Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

peräsuolen syöpä (CRC) tunkeutuminen hankittu immuniteetti soluja korreloi suotuisa ennuste. Rooli luonnollinen immuniteetti keskustellaan yhä. Täällä käsiteltiin ennustetekijöiden vaikutusta CRC tunkeutuminen neutrofiilien granulosyyttien (NG).

Methods

TMA lukien terve limakalvo ja kliinisesti selityksin CRC näytteitä (n = 1491) värjättiin MPO ja CD15 spesifisten vasta-aineiden. MPO + ja CD15 + positiiviset immuunijärjestelmän solut laskettiin kolmen riippumattoman tarkkailijan. Fenotyyppinen profiilit CRC tunkeutumisatmosfäärin MPO + ja CD15 + solut validoitu virtaussytometrialla solujen suspensioita, jotka ovat peräisin entsymaattisesti kirurgisista näytteistä. Survival analyysi suoritettiin jakamalla satunnaistettiin tiedot koulutukseen ja validointi osajoukkoja.

Tulokset

MPO + ja CD15 + solujen infiltraatiota merkittävästi korreloivat (p 0,0001; r = 0,76). Kuitenkin vain korkea tiheys MPO + solutunkeutumisen liittyi merkittävästi parantunut selviytymistä koulutuksessa (

P

= 0,038) ja validointi (

P

= 0,002) sarjaa. Monimuuttuja-analyysi mukaan lukien T ja N vaiheessa, verisuonten invaasio, kasvaimen raja kokoonpano ja microsatellite epävakaus asema, MPO + infiltraatiota osoittautunut itsenäisen ennustetekijöitä merkki yleinen (

P

= 0,004; riskisuhde = 0,65; CI: ± 0,15) ja molemmissa koulutus (

P

= 0,048) ja validointi (

P

= 0,036) sarjaa. Virtaussytometrialla analyysi CRC solususpensioiden peräisin kliinisistä näytteistä osoitti, että vaikka MPO + solut olivat pääosin CD15 + /CD66b +, suurehko prosenttiosuudet CD15 + ja CD66b + solut MPO-.

Johtopäätökset

Tiheä MPO + infiltraatiota on uusi itsenäinen suotuisa ennustetekijä CRC.

Citation: Droeser RA, Hirt C, Eppenberger-CASTORI S, Zlobec I, Viehl CT, Frey DM, et ai. (2013) Korkea myeloperoksidaasia Positiivinen solutunkeutumisen kolorektaalisyövässä on itsenäinen Myönteinen ennustetekijä. PLoS ONE 8 (5): e64814. doi: 10,1371 /journal.pone.0064814

Editor: Syed A. Aziz, Health Canada, Kanada

vastaanotettu: 18 tammikuu 2013; Hyväksytty: 17 huhtikuu 2013; Julkaistu: toukokuu 29, 2013

Copyright: © 2013 Droeser et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Taloudellinen tuki tämän tutkimuksen antamien Swiss National Science Foundation (SNF) Avustukset Nr. PP00P3-133699, Nr. 31003A-122235 ja Nr. 320030-120320, Italian Association for Cancer Research (AIRC) IG Grant Nr. 10555, Rainbow Association for Research in Pediatric Oncology-Hematologia kanssa /NANDO PERETTI Foundation, ja Lazion alueen elinsiirtokeskusta ja aivosairauksien. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

ulokekasvun ja etenemisessä ihmisen paksusuolen ja peräsuolen syöpien (CRC) ohjaavat geenin mutaatiot ja microsatellite epävakaus kasvaimen ominaispiirteet [1], [2], ja vuorovaikutus syöpäsolut microenvironmental ärsykkeitä, jonka ei-transformoitujen solut [3], [4]. Erityisesti, sytokiinin ja kemokiinin ympäristö ja tunkeutumisen immunokompetenttien solujen vaikuttaa merkittävästi CRC tulos [5] – [8].

tunkeutuminen aktivoitujen CD8 + muisti-T-solujen ja ilmentyminen IFN-γ-geenin sisällä CRC osoittanut vakuuttavasti, että liittyä suotuisa ennusteeseen [5], [7]. Lisäksi me ja muut ovat osoittaneet, että FOXP3 + immuunisolujen infiltraatio itsenäisesti ennustaa parantunut selviytymistä CRC [9], [10].

rooli luontaisen immuunijärjestelmän soluja ei tutkittu vertailukelpoisia yksityiskohtaisesti ja kiistelty tiedot raportoitu koskien CRC tunkeutuminen NK-solujen [11] – [14] ja makrofagit [15] – [17].

Granulosyytit on suurelta osin huomiotta kasvaimen immunologit [18]. Kuitenkin viimeaikaiset tutkimukset, suoritetaan pääasiassa kokeellisissa malleissa, viittaavat siihen, että neutrofiilien granulosyyttien saattavat estää metastaattinen etenemistä [19]. Lisäksi ne ehdotettiin käytävä sytokiinien eriyttämisen osaksi N1 ja N2 solut jolla on anti- ja pro-kasvain ominaisuuksia, vastaavasti [20], [21]. Nämä havainnot ovat johtaneet nousevalle kiinnostusta granulosyytti tunkeutuminen syövän [22] – [24].

Aiemmissa työssä, osoitimme, että CRC tunkeutumisen CD33 + /HLA-DR- /CD16 + ydinsoluissa liittyy parantunut elossaololuku [13]. Näiden pohjalta fenotyyppisten ominaisuuksien, me arveltu, että CRC voitaisiin soluttautunut granulosyyttien suotuisa ennustetekijöiden merkitys.

myeloperoksidaasi (MPO) on lysosomaalisen entsyymin tuotettu suuria määriä mukaan neutrofiilisiä granulosyyttien (NG) [25], erityisesti aikana varhaisessa kypsymisen vaiheessa. MPO katalysoi tuotanto hypokloorihapon vetyperoksidia ja kloridianionin ja hapettaa tyrosiinin tyrosyyli radikaaleja. Sekä hypokloorihapoketta ja tyrosyyli radikaalit ovat sytotoksisia erilaisia ​​mikro-organismeja. Erityisesti, MPO on mukana myös induktioon granulosyyttien apoptoosin aktivaation jälkeen [26], [27].

pieninä CRC näytteitä (n = 67), on osoitettu, että MPO + infiltraatiota on merkitsevästi suurempi CRC kuin normaalissa paksusuolen limakalvon [28]. Kuitenkin prognostisia merkitystä CRC tunkeutuminen MPO + soluja ei ole käsitelty toistaiseksi.

CD15, joka tunnetaan myös Lewis X ja vaihe-erityisiä alkioantigeeni 1, on hiilihydraatti adheesiomolekyyli ilmentyy kypsissä neutrofiilien, välittävät fagosytoosin ja kemotaksista [29]. Tärkeää on, CD15 ekspressio on havaittu tuumorisoluissa ja havaittiin korreloivan huonon ennusteen pään ja kaulan, mahalaukun ja keuhkojen syövät [30] – [32]. CRC, ilmentyminen CD15 kasvainsoluihin osoitettiin tapahtua etenemiseen metastaattisen vaiheissa [33] ja liittyvän esiintyy paljon uusiutumista ja huono selviytyminen [34], [35]. Kuitenkin ennusteen arvioinnissa CRC tunkeutuminen CD15 + immuunisolujen ei ole tutkittu.

Tässä näytämme ensimmäistä kertaa, että alaryhmä CRC on ominaista korkea tunkeutuminen MPO + ja CD15 + positiiviset solut. Tärkeintä on, korkea MPO + solutiheyteen CRC on itsenäisesti liittyy suotuisa ennuste.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

Kirjallinen lupa on annettu potilailta heidän tietoa voidaan varastoida sairaalassa tietokantaan ja käyttää tutkimustarkoituksiin. Käyttämällä tätä kliinisesti selityksin TMA tutkimuksen hyväksyi vastaavan eettisen komitean yliopistollisen sairaalan Basel (Ethikkommission beider Basel) ja ex vivo analyysit hyväksynyt Institutional Review Board (63/07). Sillä juuri leikattu kliinisissä näytteissä mukana tässä tutkimuksessa kirjallinen suostumus on annettu pois potilailla, jotka saavat leikkaushoitoa Basel yliopistollisessa sairaalassa.

Tissue Microarray Hakemisto Rakentaminen

TMA käyttää tässä työssä rakennettiin käyttämällä 1420 kuin peräkkäisen, ensisijainen CRC, kuten aiemmin on kuvattu [36]. Lyhyesti, formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotettujen CRC kudosblokeista saatiin. Kudossylintereitä, joiden halkaisija on 0,6 mm, meistetään morfologisesti edustavalla kunkin luovuttajan lohkon ja tuodaan yhteen vastaanottajan parafiiniblokkiin (30 x 25 mm), käyttäen puoliautomaattista kudosta ryhmittäjällä. Lyönnin tehtiin päässä kasvaimen siten, että kukin TMA paikalla koostui vähintään 50% kasvainsoluja. Yksi ydin per tapaus käytettiin.

kliinis-

kliinis tietoja 1420 CRC osallistuneiden potilaiden TMA kerättiin jälkikäteen ei-ositettu ja ei-sovitettu tavalla. Lisäykset sisältyvät potilaan ikä, kasvaimen halkaisija, sijainti, pT /pN vaiheessa luokalla histologisen alatyypin, verisuonten invaasio, raja kokoonpano, läsnäolo peritumoraalista lymfosyyttinen tulehdus invasiivisia kasvain etu- ja tautikohtaista eloonjäämisen (taulukko 1). Kasvain raja kokoonpano ja peritumoraalista lymfosyyttinen tulehdus arvioitiin mukaan Jass käyttämällä alkuperäistä H 0,0001) korrelaatio mittausten havaittiin. Evaluation of MLH1, MSH2, MSH6, CD16, CD68, CD8 ja FOXP3 erityisiä värjäykset CRC TMA tutkittavana julkaistiin aikaisemmin [9], [13], [39].

Virtaussytometria Analyysit

jälkeen Institutional Review Board hyväksyntä (63/07), kudosten poistettiin kirurgisesti CRC ja viereisen normaalin limakalvon jauhettiin, sentrifugoitiin ja suspendoitiin uudelleen RPMI 1640-väliaineessa, jota oli täydennetty 5% vasikan sikiön seerumia, 2 mg /ml kollagenaasia IV, 0,1 mg /ml hyaluronidaasia V, ja 0,2 mg /ml DNAasia I (Sigma Aldrich, Basel, Sveitsi). Seuraavat 1 tunnin ruoansulatusta, solususpensiot suodatettiin ja sentrifugoitiin. Fenotyyppinen analyysi pinnan markkereita, solut värjättiin mAb: illä 15 minuuttia jäällä PBS, pestiin kerran PBS: llä 0,5% FCS: ää, 0,5 M EDTA-puskuria ja kiinteän hajotuspuskuriin BD Bioscience (01:10). Sitten näytteet läpäiseviksi BD kiinnitys /permeabilisointipuskuriin. Solunsisäiseen värjäystä anti-MPO reagenssin tai isotyypin yhteen sovitettua negatiivista kontrollivasta-ainetta lisättiin ja 15 min huoneenlämpötilassa inkuboinnin jälkeen. Jälkeen PBS pesun, solut suspendoitiin pesupuskurissa ja analysoitiin virtaussytometrialla käyttäen 2-laser BD FACSCalibur (Becton Dickinson, San Jose, CA). Tulokset analysoitiin Cell Quest (Becton Dickinson, San Jose, CA) ja Flow Jo (Puu Star, Ashland, OR) ohjelmistot.

Tilastollinen analyysi

katkaisuhetki tulokset käytetään luokittelemaan CRC matalalla tai korkealla MPO + tai CD15 + tunkeutuminen saatiin regressio puu analyysi, jossa arvioidaan herkkyys ja vääriä positiivisia erottelua varten eloonjääneiden ja ei-perhe, kaikki kasvain näytteissä [40]. Erityiset tulokset asetettiin 60 solua /TMA-booli MPO + ja 46 solua /TMA-booli CD15 + tunkeutumisen. Chi-Square tai Fisherin testejä käytettiin määrittämään yhdistyksen MPO + ja CD15 + soluttautuminen ja kliinis. Univariate eloonjääminen analyysi suoritettiin Kaplan-Meier menetelmä ja log rank testi. Oletusta suhteellisten riskien varmistettiin molempien markkereita analysoimalla korrelaatio Schoenfeld jäännösten ja joukkoon yksittäisten epäonnistumisen kertaa. Kaikki puuttuvat kliinis tiedon oletettiin puuttuvan sattumanvaraisesti. Myöhemmin MPO + ja CD15 + solujen infiltraatiota tiedot merkittiin Coxin monimuuttuja regressioanalyysi ja hazard ratio (HR) ja 95% luottamusvälit (CI) käytettiin määrittämään assosiaatioita elinaika. Monimuuttuja Coxin regressioanalyysi suoritettiin 975 tapausta vuodesta puuttuvat arvot jätettiin pois mallista.

Spearmanin listalla korrelaatio käytettiin analysoimaan korrelaatio MPO +, CD15 +, CD16 +, CD68 +, CD8 + ja FOXP3 + infiltraatiota. Tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen R i386 versio 2.15.2 (https://www.R-project.org). Tietojen raportointi suoritettiin REMARK kriteerien [41].

Tulokset

CRC tunkeutuminen MPO + ja CD15 + solut: Detection ja Assosiaatio kliinis-

MPO + ja CD15 + soluja voitiin onnistuneesti tunnistettu TMA tutkittavina erityisiä mAbien. Kuva 1A-D esitetään edustavat värjäykset CRC matala ja korkea MPO + tai CD15 + infiltraatiota.

CRC näytteitä värjättiin MPO ja CD15 monoklonaalisia vasta-aineita (klooni 59A5, Novocastra ja klooni Carb-1, Leica, vastaavasti ). Kasvaimen lyöntejä edustavat matalan (paneelit A ja C) ja korkea (paneelit B ja D) tiheys CRC tunkeutumisatmosfäärin MPO + (paneelit A-B) ja CD15 + (paneelit C-D) soluja, vastaavasti. Suurennus: 20x. Paneeli E raportoi jakelu MPO + solujen normaalin limakalvon (E1), yhteensä CRC (E2), MMR-puutosta CRC (E3) ja MMR-asiantunteva CRC (E4). Vihreä viiva osoittaa cut-off 60 solua /booli määrittelemien regressio puu analyysi. Paneeli F raportoi jakelu CD15 + solujen normaalin limakalvon (F1), yhteensä CRC (F2), MMR-puutosta CRC (F3) ja MMR-asiantunteva CRC (F4). Vihreä viiva osoittaa katkeamisen 46 solua /booli määrittelemien regressio puu analyysi.

Out of 1420 CRC yksittäisiä yksilöitä, MPO lauseke voidaan arvioida 1225 näytettä, myös 1031 MMR-taitavia ja 194 MMR-puutosta CRC. CD15 ilmentyminen oli arvioitavissa 1191 CRC yksilöihin, mukaan lukien 817 MMR taitavia ja 191 MMR puutteellinen näytteitä. Määriä näytteitä arvioitiin kunkin ominaisuuden on esitetty absoluuttisina lukuina ja prosentit taulukossa 2. Dropouts johtuivat menetys lyöntejä aikana TMA värjäystä valmistelun tai puuttuvat tiedot, ja yleensä osuus 15% datan (taulukot 1-2).

Normaali paksusuolen limakalvo todellakin soluttautunut MPO + ja CD15 + soluja (keskiarvo: 6,4, mediaani: 2, alue 0-59 solua /punch for MPO (n = 48) ja keskiarvo: 4,3, mediaani: 1, alue 0-35 solua /booli CD15 (n = 47), tässä järjestyksessä). Kuitenkin huomattavasti suurempi (

P

0,001) tunkeutuminen MPO + ja CD15 + soluja oli havaittavissa CRC näytteistä (keskiarvo: 26,7, mediaani: 23, vaihteluväli 0-150 solua /punch for MPO (n = 1225 ) ja keskimääräinen: 16.4, mediaani: 7, alue 0-125 solua /punch for CD15 (n = 1191), vastaavasti, kuvio 1E-F).

MPO + ja CD15 + tunkeutuminen, kuten arvioitu absoluuttinen solujen määrä , oli merkitsevästi korkeampi MMR puutteellinen kuin MMR taitavia CRC (mediaani: 30 solua /punch puutteelliset vs. 21 solua /booli taitavia CRC

P

= 0,007 ja 9 solua /booli puutteelliset vs 6 solua /booli taitavia CRC

P

= 0,05, MPO ja CD15 vastaavasti; luvut 2E-F).

CRC kirurgisista näytteistä olivat entsymaattisesti pilkottu ja heti värjättiin fluorokromilla leimatun mAb: iden tunnustaa MPO, HLA DR, CD66b, CD15 ja CD16, joka ilmoitetaan ”materiaalit ja menetelmät”. Paneeli A raportoi yksi edustaja värjäys, kun taas paneeli B on yhteenveto tuloksista tuoreeltaan leikattiin näytteitä (n = 8) koskien ilmaus ilmoitettu merkkiaineiden CRC soluttautua MPO + solut.

regressio puu analyysi määritelty raja- pistemäärät MPO + ja CD15 + CRC infiltroituvat solut havaittiin yksittäisissä ihobiopsioista (n = 60 ja n = 46, vastaavasti) käytettiin arvioimaan kliinis korrelaatioita.

Univariate Coxin regressioanalyysiä paljasti, että suuri tiheys MPO + infiltraatiota (≥ 60 solua /punch), havaittavissa 14,5% kasvainten, oli merkitsevästi yhteydessä vanhempien potilaiden iästä (

P

= 0,04). Mikä tärkeintä, se oli merkitsevästi yhteydessä varhaisen (pT1-2) kasvain vaiheessa (

P

= 0,007), ei ole paikallisia uusiutumisen (

P

= 0,031) ja korkeamman 5 vuoden pysyvyys (

P

= 0,0009) (taulukko 2).

korkea tiheys CD15 + infiltroituvat solut (≥46 solua /punch), havaittavissa 10,8% kasvainten, oli merkitsevästi yhteydessä vasemmalla yksipuolinen sijainti (

P

= 0,018), varhainen (pT1-2) vaihe (

P

= 0,0004), ei ole paikallisia uusiutumisen (

P

= 0,03) ja suurempi 5- vuoden pysyvyys (

P

= 0,033) (taulukko 2).

Korrelaatio MPO +, CD15 +, CD16 + ja CD68 + kasvain infiltroituneen ydinsoluissa

Tutkitaan suhteita kasvain tunkeutuminen ilmentävien solujen MPO ja muiden immuunijärjestelmän merkkiaineita (CD15, CD16, CD68, CD8, FOXP3) ilmaisemat immunokompetenteille solujen soluttautuminen CRC, tietoja ylimääräisiä immuuni histokemiallisella värjäykset saman TMA aikaisemmista tutkimuksista käytettiin [9], [13] , [39]. Tilastollisesti vahvin korrelaatio oli havaittavissa välillä MPO + ja CD15 + solujen infiltraatiota (r = 0,75,

P

0,0001), kun taas korrelaatiot toissijainen merkitys oli havaittavissa CD16 + (r = 0,32), CD68 + (r = 0,35) , CD8 + (r = 0,13) ja FOXP3 + (r = 0,21) solukeräytymistä.

Ex vivo karakterisointi MPO + solujen vasta Poistettu CRC

arvioimiseksi yksityiskohtaisesti ilmiasun kudoksen soluttautua MPO + solujen , juuri leikattu CRC (n = 8) oli entsymaattisesti, ja yhden solun suspensiot analysoitiin virtaussytometrialla. Esimerkkejä tästä fenotyyppianalyysillä on esitetty kuviossa 2a.

Suurin osa CRC tunkeutumisatmosfäärin, MPO + solut olivat CD15 + (90,3% ± 5,6%), CD16 +, (77,6 ± 19,4%), ja CD66b + (80,6 ± 19,9%; kuvio 2b). Mielenkiintoista on, että MPO + tunnistettavista soluista autologisen normaalin limakalvon näkyy samanlainen (P 0,05) merkki ekspressiokuvio (tuloksia ei ole esitetty). Erityisesti kuitenkin huomattava prosenttiosuudet MPO- /CD66b + solut (47,3 ± 35,7%) ja enemmän odotetusti, on MPO- /CD15 + soluja (78,0 ± 17,7%) ja mahdollisesti syövän luonteesta olivat havaittavissa CRC peräisin solususpensioiden.

Prognostic merkitys MPO + ja CD15 + Cell tunkeutuminen CRC mikroympäristössä

keskimääräinen elinaika oli 50 ja 46 kuukautta potilailla, joilla on korkea tai matala MPO + solutiheys, vastaavasti. Korkea MPO + solutunkeutumisen oli merkitsevästi (P ​​= 0,0003), joka liittyy parempaan ennusteeseen (0,59 HR, 95% CI: ,45-+0,74), verrattuna kasvaimiin, joilla on alhainen MPO + solujen tunkeutuminen Yksiulotteisissa Coxin regressioanalyysiä. Kun jakaminen kohortin testissä ja validointi asettaa, korkeat pisteet MPO + solutunkeutumisen oli vielä liittynyt merkittävästi parantunut eloonjääminen (

P

= 0,038 ja

P

= 0,002, tässä järjestyksessä; kuvio 3A -B). Useat satunnaistamiset yleistä kohortin olivat yrittäneet ja kaikkien tulosten havaittiin olevan vertailukelpoinen.

Kaplan-Meier eloonjäämiseen käyrät suunniteltiin mukaan MPO + ja CD15 + kasvain tunkeutuminen potilailla laakeri CRC. Paneeleissa A-C, katkoviivat katso tiheän ja mustat viivat alhaisen tiheyden tunkeutumisen mukaan cut-off-arvot perustetun regressio puu analyysi (60 solua /punch MPO + ja 46 solua /punch for CD15 + solujen tunkeutumista). Paneelit A ja B raportti vaikutuksista korkean MPO + infiltraatiota, havaittuna koulutuksessa (n = 609; 255 kuolemantapausta havaittu 519 potilailla, joilla on alhainen CRC tunkeutuminen MPO + solujen ja 28 kuolemantapausta havaittu 90 potilaalla, joilla kasvainten korkea MPO + infiltraatiota

P

= 0,038) ja validointi asettaa (n = 583; 234 kuolemantapausta havaittu 498 potilailla, joilla on alhainen CRC tunkeutuminen MPO + solujen ja 23 kuolemantapausta havaittu 85 potilaalla, joilla kasvainten korkea MPO + infiltraatiota,

P

= 0,002). Paneeli C raportoi vaikutus korkea CD15 + CRC tunkeutuminen koko potilasryhmälle tutkittavana (n = 1169; 458 kuolemantapausta havaittu 1041 potilaalla on matala CRC tunkeutuminen CD15 + soluja ja 47 kuolemantapausta havaittu 128 potilailla, joilla on kasvaimia, joilla on korkea CD15 + infiltraatiota

P

= 0,051). Ruudussa D kumulatiiviset vaikutukset kasvaimen tunkeutuminen MPO + ja CD15 + solut tutkitaan. Rosa linja (430/946) tarkoittaa kasvaimia alhainen MPO + /CD15 + solujen tunkeutuminen. Vaaleansininen viiva (18/34) viittaa kasvaimen alhainen MPO + ja korkea CD15 + solujen tunkeutuminen. Lila linja (29/91) viittaa kasvainten suuren MPO + /CD15 + infiltraatiota ja vihreä linja (18/76) viittaa CRC korkea MPO + ja alhainen CD15 + solujen infiltraatiota (n = 1147; 430 kuolemantapausta havaittu 946 potilailla, joilla on alhainen CRC tunkeutuminen MPO + ja CD15 + soluja, 18 kuolemantapausta havaittu 34 potilaalla kasvainten korkea CD15 + ja alhainen MPO + solutunkeutumisen; 29 kuolemantapausta havaittu 91 potilaalla, joilla on korkea CRC tunkeutuminen MPO + ja CD15 + soluja, 18 kuolemantapausta havaittu 76 potilaalla, joilla kasvainten korkealla MPO + ja alhainen CD15 + infiltraatiota,

P

= 0,002).

yhden muuttujan analyysissä eloonjääminen lisääntyi myös tapauksessa ennätyksensä CD15 + solujen infiltraatiota (

P

= 0,051, kuvio 3C). Yhdistelmä-analyysi osoitti kuitenkin, että MPO on hallitseva merkki liittyy parantunut ennuste ilman asiaan lisäainetta säädetty etuus CD15 positiivisuus (kuvio 3D).

Mikä tärkeintä, monimuuttuja-analyysi, korkeat pisteet MPO +, mutta ei CD15 + , solujen infiltraatio oli itsenäisesti liittyy suotuisa ennusteeseen säätämisen jälkeen useita tunnettuja ennustetekijöitä tekijät kuten ikä, sukupuoli, T vaiheessa N vaiheessa kasvaimen, verisuonten invaasio, kasvaimen raja kokoonpano ja microsatellite vakauden (

P

= 0,004 , taulukko 3). Myös kaksi kerrostunut kollektiivien vaikutus MPO + infiltraatiota eloonjäämiseen sairastavien potilaiden CRC edelleen merkittäviä (

P

= 0,048 ja

P

= 0,036 testaukseen ja validointi asetettu, vastaavasti).

keskustelu

parhaan tietomme mukaan tämä on ensimmäinen tutkimus tunnistaa MPO + neutrofiilien granulosyyttien kasvaimen tunkeutuminen itsenäisenä suotuisa ennustetekijä CRC.

Myelooisen infiltraatiota tiedetään edistävän kasvaimen kasvua ja liittyvän huonoon ennusteeseen erilaisissa ihmisen syövissä [42]. Erityisesti kasvaimiin liittyviä makrofagien on merkitty obligaattien kumppaneita kasvainprogression ja etäpesäkkeiden muodostumisen [43]. Granulosyytti tunkeutuminen on myös todettu olevan yhteydessä huonoon ennusteeseen eri kasvaimissa mukaan lukien keuhkosyövässä ja munuaisten ja maksasyövän [44] – [47]. Tässä yhteydessä CRC voisi edustaa mielenkiintoinen poikkeus [48], [49]. Todellakin, kiistanalainen tiedot on raportoinut ennustetekijöiden merkityksestä makrofagien tunkeutuminen CRC [50] – [54].

neutrofiilikeräytymän on havaittu korotetaan siirryttäessä normaalista dysplastic ja syöpä- limakalvon [55 ]. Lisäksi CRC infiltraatio CD66b + solut on hiljattain ehdotettu olevan haitallisia ennusteeseen [56].

Aiemmissa työssä me osoitimme, että CRC tunkeutumisen CD16 + solut korreloi parannetun selviytymisen [13]. Tämä merkki ilmaistaan ​​neutrofiilien, alaryhmässä makrofagien ja NK-solujen [57], [58]. Todellakin, NK-solujen tunkeutuminen CRC on merkityksetön [13], [14] ja vailla prognoosi- merkitystä [59]. Koska CRC soluttautuminen CD16 + solut ovat myös CD11 + /CD33 + /HLA-DR-, tässä tutkimuksessa olemme keskittyneet analyysiin ilmentävien solujen MPO ja CD15 granulosyyttien markkereita.

yhden muuttujan analyysissä high density CRC tunkeutuminen solut, jotka ilmentävät joko markkeri liittyi parantunut selviytymistä. Kuitenkin seuraava säätö monimuuttujille suorittaa kompensoimaan valmisteleva luonne analyysi tämän suotuisan ennustetekijöiden merkityksellinen säilyi MPO + mutta ei CD15 + solukeräytymistä.

Mikä tärkeää, sopusoinnussa aiemmin julkaistun raportin [55 ] havaitsimme, että MPO + ja CD15 + solut valikoivasti asuttaneet CRC kudoksissa, kun ne huonosti soluttautuneet normaali paksusuoli limakalvo, mikä viittaa siihen, että he nimenomaan rekrytoidaan kasvaimen microenvironment. Mielenkiintoista, MPO + solujen tunkeutuminen oli suurempi MMR-puutosta kuin MMR-taitavia CRC kuten aiemmin ehdottanut tehdyssä tutkimuksessa, jossa 67 näytettä rajoitetun määrän syöpiä (n = 35) [28].

Virtauspohjaisen sytometrinen analyysi pilkottu pariksi normaali ja syöpäkudokset osoittaa, että sekä terveillä limakalvolla ja CRC infiltroivia MPO + solut ovat CD15 + /CD16 + /CD66b + /HLA-DR-, sopusoinnussa granulosyyttisen linjaa. Tärkeintä on kuitenkin, havaitsimme merkittävää prosenttiosuudet CD66b + /MPO- solujen soluttautua CRC. Nämä tiedot voivat selittää eroavuudet havaintomme ja aiemman keskitytään CD66b + CRC infiltroituvat solut [56]. Erityisesti neutrofiilit samankaltaisia ​​ilmiasun on myös havaittu soluttautua pään ja kaulan alueen syövät [60].

Vastaavasti läsnäolo CD15 + /MPO- solut terveillä limakalvolla ja syöpäkudokset voisi selittää ero ennustetekijöiden merkitystä nämä merkit. Erityisesti kuitenkin, MPO-geenin ekspressio oli havaittavissa CRC tai normaali limakalvo yksilöitä (tuloksia ei ole esitetty) ja joka on kypsä granulosyyttien luonne MPO + infiltroituvat solut [61].

MPO-aktiivisuus on ehdotettu vaikuttavan patogeneesiä rappeuttavia sairauksia, kuten ateroskleroosi, multippeliskleroosi ja Alzheimerin tauti [62]. Lisäksi korkea MPO aktiivisuus tai MPO + infiltraatiota on todettu ruokatorven [63], ja gynekologiset syövät [64], [65] ja CRC [28], [66], [67], mutta niiden ennustetekijöitä vaikutus ei analysoitu .

huolimatta Ensimmäiset raportit dokumentointia kyky välittää kasvainsolusytotoksisuutta [68] granulosyyttejä on suurelta osin laiminlyöty kasvain immunologit [18]. Kuitenkin kokeellisissa malleissa aiemmin ovat osoittaneet, että peräsuolen syövän solut transfektoitu G-CSF-geeni voidaan hylätä kasvaimeen infiltroituvien neutrofiilien kun vuorovaikutus IFN-γ tuottavien T-solujen [69]. Granulosyytit myös osoitettu ekspressoivan kostimulatorisia molekyylejä ja voi esittää antigeenejä [70], [71], mikä viittaa siihen mahdollisuuteen rooli aloittamisen antigeenispesifisten antitumor vasteita.

Viime aikoina todisteita kyky granulosyyttien estää keuhkojen etäpesäkkeiden muodostumista kokeellinen rintasyövän malli on annettu [19]. Lisäksi kapasiteetin granulosyyttien tehdään TGF-β riippuvainen polarisaatio huomioon N1 ja N2 funktionaalisen profiilit, tunnettu siitä, että anti- tai pro-kasvainten ominaisuuksia, vastaavasti, samalla tavalla kuin makrofaagit, on myös dokumentoitu [20].

molekyyli tausta taustalla CRC tunkeutuminen MPO + solut ja sen prognostiset merkitys on epäselvä. Nämä ilmiöt voivat heijastaa kemokiinin tuotantoa aktivoituneet T-solut, ja siten epäsuorasti seurausta meneillään kasvaimia torjuvaa sopeutumisreaktiot. Vaihtoehtoisesti ne saattavat liittyä tuotantoon granulosyyttien houkutella kemokiinien kasvainsolujen. Vähintään CXCL8 (IL-8) tiedetään tuottaa CRC-soluissa. Sen tuotanto ehdotettiin liittyvän lisääntynyt angiogeneesiin ja kasvaimen levittämiseen [72]. Toisaalta, me ja muut ovat aiemmin osoittaneet, että GM-CSF, edistää granulosyyttien kypsymiseen ja säilymiseen, voidaan myös tuottaa CRC soluihin [73], [74].

tulokset edistävät luonnehdinta monimutkaisia ​​ominaisuuksia luonnostaan ​​suolistossa mikroympäristössä ja CRC-immuunijärjestelmä vuorovaikutus [75]. Lisätutkimuksia on perusteltua selvittämään molekyylitason mekanismit itsenäisen ennustetekijöiden vaikutusta MPO + solujen CRC. Mikä tärkeintä, täällä osoitamme, että CRC soluttautuminen MPO + ilmentävät CD16 Fcy keskimääräisen affiniteetin reseptoria. Kyky granulosyyttien toimia välittäjänä vasta-riippuvainen soluvälitteinen sytotoksisuus (ADCC) on keskusteltu. Kuitenkin saatavuus uusien terapeuttisten mAb glycoengineered Fc fragmenttien ominaista lisääntynyt affiniteetti Fcy reseptoreihin [76] saattaa johtaa uudelleenarviointia Effektorisolujen merkityksestä granulosyyttejä.

Tässä yhteydessä on houkuttelevaa spekuloida, että neutrofiilikeräytymän tulisi sisällyttää nykyiseen ennustemalleja CRC [77] ja että se saattaisi olla tärkeä uusi kerrostuminen tekijä satunnaistamista tietyissä kliinisissä tutkimuksissa.