Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Meillä instituutti, joka on chemoradioselection strategia on käytetty valitsemaan potilaille elinten säilytystä perusteella vastetta ensimmäiseen 30-40 Gy samanaikaista sädehoitoa (CCRT) . Potilaat, joilla myönteisen vastauksen (ts chemoradioselected; CRS) ovat osoittaneet parempia tuloksia kuin ne, joilla on epäsuotuisa vaste (ts nonchemoradioselected, N-CRS). Onnistunut kohdistaminen molekyylien, jotka vaimentavat tehoa chmoradioselection voi parantaa tuloksia. Siten Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli arvioida yhdistyksen uusi syövän kantasoluja (CSC) merkki, CD44 variantti 9 (CD44v9), solun vastareaktioita chemoradioselection kehittyneen pään ja kaulan levyepiteelisyöpä (HNSCC).

Materiaalit ja menetelmät

kautta lääketieteellinen kaavio haku, 102, joilla on pitkälle HNSCC käsitelty chemoradioselection 1997-2008 otettiin. Mukaan meidän algoritmin, 30 potilasta oli CRC seuraavat induktion CCRT ja 72 potilasta oli N-CRS. Käyttämällä tavanomaista immunohistokemiallisella tekniikalla, biopsianäytteistä ja poistaa kirurgisesti Tuumorinäytteet immunovärjättiin anti-CD44v9 spesifisten vasta-aineiden.

Tulokset

luontainen ekspressiotasojen CD44v9 on biopsianäytteistä ei korreloinut chemoradioselection ja potilaan selviytymistä. Kuitenkin N-CRS potilailla CD44v9-positiivisten ryhmässä oli merkittävästi (

P

= 0,008) huonompi ennuste, kuin CD44v9-negatiivinen ryhmä. Monimuuttuja analyysit osoittivat, että joukossa neljä ehdokasta tekijöiden (T, N, vastaus CCRT, ja CD44v9), CD44v9 positiivisuus (HR: 3,145, 95% CI: 1,235-8,008,

P

= 0,0163) korreloi merkitsevästi huono ennuste, yhdessä kehittyneen N vaiheessa (HR: 3.525, 95% CI: 1,054-9,060,

P

= 0,0228). Lisäksi eloonjäämisaste CD44v9 aiheuttaman ryhmässä oli merkitsevästi (

P

= 0,04) huonompi kuin CD44v9-non aiheuttama ryhmä.

Johtopäätökset

CCRT aiheuttamaa CD44v9 ilmentäviä CSCS näyttävät olevan merkittävä este chemoradioselection. CD44v9-kohdistaminen näyttää olevan lupaava strategia tehostavat chemoradioselection ja siitä elimen säilyttäminen ja selviytymistä.

Citation: Aso T, Matsuo M, Kiyoharan H, Taguchi K, Rikimaru F, Shimokawa M, et al . (2015) induktio CD44 Variant 9-ilmaiseminen Cancer Kantasolut Voisi Lieventää tehokkuus Chemoradioselection ja huonontaa prognoosi Potilaat, joilla Advanced Head and Neck Cancer. PLoS ONE 10 (3): e0116596. doi: 10,1371 /journal.pone.0116596

Academic Editor: Torbjörn Ramqvist, Karolinska Institutet, Ruotsi

vastaanotettu: 24 syyskuu 2014; Hyväksytty: 12 joulukuu 2014; Julkaistu 9 maaliskuuta 2015

Copyright: © 2015 Aso et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi.

Rahoitus: Grant-in -Aid for Scientific Research (C) Muneyuki Masuda.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä olemassa.

Johdanto

huolimatta viimeaikaisen kehityksen monitieteinen hoitoja, yleistä selviytymistä ja elämänlaatua potilailla, joilla on edennyt pään ja kaulan okasolusyöpä (HNSCC) eivät ole parantuneet merkittävästi viime vuosikymmenen aikana [1, 2] . Siten perustaminen kliinisesti tehokkaita hoitoja perustuva HNSCC biologia on välttämätöntä. Laitoksella Otolaryngology ja pään ja kaulan kirurgian Kyushun yliopistossa ja siihen sidoksissa olevien laitosten, strategia nimeltään chemoradioselection on käytetty väline, jolla mitataan biologisen aggressiivisuus yksittäisen kasvaimen vuodesta 1972 [3-5]. Lyhyesti, vasteet kasvaimista arvioidaan seuraavien 30-40 Gy samanaikaisten chemoradiothepapy (CCRT). Sitten potilaat, jotka osoittavat myönteistä palautetta (ts chemoradioselected, CRS), jatka edelleen CCRT jopa 60-70Gy, kun taas ne, joilla on epäsuotuisa vastaukset (toisin sanoen ei chemoradioselected, N-CRS), tehdään radikaaleja, mikä usein johtaa menetys elintärkeitä elimiä (esim kurkunpää). Kiehtovan, CRS potilaat osoittavat huomattavasti paremman selviytymisen ja elimen säilyttäminen riippumatta niiden kliinisen vaiheen, mikä viittaa tarkkuuteen chemoradioselection [3, 5]. Äskettäin samanlainen käsite chemoselection oletettiin ryhmä yliopistossa Michigan, joiden avulla parannetaan elimen säilyttäminen ja selviytymisen [6-8]. Näin ollen, jos tehoa kemo- /radioselection on parannettu, oli parempi eloonjäämisen ja elimen säilyttäminen potilailla, erityisesti ne, joilla on pitkälle edennyt HNSCC saattaa olla mahdollista [1]. Tämän perusteella arveltiin Tämän tutkimuksen tarkoituksena on selvittää mekanismeja, jotka vaimentavat vaikutukset chemoradioselection kehittämään kliinistä tehokkaita hoitomuotoja kehitettäessä.

Viimeisten kymmenen vuoden aikana on käynyt ilmi, että syöpä kantasolut (CSCS), joille on ominaista hyvät mahdollisuudet itseuudistumisen ja etenemisen heterogeeninen kasvain, voi olla pääasiallinen syy kasvaimen vastareaktioita perinteisiin kemo- /radio hoitojen [9]. Survival yhden CSC voi aiheuttaa kasvaimen uudelleen kasvuun ja ennen kaikkea CSCS on ehdotettu olevan lähde etäispesäkkeitä [9]. Vuonna HNSCC, standardi muoto CD44 (CD44s) tunnistettiin ensin pinnan merkkiaine CSCS Prince et al., Ja se on ilmaistu 10% HNSCC soluihin [10]. Kuitenkin tulokset immunohistokemiallinen tutkimus, joka osoitti, että 60% -95% solujen normaalin epiteelin pään ja kaulan ja 60% -100% of HNSCC soluista ilmaisi CD44s, ovat herättäneet epäilyjä uskottavuutta tämän merkin [ ,,,0],11]. Lisäksi, ymppäyksen pieni määrä CD44s-negatiivisten HNSCC solujen aiheuttama kehittäminen irtotavarana kasvaimen heikentyneisiin hiiren [12, 13]. Sen sijaan läpi sarjan

in vitro

ja

in vivo

määrityksiä ja kokeiluja kliinisistä näytteistä, pääasiassa suoritetaan laboratoriossa professori Saya Keio University, CD44 variantti 9 (CD44v9) , joka on silmukoinnin variantin CD44, on tullut uusi markkeri syövän stemness erilaisia ​​kiinteitä kasvaimia, mukaan lukien HNSCC [14-18]. Toiminnallisesti, CD44v9 lisää solunsisäisen tason pelkistettyä glutationia (GSH), kun yhdessä XCT, minkä vuoksi se suojaa soluja ROS ja oksidatiivisen stressin, joka on yksi erillisten ominaisuuksien CSCS [14]. Tämä skenaario hyvin selittää mekanismia, jolla CSCS selviävät kemo- /radio hoitoja, koska nämä aineet on raportoitu aiheuttavan sytotoksisia vaikutuksia lähinnä ROS tuotanto [14, 19]. Itse asiassa HNSCC kasvain näytteissä, kaksinkertainen immunovärjäyksin kanssa involukriini, erottelu merkki, ja CD44v9 selvästi osoittanut poissulkevalla värjäyskuvion ja induktiokemoterapiaa ensisijaisesti tappoi involucrin-positiivisten syöpäsolujen, jolloin merkityn induktion CD44v9-positiivisten solujen. Ilmentymistasojen CD44v9 in HNSCC solulinjat, jotka liittyvät kohonneeseen solunsisäisen GHS ja kestävyys sisplatiinia. Siten hoidot CD44v9 ilmentävien HNSCC solulinjoja estäjä XCT, sulfasalatsiini, esti merkittävästi solujen elinkelpoisuuden ja kasvaimen kasvua nude-hiirissä ja suurempi herkkyys Sisplatiinin [16].

Näiden havaintojen me immunohistokemiallisesti tutkittiin ekspressiotasoja CD44v9 proteiinin kliinisistä näytteistä saatiin potilailta, joilla on pitkälle edennyt HNSCC mukaisesti käsitellyn platina-pohjainen chemoradioselection strategia määrittää, jos CD44v9-ilmentävien HNSCC soluilla stemness ja aiheuttaa solujen vastareaktioita chemoradioselection.

Materiaalit ja menetelmät

Patient ominaisuudet, sub-ryhmittely ja kudosnäytteistä

kautta lääketieteellinen kaavio haun potilaille, jotka saivat meidän instituutti 1997-2008, valitsimme 102 potilasta tähän tutkimukseen, jotka täyttivät seuraavat kriteerit: (1) ne, joilla oli aiemmin hoitamaton hypopharyngeal, kurkunpään tai suuontelon syöpäpotilaat vaiheen III tai IV kasvain mukaan UICC TNM luokittelu (2002); (2) ne käsitellään chemoradioselection strategian; (3), joilla ei ollut etäinen etäpesäke; ja (4), joilla on biopsialla ja /tai poistaa kirurgisesti yksilöt ilmeisesti sisälsi invasiivisia rintamalla kasvain, jotka olivat vieressä tai ympäröimänä kasvaimeen liittyvää strooman meidän formaliinilla kiinnitetyt parafinoidut kudoksen arkisto; tämä viimeinen kriteerit otettiin mukaan, koska pisteytys immunovärjäyksen suoritettiin näiden kasvainten rintamalla, kuten on kuvattu alla. Virus liittyvät HNSCCs (ts nenänielun ja nielu) jätettiin pois analyyseistä keskittyä biologisen roolin CD44v9. Tutkimus hyväksyi Institutional Review Board of National Kyushu Cancer Center (nro 2013-107). Kirjallinen suostumus antoivat osallistujia kliiniset tiedot voidaan käyttää tässä tutkimuksessa.

potilaiden ominaisuuksiin on esitetty taulukossa 1. Kaikki potilaat olivat seurattiin 60 kuukautta; keskimääräinen seuranta-aika oli 51,7 kuukautta (vaihteluväli: 2-151). Heidän keski-ikänsä oli 60,8 vuotta. Oli 27 potilasta, joilla hypopharyngeal syöpä, 40 potilailla, joilla on suun kautta syöpä, ja 35 potilasta, joilla kurkunpään syöpä.

Hoitokuureja potilaiden on esitetty kuvassa. 1. Sen jälkeen 30-40 Gy CCRT käsittää sisplatiinin (CDDP; 15 mg /m

2 /vrk) tai parapalatin (CBDCA; AUC = 1 /vrk) päivinä 1-5 ja ulkoinen säteilytys (2,0 Gy /vrk) 5 päivää viikossa, 30 potilasta luokiteltiin CRS ryhmään (kliininen täydellinen vaste saavutettiin ensisijainen sivusto) ja loput 72 potilasta luokiteltiin N-CRS ryhmä.

CCRT, samanaikainen kemosädehoito; CDDP, sisplatiini; CBDCA, paraplatinista; AUC, alue käyrän alla; ja PND, suunnitellut kauladissektio.

Tutkittuaan huolellisesti kudoksen arkiston, 30 koepalanäytteistä N-CRS potilaista ja 30 pariksi koepala ja kirurgisesti poistettu yksilöitä samasta N-CRS potilasta valittiin. Kuitenkin loput 42 potilasta N-CRS käsi ei ollut kunnollisia kudosnäytteistä, jotka täyttivät edellä mainitut kriteerit; Siksi vain kirurgisesti poistettu kudoksia kerättiin tässä potilasryhmässä. Näin ollen, yhteensä 132 (60 biopsia ja 72 poistetaan kirurgisesti) kudosnäytteitä käsiteltiin tässä tutkimuksessa.

Immunohistokemia ja teki

Anti-ihmis-CD44v9 rotan IgG monoklonaalinen vasta-aine (RV3), joka tunnustaa erityisesti ihmisen CD44v9, syntyi ja ystävällisesti professori Saya, Keio University. Tämä vasta-aine on käytetty aiemmissa tutkimuksissa [15, 16, 18]. Immunovärjäys CD44v9 suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [15]. Lyhyesti, joka on Vectastain Elite ABC Standard Kit (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA), jossa on lämmitetty aiheuttama, antigeeni-haku vaiheessa käytettiin suorittamaan immunohistokemiallisella värjäyksellä CD44v9. Ksyleeni on käytetty parafiini osat, jotka rehydratoitiin sarjassa etanolit. Lämpöä epitooppisup- haku suoritettiin Target Retrieval Solution (S-1699, DAKO, Tokio, Japani) autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Jäähdytyksen jälkeen huoneen lämpötilassa 20 minuutin ajan, levyt pestiin perusteellisesti Tris-puskuroidussa suolaliuoksessa (TBS), pH 7,6. Endogeeninen peroksidaasiaktiivisuus estettiin huoneenlämpötilassa käsittelemällä 0,3% vetyperoksidia metanolissa 30 min. Leikkeitä pestiin TBS: ssä ja sitten siirrettiin Shandon Sequenza värjäytymistä järjestelmä kosteutetussa kammiossa (Thermo Fisher Scientific K.K., Yokohama, Japani). Epäspesifinen vasta-aineen sitoutuminen estyi inkuboimalla osiot 10% tavallista kaniseerumia. Levyjä inkuboitiin hiiren monoklonaalisella vasta-aineella CD44v9 (RV3) (laimennettu 1: 12500, 0.2μg /ml) 4 ° C: ssa yön yli. Nämä leikkeet pestiin kolme kertaa TBS: llä ja inkuboitiin 30 minuuttia biotinyloidun kanin anti-rotta-IgG: tä (Dako, Tokio, Japani) laimennettuna 1: 200 vasta-aine liuotinta. Metal Enhanced DAB Substrate Kit (Thermo Scientific) käytettiin visualisoimaan CD44v9 ilme. Objektilasit vastavärjättiin hematoksyliinillä. Asianmukaiset negatiiviset ja positiiviset kontrollit käytettiin kussakin värjäys aikavälillä. Oli 2 eri negatiiviset kontrollit: 1) ei-immuuni rotan IgG2a-Negatiivinen Isotyyppikontrollit (Millipore, Billerica, MA, USA), joilla on sama konsentraatio kuin primaarinen vasta-aine ja 2) laimennus puskurilla ilman primaarista vasta-ainetta. Rintasyöpä kudos käytettiin positiivisena kontrollina,

Koska tyvisolut normaalissa epiteelissä ylemmän aerodigestive suolikanavan positiivisia värjäytymistä CD44v9 (Fig. 2A), laskeminen CD44v9-positiivisten solujen suoritettiin invasiivista rintamilla kasvaimia, jotka olivat vieressä tai ympäröimänä kasvaimeen liittyvää strooman ja yksinomaan laskea syöpäsoluja. Tämä lähestymistapa perustui myös spekuloitu, että CSCS, mukaan lukien HNSCC, usein asuvat kapealla sijaitsee kasvaimeen liittyvien strooman [9, 20]. Mikroskooppinen analyysi suoritettiin 2 riippumattomat tarkkailijat, mukaan lukien erikoistunut histopathologist (KT) ja keskimääräinen arvo annettiin pisteytys.

värjäytymisen voimakkuus saatu tyvisoluista normaalin epiteelin käytettiin kontrollina (A) . Kasvainnäytteet osoittanut voimakasta (B), kohtalainen (C), ja heikko (D) intensiteetit suhteessa kontrolliin (A). Vastaavat positiivinen (E) ja negatiivinen (F) värjäykset. Palkki osoittaa 200 um.

CD44v9 värjäytyminen pisteet määritettiin summan määrästä pisteet (eli prosenttiosuus positiivisten syöpäsolujen) ja laatupisteet (eli intensiteetti värjäyksen verrattuna värjäytyminen normaalien tyvisolujen) käyttäen menetelmää perin ehdottamaa Bankfalvi et al [21]. Määrä tulokset määriteltiin seuraavasti: 0%, mitään positiivista solua; 1, 1% -25%; 2, 26% ~75%; ja 3, 76% -100%. Laatu tulokset määriteltiin seuraavasti: -1, tasaisesti heikkoa värjäytymistä; 0, heterogeenisesti samanlaisia ​​tai voimakas värjäys; ja 1, homogeenisesti samanlaisia ​​tai voimakasta värjäytymistä. Tämän perusteella pisteytysjärjestelmä, näytteitä pisteiden -1~1 luokiteltiin CD44v9-negatiivinen ja näytteitä pisteiden 2~5 luokiteltiin CD44v9-positiivisia.

Arvostelu kasvaimen vastauksia CCRT

terapeuttiset vaikutukset CCRT on kirurgisista näytteistä arvioitiin perusteiden mukaisesti määriteltyjen yleisten sääntöjen kliiniset tutkimukset pään ja kaulan alueen syöpä (5

th Edition) toimittanut The Japan Society for pään ja kaulan alueen syöpä. Lyhyesti, vaikutukset jaetaan 4 laadut: Grade 0, ei vaikutusta; Grade 1, lievä vaikutus ≤1 /3 syöpäsolujen edelleen elinkelpoinen; Grade 2, voimakas vaikutus 1/3 syöpäsolujen elinkelpoisia; ja asteen 3, täydellinen vaste ilman eläviä soluja.

Tilastolliset analyysit

Wilcoxonin summa testiä käytettiin analysoimaan merkitystä CD44v9 ilmaisun biopsianäytteistä ja chemoradioselection (eli CRS versus N -CRS). Analysoimme väliset korrelaatiot ekspressiotasot CD44v9 vuonna biopsianäytteistä ja CD44v9 induktio ja hoitojen vaikutuksia poistaa kirurgisesti yksilöitä käyttäen Fisherin testiä. Vertaamaan tautikohtaisia ​​eloonjäämisen (DSS) hinnat välillä erityisryhmille, Kaplan-Meier dikäyrät ja Wilcoxonin testi käytettiin analysoimaan tilastollisia eroja. Yhden ja usean Coxin suhteellisen riskin malliin laskemiseen käytettiin vaikutusten clinicopathlogical tekijöiden DSS hinnat. Arvot

P

0,05 katsottiin tilastollisesti merkittäviksi. Kaikki analyysit vahvistettiin erikoistunut tilastotieteilijä (M. S).

Tulokset

immunovärjäyksin

edustaja kuvia CD44v9 värjäys on esitetty kuvassa. 2. jakauma pistemäärät 60 koepalanäytteistä oli seuraava: pisteet -1, 0; pisteet 0, 13; pisteet 1,15: pisteet 2, 24; Pisteet: 3, 4; pisteet 4, 4; ja pisteet 5, 0. Toisaalta, 72 kirurgisista näytteistä osoitti seuraavat jakelu: pisteet -1,0; pisteet 0, 11; pisteet, 1,30: pisteet 2, 18; Pisteet: 3, 13; pisteet 4, 0; ja pisteet 5, 0. Näin ollen CD44v9 positiivisten määrä oli 53% (32/60) varten kudosnäytteistä, ja 43% (31/72) varten kirurgisista näytteistä. Kolme ensisijainen sivustoja, suuontelon, hypopharynx ja kurkunpään, oli samanlainen ekspressiotasojen CD44v9 että koepalan (

N

= 60,

P

= 0,39) ja poistaa kirurgisesti (

N

= 72,

P

= 0,092) yksilöitä. Kun värjäävä tulokset verrattiin välillä pariksi biopsia ja kirurgisista näytteistä saadut identtiset 30 potilasta, 12 potilasta osoitti kasvua CD44v9 ekspressiota kirurgisista näytteistä (nimetty CD44v9 aiheuttama ryhmä), kun taas loput 18 potilasta (nimetty koska CD44v9-non aiheuttama ryhmä), tulokset olivat vähentynyt tai ennallaan. Pariksi biopsianäytettä koostuu kasvainten hypopharynx (9), suuontelon (13), ja kurkunpään (9). Joka kolmas sivustoja oli samanlainen hinnat CD44v9 induktion (38-44%).

Clinical kursseja, vastauksia CCRT ja leikkauksen jälkeisen CCRT

Kaplan-Meier -käyrät (Fig. 3A) käytettiin analysoimaan kliinisiä tuloksia CRS ja N-CRS potilasta (Fig. 1). Yhdenmukainen aiempien havaintojen CRS potilailla osoitti merkitsevästi (

P

0,001) parempi eloonjääminen [3, 5]. 72 poistaa kirurgisesti yksilöt osoittivat G1 (

N

= 58) tai G2 (

N

= 14) vasteita induktiohoitoa CCRT. Niistä 72 N-CRP potilasta, 54 koki pot-operative CCRT. Mitään merkittävää eroa ei havaittu Kaplan-Meier -käyrät potilaiden kanssa tai ilman pot-operative CCRT (

P

= 0,507).

(B) Tauti erityinen eloonjäämiskäyristä perustuu CD44 v9 positiivisuus koepalojen (n = 60) on saatu 30 chemoradioselected (CRS) potilasta ja 30 ei-chemoradioselected (N-CRS) potilasta. (C) Tauti erityinen eloonjäämiskäyristä perustuu CD44 v9 positiivisuus koepalojen saatu 30 N-CRS potilailla.

Association primaarituumorin sivuston chemoradioselection ja ennusteen

sitten tutki primaarikasvaimen sivusto vaikutti chemoradioselection ja potilaiden eloonjäämisen. Syövistä suuontelon osoitti selvästi alhaisempi chemoradioselection (1/40, 3%) kuin nielu (14/27, 52%) ja kurkunpään (15/35, 42%), mikä on yhdenmukaista yleinen yksimielisyys, että suuontelon syöpä on suhteellisen resistenttejä kemoterapia /säteily joukossa HNSCCs [22]. Kuitenkin Kaplan-Meier analyysit kirurgisesti poistettu näytteestä (

N

= 72), 5-v DSS nopeudella suuontelon syöpä (50%) oli samanlainen (P = 0,80) kuin hypopharynx (65%) ja kurkunpään (55%).

ilmentäminen CD44v9 että biopsianäytteistä

arvioimiseksi kliininen merkitys vaikutuksesta luontainen CD44v9 ilmentymisen chemoradioselection ja potilaiden eloonjäämisen, vertasimme ilmentymistasojen CD44v9 60-käsittelemättömän biopsianäytteistä saatu CRS (

N

= 30) ja N-CRS (

N

= 30) potilaista. Ei ollut merkittävää eroa CD44v9 ilmentymisen tasojen CRS ja N-CRS näytettä (

P

= 0,8289). Lisäksi CD44v9 positiivisuus ei vaikuttanut Kaplan-Meier DSS käyrät joko CRS plus N-CRS kohortti (

P

= 0,64; Fig. 3B) tai N-CRS kohortti (

P

= 0,97; Fig. 3C). Samanlaisia ​​tuloksia saatiin yksiulotteista Coxin suhteellista riskin malliin (HR: 1,086, 95% CI: 0,68-1,72;

P

= 0,72). Nämä tulokset viittaavat siihen, että ekspressiotasot luontaisia ​​CD44v9 on biopsianäytteistä eivät ole käyttökelpoisia ennustaja chemoradioselection ja potilaan eloonjäämisen.

ilmentäminen CD44v9 on kirurgisesti poistettu näytteet

Koska edellä esitettyjen havaintojen analysoimme onko ekspressiotasot CCRT aiheuttaman CD44v9 korreloivat epäsuotuisa kannalta: kirurgisesti poistettu yksilöt saadaan N-CRS potilasta. Perustana tälle analyysi oli edellisen havainnon, että induktiokemoterapiaa ilmeisesti parantanut osajoukko CD44v9 ilmentävien solujen HNSCC kasvaimissa [16]. N-CRS potilailla CD44v9-positiivisten ryhmässä (

N

= 31) osoittivat merkitsevästi (

P

= 0,008) huonompi DSS kuin CD44v9-negatiivinen ryhmä (

N

= 41) (Fig. 4A). Koska se vahvisti, että ensisijainen kasvaimen ei vaikuta DSS kuten edellä on mainittu, olemme tutkineet vaikutuksia neljän tekijän eli, T, N, kasvaimen vastauksia CCRT, ja CD44v9 positiivisuus on DSS määrä potilaita sekä yhden muuttujan ja monimuuttuja analyysien Coxin suhteellisen riskin malliin (taulukko 2). Yksiulotteista analyysit osoittivat merkittävästi lisääntynyt riski tautikohtaiset kuoleman CD44v9-positiivisilla potilailla (HR: 2,033, 95% CI: 1,071-3,859;

P

= 0,03) ja kehittyneitä N (HR: 3,091, 95 % CI: 1,045-9,060;

P

= 0,0397). Monimuuttuja analyysit, CD44v9 positiivisuus (HR: 3,145, 95% CI: 1,235-8,008,

P

= 0,0163) ja kehittyneiden N vaiheessa (HR: 3.525, 95% CI: 1,054-9,060,

P

= 0,0228) olivat merkitsevästi korreloi huonon ennusteen (HR: 3.140, 95% CI: 1,230-8,017;

P

= 0,0167), mikä viittaa siihen, että näihin neljään tekijään, CD44v9 ekspressiotaso on hyödyllinen biomarkkereiden N-CRS väestö, yhdessä kehittyneen N vaiheessa.

(B) Diseasespecific eloonjäämiskäyristä 30 N-CRS potilasta, jotka olivat pariksi koepala ja poistaa kirurgisesti näytteitä. Potilaat jaettiin 2 ryhmään niiden tasojen CD44v9 ilmaisun ennen ja jälkeen samanaikaista sädehoitoa.

vertailu pariksi näytteistä

analysoidaan onko CD44v9-positiivisuus näyt- teessä korreloi induktion CD44v9 on kirurgisesti poistettu yksilöitä. Kiehtovan, korotukset CD44v9 pisteet havaittu etupäässä (

P

= 0,0236) potilailla, joilla CD44v9-negatiivinen biopsianäytteistä (64%, 9/14) kuin CD44v9-positiivisilla potilailla (19%, 3/16) . Ilmaisu tasot CD44v9 että biopsianäytteistä ei korreloinut arvosteluun kasvaimen vaste CCRT arvioitiin pariksi poistaa kirurgisesti näytteet (

P

= 0,3992). Olemme edelleen verrattuna DSS käyrien välissä CD44v9 aiheuttama ryhmä (

N

= 12) ja CD44v9-non aiheuttama ryhmä (

N

= 18) ja totesi, että entinen oli merkittävästi (p = 0.04) huonompi DSS korko (Fig. 4B).

Yhteenvetona nämä tulokset vahvasti osoittivat, että CCRT aiheuttama CD44v9 ilmaisun sijaan luontaista ilme on terapeuttinen este chemoradioselection.

keskustelu

viime vuosikymmenen aikana, hoidon kulmakivi pitkälle HNSCC on siirtynyt alkuperäisestä radikaali kirurginen resektio yhdistettynä leikkauksen jälkeisen sädehoidon annoksesta tehostettua hoitoa protokollia, jotka on suunnattu ensisijaisesti elimen säilyttäminen [23, 24]. Tämä suuntaus on selvästi edennyt äskettäin käyttöön CCRT (esim kliiniset kokeet johdolla Sädehoito Oncology Group (RTOG)) ja jaksottainen hoito käsittää induktio kemoterapia ja CCRT (esim Tax 324 protokollat), jotka ovat johtaneet lisäparannuksia elinten säilyttämiseen, Paikallista ohjaus, ja selviytyminen [25-28]. Siitä huolimatta, kuten viimeaikaiset tutkimukset tai arvioita, nämä protokollat ​​näyttävät saavuttaneen ylärajaa ihmisen toleranssin akuutin ja subakuutin toksisuuden jotka ovat aiheuttaneet usein laryngoesophageal toimintahäiriö ja mahdolliseen hoitoon liittyvät kuolemat [29-31]. Tästä syystä näyttää tarpeen pienentää nykyistä liiallinen intensiteetti hoidon kehittyneiden HNSCC optimoimalla hoitosuhde. Toisaalta, olemme käyttäneet chemoradioselection strategia käyttää täydellistä etuja radikaali resektio ja CCRT, välttäen vakava akuutti ja myöhään toksisuudet. Aiemmissa tutkimuksissa CRS potilailla osoitti merkitsevästi paremmin selviytymisen toiminnallinen kurkunpää kuin N-CRS potilaiden [3, 5], sopusoinnussa havaintojen tämän tutkimuksen. Nämä tulokset viittaavat siihen, että chemoradioselection strategia voi olla lupaava lähestymistapa kehittyneiden HNSCC, jotka voivat optimoida hoitosuhde. On kuitenkin selvää, että osuus CRS potilaiden olisi nostettava edelleen parantaa määrien elimen säilyttäminen ja potilaan selviytymistä. Tunnistaminen ja kohdennusmolekyylejä että tilanteen seuraukset chemoradioselection näyttää olevan erittäin tehokas strategia tämän tavoitteen saavuttamiseksi [1]. Kuten edellä mainittiin, nykyisen käsitekehyksestä syövän biologian, CSCS lienevät tärkeimmät syyt solujen vastareaktioita CCRT; Näin ollen, CSCS odotetaan liittyvän mekanismin vaimentaa tehoa chemoradioselection [1, 9].

Tässä yhteydessä olemme arveltu, että pitkälle HNSCC ilmaus oletetun CSC markkeri, CD44v9, voi vastuussa solujen resistenssin chemoradioselection. Tuloksemme osoittivat selvästi, että ilmaus CD44v9 korreloi huonon tuloksia potilaista hoidettiin chemoradioselection strategiaa, joka vahvisti hypoteesia. Lisäksi olemme toimittaneet ensimmäiset kliiniset todisteet siitä, että CD44v9 voivat olla hyödyllinen biomarkkereiden ja siten hyödynnettävissä molekyylikohteena hoidossa kehittyneen HNSCC. Lisäksi, muiden kliinis tekijöitä, jotka on käytetty tavanomaisia ​​prognostisia markkereita HNSCC ekspressio CD44v9 merkittävästi liittyvät huonoon ennusteeseen potilailla, monimuuttuja-analyysit, sekä pitkälle N vaiheessa (taulukko 2). On huomionarvoista, että CD44v9 osoitti alempaa

P

-arvo kuin N vaiheessa. Siitä huolimatta meidän havainnot että CCRT aiheuttama CD44v9 ilmaisukeinoja eikä luontainen ilmaus oli ennusteen arvioinnissa tulisi tulkita huolellisesti. Oletettavasti CD44v9 ilmaisu ei yksin riitä osoittamaan omaisuutta stemness syöpäsoluissa; CD44v9-ilmentäviä syöpäsolut ovat todennäköisesti muodostuu CSCS ja ei-CSCS. Näin ollen, kliininen merkitys CD44v9 ilmentymisen chemoradioselection strategiaa voitaisiin selittää ainakin 3 skenaarioita, kuten kuvassa. 5. Kun kasvaimet eivät sisällä CD44v9-ilmentävät CSCS, yhteensä solukuolemaa CCRT on mahdollista (ts CRS, Fig. 5A). Toisaalta, kun kasvaimet sisältävät CD44v9-ilmentäviä CSCS ne voivat selviytyä CCRT (eli N-CRS; Fig. 5B). Lisäksi on mahdollista, että CCRT, toimii selektiivinen paine voivat aiheuttaa stemness in CD44v9-ilmentävät ei-CSCS ja johtaa syöpäsolun eloonjäämisen (eli N-CRS, Fig. 5C). Nämä valikoiva jäänteitä CSCS pidetään lähteitä paikallisen invaasion sekä alue- ja kaukaisia ​​etäpesäkkeitä, joka sitten pahentaa tuloksia N-CRS potilasta. Edellisessä toteamukset induktiokemoterapiaa kasvattaa CD44v9 ilmentävä solupopulaatio suusyövän [16], kun yhdessä löydämme että CCRT aiheuttama CD44v9 ilmentymisen merkittävästi korreloi huonon ennusteen, tukevat teoriaa, että kemo- /sädehoito, tietyn seikka, voi toimia voimana valikoivan lakaista tai valikoiva painetta, joka ajaa HNSCC evoluutio, joka johtaa syntymistä pluripotenttien CSCS [1]. Nämä skenaariot (Fig. 5) näyttävät selittää, miksi ei luontaista, mutta CCRT aiheuttaman CD44v9 ilmentyminen oli hyödyllinen biomarkkerina meidän chemoradioselection strategiassa. Vuonna biopsianäytteistä, se ei ole mahdollista erityisesti havaita CD44v9-ilmentävät CSC tai CD44v9-ilmentävät ei-CSC väestöstä, joka lopulta hankkia stemness jälkeen CCRT: eli erottaa kuvio B ja C A. Toisaalta, että kirurgisesti poistettu näytteitä N-CRS potilailla, joille tehtiin CCRT, The CD44v9-ilmentäviä soluja on tarkoitus erittäin rikastettu CSCS, arvon lisääminen CD44v9 ilmentymisen biomarkkerina.

(A) CD44v9-ilmaisemisesta -CSCs ovat herkkiä CCRT. Luonnostaan ​​CD44v9-ilmentävien CSCS (B) tai CCRT aiheuttama CD44v9-ilmentävien CSCS (C) voi selvitä CCRT. Nämä CD44v9-ilmentävät CSCS pidetään erittäin invasiivinen ja metastaattinen. CSC, syöpä kantasolujen; CCRT, samanaikainen sädehoitoa; CRS, chemoradioselected; ja N-CRS, ei-chemoradioselected.

Sulfasalazine on hyvin ominaista erityinen estäjä XCT välittämää kystiini liikenteen [17] ja siksi odotetaan riistää CD44v9 ilmentävien syöpäsolujen puolustusmekanismi vastaan ​​ROS. Todellakin, anto sulfasalatsiinin tehostetun solunsisäisen aktiivisuuden ROS

in vivo

määrityksissä [17] ja herkistyneet HNSCC solulinjat CDDP [16]. Sen vuoksi on odotettavissa, että yhdistelmähoito sulfasalatsiinin ja CCRT voi merkittävästi voimistaa chemoradioselection herkistämällä sekä sisäsyntyinen ja CCRT aiheuttama CD44v9-ilmentävien CSCS (Fig. 5A ja 5B) ja CCRT, ja parantaa tuloksia potilailla, joilla on pitkälle HNSCC. Koska sulfasalatsiini on kaupallisesti saatavilla huume, joka on pitkään käytetty hoitoon potilaille, joilla on haavainen paksusuolen tulehdus ja nivelreuma, kliinisiä kokeita tämän pöytäkirjan ovat nyt miettiminen.

Yhteenvetona CD44v9 kohdistaminen saattaa tarjota uuden lähestymistavan kliinisesti toteutettavissa CSC kohdistettuja hoito HNSCC jotka voivat voimistaa tehoa chemoradioselection ja parantaa elimen säilyttäminen ja selviytymistä.

Kiitokset

Tekijät Kiitokset prof Hideyuki Saya tarjota meille CD44v9 vasta-aineella ( RV3) ja hänen rakentavasta kommentteja tähän tutkimukseen.