, 95% CI = 1,7-9,0), ja sytoplasminen ALCAM immunopositivity (p = 0,002; OR = 3,7, 95% CI = 1.6- 8.7). Menetys kalvo E-kadheriinin ja β-kateniinin kun otetaan yksi fenotyyppi (E-cad

– /β-cat M

-) korreloi merkittävästi yleisten ja sytoplasman ALCAM immunopositivity in OSCC (taulukko 2).

Independent ennustavat siirtyminen normaalista OL ja syöpä Fenotyyppikuvaus

määrittämiseksi itsenäisen ennustavat siirtyminen normaalista OL, regressioanalyysimme toteutettiin vaiheittain. Näistä muuttujista, parametrit, jotka tulivat merkittäviä yhden ja usean analyysit on koottu taulukkoon 3. ALCAM sytoplasmista lauseke (p = 0,024; OR = 11,6; 95% CI = 1,4-98,2) syntyi olla merkittävin fenotyyppi siirtymisen normaali suun limakalvon OL. Menetys membranous β-kateniinin ilmaisu tullut merkittävin ennustaja siirtymistä hyperplastic kohteeseen dysplastic vauriot (p = 0,01, OR = 4,2, 95% CI = 1,3-12,6). Monimuuttuja logistinen regressio analyysit paljastivat, että menetys membranous E-kadheriinin ilmentymisen on merkittävin fenotyyppi siirtymistä OL OSCC (p = 0,02; OR = 2,0; 95% CI = 1,1-3,7).

kliiniset tulokset potilaista

Independent ennustavat kliinisten parametrien, tuumorikuorma, solmukohtien osallistuminen ja kliinisessä vaiheessa OSCC.

määrittämiseksi itsenäisen ennustavat kliinisten parametrien, tuumorikuorma, solmukohtien osallistuminen ja kliinisen vaiheessa regressioanalyysimme toteutettiin vaiheittain E-kadheriinin, β-kateniinin ja ALCAM erikseen tai yhdessä, 105 OSCCs (taulukko 3). β-kateniinin kalvo tappio (p = 0,001, OR = 4,2; 95% CI = 1,8-10,2) ja β-kateniinin ydin- /sytoplasmisen kerääntymisen (p = 0,027, OR = 3,1; 95% CI = 1,1-8,3) olivat voimakkaasti yhteydessä nousi kasvaintaakkaa. β-kateniinin kalvo tappio (p = 0,003, OR = 3,8; 95% CI = 1,6-9,3) ja yleinen ALCAM ilmaisun /β-kateniinin ydin- /sytoplasmisen kerääntymisen (p = 0,025, OR = 3,4, 95% CI = 1,2-9,7 ) olivat voimakkaasti yhteydessä solmukohtien etäpesäkkeitä. Yhdistetty markkereita, ALCAM ilmaisu /β-kateniinin ydin- /sytoplasmisen kerääntymisen (p = 0,006, OR = 9,9, 95% CI = 1,9-51,5) ja β-kateniinin kalvo tappio (p 0,001, OR = 8,7; 95% CI = 3,3 -22,8) olivat voimakkaasti yhteydessä pitkällä kliinisessä vaiheessa (taulukko 3).

ry muutokset E-kadheriinin, β-kateniinin ja ALCAM ilmaisutapoja tauti lopputulokseen.

merkittävä yhdistys havaittu alentamisella taudista vapaan eloonjäämisen ja kasvaimen vaiheesta [p = 0,03; Hazard Ratio (HR) = 2,5; 95% CI = 1,1-5,6].

mahdollisesta ennustetekijöiden kapasiteetti Kaplan-Meier selviytymisen analyysin ja Coxin suhteellinen vaara mallia käytettiin analysoimaan erilaisia ​​yhdistelmiä mahdollisia biomarkkereita, jotta voidaan arvioida yhdistys muutoksia eri biomarkkereiden kliinisten tutkimusten tulosten kanssa . Vaikka useita yhdistelmiä todettiin olevan merkittäviä (taulukko 3), merkittävimmät fenotyyppi, joka syntyi kun haitalliset prognosticator oli: lisääntynyt soluliman ALCAM ilmaus + menetys membranous E-kadheriinin; ALCAM C

+ /E-cad

– (p 0,001; HR = 4,8; 95% CI = 2,2-9,9, kuvio 2D) (taulukko 3).

Perustuu tietoihin,