Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tässä tutkimuksessa HPRP-A2, synteettinen 15-mer kationiset peptidit, joissa kaikki D-aminohappoja, esti tehokkaasti selviytyminen mahalaukun solulinjojen annoksesta riippuvalla tavalla. Mahalaukun kasvainsolujen tappaminen HPRP-A2 kuuluu nopea romahdus kalvon eheyden ja solunsisäisiä reittejä. Propidiumjodidia (PI) ja laktaattidehydrogenaasin (LDH) määritykset osoittivat, että yhden tunnin hoidon HPRP-A2 johti kalvon läpäisevyyden muutokset BGC-823-soluissa annoksesta riippuvalla tavalla. Lisäksi HPRP-A2 indusoiman apoptoosin BGC-823-soluissa liittyy merkittävä lisääntyminen reaktiivisten hapen lajien (ROS), kaspaasi-3, -8 ja -9 aktivaation vähentäminen mitokondrion kalvon potentiaali (MMP), ja solusyklin pidätys G1 vaiheessa. Sen lisäksi luontainen sytotoksisuus, HPRP-A2 synergized voimakkaasti doksorubisiinin (DOX) parantaa tehokkuutta tappaa mahakasvaimen solujen i

n vitro

. Uskomme, että HPRP-A2 kaikki D-aminohappoja voi olla voimakas ehdokas syövänvastainen terapeuttisten erityisesti yhdistelmähoitoa.

Citation: Zhao J, Hao X, Liu D, Huang Y, Chen Y (2015 )

In vitro

karakterisointi Rapid sytotoksisuus syövän Peptide HPRP-A2 kautta kalvo Destruction ja Solunsisäiset Mechanism vastaan ​​mahasyövän Cell Lines. PLoS ONE 10 (9): e0139578. doi: 10,1371 /journal.pone.0139578

Editor: Aamir Ahmad, Wayne State University School of Medicine, Yhdysvallat |

vastaanotettu: 2. heinäkuuta, 2015 Hyväksytty: 15 syyskuu 2015; Julkaistu: 30 syyskuu 2015

Copyright: © 2015 Zhao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat National Natural Science Foundation of China (nro 81373445, YXC ja nro 21442001, YBH) ja Natural Science Foundation of Jilin (nro 20150101189JC , YC ja nro 20140101042JC, YBH). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Yli viime vuosikymmeninä, vaikka läpimurto on saavutettu kehittämisessä syövän hoitomuotoja, kestävyys ja epäspesifinen myrkyllisyys tavanomaisten huumeet ovat edelleen pullonkaula asioita mahdollisten kliinisten käytäntöjen [1-3]. Siksi tarvitaan pikaisesti kehittää uusia lääkkeitä, joilla on erilaiset toimintatavat, jotka voivat voittaa puutteet monien lääkkeille.

Tällä hetkellä mahdollisia sovelluksia syövänvastainen peptidien (ACP) terapeuttisina aineina syövän hoitoon eteneminen houkutella enemmän huomiota kuin perinteiset kemoterapia lähinnä seuraavat ominaisuudet: (1) korkea spesifisyys. Positiivisesti varautuneet peptidit valikoivasti tavoite syöpäsoluja, jotka kantavat negatiivisia varauksia ja niillä on erilainen kalvon komponentteja kuin normaalit solut [4, 5], (2) uusi vaikutustapa. Se voisi välttää perustettu monelle resistenssimekanismeja [5-7]; (3) synergistinen syövän vastainen vaikutus kemoterapeuttisten. On raportoitu, että tietyt ACP voi tuottaa synergistisen syövän vastaista aktiivisuutta, kun ne yhdistetään käytettäväksi erilaisten tavanomaisten syöpälääkkeiden [8-10].

yleinen mekanismi peptidi-indusoidun solukuoleman on solukalvon häiriöitä kautta micellization tai huokosten muodostumista , vaikka jotkut AKT-maiden raportoidaan laukaista apoptoosin kuolemalla reseptorireitin ja /tai mitokondrion reitin [8, 11]. Lisäksi huokosten muodostumisen solukalvon ja muutoksen kalvon läpäisevyys voi tarjota paremman kanavan tulo muiden syöpälääkkeiden soluihin ja parantaa niiden syövänvastainen toimintaa [8, 12].

edellinen tutkimus on osoittautunut, että HPRP-A2 voi indusoida solukuoleman ja samanaikaisesti parantaa DOX /epirubisiini (EPI) aiheuttaman apoptoosin HeLa ja HepG2 solulinjat [12]. Lisäksi, johtuen D-aminohappokoostumus, HPRP-A2 on resistentti proteolyyttisen katkaisun ja säilyttää yhtä syöpälääkkeiden toimintaa sen L enantiomeerien [6, 12]. Perustuen aikaisempiin tutkimuksiin, pyrimme saavuttamaan kaksi tavoitetta tässä tutkimuksessa: hahmotella taustalla syövän vastaisen mekanismi HPRP-A2 ja tutkimaan synergistinen syövän vastainen vaikutus BGC-823 ja SGC-7901-soluissa yhdistettynä HPRP-A2, DOX.

Materiaalit ja menetelmät

solulinjat ja soluviljelmä

Ihmisen mahalaukun syövän solulinjat BGC-823 ja SGC-7901 saatiin American Type Culture Collection, joka tunnistaa solun linjat lyhyen tandem repeat DNA-testillä, käytettiin 6 kuukauden kuluessa elvytys ja kasvatettiin DMEM: ssä, jossa naudan sikiön seerumia (FBS, 10% v /v), penisilliiniä (100 U /ml), ja streptomysiinillä (100 U /ml) kosteassa ilmakehässä 37 ° C: ssa, 5% CO

2.

peptidisynteesi ja puhdistus

peptidi syntetisoitiin kiinteän faasin peptidisynteesillä käyttäen Fmoc (9-fluorenyyli -methoxycar-nyyli) kemiaa, kuten on kuvattu aiemmin [13]. Lisäkarakterisointia havaittiin massaspektrometrialla ja aminohappoanalyysillä. DOX HCl ostettiin Meilun Biology Technology Co, Ltd (Dalian, Kiina).

Solun luelinkykymäärityksillä

BGC-823 ja SGC-7901-soluja (5 x 10

3) maljattiin kolmena rinnakkaisena 96-kuoppaisilla mikrotiitterilevyillä. Täydellinen väliaine korvattiin 24 tunnin jälkeen 100 ui tuoretta alustaa, joka sisälsi erilaisia ​​pitoisuuksia huumeita. Sen jälkeen vielä 24 h, soluja inkuboitiin 3- (4,5-dimetyyli-2-tiatsolyyli) -2,5-difenyyli-2H-tetratsoliumbromidia (MTT) 37 ° C: ssa 4 h. Sen jälkeen dimetyylisulfoksidi (DMSO) lisättiin liuottamaan formatsaanikiteet ja absorbanssi 492 nm: ssä mitattiin mikrolevylukijalla (GF-M3000; Gaomi CaiHong Analytical Instruments Co, Shandong, Kiina). Jin kaavaa käytettiin edelleen määrällisesti synergistinen vaikutus yhdistelmän hoidossa HPRP-A2 ja DOX. Kaava on: Q = Ea + b /(Ea + Eb-Ea × Eb), jossa Q on yhdistelmä indeksi; Ea + b edustaa soluproliferatiivi- esto yhdistetyn huumeiden; Ea ja Eb ovat merkkejä soluproliferatiivi- esto kunkin lääkkeen. Laskennan jälkeen: Q 0,85, Q 1,15 ja 0,85 Q 1,15 osoittaa antagonismia, synergiaa, ja lisävaikutus, vastaavasti [14].

Hemolyysi aktiivisuusanalyysiä

Hemolyysi toiminta analyysi oli suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu [13]. Saada punasoluja, tuoretta ihmisen verta stabiloitu EDTAK sentrifugoitiin 1000 rpm: llä 5 minuutin ajan, pestiin kahdesti PBS: llä ja laimennettiin lopulliseen konsentraatioon 2% PBS: ssä. 70 ui 2% ihmisen erytrosyyttien lisättiin pyöreäpohjaiseen 96-kuoppalevylle, jonka jälkeen 70 ui eri pitoisuuksia HPRP-A2. Kun oli inkuboitu 37 ° C: ssa 1 h, levy sentrifugoitiin sitten 3000 rpm: llä 10 minuutin ajan ja 90 ui supernatanttia siirrettiin tasapohjaisille 96-kuoppaiselle levylle. Vapauttamista hemoglobiinin määritettiin mittaamalla supernatantin absorbanssi 540 nm: ssä. Punasolut PBS ja tislattua vettä (dH

2O) käytettiin negatiivisina ja positiivisina kontrolleina vastaavasti. Hemolyyttinen aktiivisuus lasketaan prosentteina koeryhmän ja positiivinen kontrolli, vähentämisen jälkeen negatiivisen kontrollin osalta. Tiedot ovat keskiarvo ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta.

PI määrityksessä

BGC-823-soluja (1 x 106 solua /kuoppa) siirrostettiin kuusi-kuoppalevyillä. Inkuboinnin jälkeen HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) 1 tunti, solut otettiin talteen ja käsiteltiin sitten 5 ug /ml PI 4 ° C: ssa 10 minuutin ajan pimeässä. Solut pestiin PBS: llä kolme kertaa ja sitten havaita fluoresenssin voimakkuus PI käyttäen virtaussytometrialla (FACSCalibur, Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA).

LDH: n vapautuminen

LDH: n vapautuminen aktiivisuus mitattiin LDH iinianalyysikitissä (Jiancheng Bioengineering, Ltd., Kiina) mukaan valmistajan ohjeiden. BGC-823-soluja ympättiin 5 x 10

3 solua /kuoppa 96-kuoppaiselle levylle. Inkubaation jälkeen HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) 1 h, vapauttaa LDH supernatantissa mitattiin mikrolevylukijalla (GF-M3000; Gaomi CaiHong Analytical Instruments Co, Ltd Shandong, Kiina) at 450 nm: ssä. Solut ilman hoitoa tai hajotetaan Triton X-100 käytettiin negatiivisena ja positiiviset kontrollit, vastaavasti. Kaikki kokeet suoritettiin kolmena rinnakkaisena. LDH-aktiivisuus laskettiin prosenttiosuutena koeryhmän ja positiivinen kontrolli, vähentämisen jälkeen negatiivinen kontrolli vastaavasti.

ROS määritys

ROS iinianalyysikitissä (BestBio, Co. Shanghai, Kiina) käytettiin havaita sukupolven ROS. -Soluja (1 x 106) käsiteltiin HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) 1 tunti. Myöhemmät menettelyt suoritettiin valmistajan protokollan. Lyhyesti, solut hajotettiin trypsiinillä sentrifugoitiin 1500 rpm: ssa 3 minuutin ajan, pestiin kolme kertaa PBS: llä ja suspendoitiin sitten 500 ul: aan PBS: ää. Inkubaation jälkeen 2 ’, 7’-dichlorofluorescin diasetaatti (DCFH-DA) fluoresoivasta koettimesta, 20 minuutin ajan 37 ° C: ssa, solut pestiin PBS: llä kolme kertaa, ja havaitaan vihreä fluoresenssi-intensiteetin (GEOMEAN) virtaussytometrialla. Vihreä fluoresenssi-intensiteetti korreloi positiivisesti tasosta ROS.

MMP

MMP määritettiin mitokondrion kalvon potentiaalia iinianalyysikitissä kanssa 5,5 ’, 6,6’-tetra- -1,1 ’, 3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine jodidi (JC-1), joka on koetin mitokondrioiden toiminnan (BestBio, Co., Shanghai, Kiina). JC-1 on aina käytetään havaitsemaan mitokondrioiden Depolarisaatio esiintyy alkuvaiheessa apoptoosin. Kun soluja korkea MMP, JC-1 kokoontuivat mitokondrion matriisissa, muodostaen J-aggregaattien ja tuottaa punaisen fluoresenssin. Sitä vastoin solut, jotka sisältävät JC-1 + monomeerista monomermonomer on alhainen MMP ja näyttää vihreää fluoresenssia. Mitokondrioiden Depolarisaatio määritettiin lasku punaisen (590 nm, FL-2-kanavainen) /vihreä (530 nm, FL-1 kanava) fluoresenssin intensiteetin suhdetta. Lyhyesti, sen jälkeen, kun hoidon HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) 1 tunti, BGC-823 solut kerättiin ja niitä inkuboitiin 0,5 ml JC-1 työliuosta 20 min ajan 37 ° C: ssa, pestiin sitten kahdesti PBS: llä, suspendoitiin PBS: ään ja analysoitiin virtaussytometrialla (FACSCalibur, Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA).

Caspase aktiivisuusmäärityksen

Soluja käsiteltiin HPRP-A2 (10, 15 uM) 24 tunnin ja sitten kaspaasi toimintaa mitattiin käyttäen vastaavaa kaspaasiaktiivisuus detektiovälinepakkaukset (BestBio, Co., Shanghai, Kiina), mukaan valmistajan ohjeiden. Keskimääräinen Tiedot esitetään keskiarvona ± SD vähintään kolmen itsenäisen kokeen.

Solusyklianalyysiä

BGC-823-soluja (1 x 10

6) ympättiin 6-kuoppaisille levyt 24 tuntia. Induktion jälkeen HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) 24 tunnin ajan, solusyklin jakautuminen määritettiin FACScan-sytometrillä ja Cell Quest ohjelmisto (FACS Calibur, Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA). Kaikki kokeet suoritettiin kolmena rinnakkaisena.

Tilastollinen analyysi

Tulokset esitetään keskiarvoina ± SD kolmesta riippumattomasta määrityksestä. Tilastollinen merkitys ryhmien välisiä eroja analysoitiin

t

-testi, jossa merkitys hyväksytty

P

0,005 (*) ja

P

0,001 (**).

Tulokset

peptidi ja sytotoksisuus

Kuten kuviossa 1, peptidi HPRP-A2 on 15 tähteen α-kierteisen amfipaattisen kalvo-aktiivisen peptidi, joka koostuu kaikkien D-aminohappoja. Verrataan selektiivinen toksisuus HPRP-A2 kohti mahalaukun syöpäsoluja ja normaaleja soluja (ihmisen punasoluja), voimme helposti todeta, että IC

50 (lääkkeen konsentraatio, jossa solujen elinkelpoisuus väheni 50% verrattuna käsittelemättömään solut) arvot ovat paljon vähemmän kuin minimaalinen hemolyyttinen pitoisuus (lääkkeen konsentraatio, joka aiheutti 20% cell hemolyysin) on HPRP-A2. Nämä tulokset osoittivat, että HPRP-A2 voidaan selektiivisesti tappaa mahasyövän solujen ja säästää normaalien solujen (kuviot 2 ja 3). Samanlaisia ​​syövänvastainen toimintaa kahdessa solulinjassa (BGC-823 ja SGC-7901) osoitti, että oli laajakirjoinen vaikutus syövän vastaisen toiminnan HPRP-A2. Koska sen kalvo-aktiivinen ominaisuus, HPRP-A2 esittää syöpälääkkeiden terapeuttista potentiaalia, koska se on selektiivisesti toksinen kohti kasvainsoluihin kuin normaaleihin soluihin.

soluja käsiteltiin eri pitoisuuksilla HPRP-A2 1 tunti. Solujen elinkelpoisuus määritettiin käyttäen MTT-menetelmällä. Tulokset ilmaistaan ​​prosentteina valvonnan ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta. Tilastollinen analyysi vertasi HPRP-A2 hoitoryhmässä kontrolliryhmiin (* P 0,005; ** P 0,001).

Data pistettä läsnä keskiarvo ± S.D. Kolmen riippumattoman kokeen. PBS: llä ja dH2O käytettiin negatiivisina ja positiivisina kontrolleina vastaavasti. Tilastollinen analyysi vertasi HPRP-A2 hoitoryhmässä kanssa positiivisen kontrollin ryhmät (* P 0,005; ** P 0,001).

HPRP-A2 aiheuttama parantamiseksi läpäisevyyttä

jotta vahvistaa muutosta kalvonläpäisyn inkuboinnin jälkeen HPRP-A2, ottoa solun sisään PI ja solun vapauttamaan LDH tutkittiin virtaussytometrillä ja mikrolevynlukijaa kohti BGC-823 soluja. Kuten kuviossa 4 on esitetty, virtaussytometristä kuvaajat PI siirtyä asteittain suuntaan korkean fluoresenssi-intensiteetin pitoisuudesta riippuvalla tavalla, ja vapautuminen on lisääntynyt LDH havaittiin myös soluissa inkuboitiin HPRP-A2. Toisin sanoen, HPRP-A2 voi aiheuttaa vahinkoa solun kalvo ja tuloksena parantamiseksi solukalvon läpäisevyyttä.

Soluja inkuboitiin kasvavilla peptidin pitoisuuksilla 1 tunnin ajan 37 ° C: ssa. (A) Quantitative vertailuja fluoresenssin intensiteetti (in GEOMEAN) eri pitoisuuksina analysoitiin virtaussytometrialla. (B) LDH supernatantissa mitattiin mikrolevylukijalla aallonpituudella 450 nm. Solut ilman hoitoa tai hajotetaan Triton X-100 käytettiin negatiivisena ja positiiviset kontrollit, vastaavasti. LDH-aktiivisuus laskettiin prosenttiosuutena koeryhmän ja positiivinen kontrolli, vähentämisen jälkeen negatiivinen kontrolli vastaavasti (* P 0,005). Tiedot ovat keskiarvo ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta.

HPRP-A2 aiheutti vahingot mitokondrion toiminnan

solunsisäinen reaktiivisen hapen (ROS) vapautumisen ja mitokondrion kalvon potentiaali (MMP ) ei havaittu FACS vastaamaan mitokondriot funktio BGC-823-solujen

in vitro

. Kuten kuviossa 5A, virtaussytometrisesti histogrammin soluja inkuboitiin suurempaa HPRP-A2 paljasti suurempi fluoresenssin voimakkuus, kun oli inkuboitu 1 tunnin ajan. Vastaava virtaussytometrinen määrällinen vertailu fluoresenssin intensiteetin GEOMEAN näissä eri pitoisuuksissa oli samanlainen suuntaus, jonka mukaan lisääntynyt vapautuminen ROS BGC-823-solujen läsnä ollessa HPRP-A2 oli pitoisuudesta riippuva. Vastaavia pitoisuudesta riippuva muuttuva suuntaus havaittiin myös kuviossa 5B, suhde FL2-H /FL1-H merkittävästi vähentynyt, mikä osoittaa depolarisaatio MMP.

(A) BGC-823-soluja käsiteltiin 1 h ja reaktiivisten hapen lajien (ROS) analysoitiin FACS: lla kvantitatiivisesti verrata fluoresenssin intensiteetti (in GEOMEAN) eri pitoisuuksina. (B) 1 tunnin kuluttua hoidon suhde FL2-H /FL1-H vähentynyt, mikä osoittaa vähennystä MMP. (C) BGC-823-soluja käsiteltiin HPRP-A2 (10 ja 15 uM) 24 tunnin ajan ja sitten kaspaasi-aktiivisuudet mitattiin. Data ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta. Tilastollinen analyysi verrattiin HPRP-A2 hoitoryhmässä kontrolliryhmiin (* P 0,005; ** P 0,001).

Caspase aktivaation ja solusyklin analyysi

Activation kaspaasi-3, -8 ja -9 HPRP-A2-indusoidun solujen mitattiin käyttäen mikrolevylukijalla 405 nm: ssä. Kuten on esitetty kuviossa 5C, kaspaasi-3, -8 ja -9 olivat kaikki lisääntyi hoidon jälkeen HPRP-A2 24 h BGC-823-soluissa, mikä viittaa siihen, että apoptoosin induktio, joita HPRP-A2 voi olla kaspaasiriippuvaisen . Kuten on esitetty kuviossa 6, BGC-823-soluja käsiteltiin eri pitoisuuksilla HPRP-A2 (5, 10, 15 uM) 24 tunnin ajan johti siihen, että nousu sub-G1 pidätys ja G1 pidätys. Nämä havainnot vahvistettiin myös lisääntynyt kaspaasi-3-aktiivisuus käsittelyn jälkeen HPRP-A2.

Cell-syklin jakaumat hoidon jälkeen 5, 10 ja 15 μΜ HPRP-A2: ssa 24 tuntia erikseen havaittiin virtaussytometrialla. Solusyklin jakaumat arvioitiin PI värjäystä. Tulokset osoittivat, yhdestä kolmesta kokeesta samanlaisin tuloksin.

HPRP-A2-indusoitu kasvu DOX sytotoksisuuden

BGC-823 ja SGC-7901 solut valittiin tutkia synergistinen syövänvastainen vaikutus HPRP-A2 ja kemoterapeuttisen lääkkeen DOX. Soluja käsiteltiin HPRP-A2 (6 pM) ja /tai Dox (1,6 ug /ml) ja 4, 24 ja 48 tuntia. MTT-määrityksissä käytettiin arvioimaan monimuotoiset syöpää ehkäisevistä vaikutuksista soluihin. Lääke pitoisuudet tässä työssä valitut perustuivat IC

50-arvot kunkin lääkkeen yksin. Ei ollut selvää sytotoksisuutta tai kasvun hidastumista, kun kukin lääke käytettiin yksinään. Sen sijaan, kun käytetään peptidi /lääkkeen yhdistelmiä (HPRP-A2 /DOX) samalla annoksia käytetään yksinään, yhdistelmä osoitti merkittävää sytotoksisuutta (kuvio 7). On myös selvää, että syövänvastainen aktiivisuus HPRP-A2 ei juuri vaikuta inkubointiaika; toisin, jossa kasvua inkubaatioajan 48 h, DOX näyttää paljon suurempi syövän vastainen aktiivisuus kuin 4 tuntia, joka osoittaa dramaattisesti eri toimintamekanismeja välillä AKT ja kemoterapeuttista lääkettä. Mukaan Jin kaavan, kaikki Q (yhdistelmä-indeksi) arvot olivat suurempia kuin 1,15, mikä osoittaa, että oli olemassa merkittäviä synergistisiä vaikutuksia välillä α-kierteisen peptidin HPRP-A2 ja tavanomaisen syöpälääke DOX BGC-823 ja SGC-7901-soluja .

paneeli (A, B ja C) edustaa kasvun inhibitio in BGC-823 ja SGC-7901-solujen yhdistelmä HPRP-A2 (6 pM) ja DOX (1,6 ug /ml) sen jälkeen, kun oli inkuboitu 4 , 24 ja 48 tuntia, vastaavasti. Tulokset on ilmaistu prosentteina valvonnan ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta. Paneeli D näyttää yhdistelmä (Q) yhdistelmän hoidossa HPRP-A2 ja DOX, jossa Q 0,85, Q 1,15 ja 0,85 Q 1,15 osoittaa antagonismia, synergiaa, ja additiivinen vaikutus, vastaavasti. Tilastollinen analyysi verrattuna yhdistelmää hoitoryhmässä kanssa DOX ryhmien (* P 0,005; ** P 0,001).

Keskustelu

Syövän peptidejä (ACP) äskettäin saaneet suuri huomio lupaavina kemoterapia-aineita, jotka vältetään haittoja nykyisillä lääkkeillä. Monet tutkimukset ovat varmistaneet, että jotkut synteettiset ja luonnolliset kationiset peptidit omaavat nopea ja laaja syövänvastainen aktiivisuus kasvainsoluihin pikemmin kuin normaalit solut, kuten ihmisen punasoluja [4, 15]. Lisäksi AKT-maat tarkistettiin lisäksi on kyky voittaa usealle-vastus mekanismi, ja yhteisvaikutukset hoidossa yhdistelmähoito [11].

HPRP-A2 hallussaan nopea ja laaja syövän vastaista aktiivisuutta, kuitenkin joitakin eroja esiintyy myös herkkyyden HPRP-A2 eri solulinjoja. Perustuu eri IC

50-arvot HPRP-A2 BGC-823 (8,65 ± 0,38 uM), SGC-7901 (10,42 ± 0,30 uM), PC3 (21,38 ± 0,56 uM), ja B16 (19.16 ± 0,38 uM ), valitsimme BGC-823 ja SGC-7901 soluja tutkimuskohteita. Sitä paitsi syövän vastaisen toiminnan HPRP-A2 muu syöpä solulinjoja kuten HeLa ja HepG2 on julkaistu edellisessä paperi [12]. Molemmat BGC-823 ja SGC-7901-solut kuuluvat mahalaukun solulinjoja, siten, valitsimme BGC-823 esimerkkinä tutkia syövän vastaisen mekanismin HPRP-A2

in vitro

.

tässä tutkimuksessa olemme osoittaneet, että HPRP-A2 on amfipaattinen α-kierteisen peptidin merkittävä syövänvastainen aktiivisuus BGC-823 ja SGC-7901 solulinjoissa. Tutkimuksemme ovat osoittaneet, että HPRP-A2 osoitti syöpää selektiivinen toksisuus, lähinnä siksi, että syöpäsolujen koostuu useammasta anionista fosfolipideistä ja sisältävät O-glykosyloidun musiinin, joka lisää negatiivista varausta syöpäsolujen pinnalla [16, 17]. Lisäksi, enemmän mikronukkalisäkkeiden syöpäsolut voivat lisätä pitoisuutta sitovaa peptidiä laajentamalla kalvon pinnan ja siten osoittaa voimakkaampaa sytotoksisuutta syövän solukalvojen [11, 18].

ACP kykenevät häiritsevät solukalvon, joka voi aiheuttaa solukalvon läpäisevyyden muutoksia. Tässä tutkimuksessa muutos BGC-823 solukalvon havaittiin tunnistamalla PI-läpäiseväksi ja LDH: n vapautuminen. Asteittainen nousu PI läpäiseväksi ja LDH: n vapautuminen ovat pitoisuudesta riippuva tapojen käsittelyn jälkeen HPRP-A2. Lisäksi HPRP-A2-solukuolema liittyy reaktiivisten hapen lajien depolarisaation MMP aktivointi kaspaasin toiminnan ja lohkon G1 vaiheeseen solusyklin.

Lisäksi sytotoksisuutta HPRP-A2, osoitimme, että se voisi lisätä tehoa DOX vastaan ​​BGC-823 ja SGC-7901-soluissa, joka on johdonmukainen edellisessä tutkimuksessa. Aiemmissa tutkimuksessa olemme tutkineet monimuotoiset syöpähoidolla käyttäen α-kierteisen peptidit HPRP-A1 ja HPRP-A2 kanssa kemiallisia huumeita DOX ja EPI HeLa ja HepG2 solulinjat [12]. Synergia näkyy sallii käytöt suhteellisen pieninä pitoisuuksina peptidien ja huumeiden saavuttaa merkittäviä syöpää ehkäisevistä vaikutuksista

in vitro

ja

in vivo

. Tämä annoksen pienentäminen minimoi lääkkeen sivuvaikutuksia normaaleihin soluihin ja mahdollistaa tehokkaan apoptoosivälitteisten syövänvastainen vaikutus. Nykyinen tutkimus on vaikutuksia, jotka HPRP-A2 voi tulla lupaava syövän vastaista terapeuttista ainetta korkea syövänvastainen selektiivisyys ja voimakasta synergististä vaikutusta yhdistelmähoidossa. Tutkimuksemme pääasiassa kuvaavat mekanismia HPRP-A2-solukuolema ja voi olla apua suunnittelussa kemoterapeuttisten vastaan ​​mahalaukun solulinjoja.

Johtopäätökset

HPRP-A2 osoittaa vahvaa syövän vastaista aktiivisuutta BGC- 823 ja SGC-7901 solulinjoissa ja lievästi ihmisen punasoluja. HPRP-A2 aiheuttama syöpä solukuoleman kautta sekä suoraan kalvoon tuhoava vaikutus ja solunsisäiset mekanismit, kuten dramaattinen kasvu kaspaasi-3, -8 ja -9 aktivaation vähenemiseen mitokondrion kalvon potentiaali (MMP), ja sukupolvi ROS ja solusyklin pysähtymisen G1. Lisäksi HPRP-A2 synergized vahvasti DOX parantaa tehoa tappaminen mahakasvaimen solujen

in vitro

. Tuloksemme korostavat laaja syövän vastaisen potentiaalia HPRP-A2 ja selventämään sen vaikutusmekanismi. Uskomme, että kartuttaa ACP tehokkaammilla ja kasvaimeen kohdistaminen ominaisuudet avaavat uusia tapoja torjua syöpää onnistuneesti.