Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Tutkimukset potilailla, joiden paraneoplastic neurologisia sairauksia (PND) ovat osoittaneet, että apoptoottinen kasvain toimii mahdollinen voimakas laukaista aloittamiseksi luonnossa esiintyvän kasvaimen immuniteetin. Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli arvioida toteutettavuus, turvallisuus, ja immunogeenisyyttä apoptoottista kasvainta autologisten dendriittisolujen (DC) rokote.

menetelmät ja havainnot

Olemme mallinnettu PND kasvain immuniteetin kliinisessä tutkimuksessa, jossa apoptoottisia allogeenisten eturauhassyövän soluja käytetään tuottamaan apoptoottisen kasvainta autologisten dendriittisolujen rokotetta. Kaksikymmentäneljä eturauhassyöpäpotilaisiin immunisoitiin vaiheen I, satunnaistetussa, single-blind, placebo-kontrolloitu tutkimus turvallisuuden arvioimiseksi ja immunogeenisuutta rokotteen. Rokotukset olivat turvallisia ja hyvin siedettyjä. Mikä tärkeintä, Huomasimme myös, että rokote oli immunogeeninen aiheuttaen viivästyneen tyypin yliherkkyys (DTH) vastauksista ja CD4 + ja CD8 + T-solujen lisääntymistä, joilla ei ole vaikutusta FoxP3 + säätelijä-T-solujen. Tilastollisesti merkittävä kasvu T-solujen lisääntymisen vasteet eturauhaskasvainsoluissa

in vitro

(p = 0,002), vähennys prostataspesifisen antigeenin (PSA) kaltevuus (p = 0,016), ja kaksinkertainen kasvu PSA kaksinkertaistaa aika (p = 0,003) havaittiin kun vertasimme tiedot ennen ja jälkeen rokotuksen.

Johtopäätökset

apoptoottisen syöpäsolun rokote mallina luonnossa esiintyvien kasvainten immuunivasteita PND potilailla tarjoaa turvallisen ja immunogeeninen kasvain rokote. (ClinicalTrials.gov numero NCT00289341).

Trial Rekisteröinti

ClinicalTrials.gov NCT00289341

Citation: Frank MO, Kaufman J, Tian S, Suárez-Fariñas M, Parveen S , BLACHERE NE, et ai. (2010) käyttää luonnossa esiintyviä kasvainimmuniteetin: kliinisessä rokote Trial eturauhassyövässä. PLoS ONE 5 (9): e12367. doi: 10,1371 /journal.pone.0012367

Editor: Torbjörn Ramqvist, Karolinska Institutet, Ruotsi

vastaanotettu: 1 maaliskuu 2010; Hyväksytty: 22 Kesäkuu 2010; Julkaistu: 1. syyskuuta 2010

Copyright: © 2010 Frank et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Burroughs Wellcome Fund ja Doris Duke Foundation (MLA), National Institutes of Health (NIH) (R01 CA85784 ja RBD), Rockefeller University Hospital Clinical and Translational Science palkinnot (CTSA) (myöntää UL1 RR024143) National center for Research Resources NIH, Leslie Misrock Memorial Fund, ja David Koch. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Kasvain koskemattomuutta, jos potilaalla on paraneoplastic neurologisia sairauksia (PND) on tutkittu toivoa paljastaa periaatteita, joita voidaan soveltaa väestössä syöpäpotilaiden [1], [2]. Nämä tutkimukset osoittivat, kasvaimen antigeeni-spesifinen CD8

+ T-solujen perifeerisen veren PND potilailla [3], [4], mutta myös syntyy paradoksi. PND antigeenejä ilmaistaan ​​yleensä aivoissa, ja ne ektooppisesti ilmaistaan ​​kasvaimissa, mutta ei ilmaistu dendriittisolut (DC: t), jotka ovat tarpeen prime naiivia T-soluvasteita. [5] Perustuu havaintojen kanssa lupus antigeenejä [6], me arveltu, että apoptoottisten solujen voisi olla tehokas keino antigeenin siirtämistä DC ja esityksen MHC I aktivointiin CD8

+ T-solujen [7]. Tämä osoittautui oikeaksi sekä kasvaimen [3] ja viruksen vasta [8], ja on todennäköistä, että fagosytoosin apoptoottisten solujen toimivat yleisenä keino, jolla immuunijärjestelmä selvitykset antigeenejä koko elämän. Insights tutkimalla luonnon kasvain immuniteetti PND tarjoavat pakottavia alustasta, johon malli kliinisissä tutkimuksissa [2], [9], [10].

Useat havainnot tukevat ehdotusta, että apoptoottinen kasvainsolut voivat olla voimakas antigeenin lähteenä stimuloimiseksi isännän immuunivasteita

in vivo

. Teoriassa kaikki mahdolliset kasvaimen antigeenejä sisällä apoptoottinen kasvainsolun, ja useita epitooppeja kustakin antigeeni, voi olla rajat esittämä DC, jossa käsitellään antigeeni voidaan sijoittaa kaikille (yleensä kuusi) MHC I alleeleja. Tämä tarjoaa huomattavia etuja verrattuna peptidilisätty DC protokollia, jossa tutkijan on tunnettava kasvaimen antigeeni, on valittava erityinen MHC I-rajoittuneita peptidejä antigeenin stimulaatiota. Antigeenin esittelystä apoptoottisia soluja on arvioitu olevan 10,000-50,000 tehokkaampi kuin vapaa peptidi lastauksessa MHC-molekyylien DC [11], [12]. Apoptotic materiaali käsitellään luonnollinen polku: apoptoottisten solujen sisäistetään DC-rajoitettua reseptoreihin, kuten α

Vp

5 integriinireseptoriantagonisteja [13], sen jälkeen prosessoidaan DCitä erilliset reitit [14]. Nämä DC: t sitten tuottaa sekä MHC I ja MHC II-peptidin epitoopit [13], joka johtaa aktivaatioon sekä CD8

+ ja CD4

+ T-soluja. Koska kyky DC: iden rajat esittää apoptoottisten solujen aktivoimiseksi efektori- CD8

+ T-soluja tarvitaan signaalien CD4-auttajasolujen [15], kyky apoptoottisten lastattavan materiaalin sekä MHC I ja MHC II-molekyylejä on erityisen tärkeää harkittaessa sen potentiaali immunoterapiassa.

DC esittää apoptoottisten kasvainsolujen stimuloida T-soluvasteita eläimissä ja

in vitro

[16]. Kliinisesti, useissa tutkimuksissa on käytetty tappoi kasvainsolut rokotteen tutkimukset, mukaan lukien glia [17] – [21], eturauhassyöpä [22], melanooma [23], rintojen [24], munasarjasyöpä [25] ja lasten kiinteän kasvaimen soluihin [26] (tarkistetaan [9], [16], [27]). Nämä tutkimukset eivät ole keskittyneet apoptoottisen kuoleman sinänsä, vaan tappanut kasvainsolujen eri tavoin (esim. Jäädyttää-sulatus, tai suuria määriä UVB ja gamma-säteilytys), mikä johtaa epätäydellisesti tunnettu seoksia nekroottisen ja apoptoottisen solukuoleman. Tulkinta näistä tutkimuksista vaikeuttaa kiista immunogeenistä tehoa eri kuolleita soluja [28]. Kuitenkin jotkut tutkimukset ovat osoittaneet mahdollisuuksia immunologisen ja kliininen vaste oman veren DC esittää kuolleiden kasvainsolujen [19], [23]. Täällä ryhdyimme tarkemmin testata suhde induktion PND kaltainen kasvain immuunivasteet ja kehittämiseen kliinisen rokotteen. Me aiheuttama apoptoottisen kuoleman LNCaP eturauhassyövän solut, ja mahdollistanut niiden fagosytoituvat autologisen DC syntyvät eturauhassyöpä potilaiden ääreisverenkierron monosyytit; kuten DC aikaisemmin osoitettu stimuloivan sekä CD8

+ ja CD4

+ T-solujen

in vitro

[29] ja B16 hiiren melanoomaa malli DC rajat esittämällä apoptoottisten kasvain oli tehokas estämään kasvaimen kasvua (BLACHERE et al., julkaisematon data). Kirjoittajat raportoivat turvallisuuden ja immunogeenisuuden DC /apoptoottisten LNCaP eturauhaskasvainsoluissa kontrolloidussa tutkimuksessa 24 eturauhassyöpäpotilaille.

Tulokset

Tutkimus Väestö

Kaksikymmentäneljä peräkkäisen sopivaa potilasta rokotettiin DC /LNCaP yhdessä ohjaus rokotukset. Kaikkiaan +28,4-+78.900.000 (keskiarvo 50,3 Me) DC rajat esittämällä apoptoottisten LNCaP-kasvainsoluja annettiin potilasta kohden, jaettuna 4 annokseen, kukin 2 viikon välein (kuva 1). Tuolloin tutkimuksen aloitusvaiheessa, 11 potilasta 12 Arm 1 ja 10 potilasta 12 Arm 2 oli vain biokemiallisten uusiutuminen ilman muuta näyttöä etäpesäkkeitä (taulukko 1). Keski-ikä potilailla oli 62,5 ± 6,7 ja 65,7 ± 9,2 vuotta ja keskimääräinen Gleason pisteet lähtötilanteessa oli 7,25 ja 7,17 in Arms 1 ja 2, vastaavasti.

Potilaat seulotaan ja satunnaistettiin 1 2 aseiden , joissa jokaisessa on 12 potilasta. Potilaat molemmat kädet olivat sokeita aikana rokotteen /lumelääke vaiheiden kunnes viikolla 8. potilaalla Arm 1 jatkui jälkeisen rokotteen vaiheessa kun potilaalla Arm 2 ylittäneet rokotteeseen vaiheeseen ennen post-rokotteen vaiheessa.

DC rokotteen ominaisuuksista

DC: itä viljellään kanssa LNCaP tai LNCaP-M1-solut, jotka olivat yli 90-% apoptoottisia (kuvio 2). Kaikki DC rokote-annoksina täyttänyt kriteerit elinkelpoisuuden ja kypsyyttä (taulukko 2 ja kuva 2). DC toiminto seurattiin allo-MLR; DC stimuloi 2 x 10

5 allogeenisten T-solujen sisällyttämään ≥10

5 CPM

3H-tymidiinin päivänä 5 18 tuntia

3H tymidiiniä pulssi (tuloksia ei ole esitetty).

UV-säteilyllä (+ UV) nimenomaisesti indusoi apoptoosin LNCaP kuten osoitetaan 96% Caspatag + TOPRO + värjäämällä 38 tunnin kuluttua UV. DC viljellään apoptoottiseen LNCaP (Vaccine) ovat kypsät, 96% CD83-positiivisia soluja. Näytetyt tiedot edustavat kaikkia 24 valmistetut rokotteet.

Turvallisuus

esiintyvyys injisointikohdan ja systeemisiä reaktioita rokote on esitetty taulukossa 3. Mitään rokotetta liittyviä vakavia haittavaikutuksia ei havaittu. Vain 1 myrkyllisyys oli merkitsevästi erilainen plaseboa ja rokote ryhmien yksöissokkoutetulla vaiheen tutkimuksesta: luokka 1 tai 2 injektiota reaktiot, joita esiintyi 11 potilasta 12 rokoteryhmässä (p 0,001), mikä johtui rokote (mutta ei lumelääke) tuottavan DTH kaltaisia ​​vasteita. Ei ollut oireenmukaiseen todisteita autoimmuunisairaus, jos potilaalle, kuten vaskuliitti, kilpirauhastulehdus, koliitti, neurologiset tauti, hormonihäiriö tai kardiomyopatia.

Immuunivaste

Kaikki potilaat, jotka saivat DC /keyhole limpet hemosyaniini (KLH), rokote oli positiivinen DTH-vaste KLH: hon. Yhdelläkään 24 potilaista oli vaste LNCaP lysaatin lähtötilanteessa (viikko 0). Kaikki 24 potilasta saivat LNCaP lysaatin osana DTH paneelien viikoilla 3, 5, 7, ja 9. Niistä 24 potilaasta (67%) oli DTH vastaus LNCaP lysaatin ainakin 1 näistä 4 ajankohtina, kanssa korkein potilaiden osuus (54,2%) reagoimalla LNCaP lysaatin 2 viikkoa viimeisen tehosteannoksen (viikko 9). Vasteet säilyivät 9 13 potilasta (69%) on 22 viikkoa sen jälkeen, kun viimeinen tehoste (viikko 29, kuvio 3). Vastauksilla LNCaP lysaatin olivat tilastollisesti merkitseviä kaikkina ajankohtina 95%: n luottamusväli. Normaali suolaliuos, annetaan kontrollina, oli negatiivinen kaikissa aikapisteissä kaikilla potilailla.

Vaccine indusoi DTH-vaste ja LNCaP solulysaateista ruiskutetaan ihonsisäisesti mitattiin ilmoitettuina aikoina. Viikko 1 oli lähtötilanteessa, jolloin potilaalla ei DTH vasteet (tuloksia ei ole esitetty). DTH vasteet katsottiin positiivinen ≥5 mm punoitus luettiin 48 tunnin kuluttua sijoitus. Palkit ilmaisevat potilaiden määrä positiivisia vastauksia kunakin ajankohtana. Virhe pylväät edustavat 95%: n luottamusväli. Pisteviiva trendi potilaiden osuus, joilla positiivisia vastauksia kunakin ajankohtana. Tilastollisesti merkitsevä positiivinen DTH vastauksia LNCaP solulysaattiin ilmestyi viikolla 3 (ensimmäistä kertaa pisteen jälkeen lähtötilanne) ja vasteet olivat edelleen läsnä 9 13 potilaalla (69%) 22 viikon kuluttua viimeisestä tehosteannoksen jälkeen (viikko 29).

3H tymidiiniä lisääntymisen määrityksessä käytettiin arvioimaan reaktiivisuus T-solujen KLH-proteiinia ja eturauhasen tuumorisoluihin (joko niitä, joita käytetään rokottamiseen (LNCaP) tai toiseen eturauhassyövän solulinja (PC3) ). Negatiivinen kontrolli antigeenejä mukana autologisten monosyyttien ja merkityksetön solulinja (3T3). 3T3 influenssa käytettiin positiivisena kontrollina. T-solut kerättiin viikolla 0 (pre-rokote) leukafereesejä ja viikolla 13 (post-rokote) leukafereesejä (kuvio 1). Ollakseen pätevä, kukin yksittäinen runsaudenmäärityksessä on ollut havaittavissa influenssa vasteen ennen ja jälkeen rokote. Kaksi 24 potilaalla ei havaittu influenssa vastetta ja siten jätettiin analyysin ulkopuolelle. 22 arvioitavasta potilaasta, pidetään ryhmänä, ei ollut tilastollisesti merkitsevää eroa T-soluvaste on influenssa, ennalta versus post-rokote (p = 0,310, tuloksia ei ole esitetty). Oli tilastollisesti merkitsevä T-soluvaste KLH post-rokotteen vs pre-rokotetta (p = 0,008), samoin kuin apoptoottista LNCaP (p = 0,017) ja apoptoottisten PC3-kasvainsoluja (p = 0,011) (kuvio 4a). Ei ollut tilastollisesti merkittäviä eroja ennen vs post-rokotteen T-soluvasteita antigeeniä esittelevät solut (APC: t) yksinään (p = 0,160), hallita antigeenejä, 3T3 (p = 0,070) tai autologisilla monosyyteillä (p = 0,156) (taulukko 4, kuva 4a ja tietoja ei näytetty).

vertailu ennen ja jälkeen rokote bulk T-soluvasteita eturauhasen antigeeni. a. Apoptoottinen tuumorisoluja (LNCaP ja PC3, tai merkityksetön solulinja (3T3)) tai KLH-proteiinia oli viljeltiin yhdessä potilaan perifeerisen veren monosyytit ja syngeenisten irtotavarana T-solut saatiin potilailta ennen tai jälkeen rokotuksen. Monosyytit ilman ulkopuolisen antigeenin (Ei Ag) tai apoptoottisten 3T3-soluja (Ctrl Ag), toimi negatiivisena kontrollina. Proliferaatio arvioitiin päivänä 5 18 tuntia

3H tymidiiniä pulssi. Tiedot esitetään 22 24 potilasta. Ero leviämisen (post miinus ennalta rokote) kullekin antigeenille ryhmä näkyy rasiakuvaajien. Arvot ilmoitetaan ovat keskimäärin pulsseina minuutissa (CPM) kolmen kuopan. Mediaani ero kullekin antigeenille ryhmä näkyy linjan ruutuun. Jokainen potilas, joka on Peränpitäjänä osoitetaan ainutlaatuinen symboli. Tilastollisesti merkitseviä eroja ennalta rokotteen vs. jälkeinen rokote T-solujen proliferatiiviset vasteet havaittiin KLH (p = 0,008), LNCaP (p = 0,017) ja PC3 (p = 0,011). b. Bulk T-solut saadaan rokotuksen värjättiin CFSE ja viljelty DC rajat esittämällä eturauhasen antigeenejä, LNCaP ja PC3, tai merkityksetön solulinjan (293-solut, Ctrl Ag). Solujen lisääntyminen päivänä 5, arvioitiin CFSE väriaine laimentaminen, näkyy x-akselilla ja CD8 ilme näkyy y-akselilla. Prosenttiosuudet esitetty edustavat CD8 + soluja, jotka ovat jakautuneet sisällä pääosa T-solujen populaatio. Neljä viidestä ylimääräistä potilaiden testattu osoitti samanlaista CD8 + vastauksia; Esitetyt tiedot ovat potilaan # 15.

Perustuu DTH data (kuva 3) ja

3H tymidiiniä leviämisen data (kuva 4a), laskimme ja sijoittui DTH-indeksi ja leviämisen indeksi määrittää, oliko yhdistyksen välillä. Positiivinen korrelaatio havaittiin (0,55 käyttäen Spearmanin (p = 0,008)), mikä osoittaa, että potilaat, joilla oli positiivinen DTH vastauksia LNCaP lysaatin taipumus myös olla T-solujen lisääntymisen vasteet apoptoottisten LNCaP

in vitro

.

leviämisen vaste arvioitiin myös CFSE väriaine laimennus määritys [30]. 5 potilasta 6: sta, joka on CD8 + T-soluvasteen spesifinen eturauhasen antigeenejä havaittiin (kuvio 4b ja tietoja ei ole esitetty). Me vahvisti, että kaikki kuusi potilasta testattiin oli myös CD4 + T-solujen vaste eturauhasen antigeenejä.

harkitsi mahdollisuutta, että lisääntynyt T-soluproliferaation vastaus rokotuksesta voi koskea laskuun säätelijä-T-solujen liikkeessä. Voit selvittää prosenttia CD4 + T-solujen, jotka ovat säätelijä-T-solujen ennen ja jälkeen rokotettu verinäytteet, PBMC värjättiin ja arvioitiin Foxp3 lauseke (kuva 5). Eroa (p = 0,924) havaittiin Foxp3 ilmaisun verrattiin ennen ja jälkeen rokotuksen CD4 + T-solut 15 potilasta (taulukko 4).

a. FACS profiilia Foxp3 ilmaisun ennen ja jälkeen rokotettu ääreisverenkierron aidatulla CD4 + T-soluja. Edustava potilas (# 13) on esitetty. b. Rasiakuvaajien prosentuaalisen Foxp3 + soluja (aidatulla CD4 + T-solujen) edeltäviä ja rokotuksen 15 edustavasta potilaasta, mukaan lukien koko joukko proliferatiivisia vasteita ja muutokset PSA rinteessä. Mediaani on osoituksena +. Vieraat havainnot on merkitty •. Eroa rokotuksia edeltäneeseen vs. jälkeinen rokote T-solujen ilmentymisen Foxp3 (p = 0,924) havaittiin.

PSA vastaus

prostataspesifisen antigeenin kahdentumisaikoina (PSADT) laskettiin kullekin potilaalle kussakin vaiheessa tutkimusta. Mediaani kaksinkertaistui aika edeltävässä rokotteen faasi oli 4,5 kuukautta, ja tämä nousi 5,4 ja 8,9 kuukauden ajan rokotteen ja post-rokotteen vaiheita vastaavasti. Siellä olivat tilastollisesti merkitseviä eroja PSADT välillä ennen ja jälkeen rokote vaiheet (p = 0,003) sekä rokotteen ja post-rokote vaiheet (p 0,001), mutta ei välillä pre-rokote ja rokote vaiheet (p = 0,915) .

Vertasimme myös kaltevuus PSA nousun välinen 3 tutkimuksen vaiheissa. Kahdeksantoista 23 (78%) potilaalla, oli väheneminen PSA kaltevuuden välillä ennen ja jälkeen rokote vaiheissa. Kun otetaan huomioon kaikki 23 potilasta, oli tilastollisesti merkittävä lasku PSA kaltevuuden välillä pre-rokotteen ja post-rokote vaiheissa -0,093 /kk (p = 0,016, Kuvio 6 ja taulukko 5). Ei ollut tilastollista eroa PSA kaltevuuden välillä pre-rokote ja rokote vaiheet (-0,018 /kk, p = 0,681) tai rokotteen ja post-rokote vaiheissa (-0,075 /kk, p = 0,098). Arvioimme, onko tämä PSA kaltevuuden muutos saattaa johtua kehittämisestä seerumin anti-PSA-vasta-aineita. Pre- ja post-rokote seerumi arvioitiin mittaamalla seerumin vasta-reaktiivisuus puhdistettua PSA proteiinin Western blot käyttäen PSA monoklonaalisia vasta-aineita positiivisena kontrollina. Olemme löytäneet mitään todisteita vasta-aineen reaktiivisuuden PSA (tietoja ei esitetty). Silti emme voi sulkea pois, että vasta-aineet eivät ole havaittavissa johtuen antigeeni /vasta-kompleksit muodostetaan ja että nämä jotenkin auttoi clearing PSA seerumista.

Kaavio keskimääräisestä log

2 (PSA) kaltevuus per selvitysvaiheessa (yhtenäinen viiva); vertailun, ekstrapolointi ennalta rokote keskiarvo log

2 (PSA) kaltevuus on esitetty (katkoviiva). Perustuen lineaarinen ura malli, keskimääräinen muutos PSA kaltevuus 23 potilaita ennen jälkeiseen rokote vaiheissa on -0,093 /kk (p = 0,016). Yksi potilaan PSA-arvot eivät olleet mukana analyysissä hänen pre-rokote arvot vaikuttivat muu käsittely lähellä alkua Tutkimukseen osallistumisen. Kolme muuta potilasta aloitti muun hoidon aikana tai sen jälkeen rokotuksen; PSA-arvot saadaan, kun tätä kohtaa ei sisällytetty analyysiin.

sitten kerrostunut tutkimusväestö kaksi enemmän kiinteitä vaikutuksia yhdistettyä mallia ja suoritti uskottavuusosamäärä; potilaat, joilla oli DTH-vaste ja LNCaP lysaatti oli merkittävästi erilainen PSA kaltevuuden muutos verrattuna niihin, jotka ei ollut DTH-vaste on LNCAP lysaatti (p = 0,004). Kuusitoista 24 potilaalla oli DTH vasteet LNCaP vähintään yhdessä aikapisteessä. Tässä potilasryhmässä oli tilastollisesti merkitsevä muutos PSA kaltevuuden välillä pre-rokotteen ja post-rokote vaiheissa (-0,105 /kk, p = 0,020, taulukko 6). Kahdeksan 24 potilasta ei ollut vastausta LNCaP lysaatin milloin tahansa vaiheessa, ja näillä potilailla ei ollut tilastollisesti merkitsevää muutosta kaltevuuden välillä pre-ja post-rokote vaiheissa (-0,033 /kk, p = 0,631). Kun me kerrostunut tutkimusväestö 2 ryhmään perustuen PSA-arvo lähtötilanteessa, todennäköisyys suhde testi osoitti merkittävästi erilainen PSA kaltevuuden muutos näiden kahden ryhmän (p 0,001). Kun sekoitettu malli, huomasimme, että ne, jotka oli PSA ≥1 ng /ml tutkimuksen alkaessa (15 potilasta) oli merkittävä PSA kaltevuuden muutos välillä pre jälkeiseen rokote vaihe (-0,099 /kk, p = 0,031, taulukko 6) kun potilas alaryhmä, joka oli PSA 1 ng /ml tutkimuksen alkaessa (8 potilasta) ei (-0,078 /kk, p = 0,279). Yhdessä nämä tiedot osoittavat, että tutkimuksessa potilaat otetaan ryhmänä oli merkittävä väheneminen nousunopeus PSA rokotuksen jälkeen, ja että tämä vaikutus oli erityisen selvää, joilla on immunologisen vasteen ja helpommin mitattavissa oleva tauti.

keskustelu

Potilaat, joilla PND kehittää toimivia tuumorisuppressiogeeneksi yhteisten syöpätyyppien [2], jotka todennäköisesti laukaista immuunitunnistusta kohdunulkoisen ilmentymisen hermosolujen proteiinien näiden syöpien. Laukaista tällaisia ​​immuunivaste, me arveltu ja osoittaneet, että apoptoottinen kasvain toimii voimakas lähteenä antigeenin esittelystä APC: iden [7], [29]. Painopiste Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli arvioida turvallisuutta ja immunogeenisuutta jäljittelemään tämä tarkoittaa laukaista kasvaimen immuniteetin käyttämällä eturauhassyövän potilaiden DC rajat esittämällä apoptoottisten kasvainsolujen syövän rokote.

Huolimatta käsitteellinen yhteys kehittäminen apoptoottisten solujen rokotteena ja kasvain immuniteetin PND, emme löytäneet mitään todisteita siitä, että tämä lähestymistapa laukaisi autoimmuunisairaus meidän potilailla. Teimme Huomaa pieni ANA kohonneita lähettää rokotetta 5 potilaalla (tiitteri 1:160 yhdellä potilaalla, ≤1:80 neljällä potilaalla), jotka hävisivät ajan mittaan in 4/5 potilaalla. Olemme kuitenkin myös huomattava, että 7 potilaalla on havaittavissa ANA tasot ennen rokotusta, 5 tuli pienempi rokotuksen jälkeen. Tilastollinen analyysi ANA muuttuu ennalta versus post rokotetta /plaseboa Arm 1 vs. Arm 2 paljastanut mitään merkittäviä eroja (Fisherin tarkka testi), ja voimme päätellä, että ANA muutokset eivät olleet kliinisesti merkittäviä; Lisäksi tällaiset ohimenevä vasteita on yleisesti nähty DC rokotteiden [26], [31], [32]. Yksi syy, että päätimme eturauhassyövän alustavana kasvain opiskeluun tämän rokotteen lähestymistapa on, että nämä kasvaimet ovat harvoin liittyy PND. Huolimatta Rokotteen turvallisuutta täällä, varovaisuus on aiheellinen laajentaa tätä lähestymistapaa potilaille kätkeminen kasvaimia tiedetään liittyvän PND (esimerkiksi gynekologiset kasvaimet ilmentävät CDR2 tai Nova antigeenejä ja pienisoluisessa keuhkosyövässä ilmentävät Hu antigeeni) [1], [2].

dendriittisolujen /apoptoottinen kasvain rokote oli immunogeeninen. Kuusikymmentä-seitsemän prosenttia potilaista kehittyi DTH vasteet LNCaP antigeenejä. Lisäksi nämä DTH vasteet korreloi positiivisesti jälkeisen rokotteen bulk T-solujen lisääntymisen vasteet. Tämä korkea immunogeenisuus oli samankaltainen kuin muissa tutkimuksissa peptidilisätyn tai kasvainsolun liittyvät DC rokotteita. Mikä tärkeintä, nämä vasteet sisältyy CD8 + T-solujen vasteita eturauhaskasvainsoluissa (kuvio 4b). Tämä on merkittävä, koska kriittinen tekijä menestyksekkään tuumorirokotteet on todennäköisesti CD8 + T-soluvasteiden [33]. Kyky havaita tällaiset vastaukset täällä on yhdenmukainen sen havainnon kanssa, että rajat esittely apoptoottisten solujen kykenevät stimuloimaan naiivi ja muistin CD8 + T-solu vasteita kasvainsoluihin [3] tai viruksen infektoimien solujen [8]

ex vivo

. Johtuen taudin luonne, autologiset kasvainsolut ei ollut saatavilla testausta T-soluvasteiden. Kuitenkin sekä CD4 ja CD8 proliferaatiovasteet havaittiin eturauhasen kasvainsolulinjoja, vaikka korkean taustan vasteet, joita nähtiin T-soluissa rokotuksen jälkeen (kuvio 4a). Tällainen tausta vasteita on havaittu ennen DC-rokotteiden ja ovat epävarmoja etiologiassa [34], ja saattaa heijastua ohimenevää nousua ANA nähtävissä joillakin potilailla. On todennäköistä, että potilailla oli vaihteleva immuunivasteita kasvaimeen rokotuksen joko johtuvat luontaisista eroista immuuni ohjelmistoon, tai toimia itse kasvain muuttaa potilaan immuunivasteita [35].

Merkittävästi, olemme huomanneet, että PSA rinteitä vähentynyt ja PSADT kasvoi rokotuksen jälkeen meidän potilaan koko väestön (p = 0,016). Oletimme, että jos tämä korrelaatio liittyi rokotteen immunogeenisyyttä, PSA muutosten pitäisi olla läsnä potilasryhmässä osoittaa immunogeeninen vaste rokotetta mutta ei niille, jotka eivät. Itse asiassa, potilaat, joilla oli DTH vastauksia LNCaP rokotuksen jälkeen oli tapahtunut merkittävää alenemista PSA kulmakerroin (p = 0,020), verrattuna potilaisiin, joilla ei ollut DTH vasteita (p = 0,631). Yhdessä meidän tiedot viittaavat siihen, että havaitut muutokset PSA rinteessä edustavat immuunivasteen potilaan kasvainsoluihin

in vivo

.

Vaikka muuttuja immunologisia ja kliinisiä vasteita on raportoitu rokotteita käyttäen kuollut kasvain soluja antigeenin lähteenä, nämä tutkimukset eivät ole keskittyneet puhtaalla, hyvin määritelty populaatiot apoptoottisten kasvainsolujen. Käytimme UV-B säteilytys indusoivan apoptoottista (ei nekroottisen) kuolemaa 90% eturauhasen solulinjan käytetty rokote; kuitenkin, meidän sivuvaikutusprofiili oli hyvin alhainen, samanlainen kuin muut tuumorirokotteet. Useimmat muut tutkimukset ovat käyttäneet gammasäteilyä tai pakastamalla ja sulattamalla, tuottaa vaihteleva seokset apoptoottisten ja nekroottisten solujen, joka voi toimia perustana eroja immunogeeninen potentiaali [28].

Yhteenvetona tulokset esitellään tässä tutkimuksessa perehdyttävää turvallisuus ja immunogeenisyys tiedot rokotteen jäljittelee mitä uskomme on kriittinen laukaista luonnossa esiintyvien tehokkaan kasvainta immuunivasteen nähdään PND potilailla. Nämä vasteet korreloivat kliinisesti merkityksellistä vastaus potilaalle kasvain, arvioituna erittäin tilastollisesti merkittäviä vaikutuksia PSA rinteessä ja kaksinkertaistaa aikaa. Nämä havainnot viittaavat siihen, että tämä rokotus lähestymistapa takaa lisätutkimusta turvallisena ja voimakas keino laukaista kasvaimen immuunivasteen väestössä syöpäpotilaita. Tulevien rokote muutokset katsotaan ovat lisäämällä immuunijärjestelmän apuaineita aikana rokotteen valmistamiseksi ex vivo tai yhdessä rokotteen antamisen in vivo [9], [36], tai autologisten kasvaimen lähteenä apoptoottisten antigeenin. Lisäksi turvallinen keino rokotuksia eturauhasen (tai muu) syöpiä voidaan palvella synergistinen tavalla muiden immuunijärjestelmää stimuloivia aineita, kuten CTLA4-Ig, jotka osoittavat lupaavia yhdistettynä immunoterapioiden eturauhasen [37] ja muita syöpiä [ ,,,0],38].

Methods

protokolla tälle kokeelle ja tukevat CONSORT tarkistuslista ovat saatavilla olevat tiedot; katso tarkistuslista S1 ja pöytäkirjan S1.

Potilaille ja Tutkimussuunnitelma

Etiikka ja ohjausjärjestelmästä.

Tutkimus hyväksynyt Rockefeller yliopistossa Institutional Review Board (RDA-0466) ja FDA (IND 10710). Kirjallinen suostumus saatiin kaikilta potilailta. Ei

de novo

solulinjoja tässä tutkimuksessa.

Tutkimuksen suunnittelu.

Tutkimus tehtiin Rockefeller yliopistossa New Yorkissa; kaksikymmentäneljä potilasta iältään 53-81 otettiin marraskuun 2003 ja helmikuun 2006 Kaikki kirjoittajat taata täydellisyys ja tietojen paikkansapitävyyden ja sen analysointi ja osallistui kirjallisesti artikkelissa.

kaksikymmentäneljä potilasta oli satunnaisesti luokitellaan johonkin molemmille varten arvioitaessa rokotteen turvallisuus, meidän ensisijainen päätepiste (kuvio 1). Kaikki potilaat olivat sokaissut. Kaksitoista potilasta osoitettu Arm 1 sai rokotetta, jota seuraa 3-rokote voidaan suurentaa 2 viikon välein, yhteensä neljä injektiota yli kahdeksan viikon ajan, ja ne avoimessa, kun viimeinen tehosteannos. Kaksitoista potilasta määrätty Arm 2 sai lumelääkettä (ajoneuvon (5% DMSO suolaliuoksessa)) kullekin neljä injektiota, olivat avoimessa, ylittäneet rokotteen vaiheeseen, ja sai rokotteen jälkeen 3 boosteja 2 viikon välein. Kun viimeinen booster, potilaat molemmissa ryhmissä seurattiin enintään 22 viikon ajan. Kaikki ajankohtina molemmat kädet enintään päivänä ensimmäisen rokotuksen DC rokotteella katsottiin rokotuksia edeltäneeseen vaiheeseen. Kaikkina ajankohtina ensimmäisestä booster läpi ensimmäisen seurannan vierailu jälkeen lopullisen rokotuksen (viikko 9) pidettiin rokote vaihe. Kaikki jäljellä olevat ajankohtina tutkimuksessa katsottiin jälkeinen rokote vaiheessa. Safety data verrattiin välillä 2 varsien tutkimuksen, kun taas immuuni ja PSA tiedot arvioitiin vertaamalla keskenään ennen ja jälkeen rokote vaiheissa kaikissa 24 potilaalla.

Potilaiden valinta ja rokotus.

Potilaat olivat voivat osallistua, jos ne antoivat tietoon perustuvan suostumuksen, oli biopsian eturauhassyöpä ja etenevä sairaus: PSA dokumentoitu olevan kasvussa 3 kertaa, joko huolimatta kastraatiotasojen testosteronitasot (alle 50 ng /dl) tai vaikka lopulliset paikallinen hoito (prostatektomia , säteily, jne). Hylkäämisperusteet mukana ennen biologinen hoito dendriittisoluilla, autoimmuunisairaus tai merkittäviä laajoja elin sairaus.

DC rokotteita annettiin yhdessä DTH paneelit ja potilaita seurataan tarkasti yhden tunnin. Potilaat palasivat klinikalle 48 tuntia, jolloin ne tutkittiin kliinisesti ja niiden DTH vastauksia luettiin. Rokotteet annettiin solu- annoksena 2-10 x 10

6 DC /rokotus, annetaan ihonalaisesti sisintä olkavarteen, noin 6-8 cm: n päässä kainalon imusolmukkeisiin. Potilaat saivat Yhden alustavan ja kolme toinen viikko tehosterokotteita. Ensimmäisen kaksi injektiota, potilaat saivat myös 2-10 × 10

6 DC /KLH.

Vaccine

Rokote oli valmistetaan BSL-2 laitos ylläpitää ja riippumattoman tarkastuksen tavata hyvä Tissue Practice vaatimukset. Valmistella autologisia DC, perifeerisen veren mononukleaariset solut (PBMC) saatiin leukafereesejä, kiinni endotoksiinivapaita kudosviljelmän astiat (Falcon), ja eriytetty

in vitro

ja epäkypsiä DC yli kuusi päivää RPMI-1640 1% autologista plasmaa, GM-CSF: ää (180 ng /ml; Bayer HealthCare Pharmaceuticals) ja IL-4 (10 mg /ml; R R siirtää päästämiseksi HLA-DR (DC) solufraktio oli oltava 70% CD83 +, 15% CD14 + ja 20% propidiumjodidia (PI) + (Serologicals). Kaikki vasta-aineet hankittiin BD Pharmingen. Steriiliys testattiin gramma tahra, jota kulttuurin bakteerien ja sienten saastuminen (Bact /ALERT, Biomereux), ja DNA fluorokromi- mykoplasman (Bionique Testing Laboratories, Inc.). LAL-menetelmää (Associates of Cape Cod) käytettiin testaamaan endotoksiinin. Lopullinen tuote on jaettu 4 yhtä suureen erään, joista kukin sisältää 2-10 x 10

6 DC kukin.