Krooninen sairaus

tiivistelmä

eukaryoottitranslaatioon initiaatiofaktoria 5A2 (EIF5A2) on tärkeä rooli syövän etenemiseen ja ennusteeseen arviointi. Kuitenkin vain vähän tietoa saatavilla sen mahdollisen roolin mahasyövässä. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli selvittää toiminta EIF5A2 kasvaimen etenemiseen ja sen mahdollisia mekanismeja. EIF5A2 ilmentyminen mitattiin ihmisen mahasyövän solusarjalla kuolemattomaksi mahalaukun limakalvon epiteelisolujen linja (GES-1) ja ihmisen mahasyövän kudosten ja tippuu alas RNA-interferenssi tai voimistuvan EIF5A2 plasmiditransfektiolla. Solujen lisääntyminen, muuttoliike ja invaasio arvioitiin

in vitro

. Alavirran tavoitteet EIF5A2 tutkittiin western blottauksella. EIF5A2 ja sen mahdollinen kohde etäpesäke liittyvä proteiini 1 (MTA1) ilmentyminen tutkittiin 160 paria ihmisen mahasyövän ja viereisen ei-kasvain näytteet käyttäen immunohistokemia (IHC) värjäys, ja sen korrelaatio kliinis-ja selviytymistä tutkittiin. Knockdovvn

EIF5A2

tai

MTA1

aiheutti näennäinen suppressio HGC27 solujen lisääntymisen, migraation ja invaasion. Sen jälkeen knockdovvn

EIF5A2

vuonna HGC27 soluissa, E-kadheriinin tasot voimistunut ja vimentiinista, sykliini D1, sykliini D3, C-MYC ja MTA1 tasot vaimentua. Säätelyä EIF5A2 vuonna MKN45 soluissa johti päinvastainen. IHC tulokset osoittivat positiivinen korrelaatio EIF5A2 ja MTA1 ilmaisun syöpien (

P

0,001). Sekä EIF5A2 ja MTA1 yliekspressio korreloivat pT vaiheessa (

P

= 0,018 ja

P

= 0,042), pN vaiheessa (

P

= 0,037 ja

P

= 0,020) ja lymphovascular invaasio (

P

= 0,016 ja

P

= 0,044). EIF5A2 tai MTA1 yliekspressio merkitsevästi yhteydessä huonoon kokonaiselossaoloaika ja taudista vapaan eloonjäämisen (kaikki

P

0,05). Monimuuttuja analyysit tunnistettu EIF5A2 itsenäisenä ennustaja sekä eloonjäämiseen (

P

= 0,012) ja taudista vapaan eloonjäämisen (

P

= 0,008) mahalaukun syöpäpotilailla. Tuloksemme osoittavat, että EIF5A2 säätelyä tärkeä onkogeenisen rooli mahasyövässä. EIF5A2 voivat edustaa uutta ennustaja huono selviytymisen ja on potentiaalinen terapeuttinen kohde mahasyövässä.

Citation: Meng Q-B, Kang W-M, Yu J-C, Liu Y-Q, Ma Z-Q, Zhou L, et ai. (2015) yli-ilmentyminen eukaryoottitranslaatioon initiaatiofaktoria 5A2 (EIF5A2) korreloi Cell aggressiivisuus ja huono Survival mahasyövän. PLoS ONE 10 (3): e0119229. doi: 10,1371 /journal.pone.0119229

Academic Editor: Jun Li, Sun Yat-sen University Medical School, Kiina

vastaanotettu: 22 tammikuu 2014; Hyväksytty: 29 tammikuu 2015; Julkaistu: 20 maaliskuu 2015

Copyright: © 2015 Meng et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Rahoitus: Tätä työtä tukivat avustuksilla Pekingin Kunnan Natural Science Foundation (nro 7132209), Hubein maakunnassa terveyttä ja perhesuunnittelua tieteellistä tutkimushanketta (nro WJ2015MB137) ja Major tieteen ja teknologian hankkeita Pekingissä City (nro D141100000414004). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Mahasyöpää (GC) on erittäin metastaattinen sairaus, ja yksi kaikkein vaarallisin maha syöpäsairauksia. [1] edistysaskelista huolimatta kirurgisten ja sytotoksisten hoitojen GC, nykyinen hoitokeinot potilaille, joilla on pitkälle GC ovat hyvin rajallinen. [2, 3] kehittää uusia hoitostrategioita, on tärkeää valaista molekyylitason mekanismeja, jotka edistävät invasiivisia ja metastaattisen ominaisuuksia GC soluja.

eukaryoottitranslaatioon initiaatiofaktoria 5A2 (EIF5A2) sijaitsee ihmisen kromosomi 3q26.2, ja on jäsen

EIF5A

geeniperheen. [4] yli-ilmentyminen

EIF5A2

mRNA tiettyjen ihmisen syöpäsoluja, toisin yliekspression rajoitu ihmisen kives ja osaa aivojen, ehdottaa

EIF5A2

on mahdollinen onkogeeni. [4] Edellinen tutkimuksissa havaittiin, että EIF5A2 on yli-ilmentynyt useissa ihmisen syövissä, kuten haiman adenokarsinooma, munasarjasyöpä, hepatosellulaarinen syöpä, keuhkosyöpä, paksusuolen ja peräsuolen syöpä ja melanooma , ja korreloi huonoon selviytymisen syöpäpotilaiden ja /tai syöpäsolun aggressiivisuus. [5-11] Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että EIF5A2 on karsinogeeninen kykyjä kautta aktivointi EIF5A2-MTA1 /C-MYC akselilla. [8] kuitenkin vähän tietoa on saatavilla noin EIF5A2 proteiinin ilmentymistä, sen prognoosi- merkityksen ja mahdollisten onkogeeninen rooli ihmisen GC.

Niinpä ensin tutkineet ilmaus

EIF5A2

ihmisen GC solulinjoissa ja sen mahdollisesta roolista solujen proliferaatiota, migraatiota ja invaasiota. Seuraavaksi tunnistettiin mahdolliset myötävirtaan kohdeproteiinit valaista vaikutuksia EIF5A2 väheneminen tai kiihdytyssäätely matkapuhelinverkon toimintoihin GC soluja. Lopuksi analysoidaan korrelaatio EIF5A2 ja MTA1 ilmentymistä ihmisen GC ja sen merkitys kliinis tekijöitä ja selviytymisen GC potilailla.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

hyväksyi tutkimuksen eettisen komitean PUMCH, Kiina Academy of Medical Science ja Pekingin unionin Medical College, Peking, Kiina, ja kirjallinen suostumus saatiin kunkin potilaan.

Potilaat ja näytteet

GC kudosten ja sovitettu viereisen ei-kasvain kudosnäytteitä saatiin 160 peräkkäisen potilailla, joille tehtiin kirurginen resektio ensisijaisen GC Pekingin unionin Medical College Hospital (PUMCH) välillä tammikuussa 2002 ja joulukuussa 2006. Ei potilaat saivat neoadjuvanttikemoterapian tai sädehoitoa. Eloonjääntitulokset saatiin perustuu sekä potilaiden kirjaa ja puhelin seurantaan. Mediaani seuranta-aika oli 53 kuukautta (vaihteluväli 1-113 kuukautta). Toiset kaksi paria tuoreita GC kudosten ja noncancerous mahan limakalvon kudokset saatiin potilailta, joille tehtiin kirurginen resektio huonosti eriytetty adenokarsinooma mahalaukussa PUMCH vuonna 2014.

määritellään lymphovascular Invasion läsnäolo kasvainsolun veritulppien sisällä tiloja ympäröi selvästi näkyviksi endoteelivuorauksen kehällä kasvaimen kohdissa. [12, 13] Potilaat saivat järjestetään mukaan 7. painos AJCC TNM luokituksen syöpä vatsaan. [14] Lauren histotype jaettiin suoliston ja haja- sekamuotoinen luokat. [15]

Soluviljely

on viisi eri ihmisen GC solulinjat saatiin Cell Center of Shanghai Institutes for Biological Sciences (AGS ja MGC803, Shanghai, Kiina) ja Cell Center of Institute of Basic Medical Sciences (MKN45, SGC7901 ja HGC27, Peking, Kiina). Immortalisoidut mahalaukun limakalvon epiteelisolujen linja GES-1 saatiin Beijing ComWin Biotech Co., Ltd (Peking, Kiina). Kaikki solut viljeltiin RPMI 1640 -elatusaineessa, jota oli täydennetty 10% naudan sikiön seerumia (FBS, Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) 37 ° C: ssa kostutetussa ilmakehässä, joka sisälsi 5% CO

2. Solut logaritmisessa kasvuvaiheessa käytettiin lisäkokeita varten.

Knockdown EIF5A2 tai MTA1 pienissä-häiritsevät RNA: t (siRNA) B

siRNA nimenomaan vastaan ​​EIF5A2 ja MTA1 [16] ja niiden ei-kohdistaminen ohjaus siRNA (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) syntetisoitiin kemiallisesti tätä tutkimusta varten. EIF5A2 siRNA-sekvenssit olivat seuraavat: # 1: 5′-GGAUCUUAAACUGCCAGAATT-3 ’, 5′-UUCUGGCAGUUUAAGAUCCTT-3′; # 2: 5’-GGUUCACCUUGUUGGAAUUTT-3 ’, 5′-AAUUCCAACAAGGUGAACCTT-3; ja # 3: 5’-GCUUCCAGCACUUACCCUATT-3 ’, 5′-UAGGGUAAGUGCUGGAAGCTT-3; ei-kohdistuksen ohjaus (NC1) siRNA: 5’-UUC UCC GAA CGU GUC ACG UTT-3 ’; 5’-ACG UGA CAC GUU CGG AGA ATT-3 ’). MTA1 siRNA-sekvenssejä (Target 2 siRNA, T2-siRNA) olivat: 5’-GCUGAGAGCAAGUUAAAGCdTdT-3 ’, 5′-GCUUUAACUUGCUCUCAGCdTdT-3’) ja FAM-leimattua siRNA (AM4620) käytettiin ei-kohdistuksen ohjaus siRNA (NC2 ).

Kaksikymmentäneljä tuntia maljauksen jälkeen kuuden-kuoppalevyille, GC-solut transfektoitiin 100pmol EIF5A2-siRNA, MTA1-siRNA tai ohjata siRNA käyttämällä Lipofectamine 2000 transfektioreagenssia (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA ) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Solut kerättiin western blotting 48 h transfektion jälkeen.

Plasmidi rakentaminen ja ohimenevän transfektion

EIF5A2 ekspressiovektori (PIRES2-EGFP-EIF5A2) syntetisoitiin Life Technologies. Solut transfektoitiin PIRES2-EGFP-EIF5A2 tai kontrolli-plasmidi käyttämällä Lipofectamine 2000 (Life Technologies) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Reaaliaikainen kvantitatiivinen RT-PCR

Kokonais-RNA eristettiin käyttäen TRIzol reagenssia (Life Technologies) mukaan valmistajan protokollaa. PCR suoritettiin käyttäen sekvenssien EIF5A2: eteenpäin: 5′-AACTGCCAGAAGGTGAACTAGG-3 ’; reverse: 5’-GTTTCCGTTTATTTGCAGGGT-3 ’, ja sekvenssit MTA1: eteenpäin: 5′-CCGGGCCTGCGAGAGCTGTTACAC-3′; reverse: 5’-CACGGCTTCCAGCGGCTTGCGTAC-3 ’. PCR suoritettiin käyttäen UltraSYBR seos (CWbio.Co.Ltd) mukaan valmistajan protokollaa. Käänteinen transkriptio suoritettiin käyttäen PrimeScript RT Master Mix Kit (TAKARA Biotechnology Co Ltd, Dalian, Kiina). CDNA tuotteet alistettiin reaaliaikainen PCR käyttämällä SYBR Esisekoite Ex Taq II Kit (TAKARA Biotechnology Co. Ltd.). Reaaliaikainen PCR suoritettiin StepOnePlus Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) käyttäen seuraavaa ohjelmaa: 95 ° C: ssa 10 minuuttia, minkä jälkeen 40 sykliä 95 ° C 15 sekunnin ajan, ja 60 ° C: ssa 1 minuutti.

GAPDH

mRNA kussakin näytteessä kvantitoitiin kuten endogeeninen kontrolli.

Western blotting

Proteiini kvantifioitiin käyttämällä BCA-proteiinin määrityskittiä (Thermo Scientific Pierce). Natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesi (SDS-PAGE) on käytetty erottamaan solulysaateista. Proteiinit siirrettiin PVDF-membraaneille ja blokattiin tris-puskuroitua suolaliuosta ja 0,1% Tween 20: tä (TBST), joka sisälsi 5% naudan seerumin albumiinia, ja sitten inkuboitiin seuraavat ensisijaiset vasta-aineet 4 ° C: ssa yön yli: kanin anti-EIF5A2 tai -C- MYC (1: 1000; Epitomics, USA, Catalog # 5549-1 tai 1472-1), kanin anti-MTA1, -E-kadheriinin tai -vimentin (1: 1000, Cell Signaling, USA, Catalog # 5647, 3195 tai 5741 ), tai hiiren anti-GAPDH (1: 1000, Santa Cruz, Catalog # sc-25778). Membraanit pestiin kolme kertaa TBST: llä ja inkuboitiin piparjuuriperoksidaasi (HRP) -konjugoitu anti-kani tai anti-hiiri-vasta-aineilla (1: 3000, Santa Cruz, USA, luettelo # sc-2004 tai sc-2005) 1 h huoneen lämpötilassa. Proteiinivyöhykkeet visualisoitiin käyttäen ECL detektioreagensseja (Pierce, USA). Suhteellinen proteiinin ekspressiotasot normalisoitiin GAPDH.

Soluproliferaatiomääritys

leviämisen HGC27 ja MKN45 solut tutkittiin käyttäen Cell Counting Kit-8 (CCK-8) (Dojindo, Japan ) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Lyhyesti, 24 h transfektion jälkeen siRNA tai plasmidi, solut siirrostettiin tiheyteen 1 x 10

4 solua /kuoppa 96-kuoppalevyille ja viljeltiin 0, 24, 48 ja 72 tuntia. Sitten, eri ajankohtina, 10 ui CCK-8-liuosta lisättiin kuhunkin kuoppaan ja inkuboitiin 2 tuntia. Absorbanssi luettiin 450 nm: ssä levylukijalla.

TranswellTM määrityksissä

vaeltavia ja invasiivisia kyky GC-solujen havaittiin käyttäen 24-kuoppaista siirtokuoppaan soluviljelmässä kammiot (8.0μm huokoskoko, Costar , Cambridge, MA, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Solun invaasiomääritys, insertin kalvot esipäällystetty Matrigel (BD, San Diego, CA, USA). Solun migraatiokokeessa, ei Matrigeliä käytettiin. 24 h transfektion jälkeen solut ympättiin sopivalla tiheys (HGC27, 5 x 10

5 /ml; MKN45, 1 x 10

7 /ml) ylemmässä kammiossa ja viljeltiin OPTI-MEM (GIBCO, USA) ilman FBS: ää vielä 24 h. Solujen annettiin siirtyä kohti RPMI 1640-alustassa, joka sisälsi 20% FBS alaosaan. Ei-vaeltavia solujen ylä- kalvon pinta poistettiin puuvilla kärki, ja muuttavien solujen kiinnitetty alempaan kalvon pinta kiinnitettiin 4% paraformaldehydillä ja värjättiin H 0,05 katsottiin olevan tilastollisesti merkitsevä. Kaikki kokeet suoritettiin vähintään teknisissä ja biologisten triplikaatit.

Tulokset

EIF5A2 ilmentäminen GC soluissa ja kudoksissa ja validointi intervention

Tutkimme ilmentymistä EIF5A2 vuonna viisi GC solulinjat ja kuolemattomaksi mahalaukun limakalvon epiteelisolujen linja GES-1

in vitro

sekä qRT-PCR (Kuva. 1A) ja western-blottauksella (kuvio. 1 B). EIF5A2 proteiini ihmisen GC kudoksissa oli korkeampi kuin pariksi kaukana ei-tuumorikudoksissa (Fig. 1 C). Koska korkea endogeenisen ilmentymisen taso EIF5A2 ja suhteellisen korkeat transfektion tehokkuutta HGC27, valitsimme tässä solulinjassa RNAi analyysi, ja valitut MKN45 solujen EIF5A2 säätelyä kokeissa johtuen sen suhteellisen alhainen EIF5A2 ilme ja korkea transfektiotehokkuuden.

(A)

EIF5A2

mRNA ilmentyminen tutkittiin reaaliaikaisella kvantitatiivisella RT-PCR

GAPDH

toimii latauskontrollina. (B) Proteiinin ilmentyminen solulinjoissa vahvistettiin western blot -analyysillä GAPDH latauskontrollina. (C) EIF5A2 proteiini ihmisen GC kudoksissa oli korkeampi kuin pariksi kaukana ei-kasvainkudoksia. (D) Kaikki kolme EIF5A2-siRNA: t, erityisesti # 1, tehokkaasti tukahdutettu

EIF5A2

mRNA ilmaisun HGC27 soluissa. (E) Western blotting paljastaa, että EIF5A2 joka pudotettiin käsittelemällä EIF5A2- siRNA: iden in HGC27 soluissa. (F)

EIF5A2

mRNA oli merkittävästi voimistunut lyhytaikaisella transfektiolla of EIF5A2 plasmidien MKN45 soluissa. (G) EIF5A2 proteiini oli merkittävästi voimistunut lyhytaikaisella transfektiolla EIF5A2 plasmidien MKN45 soluissa. (H ja I) T2-siRNA voi tehokkaasti tukahduttaa MTA1 ilmentymistä HGC27 soluissa.

Kaikki kolme siRNA voi tehokkaasti tukahduttaa EIF5A2 ilmentymistä HGC27 soluissa (Kuva. 1 D, E). Käytimme siRNA # 1 kuten EIF5A2 kohdistetut siRNA (T1-siRNA) myöhemmissä kokeissa. EIF5A2 ilmentyminen oli merkittävästi voimistunut lyhytaikaisella transfektiolla EIF5A2 plasmidien MKN45 soluissa (Fig. 1 F, G). T2-siRNA voi tehokkaasti tukahduttaa MTA1 ilmentymistä HGC27 soluissa (Kuva. 1 H, I).

EIF5A2 tai MTA1 ekspressiotasot vaikuttanut aggressiivisuus GC-solujen in vitro

knockdovvn EIF5A2 mukaan T1 siRNA esti merkitsevästi solujen lisääntymistä (Fig. 2A), muuttoliikkeen ja invaasiota (Fig. 2B) in HGC27 soluissa verrataan emosoluilta. Säätelyä EIF5A2 mukaan EIF5A2 plasmidiekspressio- edistetään lisääntyvän leviämisen (Fig. 2C), muuttoliikkeen ja invaasiota (Fig. 2D) on MKN45 soluja. Knockdovvn MTA1 T2-siRNA esti merkittävästi solujen lisääntymistä (kuvio. 2E), muuttoliikkeen ja invaasiota (Fig. 2F) in HGC27 soluissa verrataan emosoluilta.

(A) Leviämisen EIF5A2 kohdistettujen siRNA (T1-siRNA) ja ei-kohdennettu ohjaus (NC) HGC27 solut mitattiin CCK-8-määritys 24 tunnin välein sen jälkeen, kun siRNA transfektion. (B) Cell muuttoliikettä ja invaasiota laskivat transfektion T1-siRNA osaksi HGC27 soluihin (Opiskelijan

t

-testi,

P

0,001 ja

P

= 0,001 , vastaavasti). Sarake, keskiarvo; baareja, ± SD (maasta kolmen rinnakkaisen). (C) leviämisen EIF5A2-plasmidia ja ohjaus plasmidi MKN45 solut mitattiin CCK-8 määritys 24 tunnin välein jälkeen plasmiditransfektiolla. (D) Cell muuttoliike ja invaasion korotettiin seuraavan ohimenevän transfektion EIF5A2-plasmidin MKN45 soluihin (Opiskelijan

t

-testi,

P

= 2,06 x 10

-5 ja

P

= 7,65 x 10

-6, vastaavasti). Sarake, keskiarvo; baareja, ± SD (maasta kolmen rinnakkaisen). Kuva insert (B oikea ja D oikealla) näyttää edustavan näkökentän kustakin käsittelystä. (E) leviämisen MTA1 kohdistetun siRNA (T2-siRNA) ja ei-kohdennettu ohjaus (NC2) HGC27 solut mitattiin CCK-8 määritys 24 tunnin välein kuluttua siRNA transfektion. (F) Cell muuttoliikettä ja invaasiota laskivat transfektion T2-siRNA osaksi HGC27 soluihin (Opiskelijan

t

-testi, sekä

P

= 0,001). Sarake, keskiarvo; baareja, ± SD (maasta triplikaatit).

Mahdolliset kohdegeenin ilmentymisen jälkeen EIF5A2 Knockdown tai yliekspressio

Kun knockdovvn EIF5A2 vuonna HGC27 soluissa, tasot epiteelin merkki E-kadheriinin oli voimistunut, kun tasot mesenkymaalisten merkki vimentiinista olivat vaimentua ja mukana leviämisen liittyviä proteiineja sykliini D1 ja sykliini D3 ja etäpesäkkeiden liittyvä C-myc ja MTA1 downregulation (Fig. 3A). Sitä vastoin, kun EIF5A2 yli-ilmentymisen MKN45 soluissa, ilmentyminen E-kadheriinin säädeltiin vähentävästi, kun taas taso vimentiinista on voimistunut ja mukana sykliini D1, sykliini D3, C-MYC ja MTA1 säätelyä (Fig. 3B). Knockdown tai yliekspressio EIF5A2 ei ollut merkittävää vaikutusta MMP-9 ilmaisun HGC27 ja MKN45 soluja (Fig. 3A, B).

(A) jälkeen knockdovvn EIF5A2 vuonna HGC27 soluissa, E-kadheriinin tasot voimistunut, kun taas vimentiinista säädeltiin vähentävästi mukana sykliini D1, sykliini D3 ja C-MYC, ja MTA1 downregulation. (B) ektooppinen yliekspressio EIF5A2 jälkeen ohimenevän transfektion EIF5A2-plasmidin oleellisesti voimistunut sykliini D1, sykliini D3, C-MYC ja MTA1, mukana downregulation E-kadheriinin, kun vimentiinistä oli voimistunut.

Association of EIF5A2 ja MTA1 ilmaisutapoja kliinis-potilailla, joilla on GC

Positiiviset signaalit EIF5A2 olivat pääasiassa sijaitsevat sytoplasmassa ja tumassa kasvainsolujen, kun taas MTA1 signaalit pääasiassa tumassa tuumorisolujen (Fig. 4). Olemme määritelleet immuunivärjäystä arvot 0-3 normaalina ilmentymistason EIF5A2 tai MTA1, kun taas immunovärjäyty- arvot 4-12 määriteltiin yli-ilmentymisen EIF5A2 tai MTA1. EIF5A2 yli-ilmentyminen havaittiin 75 kasvaimen yksilöitä, verrattuna vain seitsemän 160 sovitetun viereisen ei-kasvain limakalvokudoksille (

P

0,001). Edustaja IHC värjäytymistä EIF5A2 in moderately- tai huonosti eriytetty mahalaukun adenokarsinooman, aluksen hyökkäyksen kasvainsoluja ja ei-kasvainkudoksessa on esitetty kuviossa. 4A, B, C ja D, vastaavasti. Niistä 160 tapaukset analysoitiin, 70 (43.75%) olivat positiivisia MTA1, tilastollinen analyysi ilmentymiskuviot osoitti, että oli positiivinen korrelaatio EIF5A2 ja MTA1 lauseke (r = 0,510,

P

0,001) . Tyypillinen värjäytyminen kuvia yliekspressio EIF5A2 ja MTA1 mahalaukun adenokarsinoomaa oli kuvassa. 4E ja 4F.

(A) edustaja immunohistokemiallisesti kuvat osoittavat EIF5A2 yli-ilmentymisen kohtalaisen erilaistunut adenokarsinooma (x 200). (B) yli-ilmentyminen EIF5A2 huonosti erilaistunut mahalaukun adenokarsinooman (x 200). (C) yli-ilmentyminen EIF5A2 kasvainsoluissa tunkeutuvat alukset (x 200). (D) Normaali ilmentymistä EIF5A2 ei-kasvainkudoksessa (x 100). (E) Tyypillinen värjäytyminen kuvat osoittavat sekä EIF5A2 ja MTA1 yli-ilmentyminen samassa mahalaukun adenokarsinooman; (G) Kaiken eloonjäämiskäyriä 160 mahalaukun saavilla syöpäpotilailla gastrektomia ryhmitelty EIF5A2 lauseke (

P

0,001). (H) Tautivapaa elinaika käyrät 145 mahalaukun saavilla syöpäpotilailla parantava leikkaus, ryhmitelty EIF5A2 lauseke (

P

= 0,001).

Kuten taulukosta 1, sekä EIF5A2 ja MTA1 yli-ilmentyminen oli korreloi positiivisesti kehittyneempien pT vaiheessa (

P

= 0,018 ja

P

= 0,042), pN vaiheessa (

P

= 0,037 ja

P

= 0,020) ja positiivinen lymphovascular invaasio (

P

= 0,016 ja

P

= 0,044), kun taas niitä ei liity muita kliinis.

Lisääntynyt EIF5A2 tai MTA1 ilmaisu korreloi huonompi selviytymisen GC potilailla

Viimeisessä seurannassa, 75 160 potilasta oli kuollut. Näistä 73 ihmistä kuoli kasvaimen uusiutumisen. Kaplan-Meier-analyysi osoitti, että sekä 5-vuoden yleinen (OS) ja taudista vapaan eloonjäämisen (DFS) varten EIF5A2 yli-ilmentymisen ryhmässä olivat lyhyempiä kuin normaalin EIF5A2 ilmaisu ryhmä (

P

0,001 ja

P

= 0,001, Fig. 4G, H). Tasaisen, potilaalla on MTA1 yliekspressio näkyvissä huono ennuste OS ja DFS (

P

0,001 ja

P

= 0,001).

Jos muuttujan merkitys univariate analyysiä Kaplan-Meier menetelmiä sisällytettiin Coxin monimuuttuja regressioanalyyseilla. Kuten esitetään S1 taulukossa ja S2 Table, monimuuttujamenetelmin havaittiin, että yli-ilmentyminen EIF5A2 oli itsenäinen tekijä, joka vaikuttaa sekä OS (riskisuhde 1,831, 95% luottamusväli 1,135-2,857,

P

= 0,012, S1 taulukko) ja DFS (riskisuhde 1.880, 95% CI1.177 ja 3.002,

P

= 0,008, S2 taulukko) saaneista potilaista parantavaa resektio GC. Kuitenkin yli-ilmentyminen MTA1 ei tuottanut riippumatonta ennustetekijöitä merkitys käyttöjärjestelmän ja DFS on monimuuttujamenetelmin.

Keskustelu

Eukaryotic initiaatiofaktoria 5A 2 (EIF5A2) on paikallistaa kromosomialueella usein huomattava kromosomi- epävakautta GC ja monien muiden syöpien, 3Q. [17-20] EIF5A2, yhtenä vain kaksi isoformia EIF5A perhe, on vahvistettu onkogeenisessä proteiinia ja voi myös olla tärkeä biomarkkeri ennusteeseen ja terapeuttinen kohde monenlaisia ​​ihmisen kasvaimista. [21] Vaikka aikaisemmassa tutkimuksessa oli tutkinut

EIF5A2

geeniekspression ensisijainen GC, nykyinen tutkimus tarjoaa ensimmäistä näyttöä kliinistä merkitystä EIF5A2 ilmentymisen ihmisen GC ja sen mahdollinen rooli säätelyyn GC solun aggressiivisuus. [22]

kantaesityksensä EIF5A2 knockdown ja yli-ilmentyminen kokeiluja

in vitro

. Tulokset osoittivat, että tukahduttaminen EIF5A2 vuonna HGC27 soluissa johti pienensi merkitsevästi solujen lisääntymisen, migraation ja invaasion, kun taas sen säätelyyn ylöspäin MKN45 soluissa johti päinvastainen. Nämä tulokset ovat yhdenmukaisia ​​aiempien havaintojen muissa kasvaimissa. [8, 10, 23] Olemme myös havainneet, että MTA1 Knockdown vuonna HGC27 soluissa esti merkittävästi solujen proliferaatiota, migraatiota ja invaasiota. Mutta mekanismia, jolla EIF5A2 lisää GC solu aggressiivisuus on vielä tuntematon.

Siksi teimme lisätutkimuksia mahdollisista tavoitteista EIF5A2

in vitro

. Tuloksemme osoittivat, että EIF5A2 säätää positiivisesti sykliini D1 ja sykliini D3, joka on tärkeä tehtävä GC solujen lisääntymisen ja solukierron säätelyssä. [24, 25] Kaikki nämä tulokset tukevat hypoteesia, jonka EIF5A2 edistää GC solujen lisääntymisen kautta säätelyä sykliini D1 ja sykliini D3. Samaan aikaan, aiemmat tutkimukset osoittivat, että EIF5A2 edistää solujen invaasiota /etäpesäke ja epiteelin-mesenkymaalitransitioon (EMT) aktivoimalla MTA1 /C-MYC kolorektaalisyövässä. [8] MTA1 ja C-MYC, sekä EMT-ohjelma, olivat myös mukana sääntelyn GC etäpesäke. [26-28] siksi tutkittiin MTA1, C-MYC ja kaksi EMT liittyvä markkereita, E-kadheriinin ja vimentiinista. Meidän tutkimukset osoittivat, että EIF5A2 positiivisesti säädellä MTA1, C-MYC ja vimentiinista ja negatiivisesti säänneltyjen E-kadheriinin. Kaikki nämä tulokset viittaavat siihen, että EIF5A2 voisi säätelevät solujen vaeltamiseen ja hyökkäyksen sääntelyn MTA1, C-MYC ja EMT

in vitro

, mutta lisätutkimuksia tarvitaan selvittämään tarkkaa mekanismia.

Tulokset nykyisen tutkimus osoitti myös, että EIF5A2 proteiini korreloi positiivisesti pT vaiheessa ja pN vaiheessa. Samanlaisia ​​tuloksia havaittiin myös ihmisen munasarjasyöpä. [5] Nämä tulokset viittaavat siihen, että EIF5A2 voi liittyä kasvaimen invaasion ja imusolmukkeiden etäpesäkkeiden tietyntyyppisten ihmisen syövissä, mukaan lukien GC. Enemmän kiinnostavaa, nykyisessä tutkimuksessa, EIF5A2 yliekspressio todettiin myös hyökkääviä syöpäsoluissa (alus hyökkäys), ja yliekspressio EIF5A2 proteiinin ensisijainen GC kudoksessa korreloi läsnäolon lymphovascular hyökkäystä. Mukaisesti osumaa aikaisemmissa tutkimuksissa ihmisen muiden maligniteettien, mukaan lukien munasarjan epiteelin kasvaimissa, virtsarakon syöpä, keuhkosyöpä, paksusuolen ja peräsuolen syöpä, yliekspressio EIF5A2 nykyisen tutkimuksen korreloi huonon potilaiden selviytymiseen GC. [5, 8, 29] lisäksi monimuuttuja-analyysi osoitti, että EIF5A2 proteiini on itsenäinen ennustaja köyhien selviytymisen leikkauspotilaiden GC.

MTA1, kuin ehdokas etäpesäkkeiden liittyvää geeniä, ovat osoittaneet merkittävästä rooli mahalaukun syöpäsolun aggressiivisuus. [27] yli-ilmentyminen MTA1 liittyy merkittävästi huonon ennusteen pN0 GC potilailla. [30] nykyinen tutkimus osoitti, että EIF5A2 ilmentyminen korreloi positiivisesti MTA1 ilmentymistä ihmisen GC kudoksissa. Immunohistokemiallista analyysiä yhdistetään in vitro -tutkimukset osoittavat, että EIF5A2-MTA1-akseli voi olla tärkeä rooli mahasyövän aggressiivisuutta.

Yhteenvetona, tulokset nykyinen tutkimus osoitti, että yli-ilmentyminen EIF5A2 on läheistä sukua GC solujen lisääntymisen, migraation ja invaasion kautta etäpesäkkeitä liittyvien proteiinien MTA1. Samalla, EIF5A2 voi olla tärkeä EMT sääntelyn GC. Yliekspressio EIF5A2 voisi olla itsenäinen tekijä ennustettaessa huono selviytyminen ja houkutteleva terapeuttinen kohde GC, mutta lisätutkimuksia tarvitaan.

tukeminen Information

S1 Taulukko. Analyysi liittyvät tekijät yleisen (OS).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0119229.s001

(DOC)

S2 Taulukko. Analyysi liittyvät tekijät tautivapaan elinajan (DFS).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0119229.s002

(DOC) B

Kiitokset

Tekijät haluavat kiittää De-Tian Wang, Ms Yu-Feng Luo ja professori Pei Gu niiden tekninen tukee.