Krooninen sairaus

tiivistelmä

fenyylibutyyli isoselenocyanate (ISC-4) on Akt estäjä osoittivat prekliinistä tehoa melanoomaa vastaan ​​ja paksusuolen syöpä. Tässä tutkimuksessa olemme pyrkineet parantamaan kliinistä hyödyllisyyttä ISC-4 tunnistamalla synergistisen yhdistelmän FDA-hyväksytty syöpälääkkeiden, relevantti ja sopiva tauti puitteet testaus, ja biomarkkereita vasteen. Testasimme aktiivisuutta ISC-4 ja 19 FDA-hyväksytty syöpälääkkeiden, yksin tai yhdistelmänä, vastaan ​​SW480 ja RKO ihmisen paksusuolen syövän solulinjat. Synergistinen vuorovaikutus setuksimabia tunnistettu ja validoitu paneeli ylimääräisiä koolonsyöpäsolulinjaa sekä kinetiikkaan synergiaa. ISC-4 yhdessä setuksimabin synergistisesti vähensi elinkelpoisuutta ihmisen paksusuolen syöpäsoluissa villin tyypin mutta ei mutantti

KRAS

geenejä. Tarkempi analyysi paljasti, että yhdistelmähoito yhteistoiminnassa laski solusyklin etenemistä, lisääntynyt kaspaasi-riippuvaista apoptoosia, ja laski fosfo-Akt in kasvainsolujen. Synergia välillä ISC-4 ja setuksimabi säilyi riippumatta kehittynyt resistenssi 5-FU ihmisen paksusuolen syöpäsoluissa. Yhdistelmä osoitti synergististä antituumorivaikutuksia

in vivo

ilman myrkyllisyyttä ja edessä resistenssin 5-FU. Nämä tulokset viittaavat siihen, että yhdistetään ISC-4 ja setuksimabi olisi tutkittava, jos potilaalla on 5-FU-resistentti paksusuolensyöpä kätkeminen villityypin

KRAS

.

Citation: Allen JE, Gallant JN, Dicker DT, Amin S, Irby RB, Sharma AK, et al. (2013) Akt Inhibitor ISC-4 synergiassa Setuksimabin ja 5-FU-Kestää Colon Cancer. PLoS ONE 8 (3): e59380. doi: 10,1371 /journal.pone.0059380

Editor: Abbes Belkhiri, Vanderbilt University Medical Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 21 marraskuu 2012; Hyväksytty: 13 helmikuu 2013; Julkaistu: 12 maaliskuu 2013

Copyright: © 2013 Allen et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat avustuksia WSE-D. ja varoja Penn State Hershey Cancer Institute, NIH National Cancer Institute apurahan R03-CA143999 on A.K.S. ja Lung Cancer Research Foundation apuraha A.K.S. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Tekijät myöntävät kilpailevan edun tohtori El-Diery sijaitsee toimituskunta for Plos ja pyynnön, vahvistavat, että tämä ei muuta niiden noudattamista kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamista ja materiaaleja.

Johdanto

Fenyylialkyyli isoselenocyanates (ISC), isosteerinen seleeni analogit luonnossa esiintyvän isotiosyanaatin luokan yhdisteitä [1], [2], ovat viime aikoina kehitetty meidän laboratorioissa ja niiden on osoitettu estävän Akt-aktiivisuutta [3], [4], [5], [6]. Niistä tutkittiin ISC ISC-4 on osoittanut parhaan antituumorivaikutuksen kokeellisissa malleissa, sekä

in vitro

ja

in vivo

, lupaavia turvallisuus [4]. ISC-4 on osoittanut vaatimatonta prekliinistä tehoa vastaan ​​monet kasvaintyypit

in vitro

, ja kasvaimen vaikutuksia on raportoitu yhteydessä melanooman kun ISC-4 käytetään mono-agentti

in vivo

[4], [5], [6]. ISC-4 on myös esillä merkittävää tuumorin vastaista vaikutusta, kautta estämällä Akt, paksusuolen syövän ksenograftien, kun käytetään mono-ainetta, ja kun käytetään yhdessä 5-fluorourasiilin (5-FU) -though kliininen hyödyllisyys yhdistelmä oli epäselvä [5].

PI3K /Akt-reitti on liian aktivoida tai muuttaa useimmissa peräsuolen syöpiä, joka on kolmanneksi eniten diagnosoitu ja tappava syöpä Yhdysvalloissa [7]. Standardi-of-care kemoterapiaa kehittyneen taudin sisältää FOLFOX tai FOLFIRI hoito, jotka koostuvat 5-FU, leukovoriinia, oksaliplatiinia ja irinotekaania lisäksi muita hoitovaihtoehtoja kuten anti-VEGF monoklonaalinen vasta-aine bevasitsumabi ja anti -EGFR monoklonaalinen vasta-aine setuksimabi. Vaikka nämä hoito yhdistelmä vaihtoehdoista ovat parantaneet potilaiden selviytymiseen, ylimääräisiä myrkytön kohdennettuja hoitovaihtoehtoja tarvitaan terapiassa tulenkestävä asettaminen kehittyneiden paksusuolen syöpä.

Vaikka prekliinisissä mono-agentti aktiivisuus ISC-4 on huomattava, yhdistelmähoito ei ole perusteellisesti tutkittu. Siksi etsitään synergistisiä yhdistelmiä, joissa ISC-4 käyttäen paneelin FDA-hyväksyttyjä lääkkeitä. Täällä raportoimme tunnistaminen ISC-4 ja setuksimabi lupaava yhdistelmähoito, joka on synergistinen antituumorivaikutuksen

in vitro

ja

in vivo

ihmisen paksusuolen syöpiin kätkeminen villityypin

KRAS

geeni.

Materiaalit ja menetelmät

Soluviljely, solujen elinkelpoisuuden määritykset, ja reagenssit

Solulinjat saatiin ATCC ja viljeltiin ATCC- suositeltava media kostutetussa inkubaattorissa 5% CO

2 ja 37 ° C. Solulinjat tässä tutkimuksessa käytetyt ei todennettu. Solujen elinkelpoisuuden määritykset, solut ympättiin 96-kuoppaisille musta seinät levyille pitoisuudella 1 x 10

5 solua per ml tuoretta väliainetta ja tilavuudessa 100 ui kuoppaa kohti. Solujen annettiin kiinnittyä yön yli ja käsiteltiin seuraavana päivänä, kuten on ilmoitettu. Päätepisteessä, CellTiter-Glo (Promega) määritykset suoritettiin valmistajan protokollan, ja bioluminescent lukema oli kirjattujen IVIS kuvantamisjärjestelmä (Xenogen). Solun synkronointi, soluja inkuboitiin 200 ng /ml nokodatsoli 16 tuntia ennen käsittelyä. Klorokiini saatiin Sigma. zVAD-fmk saatiin Promega ja käytetään työ- pitoisuutena 25 uM. ISC-4 syntetisoitiin, kuten aikaisemmin on kuvattu [6].

Virtaussytometria

sub-G1 DNA sisällön analyysi, solut trypsinoitiin tällä ilmoitettuina ajankohtina ja kiinnitettiin 80% etanolia 4 ° C: ssa vähintään 30 minuutin ajan. Kiinnitetyt solut värjättiin propidiumjodidilla läsnä RNaasi ja analysoitiin EPICS Elite-virtaussytometrillä (Beckman Coulter). Ki-67 ilmentyminen, solut olivat etanoli kiinteä, kuten edellä on kuvattu, ja immunovärjättiin anti-Ki-67-vasta-ainetta (Sigma) 1:500 30 minuuttia. Tämän jälkeen soluja inkuboitiin Alexafluor 488-konjugoitu vasta-aine on 1:500 PBS: ssä 30 minuuttia ja suspendoitiin uudelleen PBS: ään analyysiä varten.

Western blot-analyysi

soluja käsiteltiin log-vaiheen kasvun, kerättiin solu- kaavinta, sentrifugoitiin ja lyysattiin jäillä 2 tuntia solun lysis-puskuria. Supernatantti kerättiin seuraavat sentrifugoimalla ja proteiinikonsentraatio määritettiin käyttämällä Bio-Rad proteiinimäärityksellä (Bio-Rad Laboratories). Näytteiden elektroforeesi pelkistävissä olosuhteissa NuPAGE 4-12% Bis-Tris geeleillä (Invitrogen), siirrettiin PVDF, ja estetty 10% rasvatonta maitoa TBST 1 tunti. Sitten kalvoja inkuboitiin primaarisilla vasta-aineilla on saatu Cell Signaling on 1:1000 2% rasvatonta maitoa TBST yön yli 4 ° C: ssa. Membraanit pestiin TBST: ssä, inkuboitiin sopivan HRP-konjugoitua sekundaarista vasta-ainetta (Thermo-Scientific) 1 tunnin ajan, pestiin TBST: ssä, ja visualisoidaan käyttäen ECL-Plus (Amersham) ja röntgenfilmille (Thermo-Scientific).

In vivo

tutkimuksissa

Kateenkorvattomia naispuolinen nude-hiirissä (Charles River Laboratories) inokuloitiin 1 x 10

6 5-FU- kestävä RKO tai HT-29-solujen kunkin taka kylki kuin 200 ui suspensiota 01:01 matrigeelin (BD): PBS. Hoito aloitettiin, kun kasvaimet saavuttivat keskimääräisen tilavuuden ~1650 mm

3, vatsaonteloon tai laskimoon injektiot annettiin klo kokonaistilavuudessa 200 ui DMSO: ssa. Kudosten analyysi, kudos kerättiin lopetettiin hiiriä ja kiinnitettiin 4% paraformaldehydillä PBS: ssä 48 tunnin ajan. Kudos parafiiniin ja leikattiin jonka histologia Core Facility Penn State Hershey Medical Center. H 8 uM (Fig. 1 D). Siten ISC-4 on vaatimaton yksi aine tehoaa ihmisen paksusuolen syöpäsoluissa aiheuttaa solukuoleman ja laskun proliferaatiossa.

tunnistaminen synergistinen yhdessä ISC-4

etsitään synergistisiä yhdistelmiä ISC-4 FDA-hyväksyttyjä hoitomuotoja parantaa tehoa ISC-4 paksusuolen syöpä. Valitsimme SW480 ja RKO ihmisen paksusuolen syöpä solulinjoja alkuarvioinnissa perustuu niiden heterogeenisen onkogeenista geneettisiä muutoksia. SW480 on mutantti

p53

, mutantti

KRAS

, ja villityypin

BRAF

taas RKO on villin tyypin

p53

, villityypin

KRAS

, ja mutantti

BRAF

geenit [9]. Niistä koeryhmä kemoterapian ja kohdennettuja tekijöille, kombinatorinen aktiivisuus havaittiin ainakin yksi solulinja kun ISC-4 yhdistettiin sorafenibilla, gefitinibi, gemsitabiini, sisplatiini, bortetsomibin, imatinibin tai setuksimabi (kuvio 2, taulukot S1, S2) . Kuitenkin yhdistelmä ISC-4 ja setuksimabi oli ainoa synergistinen yhdistelmähoidossa havaittiin tutkituissa olosuhteissa. Lisäksi tämä synergia havaittiin ainoastaan ​​siinä RKO solulinjassa, joka satamat villityyppinen

KRAS

, eikä sen SW480 solulinjassa että satamat

KRAS

G12V

. Tämä havainto on sopusoinnussa vaatimuksen villikannan

KRAS

varten kliininen teho Setuksimabin paksusuolensyöpä [10], [11].

Solun elinkelpoisuus määrityksissä SW480 ja RKO paksusuolen syöpäsolun linjat käsitelty ISC-4 (1, 2, tai 4 uM) ja osoitti hoitojen otaksuttu EY

12,5, EY

25, ja EY

50 yksinään ja yhdistelmänä (n = 3). Annokset annetaan taulukossa S1.

ISC-4 ja setuksimabi synergistisesti estävät villin tyypin KRAS kasvainsoluproliferaation

Arvioimme synergistinen aktiivisuus ISC-4 ja setuksimabi useissa ihmisen koolonsyöpäsolulinjoissa. Linjassa aiempien havaintojen kanssa, synergistinen aktiivisuus havaittiin ainoastaan ​​HT-29 ja RKO solulinjoilla, joilla on villityyppinen

KRAS

geenejä, eikä HCT116, DLD-1, ja muut koolonsyöpäsolulinjaa mutantti

KRAS

geenejä (Fig. 3A, Taulukko S3; tuloksia ei ole esitetty). Mielenkiintoista, synergistinen vuorovaikutus ISC-4 ja setuksimabi näyttää olevan annoksesta riippuvaa suhteessa ISC-4 pitoisuus mutta riippumaton setuksimabin keskittyminen. Arvioida tämän kombinatorisista toimintaa kliinisesti merkittävästi ympäristössä, testasimme synergistisen tehon ISC-4 ja setuksimabi RKO kloonien kehittynyt resistenssi 5-FU. Koska 5-FU on standardi-of-care terapian paksusuolen syöpä, hoitoja, jotka tarjoavat hyötyä 5-FU-resistenttejä paksusuolen syövän tarvitaan klinikalla. Synergistinen aktiivisuus ISC-4 ja setuksimabia säilytetty huolimatta hankittu 5-FU-resistenssi testattiin koolonkarsinoomasoluissa (Fig. 3B-C). Yhdessä nämä tiedot tunnistaa 5-FU-resistentti paksusuolensyöpä villiin

KRAS

geenejä sopivan hoitopaikassa, jotka saattavat hyötyä ISC-4 ja setuksimabi yhdistelmähoidossa.

(A) solujen elinkelpoisuus määritykset ihmisen paksusuolen syövän solulinjat käsiteltiin ISC-4 ja setuksimabi ilmoitetuilla annoksilla 72 tuntia (n = 3). (B) Solujen elinkyvyn villityypin ja 5-FU-resistenttejä RKO soluissa, joita käsiteltiin 5-FU kuten 24 tuntia (n = 3). (C) 5-FU-resistenttejä RKO-solujen käsiteltiin ISC-4 (2 uM) ja setuksimabi (1 ug /ml) 24 tuntia (n = 3).

määrittää kinetiikkaa havaitut synergistinen tehokkuus ja löytänyt sellaista toimintaa jo 8 tunnin kuluttua altistuksesta, jossa synergiaa 12 tuntia (Fig. 4A). Tämä havainto viittaa siihen, että synergistinen aktiivisuus ISC-4 ja setuksimabi on ehkä sytotoksinen sijaan sytostaatit. Muutokset solujen morfologia, sekä fluoresoivia DNA, käsiteltyjen syöpäsolujen paljasti, että ISC-4 ja setuksimabi yhdistelmähoito aiheuttaa ilmeistä, DNA: n fragmentoituminen (Fig. 4B; kuvio. S1A). Tarkempi analyysi paljasti, että yhdistelmä ISC-4 ja setuksimabi yhteistoiminnallisesti ja lisäävät merkittävästi Saharan G1 sisältöä verrattuna mono-aineita, mutta kombinatorinen Saharan G1 pitoisuus ei riittänyt täysin selittää havaitun synergiaa (Fig. 4C). ISC-4 aiheuttama sub-G1 pitoisuus inhiboitui merkittävästi samanaikaisella inkuboimalla yleiseurooppalainen kaspaasiestäjä zVAD-fmk, mikä viittaa siihen, että yhdistelmä indusoi kaspaasiriippuvaisen apoptoosin. Tukemisessa Tämän havainnon, yhdistelmä ISC-4 ja setuksimabi indusoida synergistisesti kaspaasi-3-aktivaation (Fig. 4D).

(A) Solujen elinkelpoisuus määrityksissä RKO-solujen käsiteltiin ISC-4 (2 uM ) ja setuksimabi (1 ug /ml) yksinään tai yhdistelmänä osoitettu aika (n = 3). (B) DAPI-värjäys RKO-solujen käsiteltiin kuten (A) 12 tunnin ajan. Valkoinen nuolet osoittavat solujen hajanainen DNA. (C) Sub-G1 pitoisuus RKO-solujen käsiteltiin ISC-4 (2 uM) ja setuksimabi (1 ug /ml) yksinään tai yhdessä 12 tuntia (n = 3). *

P

0,05 verrattuna kaikissa hoitoryhmissä Studentin kaksisuuntaisella

t

testiä. (D) kaspaasi-Glo määritys RKO soluja käsiteltiin ISC-4 (2 uM) yhdessä setuksimabin (0, 0,25, 0,5, tai 1 ug /ml) 24 tunnin kuluttua altistuksesta. Alalevy esittää määrällisesti ISC-4 (2 uM) ja setuksimabi (1 ug /ml) (n = 3).

Western blot-analyysi osoitti, että ISC-4 yhdessä setuksimabin yhteistoiminnassa vähentää phospho -Akt tasoa, mutta ei fosfo-ERK, hyvin vaatimattomaksi 24 tuntia hoidon jälkeen (Kuva. 5A). Kuitenkin ajan myötä analyysi paljasti, että yhdistelmä yhteistoiminnassa ablatoitu phosho-Akt tasoilla niin pian kuin 4 tuntia käsittelyn jälkeen (kuvio. 5B). Ihmisen koolonsyöpäsolulinjaa että näytteillä synergistinen vaste ISC-4 ja setuksimabi myös vastasi merkittävä lasku fosfo-Akt (Fig. 5C). Kuitenkin, ihmisen paksusuolen syöpäsolulinjoissa kätkeminen KRAS että ei vastannut synergistisesti yhdistelmähoito myös eivät osoittaneet mitään muutoksia fosfo-Akt tasot vasteena hoitoon. Siten fosfo-Akt määrä näyttää korreloivan kasvainten vastainen vaste ISC-4 ja setuksimabi. Ei vaikutusta Ki-67 ilmentyminen tai LC3B pilkkominen, merkkiaine autophagy, havaittiin yhdistelmällä (Fig. S1B-D). Nämä havainnot osoittavat, että kampaus ISC-4 Setuksimabihoitoa johtaa osuuskunta lasku fosfo-Akt ja solujen elinkykyä, joihin liittyy lisääntynyt apoptoosi.

(A) Western blot-analyysi RKO soluja käsiteltiin ISC-4 (2 uM) ja setuksimabi (1 ug /ml) yksinään tai yhdessä 24 tuntia. Densitometria fosfo-Akt tasot yläpuolella näkyvät blot kuin normalisoitu Ran kuin suhteessa kontrolliin hoitoon. (B) Western blot-analyysi RKO-solujen käsiteltiin ISC-4 (2 uM) ja setuksimabi (1 ug /ml) yksinään tai yhdessä osoitetun ajanjaksoja. Ran näkyy latauskontrollina. (C) Western blot-analyysi osoitti ihmisen paksusuolen syöpäsolulinjoissa hoidon jälkeen yhdistelmän (Rx) ISC-4 (2 uM) ja setuksimabi (1 ug /ml) 8 tuntia. *

P

0,05 verrattuna kontrolliin.

ISC-4 ja setuksimabi käyttää synergististä antituumorivaikutuksia ilman myrkyllisyyttä

in vivo

jotta jäljitellä sen todennäköisesti hoitopaikassa ja hyödyllisyys, testasimme antituumoritehoon ISC-4 yhdessä setuksimabin kehittyneissä 5-FU-resistenttejä RKO ihonalainen ksenografteja. Tässä asetelmassa, huomasimme, että yhdistelmähoito on synergistinen alustava vaikutusta kasvaimen etenemiseen ja aiheutti kasvaimen stasis ensimmäisen viikon hoidon (Fig. 6A). Tissue-analyysi paljasti, että ksenografteissa vastaanottava yhdistelmähoito oli korkeampi kuolion histologisesti ja apoptoosin TUNEL värjäys kuin ksenografteissa vastaanottava kummallakaan aineella yksinään (Fig. 6B; Fig. S2A). Terapeuttinen annostusohjelman käytetään näissä tutkimuksissa oli hyvin siedetty ja ei muuttanut hiiren ruumiinpainon tai muutos maksan histologian (Kuva. S2B-C).

(A) Suhteellinen kasvainten koot 5-FU-resistenttejä RKO ksenografteissa 4 päivän ajan käsittelyn jälkeen yhdellä annoksella ISC-4 (3 mg /kg, ip), setuksimabi (10 mg /kg, iv), tai yhdistelmä (n≥5). Yksittäiset kasvaimet normalisoitiin lähtötasolle koko mitattiin vuorokautena 0. * P 0,05 verrattuna kaikkiin hoidettujen ryhmien Studentin kaksisuuntaista

t

testiä. (B) hematoksyliinillä ja eosiinilla (H 0,05 verrattuna kontrolliin.

vieressä tutkineet yhdistelmä ISC-4 ja setuksimabi HT-29 vastaan ​​hiirissä verrattuna monoagents ja yhdistelmä setuksimabi ja 5-FU. Huomasimme, että ISC-4 ja setuksimabi voimakkaasti vähentänyt syövän etenemiseen, toisin kuin monoagents, kun annettuna viikoittain laskimoon annoksina, jotka oli selvästi ilmeinen kasvaimen tilavuuden ja kasvaimen punnituksia (Fig. 6C, Fig. S2D). Lisäksi yhdistelmä osoitti parempia tuumorin vastainen vaikutus verrattuna yhdistelmä 5-FU: n ja setuksimabi näissä koeolosuhteissa. Tämä yhdistelmä oli jälleen hyvin siedetty (Fig. S2E) ja lisäksi seerumin kemia analyysi ei paljastanut mitään merkittäviä muutoksia elektrolyyttejä, maksan toimintaa, tai muista molekyylimarkkereita liittyvät munuais- tai sydäntoksisuuden kroonista annostusta (taulukko S4). Kumulatiivisesti nämä tehoa ja turvallisuutta tiedot osoittavat, että kombinatorinen aktiivisuus setuksimabin ja ISC-4 tulisi arvioida tulevissa kliinisissä tutkimuksissa 5-FU-tulenkestävien paksusuolensyöpä kätkeminen villityypin

KRAS

geenejä.

keskustelu

ISC-4 on lupaava Akt estäjä, joka on osoittanut antituumorivaikutus useissa prekliinisissä tutkimuksissa [3], [4], [5]. Havaitut synergiaa ISC-4 ja setuksimabi kuin yhdistelmähoidon avulla ISC-4 kohdistamaan sytotoksisuus alhaisilla mikromolaarisella annoksilla ihmisen paksusuolen syövän soluja, jotka voivat olla helpommin saavutettavissa annos

in vivo

. Yhdistelmä näyttää aikaansaavan kohonneeseen apoptoosin sekä

in vitro

ja

in vivo

, vaikka muut anti-kasvain mekanismit voivat edistää synergiaa. Tämä havainto on sopusoinnussa aiempaan toteamukseen perifosine, PI3K /Akt estäjä, synergoi aineita, jotka estävät EGFR, kuten setuksimabin [12]. Jatkotutkimuksissa pitäisi verrata ISC-4 perifosine yksin ja yhdessä setuksimabin määrittää niiden suhteellinen tehokkuus ja potentiaali uusien hoitojen ihmisen syövän.

Jatkotutkimuksissa olisi selvitettävä taustalla olevien mekanismien välistä synergiaa aineita. Erityistä huomiota olisi kiinnitettävä kombinatorisista vaikutusta fosfo-Akt, joka toimii hoitovasteen merkki yhdistämisestä ja voidaan käyttää tulevaisuudessa kliinisissä tutkimuksissa. Mielenkiintoista, synergia näiden kahden aineen havaittiin HT29 ja RKO soluja, joilla on mutantti BRAF ja PIK3CA geenien tulisi vaikuttaa suunnitelmallisesti Akt-aktiivisuutta. Kombinatoriset

in vitro

aktiivisuuden havaittiin ISC-4 useiden muiden hyväksyttyjen kohdennettuja aineet ja chemotherapies, vaikka ei synergistisiä, ja ansaitsee lisätutkimuksia. Aktiivisuus ISC-4 vastaan ​​lymfoomaa tulisi tutkia tarkemmin annettava suhteellisen voimakas

in vitro

toimintaa yhden aineen ISC-4 että havaitsimme vastaan ​​lymfoomåsolulinjojen. P53-riippumaton aktiivisuus ISC-4 ja säilyttämistä synergia setuksimabin 5-FU-tulenkestävä tauti lupaa hyvää kliinistä hyödyllisyyttä ISC-4. Useat chemotherapies, mukaan lukien 5-FU, on p53-riippuvainen sytotoksinen vaikutus kasvainsolun, ja näin ollen, kemoterapia-resistenttejä yleisesti aikana ilmenee taudin eteneminen johtuu usein inaktivoinnin kasvaimen p53 [13].

sen lisäksi, että kasvaimen pysähtymiseen aiheuttama ISC-4 ja setuksimabi yhdistelmähoitoa 5-FU-resistenttejä kasvaimia, on huomattava, että terapeuttinen annostusohjeita oli hyvin siedetty. Tämä lupaa hyvää sen käyttöä potilailla, joilla on pitkälle edennyt sairaus, joista monet ovat siedä kovia hoitoja. Terapeuttinen aktiivisuus 5-FU-resistenttejä kehittynyt paksusuolensyöpä on lupaava ja voivat hyötyä lisäämällä muita yleisesti käytettyjä hoitomuotoja yhteydessä paksusuolen syövän hoito, kuten oksaliplatiini. Setuksimabi on osoitettu palauttaa oksaliplatiini herkkyys tulenkestävät paksusuolen syövän soluja ja voi edustaa lupaavaa terapeuttista mahdollisuus [14]. Kliiniset tiedot tukevat myös setuksimabin ja irinotekaanin in irinotekaania tulenkestävät tauti [15].

Koska osoitti tehokkuuden ja turvallisuuden Yhdistelmän kliininen tutkimus ISC-4 yhdessä setuksimabin, jos potilaalla on villityypin

KRAS

geenejä, kuten vaaditaan vakio setuksimabihoito [11]. Viimeaikaiset todisteet viittaavat siihen, että koepala on otettava välittömästi ennen hoidon aloittamista vakuuttaa KRAS on villityypin kuten paksusuolen syöpä potilaat voivat kehittyä KRAS mutaatioita aikana Setuksimabihoitoa joka aiheuttaa resistenssin [16]. Lisäksi täytäntöönpano fosfo-Akt biomarkkerina vasteen voi osoittautua hyödylliseksi tulevaisuudessa tutkimuksessa kautta kasvainbiopsioissa tai analyysi verenkierrossa olevia kasvainsoluja [17], [18]. Tämä prekliininen tutkimus esittää, että yhdistelmä voi tarjota turvallisen terapeuttista hyötyä, kun vastassa on 5-FU vastus paksusuolen syöpäpotilaiden jotka tarvitsevat enemmän hoitovaihtoehtoja.

tukeminen Information

Kuva S1.

ISC-4 ja setuksimabi yhdistelmähoito ei laske Ki-67 ilmentyminen tai aiheuttaa autophagy. (A) faasikontrastimikroskoopilla ja RKO-solujen käsiteltiin ISC-4 (2 uM) ja setuksimabi (1 ug /ml) yksinään tai yhdessä 12 tuntia. (B) (B) Virtaussytometria ja (C) Western bot analyysi Ki-67 ilmentyminen RKO soluissa, joita käsiteltiin ISC-4 (2 uM) ja setuksimabi (1 ug /ml), yksin tai yhdessä määritettynä. (D) Western blot analyysi RKO-solujen käsiteltiin ISC-4 (2 uM) ja setuksimabi (1 ug /ml) yksinään tai yhdessä 24 tuntia. Klorokiiniä (C; 10 uM) sisältyy positiivisena kontrollina autophagy. Beta aktiini näkyy latauskontrollina.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0059380.s001

(TIF) B Kuva S2.

ISC-4 ja setuksimabi yhdistelmähoito on turvallinen ja kykenee yhteistyöhön antituumorivaikutus. (A) kvantifiointi TUNEL värjäytymistä tuumoriksenografteja kuvattu kuviossa 6B (n = 10). (B) Muutos hiirten kehon painon vastaanottavan ISC-4 (3 mg /kg, i.p.), setuksimabi (10 mg /kg, i.v.), tai yhdistelmällä (n≥5) kahdesti viikossa 2 viikkoa. Kehon painon muutokset on ilmaistu suhteessa painon kunkin yksittäisen hiiren ennen käsittelyä päivänä 0 (n≥3). (C) H & E-värjäystä maksakudosta korjattu hiiristä 24 tuntia hoidon ISC-4 (3 mg /kg, i.p.), setuksimabi (10 mg /kg, i.v.), tai yhdistelmällä. (D) terminaali kasvaimen tilavuus ja tuumorin paino HT-29 ksenograftissa kuvattu kuviossa 6C. Hoidon kohortteja sisältyy ISC-4 (3 mg /kg, iv), setuksimabi (10 mg /kg, iv), yhdistelmä, tai setuksimabi ja 5-FU: ta (25 mg /kg, iv) kerran viikossa (n≥8) . (E) Hiiren ruumiinpainon päätepisteessä, joka oli kolme päivää viimeisen annoksen jälkeen (n≥8). Virhe palkit osoittavat SEM toistojen.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0059380.s002

(TIF) B Taulukko S1.

Annokset valitaan hyväksyttyjen antituumoriaineina yhdessä ISC-4. EY

12,5, EY

25, ja EY

50 arvot arvioitiin kirjallisuudesta ja annokset käytettiin kokeissa kuvattu kuvassa. 2.

doi: 10,1371 /journal.pone.0059380.s003

(XLSX) B Taulukko S2.

Yhteenveto kombinatorisista vaikutuksista TIC10 hyväksyttyjen antituumoriaineita. Kombinatoriset aktiivisuutta verrattiin monoagent toimintaa solujen elinkelpoisuuden määritykset ja sen määritettiin olevan uncooperative (-), osuuskunta (+), synergistinen (*), tai epäselviä (?). Yhdistelmät näytteillä yhteistoiminnalla ainakin yhdessä solulinjan korostetaan keltaisella taas vihreä highlight osoittaa synergiaa.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0059380.s004

(XLSX) B Taulukko S3.

Yhdistelmä indeksit ISC-4 ja setuksimabi villityypin KRAS ihmisen koolonsyöpäsolulinjaa. Kombinatorisista aktiivisuus RKO ja HT-29 solulinjojen määrällisesti kuviossa 3A arvioitiin Chou-talalay menetelmällä.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0059380.s005

(XLSX) B Taulukko S4.

Seerumin kemia profiilit saavien hiirten ISC-4 ja setuksimabi yhdistelmähoitoa. Kateenkorvattomiin, naispuolinen 8 viikon ikäisille nude-hiiriin sai ISC-4 (3 mg /kg, i.p.), setuksimabi (10 mg /kg, i.v.), tai yhdistelmällä (n≥5) kahdesti viikossa 2 viikkoa. Seerumi kerättiin 2 päivää viimeisen annoksen jälkeen.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0059380.s006

(XLSX) B

Kiitokset

W.S. El-Deiry on American Cancer Society tutkimusprofessori.