Krooninen sairaus

tiivistelmä

Toisin länsimaisen lääketieteen että yleensä käyttää puhdistettua yhdisteitä ja tavoitteena kohdistaa yksi molekyyli tai polku, perinteinen kiinalainen lääketiede (TCM) koostumuksissa käsittävät tavallisesti useita yrttejä ja komponentteja, jotka ovat välttämättömiä tehon. Huolimatta hyvin pitkän aikaa ja laajaa käyttöä TCM, on olemassa hyvin vähän suoria vertailuja TCM ja standardi solunsalpaajahoito. Esillä olevassa raportissa, vertasimme tehoa TCM mausteseoksella LQ vastaan ​​keuhkosyöpä hiirimalleissa doksorubisiinin (DOX) ja syklofosfamidi (CTX). LQ esti kasvaimen koon ja painon mitata suoraan sekä fluoresoiva proteiini kuvantaminen ihonalainen, potilaalle tehdä, spontaani kokeellinen etäpesäke ja angiogeneesiä hiiren malleja keuhkosyöpään. LQ oli tehokas vastaan ​​primaarinen ja metastaattinen keuhkosyöpä ilman laihtuminen ja elintoksisuutta. Sen sijaan CTX ja DOX, vaikka tehokkaita keuhkosyöpä mallit aiheuttanut merkittäviä laihtuminen, ja elintoksisuutta. LQ oli myös antiangiogeenistä toimintaa havaitaan keuhkotuumoreita kasvavat nestiinifenotyypin rakentuvassa vihreä fluoresoiva proteiini (ND-GFP) siirtogeenisiä nude-hiiriin, jotka selektiivisesti ilmaista GFP orastavan verisuonissa. Survival kasvainta kantavien hiirten myös pidentää LQ, verrattavissa DOX.

In vitro

, keuhkosyöpä solut tapettiin LQ havaittuna nopeutus kuvantaminen, verrattavissa sisplatiinia. LQ oli tehokkaampi aiheuttamaan solukuoleman syövän solulinjoissa kuin normaali solulinjat toisin solunsalpaajahoidosta. Tulokset osoittavat, että LQ on ei-toksinen tehoa vastaan ​​metastaattisen keuhkosyövän.

Citation: Zhang L, Wu C, Zhang Y, Liu F, Wang X, Zhao M, et al. (2014) vertailu Tehoa ja myrkyllisyys perinteisen kiinalaisen lääketieteen (TCM) mausteseoksella LQ ja tavanomaisen kemoterapian keuhkosyövän etäpesäke ja Survival in Mouse Models. PLoS ONE 9 (10): e109814. doi: 10,1371 /journal.pone.0109814

Editor: Beicheng Sun, The First Affiliated sairaala Nanjing Medical University, Kiina

vastaanotettu: 07 helmikuu 2014; Hyväksytty 13 syyskuuta 2014; Julkaistu: 06 lokakuu 2014

Copyright: © 2014 Zhang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat National Cancer Institute apurahan CA132971 ja myöntää BA2011019 päässä Jiangsu Science and Technology saavutukset Transformation Temaattinen erityisrahastoja, Kiina. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Lei Zhang, Yong Zhang, Xiaoen Wang ja Ming Zhao ovat sidoksissa Cancer Inc. Fang Liu oli entinen tytäryhtiö cancer Inc. Robert M. Hoffman on palkaton tytäryhtiö cancer Inc. cancer Inc. markkinoi syövän eläinmalleissa. Ei ole muita kilpailevia intressejä. Ei ole olemassa patentteja, tuotteiden kehittämiseen tai kaupan tuotteiden julistaa. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamiseen ja materiaaleja, yksityiskohtaisena online-oppaassa tekijöille.

Johdanto

Keuhkosyöpä on johtava syy syövän kuolema ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) osuus on noin 80% rintarangan syöpäsairauksia. Yleinen 5 vuotta elinaikaa NSCLC edelleen heikko, noin 16%. Keuhkosyöpä on osoittanut vain vähän parannusta selviytymisen viimeisten 30 vuoden aikana [1]. Uudenlaisia ​​lähestymistapoja hoitoon keuhkosyöpä tarvitaan pikaisesti. Nature tuotteet ovat tärkeitä välineitä lääkekehityksessä. Syövän sairaus, 60% uusia lääkkeitä, ovat peräisin luonnollisista lähteistä. Tällä hetkellä kasvavaa kiinnostusta perinteinen kiinalainen lääketiede (TCM) yrttisekoitukset, joita on käytetty syövän hoidossa tuhansia vuosia Kiinassa. Toisin kuin Länsi-lääke, joka yleensä käyttää puhdistettua yhdisteitä ja tavoitteena kohdistaa yksi molekyyli tai reitissä TCM koostumuksia käsittävät tavallisesti useita yrttejä ja komponentteja. On paljon empiirisiä todisteita tehosta TCM muodossa yrttisekoitukset syöpäpotilailla [2] – [9].

Aikaisemmassa tutkimuksessa määritimme estävää tehoa TCM yrtti Celastrus orbiculatus Thunb . (COT) kasvaimen kasvua, etäpesäke ja antiogenesis of hepatocelluar karsinooma (HCC) Hep-G2 soluista potilaalle tehdä nude-hiirimallissa käyttäen fluoresenssin kuvantamisen tekniikkaa. Koko kehon fluoresenssikuvantamisella tehtiin mitata kasvaimen kasvua ja seurata etäpesäke kehitystä. Korkea-annoksen, varhainen hoito COT osoittivat merkittävää tehon valvontaan kasvaimen tilavuus ja tuumorin paino ihmisen HCC Hep-G2 potilaalle tehdä kasvain malli [4].

tehoa TCM yrtti tubeimu, uutetaan mukula kasvin

Bolbostemma paniculatum

testattiin MDA-MB-231 ihmisen rintasyöpäsoluilla

in vitro

. MDA-MB-231-solulinja muokattu ilmentämään RFP sytoplasmassa ja GFP liittyy histoni H2B tumassa, mikä mahdollistaa reaaliaikaisen kuvantamisen ydinvoiman-sytoplasman dynamiikkaa. Apoptoosi helposti värjätä näissä soluissa ydin- muoto muuttuu ja pirstoutumista. MDA-MB-231 RFP-GFP-soluja viljeltiin joko kaksiulotteisesti muoville tai kolmiulotteisesti Gelatiini sienellä. Soluja käsiteltiin dikloorimetaanilla uute tuoretta tubeimu. Tubeimu indusoiman apoptoosin MDA-MB-231-soluja, kuten havaittiin fluoresenssimikroskopialla, jo 24 tunnin hoidon in vitro kaksiulotteisessa kulttuuriin. 48 tunnin käsittelyn DNA pirstoutuminen voitiin havaita. Tubeimu myös indusoi apoptoosin MDA-MB-231-solujen kolmiulotteisessa kulttuuria Gelatiini sienellä, mutta vähemmässä määrin kuin 2D kulttuuri [5].

Huolimatta hyvin pitkän historian ja laajaa käyttöä TCM, on hyvin vähän suoria vertailuja TCM ja standardi solunsalpaajahoito. Olemme aiemmin kehittäneet TCM muotoilua yrttejä, LQ, joka on osoitettu olevan voimakas myrkyttömiä terapeuttisia ominaisuuksia kliinisesti ja potilaalle tehdä hiirimalleissa haimasyövän [6]. Vertasimme LQ gemsitabiinin, joka on ensilinjan hoito haimasyöpä anti-metastaattisen ja kasvaimen aktiivisuus sekä turvallisuus. Terapeuttinen teho LQ oli verrattavissa gemsitabiinin mutta vähemmän myrkyllisyys [6].

Tässä raportissa, käytimme state-of-art fluoresenssin kuvantamisen tekniikkaa ja eläinmalleissa verrata tehoa ja toksisuutta LQ doksorubisiinille (DOX) ja syklofosfamidi (CTX) keuhkosyöpään. Käytön GFP ja /tai RFP stabiilisti ilmaistu ihmisen syöpäsoluja tai hiirillä, tehoa LQ verrattiin tavanomaisen kemoterapian kasvaimen ja metastaattisen kasvun sekä angiogeneesiä.

Osoitamme tässä, että LQ on tuumorin vastaista , antimetastaattisia ja antiangiogeenisen teho kliinisesti relevantti hiiri malleja keuhkosyöpään verrattavissa doksorubisiini ja syklofosfamidi, ilman niiden myrkyllisyys.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

Kaikki eläinkokeet tehtiin syöpää ehkäisevällä Institutional animal Care ja Käytä komitea (IACUC) -protokollan hyväksytty erityisesti tätä tutkimusta ja noudattaen päämiestensä ja menettelyt hahmoteltu National Institute of Health Guide for Care ja eläinten käyttöä alle Assurance numero A3873-1. Jotta minimoida eläinten kärsimystä anestesian käyttö ja kipulääkkeitä käytettiin kaikkiin kirurgisiin kokeita. Eläimet nukutettiin 20 ui seosta, ketamiini (22-44 mg /kg), asepromatsiinia (0,75 mg /kg), ja ksylatsiinia (2-5 mg /kg) lihaksensisäisellä injektiolla 10 minuuttia ennen leikkausta. Vastaus Eläinten leikkauksen aikana seurattiin varmistaa riittävä anestesian syvyydestä. Ibuprofeeni (7,5 mg /kg suun kautta juomavedessä 24 tunnin välein 7 päivän leikkauksen) käytettiin, jotta analgesian leikkauksen jälkeen on kirurgisesti hoidetuissa eläimissä. Eläimiä tarkkailtiin päivittäin ja humaanilla tavalla tapetaan CO

2 hengitettynä, kun he täyttivät seuraavat inhimillinen päätepiste kriteerit: uupumus, ihovaurioita, huomattava laihtuminen, hengitysvaikeudet, nenäverenvuoto, pyörimisliike ja kehon lämpötilan lasku. Eläinten käyttö oli tarpeen ymmärtää in vivo tehoa, erityisesti anti-metastaattisen tehoa testattujen aineiden. Eläimiä pidettiin joissa on enintään 5 häkkiä kohti. Eläimiä pidettiin este facility korkea hyötysuhde hiukkaspäästöjen (HEPA) -filtered teline standardeissa olosuhteissa 12 tunnin valo /pimeä jaksoissa. Eläimiä ruokittiin autoklaavikäsiteltyä laboratorio jyrsijöiden ruokavalio.

Solulinjat ja soluviljelmä

Ihmisen keuhkosyöpä solulinjat H460 [12], A549 [13], hiiren Lewisin keuhkokarsinooma (LLC) [ ,,,0],14], ja apinan normaalin munuaisen endoteelisolujen line (VERO) [15] pidettiin RPMI-1640 (HyClone, South Logan, UT) ja 10% naudan sikiön seerumia (Gemini Bio-Products, Calabasas, CA). Ihmisen napalaskimon endoteelisolujen (HUVEC) [16] pidettiin EGM-2 Bulletkit väliaineessa (Lonza, Anaheim, CA).

LLC-solut ekspressoivat stabiilisti punainen fluoresoiva proteiini (RFP), kuten aiemmin on kuvattu [10] , [11]. H460-solut ekspressoivat stabiilisti vihreän fluoresoivan proteiinin (GFP), kuten aiemmin on kuvattu [12], [17] – [19]. H460 dual-väri solut ilmensivät GFP liittyy histoni H2B tumassa aikaisemmin kuvatulla [20] – [22].

Hiiret

Kateenkorvattomia karvattomia hiiriä (

nu /nu

) ja C57BL /6-hiiriä (AntiCancer Inc., San Diego, CA), 6-8 viikkoa vanhoja, käytettiin tässä tutkimuksessa. Nestiinifenotyypin-driven-GFP (ND-GFP) siirtogeenisissä C57 /B6-nude-hiirissä (AntiCancer, Inc.) ilmentävät GFP alaisuudessa nestiinifenotyypin promoottorin käytettiin myös [23] – [26]. Ei-siirtogeeniset C57 B /6-hiiret (AntiCancer, Inc.) käytettiin myös.

Ihon alle kasvaimen kasvua

A549, H460, LLC, ja H460-GFP-solut kerättiin trypzinization ja pestiin kaksi kertaa fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS) (HyClone, South Logan, UT). Solut (5 x 10

6) injektoitiin ihonalaisesti oikeaan kylkeen hiirten kokonaistilavuudessa 100 ui PBS: ää 30 minuutin kuluessa sadonkorjuun. Ihonalainen kasvaimia käytettiin myös lähteenä kudoksen ortotooppinen implantaatio keuhkoihin.

Kirurginen ortotooppinen implantaatio (SOI) B

Kasvaimen kappaletta (1 mm

3), jotka ovat peräisin H460- GFP ihonalainen kasvaimia kasvaa nude-hiiret, istutettiin kirurgisesti potilaalle tehdä istutusta (SOI) [27] päälle vasemmalle sisäelinten keuhkopussin kohortit ylimääräisiä nude-hiirten [12], [28] – [30]. Hiiret nukutettiin isofluraanilla hengitettynä. Pieni 1 cm poikittainen viilto tehtiin vasemmalla sivusuunnassa rinnassa nude-hiirten kautta neljäs kylkiluuväli. Pieni viilto (0,4-0,5 cm) kolmannen ja neljännen kylkiluun rinnassa seinälle tarjotaan pääsy keuhkopussin tilaa ja johti yhteensä keuhkojen romahtaa. Tuumorifragmentit (1 mm

3) on ommeltu yhdessä 8-0 haavanompeluaineet ja kiinteät tekemällä yksi solmu. Keuhko otettiin ylös pihdeillä ja kasvaimen fragmentti ommeltu alempaan osaan keuhkojen yhdellä ompeleella. Keuhkokudoksen sitten palautetaan rintaonteloon. Rintalihasten ja iho suljettiin 6-0 haavanompeluaineet. Suljetussa tilassa rintakehän tutkittiin välittömästi, jos vuoto olemassa, se suljettiin ylimääräisiä ompeleita. Sulkemisen jälkeen rintakehän, keuhkojen oli epä-ilmalla vetämällä ilmaa rintaonteloon on 25 gaugen ½ neulaa. Peruuttamisen jälkeen ilma, täysin liian keuhko näkyy läpi ohuen rintakehän hiiren. Sitten iho ja rintakehän lihakset suljettiin 6-0 haavanompeluaineet yhdessä kerroksessa. Kaikki menettelyt yllä mainitut toimenpiteet suoritettiin 7 × mikroskooppi [12].

Kokeellinen metastaasin syngeneeisissä hiirimallissa

LLC-RFP soluja (2 x 10

6) kerättiin trypsinisaatiolla ja pestään kylmällä PBS: llä, sitten injektoitiin häntälaskimoon nude tai C57B /6-hiirten kanssa kokonaistilavuudessa 100 ui 1 ml: n 29-mittari, lateksia ruisku 30 minuutin kuluessa sadonkorjuun. Kylvö ja pidättäminen yhden syöpäsolujen keuhkoveritulppa, kertyminen syöpä-solun emboli, syöpä-solujen elinkelpoisuus, ja metastaattinen pesäkkeiden muodostuminen oli kuvattu 14 päivän kuluttua solujen injektion [31]. Yksittäiset kuvat leikattiin keuhkot hiiristä kokeellisten etäpesäkkeitä malli saatiin kanssa OV100 pieneläinlääketieteen Imaging System (Olympus Corp., Tokio, Japani). Yhteenlaskettu punaisen fluoresenssin ala ja keuhkojen paino mitattiin metastasoineeseen taakka. Kuvat analysoitiin Imaging-Pro plus 6.0 -ohjelmisto (MediaCybernetics Inc., Rockville, MD).

Värikoodatut -angiogeneesimalli

ND-GFP siirtogeenisiä nude-hiiriin, 6-8 viikkoa vanhoja , käytettiin. Hiiret nukutettiin ja RFP-ilmentävien LLC-soluja (5 x 10

5 solua 25 ui) injektoitiin ihon korvan ja käpälään ND-GFP nude-hiiriin, joilla on 1 ml 27G½ lateksia ruisku [ ,,,0],32]. Kokonaispituus GFP-proteiinia ekspressoivien verisuonten ja fluoresenssi-intensiteetti kvantitoitiin. Kuvat analysoitiin Imaging-Pro plus 6.0 -ohjelmisto (MediaCybernetics Inc.).

Arvio teho

in vivo

hoidon tehokkuus määritettiin standardin mittaukset kasvain tilavuus ja tuumorin paino ihonalainen malleissa. Kasvaimen tilavuus laskettiin käyttäen kaavaa (pitkä halkaisija x lyhyt läpimitta

2) /2. Vuonna potilaalle tehdä malleja, hiiret uhrattiin ja tutkitaan, kun ne ilmestyivät ennalta sairaalloinen. Sen jälkeen eutanasia kukin hiiri tehtiin laparotomy ja mediaani sternotomia ja sitten kuvattiin, jotta löydetään ensisijainen ja etäpesäkkeitä kuvaamalla RFP tai GFP fluoresenssi. OV100 Small Animal Imaging System käytettiin [33]. Suorittamisen jälkeen koko kehon, avoin kuvantamisen, kiinteä elimet tutkittava perusteellisesti todistusaineistoa etäpesäkkeiden. Kehon paino, elimen rakenne havainnointi, ja ulkonäköön kunkin hiiren seurattiin ja kirjattiin todisteena systeemistä toksisuutta.

hema- ja Eosiini (H

Atractylodes macrocephala:

root;

Coix lacryma-jobi:

ydin;

Polypo- adusta

: koko sieni. Seurasimme Yhdysvaltain farmakopeoiden UPS231 raskasmetallien testaus. Kaikki yrtit testattiin ja tasot raskasmetallien olivat alle Yhdysvaltain farmakopeoiden pienin päiväannos. Kukin yrtti uutettiin kiehuvassa vedessä 20 min, liuos suodatettiin. Jäännös uutettiin 75% etanolilla, ja uute suodatetaan. Sekä vesiuute ja etanolipitoista uute yhdistettiin ja konsentroitiin lyofilisoimalla. Saadakseen 100 mg LQ tarvitaan 402 mg kuivattuja yrttejä. Lyofilisoitu jauhe suspendoitiin PBS: ään. Seosta vorteksoitiin 1 minuutin ajan ja inkuboitiin 80 ° C: ssa 30 minuutin ajan. Näyte jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja sentrifugoitiin sitten 2000 rpm: ssä 10 min. Supernatantti kerättiin lopulliseen konsentraatioon 90 mg /ml. LQ laimennettiin sitten annoksesta vaihtelevat kokeiluja hiiren malleissa tai suodatetaan 0,2 um kalvon

in vitro

käytössä.

In vivo

annostelu oli letkuruokinnalla.

Drugs

Doxorobucin (DOX) (Bedford Laboratories, Bedford, OH), cyclophosphonate (CTX) (SIGMA, St. Louis, MO), Pingxiao (PX) (CP Pharmaceutical Co., Ltd., Xian, Kiina), sisplatiinia (CDDP) (DONG-A Pharmaceutical Co., Seoul, Korea), ja paklitakselin (Taxol) (Bedford Laboratories, Bedford, OH ) käytettiin.

Aikaväli kuvantaminen H460 dual-väri soluista

FluoView FV1000 konfokaali laser mikroskoopilla (Olympus Corp., Tokio, Japani) käytettiin kuvan H460 dual-väri soluista käsitelty LQ ja CDDP varten nopeutus kuvantaminen. Korkean resoluution kuvia otettiin kiinni suoraan 72 tunnin ajan 30 minuutin välein 37 ° C: ssa.

MTS-määritys

Solut altistettiin eri pitoisuuksia LQ ja kemoterapeuttisten aineiden 72 tuntia. Lukumäärä Elävien solujen jälkeen määritettiin käyttäen Cell Titer 96 Aqueous One Solution Soluproliferaatiomääritys (Promega, Madison, WI) kuvatulla tavalla ohjeiden.

Tilastollinen

Data arvioitiin käyttäen Opiskelijan

t

-testi. Kaplan-Meier-analyysi, jossa log-rank-testi määrittämiseen käytettiin selviytymisen ja erot ohjaus ja hoitoryhmien.

p

arvo ≤0.05 määriteltiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset ja keskustelu

vertailu tehoa LQ ja CTX ihonalaisen hiiren malleissa keuhkosyöpään

Testasimme erilaisten annosten tehoa LQ ja CTX eri keuhkosyövän solulinjat

in vivo

. H460, A549, ja LLC-solut kasvavat ihonalaisesti 7 päivää nude-hiiriä käsiteltiin joko LQ (150, 300, ja 600 mg /kg) ja 10 päivää, TCM mausteseoksella PX [34] (600 mg /kg, päivittäin letkulla) ja 10 päivää, tai CTX (30 mg /kg /annos päivittäin ip) 7 päivän ajan. Kontrolliryhmän hiirille annettiin PBS: llä suun kautta. Kasvaimen kasvu mitattiin koko oli merkittävästi inhiboi LQ annoksina 150 mg /kg, 300 mg /kg, ja 600 mg /kg annoksesta riippuvalla tavalla (kuvio 1A-F) (kaikki p 0,01). Lopullinen kasvaimen paino oli laskenut huomattavasti LQ käsittelyä lainkaan annoksia (kaikki p 0,01) (kuvio 1G). CTX ja PX inhiboi myös kasvaimen kokoa ja painoa merkittävästi kontrolliin verrattuna hiiriin (kaikki p 0,01) (Fig. 1A-G). LQ (600 mg /kg) oli tehokkaampi kuin PX (600 mg /kg), joka perustuu kasvaimen koon ja painon (kaikki p 0,01) (Fig. 1 D, E, F ja G).

H460 ja A549-solulinjoja, kummassakin hoitoryhmässä sisälsi 6-hiirissä ja 10 hiirtä käytettiin käsittelemättömän kontrolliryhmiin. Sillä LLC solulinja, kummassakin hoitoryhmässä sisälsi 8 ​​hiirtä ja 16 hiiret käytettiin hoitamattomaan verrokkiryhmään. Sen jälkeen, kun ihon alle kasvaimien kasvoi nude-hiirille annettiin joko CTX (30 mg /kg /päivä i.p.) ja 7 päivää tai PX (600 mg /kg /päivä p.o.) 10 päivän ajan. PBS (po) käytettiin kontrolliryhmän. Hiiriä käsiteltiin 150, 300, ja 600 mg /kg /päivä LQ (po) ja 10 päivää. Tuumorin koko mitattiin kaksi kertaa viikossa. Kasvaimen paino mitattiin päätepiste. Tilastollinen merkitys ryhmien välillä määritettiin Studentin

t

-testi. H460 (A E), ja LLC (C F) oli kasvun esto ja kasvaimen koko inhibition käsittelyn jälkeen kaikki aineet. Kasvaimen paino oli myös merkitsevästi inhiboi kaikki aineet (G) (

p

0,01). Sen jälkeen LQ hoito, keuhko- kasvaimen kasvua ja kasvaimen paino oli merkittävästi estyy, verrattuna hoitamattomaan verrokkiryhmään kaikissa malleissa (

p

0,01). CTX ja PX hoito johti merkittävään tuumorin paino (

P

0,01) verrattuna kontrolliryhmään kaikissa solulinjoissa. LQ oli enemmän tehoa kuin PX (

p

0,05) kaikissa solulinjoissa (G). CTX aiheuttama painon menetys (

p

0,05), mutta ei LQ tai PX (H).

Kehon paino ja ulkonäköön kunkin hiiren havaittiin kokeiden aikana ja päätepisteessä. Kehon paino CTX-käsitellyissä hiirissä vähensi merkittävästi hoidon jälkeen (

p

0,05) ja talteen hitaasti hoidon jälkeen päättymisestä. Kuitenkin, ei ollut laskua kehon painosta LQ ryhmissä kaikki annokset. (Fig. 1 H). Sydän, maksa, perna, keuhkot, munuainen, ja suolistossa hiiren kustakin ryhmästä (käsittelemätön kontrolli, LQ ja CTX), värjättiin H käytimme 600 mg /kg LQ (päivittäin mahaletkun kautta) on H460 ihmisen keuhkosyövän solulinjassa. Testasimme H460-GFP solut kasvavat ihon alle verrattuna H460 emosolulinjassa nude-hiirissä hoidettu LQ. Käytimme DOX (7,5 mg /kg i.v., kaksi kertaa viikossa kolme kertaa) positiivinen kontrolli verrata LQ. Kontrolliryhmän hiirille annettiin PBS: llä suun kautta. Kasvaimen kuvantamisessa (kuvio 3D, E F) ja paksuus mittaus (Fig. 3A), osoitti, että kasvaimen kasvu inhiboituu jälkeen LQ ja DOX hoito (P-arvo = 0,029, P-arvo = 0,005, vastaavasti), verrattuna kontrollihiiriin . Lopullinen kasvaimen paino oli myös inhiboi merkittävästi sen jälkeen, kun LQ hoidon ja DOX hoitoa verrattuna PBS (

p

= 0,037,

p

= 0,01 vastaavasti). (Fig. 3B). Kuitenkin DOX johti merkittävään menetykseen painon verrattuna LQ-käsiteltyjen eläinten (

p

= 0,002) ja käsittelemättömien kontrollien (p = 0,001) (Kuva. 3C). Sen sijaan ei ole merkittävää kehon painon havaittiin LQ ryhmässä kontrolliin verrattuna (Fig. 3C). Tiedot ehdotti myös, että H460-GFP ja H460 emosolulinjassa havaittu eroa kasvuun hiirissä ja vastauksena LQ.

viisi hiirtä käytettiin kussakin ryhmässä. Sen jälkeen, kun ihon alle kasvaimien kasvoi 100 mm

2, nude-hiirille annettiin joko DOX (7,5 mg /kg i.v.) (kahdesti viikossa 3 kertaa). PBS (po), LQ (600 mg /kg vuorokaudessa po). Kasvaimen koon ja painon mitattiin päivittäin. Kasvaimen paino mitattiin päätepiste. Tilastollinen merkitys ryhmien välillä määritettiin Studentin

t

-testi. Sen jälkeen LQ hoito, keuhko- kasvaimen kasvua ja kasvaimen paino oli merkitsevästi esti (

P

0,01), verrattuna hoitamattomaan verrokkiryhmään. DOX käsittely johti myös merkittävästi kasvaimen kasvua ja painon eston verrattuna käsittelemättömiin kontrolleihin (

P

0,01). DOX hoidetuilla hiirillä oli huomattava-laihtuminen verrattuna LQ-käsiteltyjen ja käsittelemättömien kontrollien (

P

0,01). *

p

0,05; **

p

0,01. Kuvia H460-GFP kasvaimia elävien hiirten ihonalaiskudoksesta nude-hiirimallissa on esitetty eri hoitoryhmissä, ja käsittelemätön kontrolli (D); LQ (E); ja DOX (F).

vertailu LQ ja DOX tehoa sillä H460-GFP ihmisen keuhkosyöpä potilaalle tehdä mallin

Voit selvittää antimetastaattisia tehoa LQ, ortotrooppinen nude -hiiri malli ihmisen keuhkosyöpä, H460-GFP käytettiin [12]. Avoin kuviin kasvaimista keuhkoissa hoidettujen ja käsittelemättömät hiiret kuvassa. 4C-E. Kasvaimen koko estyi LQ ja DOX (kaikki p 0,01) (Fig. 4A). Kasvaimen paino oli merkittävästi vähentynyt LQ-käsiteltyjen hiirten (600 mg /kg vuorokaudessa letkuruokinnalla) verrattuna PBS kontrolliryhmään (

p

= 0,0041) (Fig. 4A). DOX (7,5 mg /kg i.v., kahdesti viikossa kolme kertaa) inhiboi myös kasvaimen paino (

p

0,0001) (Fig. 4A). DOX aiheuttaen merkittäviä laihtuminen verrattuna käsittelemättömään kontrolliin (

p

0,001) (Kuva. 4B). Sen sijaan ei ole merkittävää kehon painon havaittiin LQ-käsitellyissä eläimissä verrattuna käsittelemättömään kontrolliin (Fig. 4B). Ei ollut etäpesäke havaittu kontrolliryhmässä.

kymmenen hiirtä käytettiin jokaiseen ryhmään. H460-GFP-fragmenttien kasvaimia kasvatettiin ihonalaisesti (1 mm: n halkaisija), otettiin talteen ja istutettiin kirurgisesti ortotooppinen implantaatio (SOI) vasempaan keuhkoihin nude-hiirten. Nude-hiirille annettiin joko PBS: ää (po); DOX (7,5 mg /kg i.v. kahdesti viikossa 3 kertaa päivässä 7) tai LQ (600 mg /kg /vrk po päivittäin. Päivästä 7). Kehon painot mitattiin päivittäin. Kasvaimen painot mitattiin päätepisteen. Tilastollinen merkitys ryhmien välillä määritettiin Studentin

t-t

est. Lung kasvaimen kasvu estyi merkittävästi by LQ (

p

0,01), ilman painonmenetystä. DOX esti keuhko kasvaimen kasvua (

p

0,001), mutta indusoi merkittävää kehon painon vertailuryhmän hiiret (

p

0,001). Avoin kuvia H460-GFP kasvaimia potilaalle tehdä nude-hiirimallissa näkyvät eri hoitoryhmissä ja käsittelemätön kontrolli (C); LQ (D); ja DOX (E).

tulokset Edellä ilmoitettu LQ voi merkittävästi estää potilaalle tehdä keuhkojen kasvaimen kasvua ilman myrkyllisyyttä toisin DOX joka aiheutti merkittävää painonmenetystä.

tehokkuus LQ kokeelliseen keuhkojen syövän etäpesäkkeiden nude-hiirissä ja immunokompetenteissa C57BL /6-hiirten

Testasimme antimetastaattisia tehoa LQ kokeellisessa hiiren malleissa. RFP-ilmentävät Lewisin keuhkokarsinooma solut (LLC-RFP) solua injektoitiin i.v. Sekä nude ja C57BL /6 immuuni hiirissä saadakseen kokeellista etäpesäkkeitä. Yksittäiset kuvat leikattiin keuhkot hiiristä saatiin. Keuhkot hoitamattomaan verrokkiryhmään laajennettiin, ja väri oli tumman punainen johtuen koko kasvain. LQ-käsiteltyjen eläinten oli punertava keuhkot pienentyneellä kooltaan verrattuna käsittelemättömiin kontrolleihin. Punainen fluoresenssi-intensiteetti ja alueen läsnäolon takia, että LLC-RFP kasvaimen pelkistettiin LQ-käsitellyissä hiirissä verrattuna käsittelemättömiin kontrollihiiriin (

p

0,01) (Fig. 5A-B). LQ samalla esti kasvaimen kolonisaation keuhkoissa sekä nude ja C57BL /6-hiirissä (Fig. 5A-B). Alennettu yhteensä keuhkojen paino LQ ryhmässä, verrattuna käsittelemättömään kontrolliin, totesi myös vähensi kasvainten kolonisaatio sekä LQ hoidetuilla nude ja C57BL /6-hiirten (

p

= 0,001 ja

p

= 0,01, vastaavasti) (kuvio. 5C-D). Kokonaispinta-ala on punainen fluoresenssi keuhkojen laskettiin. Fluoresoiva alue korreloi keuhkojen paino. Yhteenlaskettu RFP kasvaimen alueella LQ saaneilla hiirillä oli 4% ja 20%, verrattuna niiden nude tai C57BL /6 ohjaus, vastaavasti (kaikki

p

arvo 0,001) (Kuva. 5E). Tulokset osoittivat, että LQ voi merkittävästi inhiboida kasvaimen kolonisaation keuhkoissa mikä osoittaa anti-metastaattinen tehoa.

kuusi hiirtä käytettiin jokaiseen ryhmään. Yksittäiset kuvat leikattiin keuhkot hiiristä kokeellisten metastaasin malli saatiin. LLC-RFP syöpäsolujen (2 x 10

6) injektoitiin häntälaskimoon nude-hiirten tai C57BL /6-hiiristä. Päivästä 2 hiirille annettiin PBS: ää (po) joka päivä käsittelemättömään kontrolliin. Hiiriä käsiteltiin LQ (600 mg /kg /vrk po) ja 10 päivää. LQ-hoidetut hiiret olivat merkittävästi heikentynyt keuhkojen paino (

p

0,001) ja vähensi punaisen fluoresenssin alue keuhkoissa (

p

0,001) verrattuna käsittelemättömiin PBS valvontaa. A ja B ovat kuvia keuhkoihin. C-D ovat keuhko painoja. E on yhteensä punaisen fluoresenssin pinta-ala.

LQ pidentynyt eloonjääminen kasvain eläinten

LQ merkittävästi pidentynyt eloonjääminen hiirten ortotooppisesti istuttaa H460 keuhkosyöpä sekä hiirillä LLC kokeellinen keuhkometastaasitestissä. Mediaani-eloonjääminen lisääntyi 26 päivää käsittelemätön kontrolli eläinten 30,3 päivää käsitellyillä hiirillä LQ (

p

= 0,005), 33,4 päivää käsitellyissä hiirissä DOX että potilaalle tehdä keuhkosyövän malli (

p

= 0,0001) (Fig. 6A, C). Kokeellisessa metastaasin malli, eloonjäämismediaani nostettiin 14 päivää, että käsittelemätön kontrolli eläinten 20 päivä vuonna LQ-käsitellyissä hiirissä (p = 0,001) ja 22 päivää, että DOX-käsitellyillä hiirillä (

p

0,001) (Fig. 6B, C). LQ pidensi elinaikaa kasvainta kantavien eläinten verrattavissa DOX.

kymmenen hiirtä käytettiin jokaiseen ryhmään. LQ huomattavasti selviytymistä sekä potilaalle tehdä (

p

= 0,015) ja kokeellinen etäpesäkkeiden (

p

= 0,001) malleja. DOX myös merkitsevästi lisääntynyt (

p

0,001) eloonjääminen molemmissa malleissa.

tuhoaminen kasvain verisuonten LQ

ND-GFP hiirimallissa, vain uusia verisuonia aiheuttama kasvain express nestiinifenotyypin perustuva GFP. Havainnointi kanssa FV-1000 kuvantamisjärjestelmä osoitti, että verisuonten kasvain oli erittäin tiheä ja kudottu keskenään verisuonen verkkoon (Fig. 7A). Sen jälkeen LQ hoito, GFP verisuonten LLC-RFP kasvaimia korvaan ja footpad pahoin vaurioituneet (Fig. B). GFP verisuonten hajallaan eri alueilla kasvain, ja tuumorinekroosi havaittiin. Yhteensä loisteputki alue, integroitu optinen voimakkuus ja kesto sekä tiheys GFP verisuonten kvantitoitiin. Tulokset osoittivat, että kasvaimen verisuonten alennettiin -50% valvonnan (

p

0,05) jälkeen LQ annon (Fig. 7C).

LLC-RFP soluja kasvatettiin nestin- ajettu GFP (ND-GFP) siirtogeenisiä nude-hiirissä, joissa kehittyvä verisuoneen ilmaisi GFP. Kolme hiirtä käytettiin jokaiseen ryhmään. Vuonna LQ-käsitellyissä hiirissä kasvaimen verisuonten näytti tuhotaan. GFP florescence verisuonten kvantitoitiin pinta, tiheys, integroitu optinen tiheys (IOD), pituus ja laskee. Mittaukset osoittivat, että LQ vähentynyt verisuonten 50%.

LQ aiheuttama syöpä solukuolemaa

in vitro

H460 dual-väri soluista, jotka ilmentävät GFP vuonna ydin ja RFP sytoplasmassa viljeltiin 35 mm: n reuna-astia käsitellään LQ tai CDDP. Solujen proliferaatio kuvattiin 4 tunnin välein 72 tunnin ajan. Solujen lisääntyminen oli täysin inhiboi LQ. Hoidon jälkeen, ei ollut mitoosin. H460 dual-väri soluja käsiteltiin LQ koko pieneni. Solulima kutistui varhaisessa ajankohtana ja katosi, mutta ytimet pysyi (Fig. 8A, B, D). At myöhään vaiheissa, ytimet hajanainen. Vuonna CDDP saaneilla H460 dual-väri solut, apoptoottiset solut ja muutama jakautuviin soluihin havaittiin (Kuva. 8C). Noin 60% soluista oli apoptoottisia klo 36-tunnin kohdalla. Hajanainen tumat havaittu, mutta oli erilainen ulkonäkö kuin käsitellyissä soluissa LQ. LQ voi laukaista eri solukuoleman mekanismilla kuin indusoiman apoptoosin CDDP. Lisätutkimuksia tehdään tulevaisuudessa.

A ja B) käsittelemättömän verrokin solut 0 tuntia ja 36 tuntia. C) CDDP-käsitellyissä soluissa 36 tuntia. D) Viivästys kuvantaminen LQ-käsiteltyjen H460 solujen 4, 24 ja 72 tuntia. Solujen proliferaatio estyy. Solujen lisääntyminen merkitty keltaisella nuolilla. Apoptoottisia soluja merkitty vihreät nuolet. Sininen ja punaiset nuolet osoittavat muutoksia samaan kenttään.

vertailu tehoa LQ ja kemoterapiaa syövän soluproliferaatioon

in vitro

H460, A549, ja LLC leviämisen testattiin

in vitro

kanssa LQ ja verrattuna CDDP, DOX, ja paciltaxel (Fig. 9A-D). Kaikki solulinjat olivat herkkiä LQ vastaavassa rakenteessa. IC

50 olivat välillä 0,36 mg /ml 0,45 mg /ml (kuvio. 9A). H460, A549, ja LLC proliferaatio myös inhiboi CDDP, paciltaxel, ja DOX (Fig. 9B-D), jossa IC

50 välillä 5~25 uM, väliltä 1-5 uM ja 5~25 uM. Kuitenkin normaali solulinjat HUVEC ja VERO oli resistenttejä LQ kanssa IC

50 noin 9 mg /ml (yli 20-kertaisesti vähemmän herkkä kuin syöpäsoluja). Sen sijaan, HUVEC ja VERO olivat herkkiä CDDP verrattavissa syöpäsoluja.